Therapeutische Wirkung der intratumoralen Injektion von dendritischen Zellen für lokal rezidivierendem Magenkrebs: ein Fallbericht

Therapeutische Wirkung der intratumoralen Injektion von dendritischen Zellen für lokal rezidivierendem Magenkrebs: ein Fallbericht
Zusammenfassung
Ein 80-jähriger Mann mit einer Geschichte von Magenkrebs und Lungenemphysem unterzog sich im Jahr 1997 mit einem distalen Gastrektomie für Magenkrebs. im Jahr 2010 ergab eine endoskopische Untersuchung eine depressive artige Läsion an der oralen Seite der Anastomose, die als Siegelring Adenokarzinom diagnostiziert wurde. Chirurgische Behandlung wurde die Auffassung vertreten, wurde aber wegen der obstruktiven und restriktiven respiratorische Ereignisse abgelehnt. Die Chemotherapie wurde wegen unerwünschter Ereignisse beendet. Endoskopie wurde verwendet, um die intratumorale Injektionen von dendritischen Zellen (DCs) Targeting synthetisierten Peptide von Wilms Tumor 1 (WT1) und Mucin-1, der Zelloberfläche assoziiert (MUC1) verwalten. Eine immunhistochemische Analyse der Tumorproben angegeben Positivität für WT1 und MUC1. Einen Monat nach sieben Zyklen von DC verabreicht wurde (von November 2010 bis April 2011), keine verdächtigen Läsionen waren offensichtlich, und seine Biopsie-Ergebnisse waren normal. Der Patient wurde 30 Monate in Remission. Intratumorale Injektionen von DCs zeigten therapeutische Effekte bei diesem Patienten, die nicht endoskopische Submukosadissektion oder Operation unterziehen könnte.
Schlüsselwörter Dendritische Zelle WT1 MUC1 Immunotherapy und rezidivierenden Hintergrund Magenkrebs
Magenkrebs sind die zweithäufigste Ursache für Krebs-Todesfälle weltweit [1]. Obwohl die Operation die definitive Behandlung für Magenkrebs ist, sind alternative therapeutische Modalitäten endoskopische Submukosadissektion (ESD), Chemotherapie und Strahlentherapie.
Vor kurzem wurde berichtet, dass die Hälfte aller Krebserkrankungen mehr als 70 Jahren bei Patienten im Alter auftreten [2 ]. Chronisch obstruktiver Lungenerkrankung (COPD), die mit Atemwegsobstruktion gekennzeichnet ist, ist auch üblich, bei älteren Menschen [3]. In einigen Fällen ist die Standardtherapie für Malignitäten wegen der Anwesenheit von COPD nicht geeignet. Sakai et al
. [4] zeigten, dass COPD ein unabhängiger Risikofaktor für die intra- und postoperative pulmonale Ereignisse war. Darüber hinaus Dimopoulou et al
. [5] berichtet, dass einige Antikrebsmittel Lungentoxizität induzieren. Beispielsweise Paclitaxel, Docetaxel, Irinotecan und berichtet wurden unspezifische interstitielle Pneumonie verursachen. In einigen Fällen kann minimal invasive Therapie für ältere Patienten mit COPD erforderlich.
Dendritische Zellen (DCs) sind Antigen-präsentierende Zellen, die für die Initiierung der T-Zell-Immunität spezialisiert sind [6, 7]. DC-basierte Immuntherapie, die synthetisierten Peptide zielt wurde kürzlich für verschiedene Malignitäten verwendet worden, einschließlich Magenkrebs [8-11]. Die geeignete Auswahl der synthetisierten Peptide erforderlich ist die therapeutische Wirkung von DC-basierte Immuntherapie für Magenkrebs zu verbessern. Im Jahr 2009 rangierte das Krebsantigen Priorisierung Projekt des National Cancer Institute Wilms Tumor 1 (WT1) und Mucin-1, der Zelloberfläche assoziiert (MUC1) als die höchste und zweithöchste Priorität Antigene bzw. [12]. Wie durch die Immunhistochemie (IHC) bestimmt werden, die Ausdrücke von WT1 und MUC1 in Magenkrebs hat 42 Treffer auf 53% zu sein [13] und 93% [14] auf.
Intratumorale Verabreichung Phagozytose DC verwendet, ist eine mögliche günstige Option [15]. Wir haben esophagogastroduodenoscopy (EGD) intratumorale Injektionen von DCs mit WT1 und MUC1 gepulst zu verabreichen.
Fall Präsentation
Ein 80-jähriger Mann mit einer Geschichte von Magenkrebs und Lungenemphysem für früh Billroth I distale Gastrektomie unterzog Magenkrebs im Jahr 1997. in den Jahren 2005 und 2009 wurde er für eine EMR lokaler Magenkrebs Rezidiv (gut differenzierte Rohr Adenokarzinom) bezeichnet. Im Mai 2010 unterzog er sich einer Follow-up-EGD, die eine depressive Typ Läsion (10 × 18 mm groß) auf dem Körper des Magens in der Nähe der Anastomose (O) (Abbildung 1a) ergab. Eine histopathologische Analyse der Biopsie-Proben ergab, Siegelring Adenokarzinom (Abbildung 2a-a "). Eine Computertomographie ergab keine Metastasen. Obwohl die Gesamt Resektion des Magen-Rest eine potenziell kurative Therapie ist, wurde diese Operation nicht unter Berücksichtigung der Lungenfunktionsstörung des Patienten durchgeführt, die obstruktiven und restriktiven Lungenerkrankung (Vitalkapazität (VC) enthalten: 2,12 L;% VC: 71,9%; gezwungen Expirationsvolumens in 1.0 Sekunden: 42,9%). Der Patient hatte eine 50-jährige Geschichte des Rauchens. ESD wurde kontraindiziert, da der Krebs einer undifferenzierten Typ war. Daher Behandlung mit TS-1 (Tegafur, Gimeracil und oteracil Kalium, Taiho Pharmaceutical Co., Ltd., Tokio, Japan); gemeinsame Terminologie wurde im August 2010 Vier Wochen nach der TS-1-Verabreichung, behandlungsbedingte Anorexie (Grad 2 eingeleitet Kriterien für unerwünschte Ereignisse, Version 4.0) wurde beobachtet, und daher Chemotherapie auf Antrag des Patienten wurde eingestellt. Abbildung 1 Gastroskopie (EGD) Bilder. (A, b) Typ 0-IIc Läsion (10 × 18 mm Größe) auf dem Körper des Magens in der Nähe der Anastomose Region (O) vor der Impfung (a). Der Magenkrebs zu einer obskuren Läsion einen Monat nach dem letzten Zyklus der Behandlung (b) zurückgebildet. Die Pfeile zeigen die Lage des Krebses.
2 histologische Analyse der Biopsieprobe Abbildung. Hematoxylin und Eosin (H & E) Färbung (aa ", ff") und Immunhistochemie von Serienschnitten von Geweben für Wilms Tumor 1 (WT1) (bb ", gg") und Mucin-1, der Zelloberfläche assoziiert (MUC1) ( cc ", hh"). (A-a ", f-f ') H & E-Färbung vor und nach der Impfung. H & E-Färbung zeigt Siegelringzellen im Gewebe vor der Impfung (a-a "). Einen Monat nach der letzten Verabreichung pathologische Untersuchung enthüllt normalen luminalen Epithelzellen (f-f "). (B-b ", g-g") -Färbung für WT1 vor und nach der Impfung. Die Proben positiv für WT1 in etwa 60% der Zellen vor der Impfung am Ort des Tumors (b-b ") und die bemerkenswerte Reduktion der WT1 Positivität nach der Impfung bestätigt (g-g"). (C-c ", h-h") -Färbung für MUC1 vor und nach der Impfung. Etwa 70% der Tumorzellen positiv waren für MUC1 vor der Impfung (c-c ') und MUC1-Färbung wurde in normalen Drüsen nur nach der Impfung (f-f beobachtete "). Immunhistochemische Färbung von CD4 + und CD8 + T-Zellen in den Biopsieproben. Serielle Schnitte der Gewebe für H &verwendet; E-Färbung präpariert und gefärbt für CD4 und CD8 (d, e, i, j). (D-d ", i-i") -Färbung für CD4 vor (d-d ") und nach der Impfung (i-i"). (E-e ", j-j") -Färbung für CD8 vor (e-e ') und nach der Impfung (j-j "). CD4 + und CD8 + T-Zellen häufiger in normalen Magengewebe nach der Impfung beobachtet, als man in Tumorgeweben vor der Impfung beobachtet. (Vergrößerung: a-j 4 ×, a'-j '× 10, a "-j" 20 ×). Die Verfahren, die für die DC
Herstellung verwendet wurden, wurden zuvor beschrieben [16]. Die DCs wurden mit Major Histocompatibility Complex (MHC) gepulst -I-restricted WT1-Peptid-Antigene, nach der Human-Leukozyten-Antigen des Patienten (HLA) -A-Muster (HLA-A 2402; CYTWNQMNL (Mutante WT1-Peptid, Neo-MPS, San Diego , Kalifornien, USA) und MUC1 langes Peptid (30 mer bei 20 mg /ml; TRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAP- GSTAP; Greiner Japan, Tokyo, Japan)). Die DCs wurden mit Hilfe der Durchflusszytometrie charakterisiert, um sicherzustellen, dass sie den typischen Phänotyp von reifen DCs erreicht. Die Oberflächenmoleküle, die von den DCs exprimiert wurden, wurden bestimmt. Der Phänotyp CD14 - /niedrig /HLA-DR + /HLA-ABC + /CD80 + /CD83 + /CD86 + /CD40 + /CCR7 + wurde als reife DCs zu definieren. Die DCs wurden bis zum Tag der Verabreichung kryokonserviert. Die DC-Suspension auf ein Gesamtvolumen von 1,0 ml mit Kochsalzlösung eingestellt wurde.
Sechs Monate nach dem Magenkrebs Rezidiv, intratumorale Injektionen von DCs diagnostiziert worden waren, wurden unter Verwendung von EGD von November 2010 bis April 2011 verwaltet diese Behandlung durch die genehmigte wurde Institutional Review Board von Isoukai (Zulassungsnummer: 26-1) und wurde in Übereinstimmung mit der Deklaration von Helsinki durchgeführt
Vaccinations siebenmal an zwei bis achtwöchigen Abständen wiederholt wurden (ca. 2,99 x 10 7 Zellen /. Injektion, die ersten vier Impfungen in zweiwöchigen Intervallen und die letzten drei Impfungen im vier- bis achtwöchigen Intervallen). Es wurde eine Nadel (Durchmesser 25 G, Länge 4 mm) zu verabreichen DCs an vier Submukosa Standorten rund um den Tumor eingesetzt. Anschließend wir OK432 (1-3KE), gelöst in 0,5 ml Kochsalzlösung an zwei Stellen in der Submukosa um den Tumor verabreicht. DC-Therapie wurde gut vertragen und die einzige behandlungsbedingten unerwünschten Ereignisse war Fieber, mit einer Körpertemperatur von über 38 ° C für zwei Tage nach der vierten Impfung. Einen Monat nach der letzten Verabreichung der Magenkrebs gefunden wurde vollständig zurückgebildet haben (Abbildung 1b). Eine histopathologische Untersuchung der Biopsie-Proben zeigten keine Siegelring-Zellen (Abbildung 2f-f "). Während der 30 Monate nach der DC-basierte Immuntherapie hat sich kein pathologischer Wiederholung beobachtet worden. Labordaten angezeigt Reduzierungen in karzinoembryonalen Antigen und Kohlenhydrat-Antigen 19-9-Spiegel nach DC-Therapie, die von 8,2 bis 6,8 ng /ml (Normalbereich: < 5,0 ng /ml) verringert und 33,2 bis 24,7 U /ml (Normalbereich: . < 37,0 U /ml) bzw.
IHC für WT1 (Monoclonal 6 F-H2, Dako Cytomation, Carpinteria, Kalifornien, USA) [13] und MUC1 (Becton Dickinson Labware, Franklin Lakes, New Jersey, United States) wurde durchgeführt, wie zuvor beschrieben [17] mit einigen Modifikationen. IHC Ergebnisse waren positiv für WT1 in etwa 60% der Siegelring-Zellen vor der Impfung (2b-b "); jedoch war die Anzahl der Zellen eine positive Färbung merklich nach der Impfung (Abbildung 2g-g ") reduziert. Etwa 70% der Zellen waren positiv für MUC1 vor der Impfung (Abbildung 2c-c "). Nach der Impfung, Umbau an der Stelle der malignen Zellen bestätigt wurde, und MUC1-Positivität wurde nur in der normalen Drüsen (Abbildung 2h-h ") beobachtet. Keine Erhöhung der Anteile von CD4
+ und CD8 + T-Zellen wurden im peripheren Blut festgestellt, basiert auf Beurteilungen vor und nach der Impfung (CD4 + T-Zellen: 43,9-42,5%; CD8 + T-Zellen: 29,3-25,5%). Auf der anderen Seite, CD4 + und CD8 + T-Zellen im normalen Magengewebe häufiger nach der Impfung beobachtet (Abbildung 2i-i "jj"), als sie in den Tumorgeweben beobachtet worden war, bevor Impfung (2d-d "ee").
Die Frequenz des WT1-spezifischen zytotoxischen T-Lymphozyten (CTLs) 0,03-0,08% erhöht. Das verwendete Verfahren wurde in unserem letzten Bericht [16] beschrieben. Am 31. Monate nach der letzten Impfung, die Niveaus der WT1-spezifischen CTLs blieb hoch (0,10%) (Abbildung 3 a-c). Figur 3: Analyse von Wilms Tumor 1 (WT1) -spezifische zytotoxische T-Lymphozyten (CTLs). (A) Vor der Impfung. (B) Nach der Impfung. (C) Am 31. Monate nach der letzten Impfung. WT1-spezifische CTL Niveaus vor der Impfung von 0,03 erhöht (a) bis 0,08% bei der letzten Impfung (b). Am 31. Monate nach der letzten Impfung, WT1-spezifische CTL-Ebenen auf 0,10% erhöht (c).
Diskussion
In diesem Fall führte restriktive Lungenerkrankung die primäre Onkologen für die Chemotherapie zu entscheiden, statt einer Operation. Allerdings entwickelt sich der Patient unerträglich Chemotherapie-assoziierter Anorexie, die den Abbruch der Behandlung erforderlich machte. Seit einigen früheren Studien haben gezeigt, dass DC-Immuntherapie sicher an Krebspatienten als minimal invasive Behandlung verabreicht werden [8, 9, 18], wählten wir diese Therapie für unsere Patienten. Die direkte Injektion von DCs in Tumoren wurde in klinischen Studien untersucht worden, darunter solche auf Hepatom [19], Bauchspeicheldrüsenkrebs [20], und Magenkrebs [21]. Wen et al
. [22] verglichen, um die therapeutische Immunität durch mehrere Arten der DC Injektion erreicht, einschließlich intratumoral, intranodal, intravenöse und subkutane Injektionen in Mäusen. Die Überlebensraten wurden dramatisch durch die Impfung über intratumorale Injektion erhöht, im Vergleich zu Injektionen mit anderen Versandmethoden durchgeführt. Pellegatta et al
. [23] berichteten, dass, im Vergleich mit anderen Abgabeverfahren kann intratumorale Injektion von DCs erhöhen Wirksamkeit anti-Tumor durch die intratumorale Umgebung verändern und T-Zell-vermittelten Immunantworten zu steigern. In diesem Fall erhöht WT1-spezifischen CTL-Spiegel wurden nach DC Immuntherapie beobachtet, was darauf hinweist, dass die DCs WT1 präsentiert CD8 + T-Zellen in einer präzisen Art und Weise zu naiv. Wir schlagen vor, dass Magenkrebs eine gute Indikation für die direkte Injektion von DCs und dass die geeignete Injektionsstelle kann die Live-Darstellung ausgewählt wurden mit EGD werden könnte.
Unreife DCs wurden für direkte Injektionen in früheren Studien verwendet, weil ihre phagozytische Fähigkeit hat, wurde in Betracht gezogen, dass der reifen DCs überlegen zu sein [24]. Jedoch haben unreife DCs wurden Toleranz und die Antigen-spezifische Inhibition von Effektor-T-Zellfunktion zu induzieren [25, 26]. Drutman und Trombetta [27] zeigten, dass reife DCs eine robuste Kapazität lösliche Antigene zu erfassen beibehalten. Darüber hinaus wird durch reife DCs internalisierten Antigene wurden effizient auf MHC-Klasse-II präsentiert Zellen und Quer präsentiert auf MHC-Klasse-I-Zellen. De Vries et al
. [28] zeigten, dass reife DCs migrieren effizient in T-Zell-besiedelten Gebieten der Lymphknoten von Melanom-Patienten. Zusammengenommen deuten diese Ergebnisse, dass es sinnvoll sein könnte, reifen DCs für die direkte Injektion in Tumoren zu verwenden.
IHC Ergebnisse für WT1 und MUC1 zeigten eine signifikante Veränderungen nach der Impfung. Mucin ist ein hochmolekulares Glycoprotein, das in den Schutz des Gastrointestinaltrakts Epithel eine wichtige Rolle spielt und im Überfluss auf der luminalen Oberfläche von verschiedenen sekretorischen Epithelzellen normalerweise vorhanden. Die Kernpeptide in der Tandem-Repeat-Domäne in normalen Zellen maskiert und in Krebs-Zell-assoziierten Mucine ausgesetzt. CTLs für MUC1 nur Krebszellen angreifen mit exponierten Tandem-Repeat-Domänen [29]. In diesem Fall waren MUC1-positive Zellen auf der Oberfläche des Siegelring Adenokarzinom vor der Impfung (Abbildung 2c-c "); jedoch wurden nur MUC1-positiven Zellen auf normalen luminalen Epithelzellen nach DC Immuntherapie bestätigt, wie wir (Abbildung 2h-h ") erwartet hatte.
Schlussfolgerungen
Zum bestem Wissen ist dies der erste Bericht ist auf die therapeutischen Effekte von DCs, die Peptide in einem Patienten mit Magenkrebs synthetisiert zielen, die nicht ESD oder kurativ operiert werden konnte.
Zustimmung kaufen Wir präzise Erklärungen der Therapie für den Patienten und seine Familie zur Verfügung gestellt. Sie gaben informierte Zustimmung zur Veröffentlichung dieses Falles Bericht und etwaige begleitende Bilder geschrieben. Eine Kopie der schriftlichen Zustimmung ist zur Überprüfung durch den Editor-in-Chief der Zeitschrift zur Verfügung.
Autoren Informationen
MK Direktor der Klinik seren ist. MN ist ein Personal Assistent an der Abteilung für Magen-Darm-Chirurgie, Kanagawa Cancer Center, Direktor der Klinik Seren und Professor an der Abteilung für Immunologie, St. Marianna University School of Medicine. TS, AC und AN waren Mitarbeiter Assistenten an Seren Clinic. MO, SS, YY, YS und NS sind auch an jeder Universitätsprofessoren
Abkürzungen
COPD.
Chronisch obstruktive Lungenerkrankung
CTLs:
zytotoxischen T-Lymphozyten
DC:
Dendritische Zelle
EGD:
Gastros

HLA:
Humane Leukozyten-Antigen
IHC:
Immunhistochemie
MUC1:
Mucin 1 verbunden sind, Zelloberflächen
WT1:
1. Wilms-Tumor
Erklärungen
Danksagung
wir den Patienten erkennen, die vereinbarten in dieser Studie und seine primäre Onkologen teilnehmen. Diese Studie erhielten keine finanzielle Unterstützung.
Autoren Original vorgelegt Dateien für Bilder
Nachfolgend finden Sie die Links zu den Autoren ursprünglich eingereichten Dateien für Bilder. 12957_2014_1883_MOESM1_ESM.tif Autoren Originaldatei für Abbildung 1 12957_2014_1883_MOESM2_ESM.tif Autoren Originaldatei für Abbildung 2 12957_2014_1883_MOESM3_ESM.tif Autoren Originaldatei für Abbildung 3 Konkurrierende Interessen
Die Autoren haben keine finanziellen oder persönlichen Beziehungen zu Personen oder Organisationen unangemessen das könnte Einfluss dieser Arbeit.
Beiträge der Autoren
MK und MN konzipiert und entwickelt, um die Studie und gesammelt, zusammengesetzt, analysiert und die Daten interpretiert. TS, AC, AN, MO, SS, YY, YS und NS interpretiert die Daten. MK und MN schrieb das Manuskript und die endgültige Manuskript genehmigt. Alle Autoren gelesen und genehmigt haben das endgültige Manuskript.

• Vergleich zwischen besser und schlecht differenziert lokal fortgeschrittenem Magenkrebs in der präoperativen Chemotherapie: eine Retrospektive, vergleichende Studie an einem tertiären Versorgungsins…
• Die Korrelation zwischen Narrow Band Imaging und Histopathologie im Magen-vorragende Vergrößerungs /oder polypoid Läsionen: eine Pilot Machbarkeit trial