Terapeutický účinok nitronádorových injekcií dendritických buniek pre lokálne recidivujúce rakoviny žalúdka: prípad report

terapeutický účinok nitronádorových injekcií dendritických buniek pre lokálne recidivujúce rakoviny žalúdka: Správa o prípad
Abstrakt
80-ročný muž s História rakovinou žalúdka a pľúcna emfyzém podstúpil distálnej gastrektómii na rakovinu žalúdka v roku 1997. v roku 2010, endoskopická vyšetrenie odhalilo depresiu typu lézie u ústnej časti anastomózy, ktorý bol diagnostikovaný ako pečatný prsteň-adenokarcinóm. Chirurgická liečba bola považovaná, ale bol odmietnutý z dôvodu obštrukčnej a reštriktívnych respiračných udalostí. Chemoterapia bola ukončená z dôvodu nežiaducich účinkov. Endoskopia bola použitá k správe intratumorová injekcie dendritických buniek (DCS), ktoré cielia syntetizované peptidy Wilms nádoru 1 (WT1) a mucín 1, bunkovom povrchu spojeného (MUC1). Imunohistochemické analýza nádorových vzoriek je uvedené pozitivitu na WT1 a MUC1. Jeden mesiac po tom, čo bol podaný sedem cyklov DC (medzi novembrom 2010 a aprílom 2011), žiadne podozrivé lézie boli evidentné a jeho biopsia výsledky boli normálne. Pacient bol v remisii po dobu 30 mesiacov. Intratumorová injekcie DC ukázali liečebné účinky u tohto pacienta, ktorý nemohol podstúpiť endoskopické submukóznu pitvy alebo chirurgický zákrok.
Kľúčové
dendritických buniek WT1 MUC1 Imunoterapia a recidivujúce rakovina žalúdka pozadí
Žalúdočné rakoviny sú druhou najčastejšou príčinou úmrtí súvisiacich s rakovinou po celom svete [1]. Aj keď operácia je definitívny liečba karcinómov žalúdka, alternatívne liečebné spôsoby zahŕňajú endoskopické submukóznu disekcia (ESD), chemoterapiu a rádioterapiu.
V poslednej dobe bolo popísané, že polovica všetkých malignít sa vyskytujú u pacientov vo veku nad 70 rokov [2 ]. Chronická obštrukčná choroba pľúc (COPD), ktorá je charakterizovaná tým, obmedzenie prietoku vzduchu, je tiež bežné u starších osôb [3]. V niektorých prípadoch, štandardná terapia pre malignít nie je vhodný z dôvodu prítomnosti CHOCHP. Sakai et al
. [4] ukázal, že CHOCHP je nezávislým rizikovým faktorom pre intra- a pooperačných pľúcnych príhod. Okrem toho, Dimopoulou et al
. [5] opisuje, že niektoré lieky proti rakovine vyvolať pľúcnu toxicitu. Napríklad, paclitaxel, docetaxel, a irinotekan boli hlásené spôsobiť nešpecifické intersticiálnu pneumóniu. V niektorých prípadoch, minimálne môže byť potrebné invazívne terapie u starších pacientov s CHOCHP.
Dendritické bunky (DCS), sú antigén prezentujúce bunky, ktoré sú špecifické pre začatie imunity T-buniek [6, 7]. DC-založené imunoterapiu, ktorý sa zameriava syntetizované peptidy sa v poslednej dobe používa rôznych nádorových ochorení, vrátane rakoviny žalúdka [8-11]. Vhodná voľba syntetizovaných peptidov je nevyhnutné zvýšiť liečebný účinok DC imunoterapia založené na rakovinu žalúdka. V roku 2009 priorít projekt antigén rakovina National Cancer Institute zaradila Wilms nádor 1 (WT1) a mucín 1, na povrchu buniek spojený (MUC1) ako najvyšší a druhý najvyšší prioritou antigény, resp. [12] Ako je definované pomocou IHC (IHC), sa zistilo, že výrazy WT1 a MUC1 v karcinómov žalúdka, že 42 až 53% [13] a 93% [14], resp.
Intratumorální podávanie za použitia DC fagocytózy je potenciálny priaznivé voľba [15]. Použili sme Ezofagogastroduodenoskopie (EGD) spravovať intratumorová injekcie DC pulzujúcich s WT1 a MUC1.
Case prezentácie
80-ročný muž s anamnézou žalúdočné rakoviny a pľúcne emfyzém podstúpil Billroth Aj distálnej gastrektómii pre včasné rakovina žalúdka v roku 1997. v roku 2005 a 2009, on bol odvolával sa na endoskopické slizničnej resekcie žalúdka lokálnej recidívy rakoviny (dobre diferencovaným rúrkového adenokarcinóm). V máji 2010 prešiel nadväzujúce EGD, ktorá odhalila depresiu typu lézie (10 x 18 mm vo veľkosti) na tele žalúdka u anastomózy (O) (obrázok 1a). Histopatologické analýzy bioptických vzoriek odhalila pečatný-krúžok adenokarcinóm (2a-a "). Vypočítaný skenovanie tomografia neodhalili žiadne metastázy. Aj keď celkový resekcia žalúdka zvyšku je potenciálne kuratívnu liečbu, táto operácia nebola vykonaná s ohľadom na pľúcne dysfunkcie pacienta, ktorý zahŕňal obštrukčné a reštriktívne pľúcne choroby (vitálna kapacita (VC): 2,12 L;% VC: 71,9%; nútenej expiračná objem 1,0 sekundy: 42,9%). Pacient mal 50-ročnú históriu fajčenia. ESD bolo kontraindikované, pretože rakovina bol nediferencovanej typu. Preto liečba TS-1 (tegafur, gimeracil a oteracil draselný, Taihu Pharmaceutical Co., Ltd., Tokyo, Japonsko) sa začala v auguste 2010. Štyri týždne po TS-1 podanie, súvisiace s liečbou anorexia (stupeň 2; všeobecná terminológia kritériá pre výskyt nežiaducich účinkov, bola pozorovaná verzia 4.0), a preto chemoterapia bola prerušená na žiadosť pacienta. Obrázok 1 Ezofagogastroduodenoskopie (EGD) obrazy. (A, b) Typ 0-IIc léziu (10 x 18 mm vo veľkosti) na tele žalúdka u anastomózy oblasti (O) pred očkovaním (a). Žalúdočné rakovina ustúpila do temnej lézie jedného mesiaca po poslednom cykle liečby (b). Šípky označujú umiestnenie rakoviny.
Obrázok 2 Histologická analýza vzorky biopsie. Hematoxylínom a eosínu (H &E) farbenie (AA "FF") a imunohistochémia sekvenčných rezoch tkanív pre Wilms tumoru 1 (WT1) (bb ", GG") a mucín 1, na povrchu buniek spojené (MUC1) ( cc "hh"). (A-a ", f-f") H &E farbenie pred a po očkovaní. H & E farbenie ukazuje Signet-ring buniek v tkanive pred očkovaním (a-a "). Jeden mesiac po poslednom podaní, patologické vyšetrenia odhaľujúce normálne luminální epitelové bunky (f-f "). (B-b ", g-g") Farbenie na WT1 pred a po očkovaní. Vzorky pozitívne na WT1 približne u 60% buniek pred vakcináciou v mieste nádoru (b-b ") a pozoruhodný zníženie WT1 pozitivity potvrdená po vakcinácii (g-G"). (C-c ", h-h") Farbenie na MUC1 pred a po očkovaní. Približne 70% nádorových buniek pozitívnych na MUC1 pred očkovaním (c-c ") a MUC1 farbenie bol pozorovaný v normálnych žliaz len po vakcinácii (f-f"). Imunohistochemické farbenie na CD4 + a CD8 + T-buniek vo vzorkách biopsie. Sériové rezy tkanív, používaných pre H &E farbenie pripravené a zafarbené na CD4 a CD8 (d, e, i, j). (D-d ", i-i") Farbenie na CD4 pred (d-d ") a po očkovaní (i-i"). (E-e ", j-j") Farbenie na CD8 pred (e-e ") a po očkovaní (j-j"). CD4 + a CD8 + T-bunky pozorované častejšie v normálnej žalúdočnej tkanive po očkovaní, než bolo pozorované v nádorových tkanivách pred vakcináciou. (Zväčšenie: a-j 4 x, a'-j "x 10, je" -j "20 x).
Metódy, ktoré boli použité na prípravu DC boli popísané skôr [16]. DCS sa pulzovali s hlavného histokompatibilního komplexu (MHC) -I-obmedzený WT1 peptidové antigény, v závislosti na pacientovom ľudský leukocytárna antigén (HLA) -A vzor (HLA-A 2402; CYTWNQMNL (mutant WT1 peptid, Neo-MPS, San Diego , Kalifornia, Spojené štáty) a MUC1 dlhý peptid (30 mer na 20 mg /ml, TRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAP- GSTAP; Greiner Japonsko, Tokyo, Japonsko)). DCS boli charakterizované pomocou prietokovej cytometrie, aby sa zabezpečilo, že dosiahol typický fenotyp zrelých DC. Povrchové molekuly, ktoré boli vyjadrené pomocou DC boli stanovené. Fenotyp CD14 - /low /HLA-DR + /HLA-ABC + /CD80 + /CD83 + /CD86 + /CD40 + /CCR7 + bol považovaný za definovať zrelé DCS. DCS sa uchovávajú v zmrazenom stave až do dňa podania. Suspenzie DC bola upravená na celkovom objeme 1,0 ml fyziologického roztoku.
Šiestich mesiacov odo dňa žalúdka recidívy rakoviny bol diagnostikovaný, intratumorová injekcie DC boli podávané s použitím EGD v období od novembra 2010 do apríla 2011. Táto úprava bola schválená inštitucionálne Review board of Isoukai (schvaľovacie číslo: 26-1) a bola vykonaná v súlade s Helsinskou deklaráciou
Očkovanie boli opakovali sedemkrát za dva až osem týždenných intervaloch (približne 2,99 × 10 7 buniek /. vstrekovanie, z ktorých prvé štyri očkovanie v dvojtýždňových intervaloch a posledné tri očkovania u štyroch až ôsmich-týždňových intervaloch). Ihla bola použitá (priemer 25 g, dĺžka 4 mm) na spravovanie radiče domény na štyroch miestach submukóznu vrstvy okolo nádoru. Následne sme podávať OK432 (1-3KE) rozpustený v 0,5 ml fyziologického roztoku na dvoch miestach v submukóznu vrstvy okolo nádoru. terapia DC bola dobre tolerovaná a jediný súvisiace s liečbou udalosť bola horúčka, s telesnou teplotou nad 38 ° C po dobu dvoch dní po štvrtej vakcinácii. Jeden mesiac po poslednom podaní, bolo zistené, že rakovina žalúdka, aby sa vrátil do pôvodného stavu úplne (obrázok 1b). Histopatologickému vyšetrenie vzoriek biopsie neodhalila Signet-ring buniek (obr 2F-f "). V priebehu 30 mesiacov po DC-založené imunoterapiu, nebol pozorovaný žiadny patologický opakovania. Laboratórne údaje naznačujú zníženie karcinoembryonálneho antigénu a sacharidov antigén 19-9 úrovne po liečbe DC, ktorá sa znížila z 8,2 na 6,8 ng /ml (normálna rozmedzie: < 5,0 ng /ml) a od 33,2 do 24,7 U /ml (normálne rozmedzie: . < 37,0 u /ml), v uvedenom poradí
IHC pre WT1 (monoklonálne 6 F-H2, Dako Cytomation, Carpinteria, Kalifornia, USA) [13] a MUC1 (Becton Dickinson, laboratórne; Franklin Lakes, New Jersey, Spojené stavy) bola vykonaná ako bolo opísané skôr [17], s niekoľkými úpravami. IHC výsledky boli pozitívne na WT1 v približne 60% pečatný prsteň buniek pred očkovaním (Obrázok 2b-B "); Avšak, počet buniek Pozitívne sfarbenie bola výrazne znížená po očkovaní (obr 2g-g "). Približne 70% buniek bolo pozitívnych na MUC1 pred očkovaním (2c-c "). Po očkovaní prestavba bola potvrdená na mieste malígnych buniek, a MUC1 pozitivita bola pozorovaná len u normálnych žliaz (obr 2h-H ").
V pomeroch CD4 nezvyšuje + a CD8 + T-buniek boli zaznamenané v periférnej krvi, na základe vyhodnotenia vykonanej pred a po očkovaní (CD4 + T-buniek: 43,9 - 42,5%; CD8 + T-buniek: 29,3-25,5%). Na druhej strane, CD4 + a CD8 + T-buniek boli pozorované častejšie v normálnej žalúdočnej tkanive po očkovaní (obr 2i-i ", JJ"), ako bolo pozorované v nádorových tkanivách pred očkovanie (obr 2d-d ", ee").
frekvencia cytotoxických T-lymfocytov špecifických pre WT1 (CTL) vzrástol od 0,03 do 0,08%. Použitá metóda bola popísaná v našej predchádzajúcej správe [16]. Na 31 mesiacov po poslednom očkovaní, hladiny WT1 špecifické CTL zostala vysoká (0,10%) (obrázok 3A-C). Obrázok 3 Analýza Wilms tumor 1 (WT1) -specifických cytotoxických T-lymfocytov (CTL). (A) Pred očkovaním. (B) po vakcinácii. (C) Po 31 mesiacoch po poslednom očkovaní. WT1 špecifické hladiny CTL pred vakcináciou sa zvýšila z 0,03 (a) 0,08% v poslednom očkovaní (b). Na 31 mesiacov po poslednom očkovaní, WT1 špecifické hladiny CTL sa zvýšil na 0,10% (c).
Diskusia
V tomto prípade, reštriktívny pľúcne ochorenie viedlo primárne oncologist sa rozhodnúť pre chemoterapiu miesto chirurgického zákroku. Avšak, pacient vyvinula neúnosný chemoterapiou spojená anorexiu, ktorý si vynútili prerušenie liečby. Vzhľadom k tomu, niekoľko Predchádzajúce štúdie ukázali, že DC imunoterapia by mohol byť bezpečne podávať pacientom s rakovinou, ako minimálne invazívne liečbu [8, 9, 18], zvolili sme túto terapiu pre naše pacienta. S priamym vstrekovaním DCS do nádoru bola skúmaná v klinických štúdiách, vrátane tých, na hepatómy [19], rakoviny pankreasu [20], a rakoviny žalúdka [21]. Wen et al
. [22] porovnávali terapeutický imunitu dosiahnutý niekoľko druhov injekcií DC, vrátane intratumorová, intranodal, intravenózna a podkožného injekcie u myší. Miera prežitia sa dramaticky zvýšil očkovaním pomocou intratumorální injekcie, v porovnaní s injekciou vykonáva za použitia iných metód dodania. Pellegatta et al
. [23] uviedli, že v porovnaní s inými metódami, intratumorální injekcie DC môže zvýšiť protinádorovú účinnosť zmenou intratumorální prostredia a zvýšenie T-bunkami sprostredkovanej imunitnej odozvy. V tomto prípade zvýšenej hladiny CTL WT1 špecifické boli pozorované po DC imunoterapia, čo ukazuje, že DC prezentované WT1 naivné CD8 + T-bunky v presným spôsobom. Navrhujeme, aby rakovina žalúdka by mohlo byť dobré znamenie pre priame vstrekovanie DC a že vhodným miestom pre injekcie môžu byť vybrané pomocou zobrazovania živých s EGD.
Nezrelým DC boli použité pre priame injekcie v skorších štúdiách, pretože ich fagocytárnu schopnosť má boli považované za lepšie ako u zrelých DC [24]. Avšak, nezrelé DC bolo preukázané, že indukuje toleranciu a inhibíciu antigén-špecifické funkcie efektorových T-buniek [25, 26]. Drutman a Trombetta [27] ukázal, že zrelé DC udržal vysokej schopnosti zachytiť rozpustné antigény. Okrem toho, antigény internalizované zrelých DC bolo účinne prezentované na MHC triedy II buniek, a cross-prezentované na bunkách MHC I. triedy. De Vries et al
. [28] preukázali, že zrelé DC efektívne migrovať do T-buniek obývaných oblastí lymfatických uzlinách pacientov s melanómom. Dohromady tieto nálezy naznačujú, že by to mohlo byť rozumné použiť zrelé radiče domény pre priame injekcie do nádoru.
Výsledky IHC pre WT1 a MUC1 uvedené významné zmeny po vakcinácii. Mucín je glykoproteín o vysokej molekulovej hmotnosti, ktorý hrá dôležitú úlohu pri ochrane epitel gastrointestinálneho traktu a je normálne prítomný vo veľkom množstve na luminální povrch rôznych sekrečných epiteliálnych buniek. Jadro peptidy v tandemových repetície domény sú maskované v normálnych bunkách a vystavené v rakovinových buniek asociované mucínu. CTL pre MUC1 rakovinových buniek iba útočných s odhalenými tandemov domén [29]. V tomto prípade, MUC1-pozitívne bunky boli prítomné na povrchu Signet-krúžku adenokarcinóm pred očkovaním (2c-c "); Avšak, MUC1-pozitívne bunky boli potvrdené iba na normálnych lumina epitelové bunky po DC imunoterapiu, ako sme očakávali (obr 2h-H ").
Závery
Podľa nášho najlepšieho vedomia, toto je prvá správa o terapeutické účinky DC, ktoré sú zamerané syntetizované peptidy u pacientov s karcinómom žalúdka, ktorí nemohli podstúpiť ESD alebo kuratívnu chirurgický zákrok.
Súhlas
sme poskytli presné vysvetlenie liečby pre pacienta a jeho rodiny. Dali písomný informovaný súhlas na zverejnenie tomto prípade správa a všetky sprievodné obrázky. Kópia písomného súhlasu je k dispozícii na kontrolu zo strany Editor-in-Chief tohto časopisu. Informácie
autorov
MK je riaditeľ Seren Clinic. MN je pomocnému personálu na oddelení gastrointestinálne operácií, Kanagawa Cancer Center, riaditeľ Seren kliniky, a profesor na Ústave imunológie, St Marianna University School of Medicine. TS, AC, a AN boli zamestnanci asistenti v Seren Clinic. MO, SS, YY, YS a NS sú tiež profesormi na každej univerzite
Skratky
COPD :.
Chronická obštrukčná choroba pľúc
CTL:
cytotoxické T-lymfocyty
DC:
dendritických buniek
EGD:
Ezofagogastroduodenoskopie

HLA:
leukocytov antigénu ľudského
IHC:
Imunohistochémia
MUC1:
mucínu 1 , na povrchu buniek spojená
WT1:
Wilms nádoru 1.
deklarácia
Poďakovanie
sme si vedomí pacienta, ktorý súhlasil, že podieľať sa na tejto štúdii a jeho primárny onkológmi. Táto štúdia nedostal žiadnu finančnú podporu.
Autorov pôvodné predloženej súbory obrazov
Nižšie sú uvedené odkazy na autorov pôvodnej predložených súborov pre obrázky. "Pôvodný súbor na obrázku 1 12957_2014_1883_MOESM2_ESM.tif autorského 12957_2014_1883_MOESM1_ESM.tif autorov pôvodného súboru na pôvodnom súboru Obrázok 2 12957_2014_1883_MOESM3_ESM.tif autorského na obrázku 3 protichodnými záujmami
Autori nemajú finančné alebo osobné vzťahy s ľuďmi alebo organizáciami, ktoré by mohli nevhodne vplyv táto práca. príspevky
autorov
MK a MN pochopil a navrhol štúdium a vybrané, montované, analyzované a interpretované dáta. TS, AC, AN, MO, SS, YY, YS a NS interpretovať dáta. MK a MN napísal rukopis a schválila finálnu rukopis. Všetci autori čítať a schválená konečná rukopis.

• Porovnanie medzi lepšie a zle diferencovaný lokálne pokročilého karcinómu žalúdka v predoperačnej chemoterapii: retrospektívnej, porovnávacie štúdie v jedinom terciárnom porovnaní staro…
• Korelácia medzi zväčšovacie narrow band imaging a histopatológia v žalúdku vyčnievajúcich /alebo polypovitými lézie: a skúšobný pilot uskutočniteľnosti