Ploche ONE: Elektroakupunktúra u ST36 zlepšuje vyprázdňovanie žalúdka a zachráni siete intersticiálne bunky Cajalových v žalúdku diabetických krýs

abstraktné

Vyčerpanie intersticiálna bunky Cajal (ICC) je certifikovaný v žalúdku diabetikov. Hoci elektroakupunktúra (EA) v ST36 je účinná terapia pre reguláciu motility žalúdka, mechanizmy EA u ST36 o vyprázdňovanie žalúdka a sietí ICC zostáva objasniť. Cieľom tejto štúdie bolo skúmať účinky EA na vyprázdňovanie žalúdka a ohľadom zmien ICC sietí. Krysy boli náhodne rozdelené do ovládacieho prvku, diabetickej krysy (DM), diabetické krysy s predstieranou EA (DM + SEA), diabetických krýs s nízkou frekvenciou EA (DM + LEA) a diabetických krýs s vysokofrekvenčnými EA skupín (DM + HEA). Expresie c-kit v každej vrstve steny žalúdka bola hodnotená pomocou western blot. Šírenie ICC bola identifikovaná immunolabeling c-kit a Ki67 ako apoptóza ICC bola vyšetrovaná TUNEL farbenia. Výsledky boli nasledovné: (1) vyprázdňovanie žalúdka bolo k výraznému oneskoreniu v skupine DM, ale zrýchlil v skupine LEA a HEA, najmä v skupine LEA. (2) Expresia c-kit v každej vrstve sa znížil zrejme v skupine DM, ale tiež up-regulovaný u skupiny LEA a HEA. (3) Bohatý množili ICC (c-kit + /Ki67 +), ktoré tvoria husté siete s c-kit + buniek bolo pozorované v skupine LEA a HEA, zatiaľ čo apoptotické bunky (c-kit + /TUNEL +) boli sotva zachytené v skupine LEA a HEA , Kolektívne, nízke a vysoké frekvencie v EA ST36 zachrániť poškodené siete ICC tým, že inhibuje apoptózu a zvýšenie proliferácie v žalúdku diabetických krýs, čo má za následok zlepšené vyprázdňovanie žalúdka

Citácia :. Chen Y, Xu JJ Liu s, Hou XH (2013) Elektroakupunktúra u ST36 zlepšuje vyprázdňovanie žalúdka a Záchrany siete intersticiálnych buniek Cajalových v žalúdku diabetických krýs. PLoS ONE 8 (12): e83904. doi: 10,1371 /journal.pone.0083904

Editor: Yvette Tache, University of California, Los Angeles, United States of America

Prijaté: 9. augusta 2013; Prijaté: 08.11.2013; Uverejnené: 31 decembra 2013

Copyright: © 2013 Chen et al. Toto je článok o otvorený prístup distribuovaný pod podmienkami Creative Commons Attribution licencie, ktorá umožňuje neobmedzené použitie, distribúciu a reprodukciu v nejakom médiu, za predpokladu, že pôvodný autor a zdroj sú pripísané

Financovanie :. Práca bol čiastočne podporený dotáciou z Národného Natural Science Foundation Číny (No. 30670775, No. 81270458). Žiadne ďalšie externé financovanie získal pre túto štúdiu. Platcovia mal žiadnu úlohu v dizajne štúdie, zber a analýzu dát, rozhodnutie publikovať, alebo prípravu rukopisu

Konkurenčné záujmy: .. Autori vyhlásili, že žiadne konkurenčné záujmy neexistujú

Úvod

Druhy gastrointestinálnymi poruchami motility v rozmedzí od funkčnej dyspepsie do gastroparézy vážne ovplyvniť kvalitu života u pacientov s diabetes mellitus desaťročie [1]. Gastroparézy, vyznačujúci sa tým, oneskorené vyprázdňovanie žalúdka, dochádza až 30% jedincov s diabetom 1. typu [2]. Hoci rôzne liečebné zákroky, vrátane farmaceutického ošetrenie a niektorých non-liekov boli vyskúšané, liečivé účinky pre gastroparesu zostáva neuspokojivá.

Akupunktúra bola empiricky používa na liečbu žalúdočných a črevných porúch v orientálnych krajinách po tisíce rokov. Elektroakupunktúra (EA), ktorá je modifikáciou tradičných akupunktúry, je vhodnejšie pre klinické a základné nastavenie výskumu k jeho reprodukovateľnosti. Zusanli
(ST36) je bežné acupoint často používané na liečbu žalúdočných a črevných chorôb. V posledných rokoch, účinky EA v ST36 na motility žalúdka boli vyhodnotené v rade štúdií. Pre zvieratá, EA v ST36 výrazne zvýšil motility žalúdka pri vedomí potkanov a zlepšenú oneskorené vyprázdňovanie žalúdka v STZ-indukovaných diabetických potkanov [3], [4]. Okrem toho, u ľudí, EA v ST36 zrýchlené vyprázdňovanie žalúdka a uľavilo dyspeptických symptómov u pacientov funkčné dyspepsie a diabetikov s gastroparézy [5], [6]. Aj keď v týchto štúdiách bolo prijaté iba nízkofrekvenčné EA, vysokofrekvenčné EA bola tiež hlásená k podpore pažeráka a distálnej motilitu hrubého čreva u zvierat [7], [8]. To znamená, že účinky rôznych frekvenčných EA na žalúdočné motilitu a uskutočnené mechanizmy upútať pozornosť ľudí.

intersticiálna bunky Cajal (ICC), dobre zavedené ako kardiostimulátory generovanie a propagácie pomalé vlny, získali význam v regulácii gastrointestinálne motilita po niekoľko desaťročí, [9]. Tri podtypy ICC vrátane intramuskulárnej ICC (ICC-IM), myenteric ICC (ICC-MY) a podslizničním ICC (ICC-SM) forme neporušené sietí v žalúdočnej steny [10]. Siete ICC nie sú statické aj za fyziologických podmienok; apoptóza a transdiferenciace viesť k strate ICC, zatiaľ čo ICC tiež možné obnoviť proliferácie, doplňovanie z kmeňových buniek a zvýšenie prežitia [11], [12]. Rozsiahle štúdie zdokumentované, že straty a poškodenia ICC spôsobená neusporiadanú gastrointestinálnu motilitu na zvieracích modeloch au pacientov s diabetom [13] - [15]. V poslednej dobe sa ďalšie štúdie uvádzajú, že EA uľahčil nárast hrubého ICC v pomalých tranzitnej zápcha krýs a potkanov po enteroenterostomy [16], [17]. Naše nedávne štúdie tiež preukázali, že EA na adrese ST36 mohla obnoviť narušenú ICC v hrubom čreve diabetických krýs [18]. Medzitým sa obáva, že EA podporoval proliferáciu a inhibuje apoptózu mozgové bunky v hipokampe [19], [20]. Avšak, tam je prázdna o účinkoch EA u ST36 o ICC v diabetickej gastroparesu a mechanizmu, či sa jedná proliferácie a apoptózy ICC

Preto Cieľom tejto štúdie bolo :. 1) vyhodnotiť účinky rôznych frekvenčných EA na vyprázdňovanie žalúdka; 2) skúmať účinky EA na adrese ST36 o ICC sietí v diabetických krýs; 3) potvrdiť, či boli zapojené apoptóza a proliferácie ICC.

materiáloch a metódach

Ethics vyhlásenie

krysy dostávali ľudské starostlivosť a táto štúdia bola vykonaná v prísnom súlade s odporúčaniami uvedenými v príručke pre starostlivosť a použitie laboratórnych zvierat z National Institutes of Health, so všetkými operáciami schválenými etickými pokyny od výboru pre zvierat starostlivosť a používanie Tongji lekárskej školy, Huazhong univerzity vedy a technológie.

Zvieratá

Male Sprague-Dawley vážil 250-300 g boli vybrané v tejto štúdii. Krysy boli získané z experimentu Animal centra Tongji Medical College (Huazhong University of Science and Technology, Wuhan, Čína) a udržiava sa za normálnych laboratórnych podmienkach (22 ° C, 12/12 h cyklu svetlo-tma) s voľným prístupom k potrave a sterilná vodu. Po jednom týždni adaptívne kŕmenie zvierat boli oficiálne prijaté do našich experimentoch.

Diabetická modelu

Po celonočné hladovanie, ale voľný prístup k vode, modely boli vytvorené s jedinou intraperitoneálnou injekciou streptozotocínom v potkany (STZ, 60 mg /kg, teda 1 ml /100 g telesnej hmotnosti, Alexis Peptidy, San Diego, CA, USA), čerstvo rozpustené v 20 mM citrátového pufru (pH 4,5, Sigma, St. Louis, MO, USA) , Kontrolná skupina bola injikovaný rovnakým objemom citrátovom tlmivom roztoku. Všetky krysy boli umiestnené v rovnakom stave, sa bez vody po dobu 4 hodín, ale ad libitum
kŕmenie. Jeden týždeň po injekcii, diabetes bol potvrdený v inom čase meraním glukózy v kvapke krvi, získané prepichnutím špičky chvosta nádoby. Hladina glukózy v krvi ≥16.7 mmol /l odfotil ako štandard pre úspešného modelu. Hladina glukózy v krvi bol premietaný včas pred injekciou a 1., 4. a 8. týždni po injekcii. Okrem toho, chudnutie, polydipsia a polyúria boli ďalšie ukazovatele pre dôkazov úspešné podnet diabetickej krysy.

Experimentálne protokoly

Krysy boli náhodne rozdelené do piatich skupín (10 potkanov každá skupina), vrátane kontroly , diabetická skupina (DM), diabetické krysy s predstieranou EA skupiny (more, len akupunktúra bez elektrického prúdu, 30 min /deň), diabetických krýs s nízkou frekvenciou EA skupiny (LEA, 10 Hz, 1-3 mA, 30 min /deň ) a diabetické krysy s vysokofrekvenčné EA skupiny (HEA, 100 Hz, 1-3 mA, 30 min /deň). EA bol realizovaný v acupoint ST36 s elektrickým stimulátorom (G6805-2A; Shanghai Huayi lekárske nástroje Factory, Shanghai, Čína) každý deň po dobu 8 týždňov. Elektrického prúdu bola stanovená v súlade s mierne chveje dolných končatín. Na dosiahnutie účelu eliminácia vplyvu stresu, boli zvieratá ponechaná voľne pohybovať vo svojej vlastnej skrini v priebehu konania EA.

Po následnom zásahu po dobu 8 týždňov, boli testované potkanom v každej skupine pre vyprázdňovanie žalúdka. Potom boli usmrtené a boli starostlivo získané vzorky dutine. Každá skúšobná vzorka bol rozdelený do niekoľkých častí, je relatívne malý bol skladovaný pri -80 ° C počas Western blot analýzu potom, čo vrstvy čerstvo oddelí a kus bol umiestnený do 2,5% glutaraldehydu pre elektrónovú mikroskopiu, a zvyšok boli fixované v Zamboni fixačnej tekutiny (2 % paraformaldehydu a 1,5% nasýteným roztokom kyseliny pikrovej v 0,1 M roztoku fosfátového pufra (PBS, pH 7,4) k imunofluorescencie.

meranie vyprázdňovanie žalúdka

vyprázdňovanie žalúdka sa vykonáva modifikácií, ako je popísané predtým [21]. Test jedlo obsahujúce fenolovej červene (0,5 mg /ml) ako indikátora a karboxymetylcelulózy (15 mg /ml) sa neustále mieša a potom sa udržiava na teplote 37 ° C. po tom, čo bolo prijaté krysy potravinársky zbavený cez noc 2 ml fenolu červená jedlo podávané prostredníctvom sondou ihlou. o tridsať minút neskôr boli zvieratá rýchlo usmrtí cervikálny dislokáciou. celý žalúdok sa opatrne odstránené po ligácia na kardio a pyloru a potom žalúdok bola otvorená a jej obsah sa naleje do testovacej trubice a premyje sa 40 ml destilovanej vody. Na konci pokusu, roztok hydroxidu sodného (20 ml, 1 M) bol pridaný do každej skúmavky vyvinúť maximálnu intenzitu farby. Absorbancia vzorky odpočítaná pri vlnovej dĺžke 560 nm pomocou spektrofotometra (Hitachi, U-2900), aby bolo o čiastku fenolovej červene zostávajúce v žalúdku. Rýchlosť vyprázdňovania žalúdka bola vypočítaná podľa tohto vzorca: vyprázdňovania žalúdka (%) = 100 x (1 - X /Y), X predstavuje absorbanciu fenolovej červene zhromaždených zo žalúdka zvierat usmrtené 30 min po testovacom jedle. Y predstavuje absorbanciu fenolovej červene získaná z žalúdka kontrolného zvieraťa zabitý bezprostredne po podaní testovacej potravy.

Western Blotting

čerstvé vzorky žalúdočnej dutine bol pritlačený na Sylgard misky a každú vrstva sa oddelí opatrne ostrou preparáciou po odstránení sliznice. S pomocou jemných špicaté pinzetou a mikrochirurgické nožničky pod mikroskopu, boli získané vrstvy ICC-SM, ICC-IM a ICC-my. Všetky manipulácie boli vykonávané na ľade, aby sa zabránilo strate proteínu. A potom vzorky ICC-SM, ICC-IM a ICC-my boli skladované pri -80 ° C.

čerstvé mrazené vzorky boli rozdrvené do suspenzie buniek a homogenizuje v pufri RIPA (Upstate, Temecula, CA , USA) s inhibítorom proteázy (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO, USA). Táto zmes bola centrifugována pri 12000 g počas 10 minút pri teplote 4 ° C a supernatanty boli zbierané ako celkové bielkoviny. Koncentrácia proteínu bola stanovená metódou Bradford. Následne ekvivalentu 50 mg extrahovaných proteínov boli postupne oddelené 10% dodecylsulfát sodný, elektroforézou na polyakrylamidovom géle (SDS-PAGE) a prenesené na membránu PVDF (Millipore, Bedford, MA, USA). Nasleduje blokovanie nešpecifických väzobných miest s 5% netučného sušeného mlieka v Tris-pufrovanom soľnom roztoku obsahujúcom 0,1% Tween 20 (TBST) pri teplote miestnosti po dobu 1 hodiny, tieto membrány boli inkubované s primárnou protilátkou, aby anti-c-kit (1: 200, Santa Cruz Biotechnology, Inc.), cez noc pri 4 ° C spolu s králičie anti-myší aktínu (1: 400, Santa Cruz Biotechnology, Inc.) slúžil ako vnútorná kontrola. Po troch premytí TBST, boli membrány inkubované s HRP-spojený sekundárne protilátka (HRP-spojený králičie anti-kozie a HRP-spojený kozí anti-myší, 1: 5000) po dobu 1 hodiny pri teplote miestnosti. Nasledované tromi premytím TBST, pásy boli vizualizované chemickou reakciou so zvýšenou chemiluminiscenčného činidla (Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ) a bol blot podrobený autorádiografiou. Analýza denzitometria bola vykonaná Množstvo One softvér (Bio-Rad Technický servis oddelenia, verzia 4.6.2).

imunofluorescenčné štúdie

V prípade celých-mount farbenie preparátov, bol otvorený žalúdok a opláchnuť niekoľko krát PBS. Žalúdočné Antrum bol pritlačený na Sylgard misky a natiahnutí na 150% svojej pôvodnej veľkosti, a potom fixované Zamboni je fixačného roztoku po dobu 24 hodín pri teplote miestnosti. Fixované tkanivá boli premyté PBS a potom sa sliznica sa odstráni ostrú preparáciou. ICC-SM umiestnenie na submukóznu povrchu kruhovej svaloviny, ICC-IM prelínanie medzi buniek hladkého svalstva a ICC-MY s myenteric nervových plexu boli starostlivo pripravené za použitia jemného špicaté kliešte a mikrochirurgické nožnice v mikroskope.

imunologické postupy na zisťovanie ICC siete a šírenie už boli popísané [22]. Ki67, jadrový proteín vyjadrený v priebehu všetkých aktívnych fáz bunky a zmizol v pokojovej bunke, bola použitá na detekciu proliferačnej ICC [23]. Po premytí šesťkrát s PBS po dobu 1 hodiny, boli tkanivá inkubované s 5% sérom normálne dobytka v PBS obsahujúcom 0,3% Triton X-100 (PBST) po dobu 1 hodiny pri teplote miestnosti, a potom inkubované s primárnou protilátkou c-kit (1: 100 , Santa Cruz, CA, USA) a Ki67 (1: 100; abca, Cambridge, UK) cez noc pri 4 ° C. Po opláchnutí v PBST po dobu 30 minút, imunoreaktivita bola detekovaná pomocou Alexa Fluór 594-konjugované sekundárnej protilátky (oslí anti-kozie IgG, 1: 100) a Alexa Fluór 488-konjugované sekundárnej protilátky (oslí anti-IgG rabit, 1: 100) pri teplote 37 ° C po dobu 1 hodiny, a následne opláchne v PBS sa trikrát po dobu 30 minút, a inkubujú sa s DAPI (0,1 mg /ml, Sigma, St. Louis, MO, USA) po dobu 30 minút ako nukleárne škvrna počítadlá. Opláchnuté v PBS dvakrát, tkanivá boli rozloženom stave na snímke. Konfokálního laserového skenovania mikroskopu (Nikon, Japonsko) bol použitý skúmať immunolabeled tkaniva. Tak, aby zahŕňal všetky úrovne pozitívne zafarbených buniek a procesov, optimálny Z stohovanie konfokálna obrazy bola nastavená na 5 um intervaloch.

Apoptóza ICC boli detekované TUNEL značenie, čo je detekcia apoptózy Kit (Roche, Nemecko). Celý-mount preparáty boli inkubované s primárnou protilátkou c-kit (1: 100, Santa Cruz, CA, USA) cez noc pri 4 ° C a sekundárne protilátka (Alexa Fluór 594 oslie anti-kozie IgG, 1: 100) pri teplote 37 ° C po dobu 30 minút. Pod zvlhčené a tmavé okolností boli tkanivá inkubované s TUNEL reakčného pufra (označovanie roztoku: roztoku enzýmu = 9: 1) pri teplote 37 ° C po dobu 1 hodiny. Potom, čo sa premyje trikrát počas 30 minút pre odstránenie nepripojených fluoresceín-dUTP a inkubujú sa s DAPI za nukleárnej škvrna počítadlá, vzorky boli pozorované pod konfokálním laserovým skenovacím mikroskopom.

Elektrónová mikroskopia

Potom, čo sliznice odstrániť, vzorky antra boli ponorené do roztoku fixačným 2,5% glutaraldehydu pri teplote 4 ° C po dobu 2 hodín. Potom boli opláchnuté 0,1 M PBS dvakrát po dobu 20 minút, post-fixované v 1% OSO _{4 (pH 7,4) po dobu 1 hodiny, dehydrovaného s odstupňovanou alkoholom, objasnené v propylénoxidu a vložený do EPONE pomocou plochej formy. Ultratenké rezy boli získané s ultramicrotome (Leica ULTRACUTU, Nemecko), ktorý sa zafarbil citrátom olovnatým po dobu 10 minút predtým, než zobrazenie s transmisnom elektrónovom mikroskope (TECNAM G ^{212, FEI, Holandsko).}}

Štatistická analýza

Pre analýzu imunofluorescenčné farbenie, žalúdočné Antrum od každého pokusného zvieraťa sa odoberali vzorky na rovnakom mieste žalúdka. ICC bol rozpoznaný c-kit imunoreaktivity a prítomnosť hojných bunkových procesov. Množia a proapoptotický ICC boli identifikované c-kit imunoreaktivity a Ki67 /TUNEL farbené jadra priloží k c-kit pozitívny membránových štruktúr. Desať náhodná pole (x 200 zväčšením 0,2607 mm ^{2) na celej-mount príprava bola prijatá na fotografiách c-kit pozitívnych buniek, c-kit + /Ki67 + a c-kit + /TUNEL + značených buniek. Tieto fotografie boli taktiež použité pre vyhodnotenie hrúbky vrstiev v každom zásobníku s pomocou DAPI značených jadier ako markeru horná a dolná hranica vrstiev. Počty c-kit pozitívnych buniek, c-kit /Ki67 a c-kit /Tunel double značené bunky sa počítali s Image-PROPLUS 5.0 (Media Cybernetics). Všetky dáta bola vyjadrená ako priemer ± SEM. Najmenej desať vízie boli nadobudnuté v každom zvierati. Analýza rozptylu (ANOVA) a t test boli použité pre porovnanie rozdielov medzi rôznymi skupinami. P hodnota menšia ako 0,05 bola braná ako štatisticky významný rozdiel.}

Výsledky

Telesná hmotnosť a hladina glukózy v krvi

Po 8 týždňoch došlo k smrti následkom úrazu v skupine DM (dva potkany) a v skupine SEA (jeden potkan). Krysy boli vyšetrované na rovnakú základnú telesnou hmotnosťou medzi skupinami (tabuľka 1). Na konci roka 1, 4 a 8 týždňoch, telesnej hmotnosti skupiny DM bol významne znížený v porovnaní s kontrolou ( P
= 0,009, 0,000 a 0,000). Nebol žiadny významný rozdiel medzi SEA a DM skupiny ( P Hotel > 0,05). Avšak, na rozdiel od skupiny DM, telesná hmotnosť bola zvýšená v skupine LEA po 8 týždňoch ( P Hotel &0,001) HEA skupina v 4 a 8 týždňov (a P =
0,003, P
. < 0,001 samostatne)

Ako je uvedené v tabuľke 2, žiadne rozdiely boli zaznamenané v úrovni východiskovej krvnej glukózy medzi skupinami. Diabetickej modely boli úspešne stanovené s vysokou úrovňou glukózy v krvi u skupiny, DM v porovnaní s kontrolou u konca 1, 4 a 8 týždňoch (všetci P Hotel &0,001). Medzitým hladiny glukózy v krvi v mori, LEA a HEA skupiny boli významne nezmenili v porovnaní so skupinou DM (všetci P Hotel > 0,05).

Vplyv EA na vyprázdňovanie žalúdka

obr.1 ukazoval účinky EA v ST36 na vyprázdňovanie žalúdka v rôznych skupinách. Žalúdočné vyprázdňovanie skupiny DM bol dramaticky oneskorením v porovnaní s kontrolou ( P
= 0,012). V porovnaní so skupinou DM, SEA nemal žiadny významný vplyv na vyprázdňovanie žalúdka ( P
= 0,338), ale LEA a HEA výrazne urýchliť oneskorené vyprázdňovanie žalúdka z 43,96 ± 5,02% na 69,72 ± 3,02% a na 59,06 ± 3,70% ( P Hotel < 0,001 a P
= 0,013, príslušne). Porovnanie medzi skupinou LEA a HEA, štatistická významnosť bolo dosiahnuté ( P
= 0,04), čo predstavuje, že účinok LEA samozrejme prekonávať to HEA.

Účinky EA na expresiu c -KIT

z obr.2 je expresia c-kit v každej vrstve steny žalúdka bola hodnotená. V ICC-IM, c-kit v skupine DM bol zrejme znížila v porovnaní s kontrolou (0,47 ± 0,04 vs 0,69 ± 0,05, P
= 0,001). Naopak, LEA a HEA výrazne zvyšuje expresiu c-kit v porovnaní s DM skupine (0,65 ± 0,04 vs 0,47 ± 0,04, P
= 0,004; 0,66 ± 0,03 vs 0,47 ± 0,04, P
= 0,002, v danom poradí). V ICC-my, expresie c-kit bola významne znížená v skupine DM v kontraste s kontrolou (0,57 ± 0,04 vs 0,83 ± 0,05, P Hotel <0,001). Ale významný rozdiel bol tak dosiahnuté v skupine LEA a HEA v porovnaní s DM skupine (0,78 ± 0,05 vs 0,57 ± 0,04, P
= 0,002; 0,76 ± 0,04 & 0,57 ± 0,04, P
= 0,004, v danom poradí). V ICC-SM, c-kit skupiny DM bol zreteľne zmenšená na základe normálnej hodnoty (0,56 ± 0,03 vs 0,77 ± 0,04, P
= 0,001). Konzistentne, LEA a HEA zrejme zvýšila expresiu c-kit v porovnaní s DM skupiny ( P
= 0,003 a P
= 0,007). Avšak, nebol zistený žiadny významný rozdiel medzi morom a DM skupiny v ICC-IM, ICC-my a ICC-SM ( P
= 0,597, P
= 0,853 a P
= 0,172).

Vplyv EA na ICC sieťach

striedaním ICC sietí najmä ICC morfológia a hustoty boli zobrazená v obr.3. Nebol žiadny významný rozdiel v hrúbke vrstvy medzi skupinami. Spojené s hladkými svalovými bunkami, c-kit imunoreaktivita na ICC-IM bol pozorovaný vo svalových vrstiev, čo ukazuje, že ICC-IM dve polárne procesy formovania celulárnej siete v kontrolnej skupine. V skupine DM, dlhé procesy ICC-IM bola narušená zrejme a hustota c-kit pozitívne bunky, bola znížená na asi 50% normálnej kontroly ( P Hotel &0,001). V porovnaní so skupinou DM, žiadna významná zmena bola zaznamenaná v skupine SEA. Avšak, takmer neporušený celulárnej siete bol vizualizovaný v skupine LEA a HEA a hustota c-kit pozitívny ICC-IM takmer obnoví na normálnu úroveň (obaja P stroje a 0,001, v porovnaní so skupinou DM ).

ICC-MY vinutia okolo myenteric plexus boli umiestnené medzi pozdĺžne a obvodové hladkého svalstva vrstiev. Multipolárny ICC-MY s mnohých odvetviach tvorí intaktné mobilnej siete sa jasne ukázalo, v kontrolnej skupine. V skupine DM, c-kit + bunky objavil sa štíhlymi bunkových tiel a zlomených procesov a hustota ICC-My sa samozrejme znížil ( P Hotel <0,001). V skupine SEA, hustota ICC-my neboli významne zmenené v porovnaní s DM skupiny ( P
= 0,762). Avšak, takmer neporušený celulárnej siete existuje okolo plexus myentericus a ICC-MY hustoty čiastočne získaného v skupine LEA a HEA (obaja P Hotel &0,001, v porovnaní so skupinou DM)
<. h3> Vplyv EA na apoptózy ICC

apoptóza ICC bola detekovaná označovanie TUNEL zistiť, či apoptóza bola zapojená do deficitu ICC pri cukrovke (obr.4). Z celých montáž prípravkov kontroly, niekoľko jadier ICC boli zafarbené metódou TUNEL vo svalovej vrstvy, myentericus vrstvy a submukóze vrstvou. Veľa c-kit + /TUNEL + ICC-IM, ICC-my a ICC-SM boli pozorované v skupine DM (18,48 ± 1,88 mm ^{-2, 26,51 ± 1,87 mm -2 a 12.03 ± 1,27 mm -2, v tomto poradí). C-kit + mobilné siete sú neúplné a proapoptotický ICC prezentované ako skrátených postupov s menším počtom pobočiek. Veľké množstvo c-kit + /Tunel + bunky boli tiež povodňami v celej vrstve skupiny SEA. V rámci realizácie LEA a HEA, apoptotické súprava + bunky boli ťažko nájsť v ICC-IM (1,79 ± 0,33 mm -2 až 2,05 ± 0,30 mm -2), ICC-MY (2,24 ± 0,40 mm -2 a 2,48 ± 0,40 mm -2) a ICC-SM (1,09 ± 0,25 mm -2 a 1,39 ± 0,20 mm -2). Mobilné siete odhalené c-kit immunostaining vykazoval vysokú hustotu a hrúbku bunkových procesov v skupine LEA a HEA.}

Vplyv EA na proliferáciu ICC

S ohľadom na zvýšený počet ICC v LEA a skupina HEA, Ki67-pozitívnych ICC bola zistená odhaliť šírenie ICC v troch vrstvách (Obr.5). V kontrolnej skupine, rad c-kit /Ki67 double značené bunky boli pozorované u ICC-IM (8,82 ± 1,02 mm ^{-2), ICC-MY (10,64 ± 0,92 mm -2) a ICC -SM (4,67 ± 0,96 mm -2). Počet ICC s zlomených konárov bolo značne znížená a siete boli veľmi riedke s niekoľkými množiacich sa bunkách a to ako v DM a SEA skupiny. Avšak v skupine LEA a HEA, c-kit /Ki67 double značené bunky v ICC-IM boli charakterizované tesne susediacich telách bunky a relatívne bipolárnej procesy a stredná hustota dosiahla na 18,37 ± 1,60 mm -2 a 15,27 ± 1,81 mm -2 (obaja P Hotel <0,001). Podobne, bohatá c-kit + /Ki67 + ICC-MY v skupine LEA a HEA (obaja P Hotel &0,001) tvorí intaktné sietí s c-kit + buniek vykonaná kruhová buniek a dlhých štíhlych procesov. V ICC-SM, sprevádzané intaktné sietí ICC, hustota proliferujúcich buniek v skupine LEA a HEA boli relatívne vyššia v porovnaní s DM skupiny ( P
= 0,016 a P
= 0,003).}

Vplyv EA na ultrastrukturálních zmenách ICC

Typické ultrastrukturální charakteristiky ICC boli odhalené pomocou transmisný elektrónové mikroskopie (Obr.6). V kontrolnej skupine, ICC-IM a ICC-bohatý na úrovni dobre vyvinuté organely rozšírená dlhé procesy, ktoré obsahujú mitochondrie a drsné a hladké ER. Polymorfná ICC-SM sa nachádza na submukóznu povrchu kruhového svalovej vrstvy vykazovali vyššiu elektróny hustá cytoplazmy, početné mitochondrie a endoplazmatického retikula. V skupine DM, je dramatický pokles v počte ICC s poškodenými ultrastrukturální rysmi bola skúmaná elektrónovým mikroskopom. Tieto bunky sa rozvodnenej mitochondrií, narušil cristaed a kondenzovaným chromatin ukázala neúplnú membrány a skrátiť procesy. Tieto zmeny sa tiež pozorovali v skupine SEA. V skupine LEA a HEA, počet ICC bola značne predĺžená a úzko súvisí s nervových vlákien a buniek hladkého svalstva, ktoré tvoria štruktúru a synaptickej medzery križovatky. Clear mitochondrie hrebeň, riadny distribuované hrubý ergastoplazma a ribozomálnu častice boli považované za klasické črty ICC-IM, IM-my a ICC-SM.

Diskusia

V tejto štúdii sme zistené, že ako nízke a vysoké frekvencie v EA ST36 potláča apoptózu ICC a aktivuje proliferáciu ICC v žalúdku STZ-indukovaných diabetických potkanov. Výsledkom je, že záchrana ICC sietí bola spojená s zabraňuje vplyv na oneskorené vyprázdňovanie žalúdka.

Ako účinný postup s menšími vedľajšími účinkami, EA v kombinácii s akupunktúrou a elektrického prúdu stimuláciu namiesto ručných manipuláciou sa postupne prijatý západných krajinách. ST36 je jedným z najčastejšie používaných miest na liečbu tráviacich ťažkostí, s indikáciami: bolesť v nadbrušku, nevoľnosť, zvracanie, nechutenstvo a roztiahnutie brucha. Súčasne naše predchádzajúce štúdia naznačuje EA na adrese ST36 by mohlo zvýšiť hrubého hnací pohyb, ale nebolo pozorované v skupine s EA na non-Acupoints. Oneskorené vyprázdňovanie žalúdka, je spoločný znak diabetikov s gastroparézy a tiež jedným z hlavných faktorov, ktoré prispievajú k príznakom gastroparézy. V posledných desaťročiach, experimenty pri vedomí krýs ukázali, že nízke frekvencie EA (10 Hz), k výraznému urýchlenie vyprázdňovania žalúdka [3], [24], [25]. Navyše, 100 Hz EA bolo účinné pre vyvolanie uvoľnenie dinorphin a serotonínu na navodenie analgézie [26]. Aj keď vysoká frekvencia EA (100 Hz), boli tiež hlásené na podporu pažeráka a distálnej motilitu hrubého čreva u zvierat [7], [8], účinky 100 Hz EA na žalúdočné motilitu sa sotva skúmané. Tak, parametre (10 a 100 Hz) EA boli vybrané podľa predbežných experimentov, ktoré uvedené stimulačný účinok na gastrointestinálnu motilitu. Naše výsledky ukazujú, že ako nízkofrekvenčné EA (10 Hz) a vysokofrekvenčné EA (100 Hz) v ST36 výrazne zlepšil oneskorené vyprázdňovanie žalúdka u diabetických krýs, a výsledok tiež ukázalo, že účinok nízkofrekvenčného EA bol dramatickejší než vysoké frekvencia EA.

Početné štúdie preukázali, že ICC zohráva dôležitú úlohu v regulácii peristaltiky žalúdka, hlavné determinantom vyprázdňovanie žalúdka [27], [28]. Rovnako ako existuje ICC v rôznych vrstvách žalúdočnej dutine v podobe sietí vivo
, sú cenným treba brať do úvahy zmeny ICC sietí. Zníženie počtu a morfologických zmien ICC-my a ICC-IM v žalúdku diabetických myší boli preukázané v predchádzajúcej štúdii [14]. Podobne bol pozorovaný výrazný úbytok ICC-IM a ICC-SM v dutine z STZ-indukovaných diabetických potkanov, ale ICC-MY nebola významne ovplyvnená výnimkou ku strate spojenia s nervových štruktúr [15]. Tieto rozdiely nálezov v týchto dvoch štúdiách boli pravdepodobne spojené s živočíšnych druhov. Zo štúdie 28 pacientov s gastroparézy, znížený počet ICC bol nájdený v plexus myentericus o plnej hrúbke antrálnej biopsia [29]. Naše výsledky ukázali, že ICC-IM, ICC-MY a ICC-SM v dutine STZ-indukovaných diabetických krýs boli výrazne znížené založený na postupe Western blotting a imunofluorescenčné farbenie, a ďalej poškodenú štruktúru ICC sa ukázalo, transmisný elektrónové mikroskopia , Našťastie, to je hlásil, že nízke frekvencie EA zlepšuje expresiu ICC v hrubom čreve pomalých tranzitnej zápcha u potkanov [17]. Navyše, naše predchádzajúce štúdie naznačujú, že aj nízke a vysoké frekvencie EA obnovuje expresiu ICC v hrubom čreve diabetických krýs [18]. Avšak, v týchto štúdiách, ale skúmať zmenu ICC ako celku, ako aj účinky rôznych frekvenčných EA na ICC v žalúdku neboli objasnené. To znamená, že účinky rôznych frekvenčných EA na tri podtypy ICC v žalúdku, vrátane ICC-IM, ICC-my a ICC-SM boli predmetom tejto štúdie. Naše výsledky ukázali, že expresia ICC v troch vrstvách boli viditeľne zachránená nízkou a vysokou frekvenciou EA, čo naznačuje, že nízke a vysoké frekvencie EA zrekonštruovaný siete ICC-IM, ICC-my a ICC-SM a ďalej by mohli prispieť k obnovený vyprázdňovanie žalúdka.

je pozoruhodné, že rovnováha ICC sietí je daná hlavne apoptózy a proliferácia ICC [11], [12]. Preto je možné mechanizmus na žalúdočné motility a účinky na ICC sietí EA na ST36 boli skúmané pomocou detekcie zmeny proliferácie a apoptózy ICC. V poslednej dobe sa proapoptotický bunková smrť je údajne prebiehajúci proces ICC sietí a úrovňou apoptózy u zdravého hrubého čreva ukazuje, že tieto bunky musia byť neustále regenerovať na udržanie neporušené sietí [12]. Okrem toho, výsledky z dospelých morčiat ukázali, že črevnej ischémii a reperfúzne poranenie viedlo k zníženiu počtu ICC prostredníctvom apoptózy, ktorá môže prispieť k gastrointestinálnych porúch motility [30]. Navyše nedávna správa ukázala, že liečba EA znižuje proapoptotický percento buniek čiernej hmoty v parkinsonizmu u potkanov [31]. Táto štúdia jasne artikuloval, že proapoptotický ICC detekovaný TUNEL metód bola povodeň v ICC sieťach diabetickej potkana žalúdka a špekuloval, že vyčerpanie ICC sietí by mohlo tiež viesť k poruchám hybnosti žalúdka. Ale vďaka zásahu frekvencie EA stimulácia nízku a vysokú, Tunel + jadro bolo ťažko nájsť, čo naznačuje apoptózu ICC boli znížené na nízkej úrovni ako obvykle.

proliferation je tiež ďalší hlavný regulátor pre udržanie siete ICC. Predchádzajúce výsledky ukázali, že proliferácia sa podieľal na obnove ICC, akonáhle to bolo stratené u dospelých zvierat [32], [33].

• Ploche ONE: Self-Hlásené žalúdočnú nevoľnosť v Travellerov na výletných-Based a pozemných balíčka Holidays
• Ploche ONE: Nikotín zoslabuje aktiváciu tkanivové makrofágy Resident v žalúdku myšou cez P2 nikotínový receptor acetylcholínu