Terapeuttinen vaikutus kasvaimensisäisenä injektioita dendriittisolujen paikallisesti uusiutuneen mahasyövän: tapausselostus

Terapeuttinen vaikutus kasvaimensisäisenä injektioita dendriittisolujen paikallisesti uusiutuneen mahasyövän: tapausselostus
Abstract
80-vuotias mies, jolla on historia mahasyövän ja keuhkolaajentuma tehtiin distaalinen gastrectomy mahasyövän vuonna 1997. vuonna 2010 tähystystutki- paljasti masentunut-tyyppinen vaurio suullisessa puolella anastomosis, joka oli diagnosoitu sinettisormus-rengas adenokarsinooma. Kirurginen hoito katsottiin, mutta hylättiin, koska obstruktiiviset ja rajoittavia hengityselinten tapahtumia. Kemoterapia lopetettiin haittavaikutusten takia. Tähystys käytettiin hallinnoida kasvaimensisäisenä injektioita dendriittisolujen (DC) kohdistaminen syntetisoitiin peptidien Wilms kasvain 1 (WT1) ja musiini- 1, solun pintaan liittyvä (MUC1). Immunohistokemiallinen analyysi kasvaimen tutkimustulokset osoittivat positiivisuutta WT1 ja MUC1. Kuukauden kuluttua seitsemän sykliä DC oli annettu (marraskuun 2010 huhtikuu 2011), ei epäilyttäviä vauriot olivat ilmeisiä, ja hänen koepala tulokset olivat normaalit. Potilas on ollut remissiossa 30 kuukautta. Kasvaimensisäistä injektiot DC osoitti terapeuttisia vaikutuksia tässä potilasryhmässä, joka ei ole voitu suorittaa endoskooppinen limakalvon alaista leikkelyn tai leikkausta.
Avainsanat
dendritic cell WT1 MUC1 immunoterapia ja toistuva mahasyövän Background
syöpien ovat toiseksi yleisin syy syöpään liittyvät kuolemat maailmanlaajuisesti [1]. Vaikka leikkaus on lopullinen hoito syöpien, vaihtoehtoiset hoitomuodot sisältävät endoskooppinen limakalvon alaista leikkely (ESD), kemoterapia, ja sädehoitoa.
Viime aikoina on raportoitu, että puolet kaikista maligniteettien ilmetä potilailla vuotiaista yli 70 vuotta [2 ]. Krooninen keuhkoahtaumatauti (COPD), joka on tunnettu siitä, että ilmavirtauksen, on yleinen myös iäkkäillä henkilöillä [3]. Joissakin tapauksissa standardi terapiaa maligniteetit ei sovellu, koska läsnäolo keuhkoahtaumataudin. Sakai et al
. [4] osoitti, että COPD oli itsenäinen riskitekijä sisäisten ja leikkauksen keuhkotapahtumia. Lisäksi, DIMOPOULOU et ai
. [5], että jotkut syöpälääkkeet aiheuttaa keuhkotoksisuutta. Esimerkiksi paklitakseli, dosetakseli, ja irinotekaani on raportoitu aiheuttavan epäspesifistä interstitiaalipneumoniitin. Joissakin tapauksissa, invasiivisia hoito saattaa olla tarpeen iäkkäille potilaille, joiden COPD.
Dendriittisolut (DC) ovat antigeenejä esitteleviä soluja, jotka ovat erikoistuneet aloittamiseksi T-solujen immuniteetti [6, 7]. DC-pohjainen immunoterapia, joka on kohdistettu syntetisoitujen peptidien on hiljattain käytetty eri maligniteettien, mukaan lukien mahasyöpä [8-11]. Sopiva valinta syntetisoitujen peptidien on tarpeen parantaa terapeuttista vaikutusta DC-pohjainen immunoterapia mahasyövän. Vuonna 2009 syöpäantigeenipep- priorisointia hanke National Cancer Institute sijoittui Wilms kasvain 1 (WT1) ja musiini- 1, solun pintaan liittyvä (MUC1) korkeimpana ja toiseksi korkein prioriteetti antigeenejä, vastaavasti [12]. Määritettynä immunohistokemiallinen (IHC), ilmaukset WT1 ja MUC1 mahalaukun syövistä todettiin olevan 42-53% [13] ja 93% [14], vastaavasti.
Kasvaimensisäisenä hallinto käyttäen DC fagosytoosin on mahdollinen myönteinen vaihtoehto [15]. Käytimme gastroskopia (EGD) hallinnoimaan kasvaimensisäisenä injektioita DC pulssitettiin WT1 ja MUC1.
Case esitys
80-vuotias mies, jolla on historia mahasyövän ja keuhkolaajentuma tehtiin Billroth I distaalinen gastrectomy varhaisen mahasyöpä vuonna 1997. vuonna 2005 ja 2009 hänet ohjattiin endoskooppinen limakalvon resektio paikallisten mahalaukun syövän uusiutumiseen (hyvin erilaistunut putkimainen adenokarsinooma). Toukokuussa 2010 hän kävi läpi seurannan EGD joka paljasti masentunut-tyyppinen leesioiden (10 x 18 mm: n kokoiset) runkoon vatsan lähellä anastomosis (O) (kuva 1a). Histopatologinen analyysi koepalojen paljasti sinettisormus-rengas adenokarsinooma (kuvio 2a-a "). Tietokonetomografia skannaus ei paljastanut mitään etäpesäke. Vaikka kokoresektioksi mahan jäännös on potentiaalisesti parantavaa hoitoa, tämä leikkaus ei tehty ottaen huomioon potilaan keuhkojen toimintahäiriö, joka sisälsi obstruktiivinen ja rajoittava keuhkosairaus (vitaalikapasiteetissa (VC): 2,12 L,% VC: 71,9%; pakotti uloshengityksen 1,0 sekunnissa: 42,9%). Potilas oli 50-vuotisen historian tupakoinnin. ESD oli vasta koska syöpä oli eriyttämätön tyyppiä. Siksi hoito TS-1 (tegafuurin, gimerasiilia ja oterasiilikaliumia; Taiho Pharmaceutical Co., Ltd, Tokio, Japani) aloitettiin elokuussa 2010. Neljän viikon kuluttua TS-1 annon, hoitoon liittyviä anoreksia (luokka 2; Yhteinen Terminologia kriteerit haittavaikutukset, versio 4.0) havaittiin, ja siten, kemoterapia lopetettiin potilaan pyynnöstä. Kuva 1 gastroskopia (EGD) kuvia. (A, b) Tyyppi 0-IIc vaurio (10 x 18 mm: n kokoiset) runkoon vatsan lähellä anastomoottisia alue (O) ennen rokotusta (a). Mahalaukun syöpä taantui epämääräinen vaurion kuukauden kuluttua viimeinen sykli hoidon (b). Nuolet osoittavat sijainti syöpä.
Kuvioon 2 histologinen analyysi kudosnäytteessä. Hematoksyliinillä ja eosiinilla (H &E) värjäys (aa ", ff") ja immunohistokemia leikesarjojen kudoksia Wilms kasvain 1 (WT1) (bb ", gg") ja musiini- 1, solun pintaan liittyvä (MUC1) ( cc ", hh"). (A-a ", f-f") H & E värjäys ennen ja jälkeen rokotuksen. H & E värjäys osoittaa sinettisormus-rengas kudokseen ennen rokotusta (a-a "). Kuukauden kuluttua viimeisestä antamisesta patologinen tutkimus paljastaa normaalit luminaa- epiteelisolujen (f-f "). (B-b ", g-g") Värjäys WT1 ennen ja jälkeen rokotuksen. Näytteet positiivinen WT1 noin 60% soluista ennen rokotusta kasvainkohdassa (b-b "), ja merkittävä väheneminen WT1 positiivisuus vahvisti rokotuksen jälkeen (g-g"). (C-c ", h-h") värjäys MUC1 ennen ja jälkeen rokotuksen. Noin 70% kasvainsoluista olisi positiivisia MUC1 ennen rokotusta (c-c "), ja MUC1 värjäytyminen havaittiin normaalissa rauhaset vasta rokotuksen jälkeen (f-f"). Immunohistokemiallisella värjäyksellä CD4 + ja CD8 + T-solujen biopsianäytteissä. Leikesarjojen kudosten käytetään H & E värjäys valmis ja värjättiin CD4 ja CD8 (d, e, i, j). (D-d ", i-i") värjäys CD4 ennen (d-d ') ja rokotuksen jälkeen (i-i "). (E-e ", j-j") värjäys CD8 ennen (e-e ') ja rokotuksen jälkeen (j-j "). CD4 + ja CD8 + T-solujen havaittiin useammin normaaleissa mahan kudoksissa rokotuksen jälkeen kuin oli havaittu tuumorikudoksissa ennen rokotusta. (Suurennus: a-j 4 ×, a'-j "10 x, joka on" -j "20 x).
Menetelmiä, joita käytettiin DC valmistamiseksi on kuvattu aikaisemmin [16]. DC: eitä pulssitettiin major histocompatibility complex (MHC) -I-rajoitettu WT1-peptidi-antigeenejä, mukaan potilaan HLA (HLA) -A kuvio (HLA-A 2402; CYTWNQMNL (mutantti WT1-peptidi, Neo-MPS, San Diego , California, Yhdysvallat) ja MUC1 pitkä peptidi (30 mer 20 mg /ml; TRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAP- GSTAP, Greiner Japan, Tokio, Japani)). DC: eitä karakterisoitiin käyttämällä virtaussytometria sen varmistamiseksi, että ne saavutetaan tyypillinen fenotyypin kypsillä DC. Pinta-molekyylit, jotka ilmaisema DC määritettiin. Fenotyyppi CD14 - /low /HLA-DR + /HLA-ABC + /CD80 + /CD83 + /CD86 + /CD40 + /CCR7- + katsottiin määritellä kypsillä DC. DC: eitä kylmäsäilytettiin saakka hallinnon. DC Suspensio säädettiin kokonaistilavuuteen 1,0 ml suolaliuosta.
Kuuden kuukauden kuluttua mahalaukun syövän uusiutumista oli diagnosoitu, kasvaimeen injektiot DC annettiin käyttäen EGD välillä marraskuussa 2010 ja huhtikuussa 2011. Tämä hoito on hyväksynyt Institutional Review board of Isoukai (hyväksynnän numero: 26-1) ja suoritettiin noudattaen Helsingin julistuksen.
Rokotukset toistettiin seitsemän kertaa kahden kahdeksaan viikon välein (noin 2,99 x 10 7 solua /suonensisäisesti neljän ensimmäisen rokotuksen kahden viikon välein ja kolme viimeistä rokotuksista neljästä kahdeksaan viikon välein). Neula käytettiin (halkaisija 25 G, pituus 4 mm) antaa DC neljässä limakalvon alaista kerrosta paikoissa ympäri kasvain. Myöhemmin me annettiin OK432 (1-3KE) liuotettuna 0,5 ml: aan suolaliuosta kahdessa sivustoja submukosaalisen kerroksen ympärille kasvain. DC hoito oli hyvin siedetty ja ainoa hoitoon liittyvä haittavaikutus oli kuume, joiden kehon lämpötila on yli 38 ° C: ssa kahden päivän kuluttua neljännen rokotuksen. Kuukauden kuluttua viimeisestä antamisesta mahasyövän todettiin taantuneet täydellisesti (kuva 1b). Histopatologinen tutkiminen koepalojen paljastaneet mitään sinettisormus-rengas soluja (kuvio 2F-f "). Aikana 30 kuukauden kuluessa DC-pohjainen immunoterapia, ei patologisia toistuminen on havaittu. Laboratorio tiedot osoittivat vähennykset karsinoembryonaalisesta antigeeni ja hiilihydraattiantigeeniä 19-9 tasoilla jälkeen DC terapian, joka laski 8,2-6,8 ng /ml (normaali alue: < 5,0 ng /ml) ja 33,2-24,7 U /ml (normaali alue: < 37,0 U /ml), tässä järjestyksessä.
IHC WT1 (Monoclonal 6 F-H2, Dako Cytomation, Carpinteria, Kalifornia, Yhdysvallat) [13] ja MUC1 (Becton Dickinson Labware, Franklin Lakes, New Jersey, Yhdysvallat Yhdysvallat) suoritettiin, kuten aiemmin on kuvattu [17], muutamin muutoksin. IHC tuloksista oli positiivinen WT1 noin 60% sinettisormus soluja ennen rokotusta (kuva 2b-b "); kuitenkin, määrä positiivisiksi värjäytyneiden solujen on huomattavasti alennettu rokotuksen jälkeen (kuvio 2g-g "). Noin 70% soluista oli positiivisia MUC1 ennen rokotusta (kuva 2c-c "). Rokotuksen jälkeen remodeling vahvistettiin paikalle pahanlaatuisten solujen, ja MUC1 positiivisuutta havaittiin vain normaaliasennossa rauhaset (kuvio 2h-h ").
Lisääntymistä ei suhteissa CD4 + ja CD8 + T-solujen havaittiin perifeerisen veren, joka perustuu arvioihin ennen rokotusta ja sen jälkeen (CD4 + T-solut: 43,9-42,5%; CD8 + T-solut: 29,3-25,5%). Toisaalta, CD4 + ja CD8 + T-soluja havaittiin useammin normaali mahan kudoksen rokotuksen jälkeen (kuva 2i-i ", jj"), kuin ne oli havaittu kasvainkudoksessa ennen rokotuksen jälkeen (kuvio 2d-d ", ee").
taajuus WT1-spesifisten sytotoksisten T-lymfosyyttien (CTL: t) kasvoi 0,03-0,08%. Käytetty menetelmä on kuvattu edellisessä raportissa [16]. Tällä 31 kuukautta sen jälkeen, kun lopullinen rokotuksen tasot WT1-spesifisten CTL: ien pysyi korkeana (0,10%) (kuvio 3a-c). Kuvio 3 analyysi Wilms kasvain 1 (WT1) spesifisen sytotoksisia T-lymfosyyttejä (CTL). (A) ennen rokotusta. (B) jälkeen rokotuksen. (C) 31. kuukauden kuluttua lopullisen rokotuksen. WT1-spesifiset CTL: t tasot ennen rokotusta kasvoi 0,03 (a) 0,08% lopullisessa rokotuksen jälkeen (b). 31 kuukauden kuluttua lopullisen rokotuksen, WT1-spesifinen CTL tasojen nousi 0,10% (c).
Keskustelu
Tällöin rajoittava keuhkosairaus johtanut ensisijainen onkologi valita kemoterapiaa sijasta leikkausta. Kuitenkin potilaalle kehittyi sietämätöntä solunsalpaajahoitoon liittynyt anoreksiaa, mikä edellytti hoidon keskeyttämistä. Koska muutamat aikaisemmat tutkimukset ovat osoittaneet, että DC immunoterapia voidaan turvallisesti antaa syöpäpotilaille niin vähän invasiivisia hoito [8, 9, 18], päätimme tämä terapia meidän potilaalle. Suora injektio DC kasvaimia on tutkittu kliinisissä tutkimuksissa, mukaan lukien hepatooma [19], haimasyöpä [20], ja mahasyövän [21]. Wen et ai
. [22] verrattuna terapeuttisen immuniteetin aikaan useita eri DC-, kuten kasvaimeen, solmukkeensisäinen, laskimoon ja ihon alle injektiot hiirillä. Eloonjäämisluvut olivat kasvoi jyrkästi rokotuksen kautta kasvaimeen injektio, verrattuna injektiot suoritettiin käyttäen muita toimitustapoja. Pellegatta ym
. [23] on raportoitu, että verrattuna muihin toimitus menetelmiä, tuumorinsisäinen injektio DC voi lisätä antituumoriteholla muuttamalla kasvaimeen ympäristön ja lisätä T-soluvälitteinen immuunivaste. Tässä tapauksessa lisääntynyt WT1 CTL tasot havaittiin jälkeen DC immunoterapia, mikä osoittaa, että DC esitellään WT1 naiivi CD8 + T-solujen täsmällisesti. Ehdotamme, että mahasyövän voisi olla hyvä indikaatio suorasuihkutus DC: iden ja että asianmukainen pistoskohta voidaan valita käyttämällä eläviä kuvantamisen EGD.
Epäkypsiä DC käytettiin suoraan injektioita aiemmissa tutkimuksissa, koska niiden fagosytoottiseksi kyky on pidetty parempi kuin kypsillä DC: [24]. Kuitenkin, epäkypsien DC: iden on osoitettu sietokyvyn ja antigeeni-spesifinen esto efektori-T-solu-toiminto [25, 26]. Drutman ja Trombetta [27] osoitti, että kypsillä DC säilyttänyt vankan kyky vangita liukoisen antigeenejä. Lisäksi antigeenejä sisäistää kypsät DC: itä tehokkaasti esitettiin MHC luokan II solujen ja rajat esitetään MHC-luokan I soluihin. De Vries et al
. [28] osoitti, että kypsillä DC tehokkaasti kulkeutua T-solu-asutusalueiden imusolmukkeiden melanooma potilaiden. Yhdessä nämä havainnot viittaavat siihen, että se voisi olla järkevää käyttää kypsillä DC suoraan injektioita kasvaimiin.
IHC tulokset WT1 ja MUC1 osoitti merkittäviä muutoksia rokotuksen jälkeen. Musiini on suuri molekyylipaino, glykoproteiini, jolla on tärkeä tehtävä suojella ruoansulatuskanavassa epiteelin ja on normaalisti läsnä runsaasti luminaalipinnalla eri erittävien epiteelisolujen. Ydin peptidien tandem-toisto verkkotunnuksen naamioidaan normaaleissa soluissa ja altistuvat syöpäsolujen liittyvien musiineja. CTL: t MUC1 vain hyökätä syöpäsolut altistuvat tandem repeat verkkotunnuksia [29]. Tällöin MUC1-positiiviset solut olivat läsnä pinnalla sinettisormus-rengas adenokarsinooma ennen rokotusta (kuva 2c-c "); kuitenkin, MUC1-positiiviset solut vain vahvisti normaaleilla luminal epiteelisolujen jälkeen DC immunoterapia, koska odotimme (kuva 2h-h ").
Johtopäätökset
Parhaan tietomme mukaan tämä on ensimmäinen raportti terapeuttiset vaikutukset DC: iden tähtäävää syntetisoitujen peptidien potilaalla mahalaukun syöpä, joka ei ole voitu suorittaa ESD tai parantava leikkaus.
Suostumus
Annoimme täsmällisiä selvityksiä terapian potilaan ja hänen perheensä. He antoivat kirjallisen tietoisen suostumuksen julkaisemiseen Tällöin raportin ja mukana kuvia. Kopio kirjallinen suostumus on nähtävillä jota Editor-in-Chief tämän lehden.
Kirjoittajien tiedot
MK on johtaja Seren Clinic. MN on henkilöstön assistentti laitoksella ruuansulatuskanavan leikkauksen, Kanagawa Cancer Center, johtaja Seren Clinic, ja professori Department of Immunology, St Marianna University School of Medicine. TS, AC, ja olivat henkilökunta avustajien Seren Clinic. MO, SS, YY, YS, ja NS ovat myös professorit kussakin yliopistossa.
Lyhenteet
COPD:
Keuhkoahtaumatauti
CTL: iä:
Sytotoksiset T-lymfosyytit
DC:
dendritic cell
EGD:
gastroskopia

HLA:
HLA
IHC:
immunohistokemia
MUC1:
Mucin 1 , solun pintaan liittyvä
WT1:
Wilmsin kasvain 1.
julistukset
Kiitokset
Tunnustamme potilas suostui osallistumaan tähän tutkimukseen ja hänen ensisijainen onkologit. Tämä tutkimus ei saanut taloudellista tukea.
Kirjoittajien alkuperäinen toimitti asiakirjat kuville
Alla linkkejä kirjoittajien alkuperäiset toimitti asiakirjat kuville. 12957_2014_1883_MOESM1_ESM.tif Kirjoittajien alkuperäinen tiedosto kuvio 1 12957_2014_1883_MOESM2_ESM.tif Kirjoittajien alkuperäinen tiedosto kuvio 2 12957_2014_1883_MOESM3_ESM.tif Kirjoittajien alkuperäinen tiedosto kuvio 3 Kilpailevat edut
Kirjoittajat ole taloudellisia tai henkilökohtaisia ​​suhteita ihmiset tai organisaatiot, jotka voisivat epäasianmukaisesti vaikuttaa tähän työhön.
Tekijät osuudet
MK ja MN suunniteltu ja tutkimuksen ja kerätään, kootaan, analysoidaan ja tulkitaan tiedot. TS, AC, AN, MO, SS, YY, YS, ja NS tulkitsi tiedot. MK ja MN kirjoitti käsikirjoituksen ja hyväksytty lopullinen käsikirjoitus. Kaikki kirjoittajat luettu ja hyväksytty lopullinen käsikirjoitus.

• Vertailu paremmin ja huonosti eriytetty paikallisesti edennyt mahasyöpä preoperative kemoterapia: retrospektiivinen, vertaileva tutkimus yhdellä erikoissairaanhoidon institute
• Korrelaatio suurentava kapea kuvantamisen ja histopatologia mahalaukun ulommaisimmassa /tai polypoid vaurioiden: pilotti toteutettavuus trial