Терапевтический эффект внутриопухолевых инъекций дендритных клеток для местного рецидива рака желудка: случай report

терапевтический эффект внутриопухолевых инъекций дендритных клеток для местного рецидива рака желудка: случай докладе
Аннотация
80-летний мужчина с история рака желудка и эмфиземы легких подверглись дистального гастрэктомию для рака желудка в 1997 г. в 2010 году эндоскопическое обследование выявило поражение депрессии типа на брюшной стороне анастомоза, который был диагностирован как перстень аденокарциномы. Хирургическое лечение рассматривалось, но был отклонен из-за обструктивных и рестриктивных респираторных событий. Химиотерапия была прекращена из-за побочных эффектов. Эндоскопии был использован для введения внутриопухолевой инъекции дендритных клеток (ДК), ориентированных на синтезированные пептиды нефробластома 1 (WT1) и муцина 1, клеточной поверхности, связанной (MUC1). Иммуногистохимическое анализ образцов опухоли показал позитивности для WT1 и MUC1. Через месяц после того, как семь циклов DC были введены (в период с ноября 2010 года по апрель 2011 года), никаких подозрительных поражений не были очевидны, и его результаты биопсии были нормальными. Пациент был в состоянии ремиссии в течение 30 месяцев. Внутриопухолевой инъекции РС показали терапевтический эффект у этого пациента, который не смог пройти эндоскопическую подслизистую диссекцию или хирургии.
Ключевые слова
дендритных клеток WT1 MUC1 иммунотерапии и рецидивирующее желудка фон рак
рака желудка являются второй наиболее распространенной причиной случаев смерти от рака во всем мире, связанных с [1]. Хотя операция является окончательным для лечения рака желудка, альтернативные терапевтические методы включают эндоскопическую подслизистую диссекцию (ESD), химиотерапии и лучевой терапии.
Недавно сообщалось, что половина всех злокачественных опухолей возникают у пациентов в возрасте старше 70 лет [2 ]. Хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ), которая характеризуется ограничением скорости воздушного потока, которая также встречается у лиц пожилого возраста [3]. В некоторых случаях, стандартная терапия злокачественных опухолей не подходит из-за наличия ХОБЛ. Sakai и др
. [4] показали, что ХОБЛ был независимым фактором риска развития интра- и послеоперационных легочных событий. Кроме того, Dimopoulou и др
. [5] сообщили, что некоторые препараты против рака вызывают легочную токсичность. Например, паклитаксел, доцетаксел и иринотекан, как сообщалось, вызывают неспецифическую интерстициальный пневмонит. В некоторых случаях, минимально инвазивная терапия может потребоваться для пожилых пациентов с ХОБЛ.
Дендритные клетки (ДК) являются антиген-представляющие клетки, которые специализированы для инициации Т-клеточного иммунитета [6, 7]. Постоянного тока на основе иммунотерапию, который нацелен на синтезированные пептиды в последнее время используются для различных злокачественных опухолей, включая рак желудка [8-11]. Правильный выбор синтезированных пептидов необходимо усилить терапевтический эффект DC на основе иммунотерапии рака желудка. В 2009 году раковый антиген приоритезация проект Национального института рака занимает опухоль Вильмса 1 (WT1) и муцина 1, клеточной поверхности, связанной (MUC1) в качестве высшей и второй наиболее приоритетных антигенов, соответственно [12]. Как было определено с помощью иммуногистохимии (IHC), были найдены выражения WT1 и MUC1 в рака желудка быть от 42 до 53% [13] и 93% [14], соответственно.
Внутриопухолевой администрирования с использованием постоянного тока, фагоцитоз является потенциальным благоприятным вариантом [15]. Мы использовали эзофагогастродуоденоскопию (EGD) для администрирования внутриопухолевой инъекции с импульсными ДК WT1 и MUC1.
Клинический случай
80-летний мужчина с историей рака желудка и эмфиземы легких подверглись дистального гастрэктомию Бильрот I для раннего рак желудка в 1997 г. в 2005 и 2009 годах, он был передан для эндоскопической резекции слизистой оболочки желудка местного рецидива рака (хорошо дифференцированной трубчатой ​​аденокарциномы). В мае 2010 года он перенес последующую ФГДС, которые выявили депрессии типа поражения (10 × 18 мм по размеру) на теле желудка вблизи анастомоза (O) (рис 1а). Гистопатологическая анализ образцов биопсии показал перстень аденокарциномы (рис 2а-а "). Компьютерная томография не выявили метастазов. Хотя общая резекция остатка желудка является потенциально лечебной терапии, эта операция не была выполнена с учетом дисфункции легких пациента, который включал обструктивных и рестриктивных заболеваний легких (ЖЕЛ (VC): 2.12 л;% VC: 71,9%; вынуждены объем выдоха в 1,0 секунды: 42,9%). Пациент имел историю курения на 50 лет. ESD было противопоказано, потому что рак был недифференцированной типа. Таким образом, лечение с TS-1 (тегафур, гимерацил и отерацил калия; Тайхо Pharmaceutical Co, Ltd, Токио, Япония) был начат в августе 2010 года через четыре недели после TS-1 управления, связанные с лечением анорексия (класс 2; Общая терминология Критерии для неблагоприятных событий, наблюдалась версия 4.0), и, следовательно, химиотерапия была прекращена по просьбе пациента. Рисунок 1 эзофагогастродуоденоскопия (ЭГДС) изображения. (А, б) тип 0-IIc поражение (10 × 18 мм по размеру) на теле желудка вблизи анастомоза области (O) перед вакцинацией (а). Рак желудка регресс неясного поражения одного месяца после последнего цикла лечения (б). Стрелки показывают расположение рака. Рисунок 2
Гистологический анализ образца биопсии. Гематоксилином и эозином (Н &Amp; E) окрашивание (аа ", Ф.Ф.") и иммуногистохимии из серийных срезов тканей для нефробластома 1 (WT1) (Вв ", gg-") и муцина 1, клеточной поверхности, связанный (MUC1) ( сс ", чч"). (А-а ", е-е") H & E окрашивание до и после вакцинации. H & E окрашивание показывает перстень клеток в ткани перед вакцинацией (а-а "). Через месяц после последнего введения, патологическое исследование выявления нормальных эпителиальных клеток просвета (е-е "). (Б-б ", г-г") Окрашивание для WT1 до и после вакцинации. Образцы положительные для WT1 в приблизительно 60% клеток до вакцинации на месте опухоли (б-б ") и значительному снижению WT1 позитивности подтвержденной после вакцинации (г-г"). (C-C ", Н-Н") Окрашивание для MUC1 до и после вакцинации. Примерно 70% опухолевых клеток были положительными MUC1 перед вакцинацией (C-C ") и MUC1, окрашивание наблюдалось в нормальных желез только после вакцинации (F-F"). Иммуногистохимическое окрашивание CD4 + и CD8 + Т-клеток в образцах биопсии. Серийные срезы тканей, используемых для H &Amp; Окрашивание E подготовлен и окрашивали для CD4 и CD8 (д, е, I, J). (D-d ", я-я") Окрашивание для CD4 ранее (D-D ") и после вакцинации (я-я"). (Е-е ", J-J") Окрашивание CD8 перед тем (е-е ") и после вакцинации (J-J"). CD4 + и CD8 + Т-клеток наблюдается чаще в нормальных тканях желудка после вакцинации, чем это наблюдалось в опухолевых тканях перед вакцинацией. (Увеличение: A-J 4 ×, а'-J '10 ×, А "-j" 20 ×).
Методы, которые были использованы для получения постоянного тока были описаны ранее [16]. РСУ импульсно главного комплекса гистосовместимости (MHC) -I-ограниченным WT1 пептидные антигены, в соответствии с человеческого лимфоцитарного антигена пациента (HLA) -A рисунок (HLA-A 2402; CYTWNQMNL (мутант WT1 пептида, нео-МОБ, Сан-Диего , Калифорния, США) и MUC1 длинный пептид (30-мер в дозе 20 мг /мл; TRPAPGSTAPPAHGVTSAPDTRPAP- GSTAP; Greiner Япония, Токио, Япония)). ДКС были охарактеризованы с помощью проточной цитометрии, чтобы гарантировать, что они достигли типичный фенотип зрелых ДК. Молекулы поверхности, которые были выражены ДК были определены. Фенотип CD14 - /низкий /HLA-DR + /HLA-ABC + /CD80 + /CD83 + /CD86 + /CD40 + /CCR7 + рассматривалась для определения зрелых ДК. ДКС были крионированным до дня введения. Суспензию DC доводили до общего объема 1,0 мл с физиологическим раствором.
Через шесть месяцев после того, как желудка рецидива рака был поставлен диагноз, внутриопухолевой инъекции РС вводили с помощью ФГДС в период с ноября 2010 года по апрель 2011 года Это лечение было одобрено институциональный обзор совет Isoukai (номер официального утверждения: 26-1) и проводилось в соответствии с Хельсинской декларацией
Вакцинации повторяли семь раз в два-восемь-недельными интервалами (примерно 2,99 × 10 7 клеток /. инъекции, первые четыре прививки в двухнедельными интервалами, а последние три прививки в четырех до восьми-недельными интервалами). Игла была использована (диаметр 25 г, длина 4 мм) для администрирования контроллеров домена на четырех участках подслизистого слоя вокруг опухоли. Впоследствии мы вводили OK432 (1-3KE), растворенного в 0,5 мл физиологического раствора в двух местах в подслизистом слое вокруг опухоли. DC терапия хорошо переносится, и единственное лечение связанных с побочными реакциями была лихорадка, с температурой тела свыше 38 ° С в течение двух дней после четвертой вакцинации. Через один месяц после последнего введения, рак желудка было обнаружено, что регрессировали полностью (1б). Гистопатологическое исследование образцов биопсии не было выявлено ни одного перстень клеток (рис 2F-F "). В течение 30 месяцев после DC-иммунотерапии, не наблюдается никаких патологических рецидивов. Лабораторные данные указывают на снижение раково антигена и антигена 19-9 уровни после того, как DC терапии, которая уменьшилась с 8,2 до 6,8 нг /мл (нормальный диапазон: &л; 5,0 нг /мл) и от 33,2 до 24,7 Ед /мл (нормальный диапазон: &л;. 37,0 Ед /мл), соответственно
IHC для WT1 (моноклонального 6 F-H2, Dako Cytomation, Carpinteria, Калифорния, США) [13] и MUC1 (Becton Dickinson Labware; Franklin Lakes, штат Нью-Джерси, США Штаты) проводили, как описано ранее [17], с некоторыми изменениями. Результаты IHC были положительными для WT1 примерно 60% от перстневидно клеток до вакцинации (рис 2b-б "); Тем не менее, количество клеток, окрашивающих положительный была значительно снижена после вакцинации (рис 2g-г "). Приблизительно 70% клеток были положительными MUC1 перед вакцинацией (рис 2с-с "). После вакцинации, ремоделирования была подтверждена на месте злокачественных клеток, и MUC1 положительность наблюдался только в нормальных желез (рис 2h-Н "). Не
в пропорции CD4 не увеличивает + и CD8 + Т-клетки были отмечены в периферической крови, на основе оценок, проведенных до и после вакцинации (CD4 + Т-клеток: 43,9 до 42,5%; CD8 + Т-клеток: 29,3 до 25,5%). С другой стороны, CD4 + и CD8 + Т-клетки наблюдались более часто в нормальной желудочной ткани после вакцинации (рис 2i-I ", JJ"), чем они наблюдали в опухолевых тканях, прежде вакцинация (рис 2d-d ", эи").
частота WT1-специфичных цитотоксических Т-лимфоцитов (CTL) увеличилась с 0,03 до 0,08%. Метод, используемый был описан в предыдущем докладе [16]. На 31 месяцев после окончательной прививки, уровни WT1-специфических Т-клеток оставалась высокой (0,10%) (фиг.3А-с). Рисунок 3 Анализ нефробластома 1 (WT1) -специфические цитотоксические Т-лимфоциты (ЦТЛ). (А) Перед вакцинацией. (Б) после вакцинации. (В) В течение 31 месяца после окончательной прививки. WT1-специфические уровни ЦТЛ до вакцинации увеличилось с 0,03 (а) до 0,08% на конечной вакцинации (б). На 31 месяцев после окончательной прививки, WT1-специфические уровни ЦТЛ увеличилась до 0,10% (с).
Обсуждение
В этом случае ограничительный легочное заболевание привело первичной онколога выбор в пользу химиотерапии вместо хирургического вмешательства. Тем не менее, у пациента развилась невыносимое химиотерапией связанная анорексию, что потребовало прекращения лечения. Так как несколько предыдущих исследований показали, что DC иммунотерапия может быть безопасно вводить пациентам с раком в качестве минимально инвазивного лечения [8, 9, 18], мы выбрали эту терапию для нашего пациента. Прямая инъекция ДК в опухоли было исследовано в клинических исследованиях, в том числе на гепатомы [19], рак поджелудочной железы [20], и рака желудка [21]. Вэнь и др
. [22] сравнили терапевтический иммунитет достигается за счет нескольких режимов подачи постоянного тока, в том числе внутриопухолевые, intranodal, внутривенный и подкожных инъекций у мышей. Показатели выживаемости резко возросли с помощью вакцинации с помощью внутриопухолевой инъекции, по сравнению с инъекциями, выполненных с использованием других методов доставки. Pellegatta и др
. [23] сообщили, что, по сравнению с другими методами доставки, внутриопухолевые инъекции ГЦ может увеличить эффективность противоопухолевой путем изменения внутриопухолевой среды и увеличение Т-клеточно-опосредованные иммунные реакции. В этом случае, наблюдались повышенные WT1 специфические уровни ЦТЛ после того, как DC иммунотерапии, что указывает, что контроллеры домена представлены WT1 к наивным CD8 + Т-клеток точным образом. Мы полагаем, что рак желудка может быть хорошим показателем для прямого впрыска и контроллеров домена, что подходящее место для инъекции можно выбрать с помощью живого изображения с ФГДС.
Незрелых контроллеры домена использовались для прямых инъекций в предыдущих исследованиях, потому что их фагоцитарную способность имеет считалась выше, чем у зрелых ДК [24]. Тем не менее, незрелые контроллеры домена, как было показано, чтобы вызвать толерантность и антиген-специфического ингибирования эффекторной функции Т-клеток [25, 26]. Drutman и Trombetta [27] показали, что зрелые DCs сохранил устойчивую способность захватывать растворимые антигены. Кроме того, антигены усвоены зрелых ДК были эффективно представлены на МНС класса II клеток и кросс-I представлены на клетках МНС класса. De Vries и др
. [28] показали, что зрелые DCs эффективно мигрировать в Т-клеточных малонаселенных районах лимфатических узлов пациентов с меланомой. Взятые вместе, эти данные свидетельствуют о том, что было бы целесообразно использовать зрелых DCs для прямых инъекций в опухоли.
Результаты IHC для WT1 и MUC1 показали значительные изменения после вакцинации. Муцин представляет собой высокомолекулярный гликопротеин, который играет важную роль в защите эпителий желудочно-кишечного тракта и, как правило, присутствует в изобилии на полостной поверхности различных секреторных эпителиальных клеток. Основные пептиды в области тандемного повтора замаскированы в нормальных клетках и экспонировали в клеточно-ассоциированного муцинами рака. ЦТЛ для MUC1 раковых клеток атаковать только с незащищенными тандемных повторов доменов [29]. В этом случае, MUC1-позитивные клетки присутствуют на поверхности перстень аденокарциномы перед вакцинацией (рис 2c-C "); Однако MUC1-позитивные клетки были подтверждены только на нормальных просветными эпителиальных клеток после иммунотерапии DC, как мы ожидали (рис 2h-Н ").
Выводы
Насколько нам известно, это первый доклад о терапевтические эффекты, которые нацелены на РС, синтезированные пептиды у пациентов с раком желудка, которые не могли пройти ОУР или хирургическое лечение.
Согласие
Мы предоставили точные объяснения терапии для пациента и его семьи. Они дали письменное информированное согласие на публикацию этого случая доклада и любых сопроводительных изображений. Копия письменного согласия доступна для рассмотрения главного редактора Главный этого журнала. Информация
авторов
МК является директором Seren клиники. MN является помощником персонала в отделении желудочно-кишечной хирургии, Канагава онкологического центра, директор Seren клиники, и профессор на кафедре иммунологии, Санкт-Marianna школы медицины университета. TS, AC и А.Н. были сотрудники ассистенты в клинике Seren. MO, SS, YY, YS и NS также преподаватели в каждом университете
Сокращения
ХОЗЛ:.
Хроническая обструктивная болезнь легких:

ЦТЛ:
Цитотоксические Т-лимфоциты


DC:
дендритных клеток


EGD:
Эзофагогастродуоденоскопия


HLA:
человеческого лейкоцитарного антигена


IHC:
Immunohistochemistry


MUC1:
муцин 1 , клеточной поверхности, связанные


WT1:
опухоль Вильмса 1.


декларациях
Выражение признательности
Мы признаем пациента, который согласился участие в этом исследовании и его главных онкологов. Данное исследование не получил никакой финансовой поддержки.
Авторов оригинальные представленные файлы для изображений изображения Ниже приведены ссылки на авторов оригинала, представленных файлов для изображений. 'Исходный файл для Рисунок 1 12957_2014_1883_MOESM2_ESM.tif Авторского 12957_2014_1883_MOESM1_ESM.tif авторов исходного файла для исходного файла Рисунок 2 12957_2014_1883_MOESM3_ESM.tif Авторского для фигурного 3 Конкурирующие интересы
Авторы не имеют никаких финансовых или личных отношений с людьми или организациями, которые могли неадекватно влияние эта работа. вклад
авторов
МК М.Н. сконструированная и разработанная исследования и собранные, собранные, проанализированные и интерпретированные данные. TS, AC, А.Н., MO, SS, YY, YS и NS интерпретировал данные. М. К. и М. Н. написал рукопись и одобрили окончательный вариант рукописи. Все авторы читали и одобрили окончательный вариант рукописи.

• Сравнение между лучше и слабо дифференцированной местно-распространенным раком желудка в предоперационной …
• Корреляция между увеличительным узкополосный и обработки изображений гистопатологии в желудочном выступаю…