PLoS ONE: Electroacupuncture na ST36 ublažava želučano pražnjenje i spašava mrežu intersticijske stanice Cajal u želucu dijabetičke štakora

Sažetak pregled

Iscrpljivanje intersticijske stanice Cajal (ICC) je certificirana u želucu dijabetičara. Iako electroacupuncture (EA) na ST36 je učinkovita terapija za regulaciju pokretljivosti želuca, mehanizmi EA na ST36 o pražnjenja želuca i mreže ICC tek treba razjasniti. Ciljevi ovog istraživanja bili su ispitati učinke EA na pražnjenja želuca te o izmjenama ICC mreža. Štakori su nasumično raspoređeni u kontroli, dijabetičnih štakora (dm), dijabetičkih štakora s sham EA (DM + SEA), dijabetičnih štakora s niskim frekvencijama EA (DM + LEA) i dijabetičnih štakora s EA skupina visoke frekvencije (DM + HEA). Ekspresija c-kit u svakom sloju želučanu stijenku procijenjena je pomoću Western blot pokusa. Proliferacija ICC je identificiran od strane imuno c-kit i Ki67 kao apoptoze ICC ispitana je TUNEL bojanja. Rezultati su bili kako slijedi: (1) Pražnjenje teško je odgođen u DM grupi, ali ubrzao LEA i HEA skupine, osobito u LEA skupini. (2) ekspresija c-kit u svakom sloju smanjena očito u DM grupi, ali također doreguliran u LEA i HEA grupe. (3) izdašan cvale ICC (c-kit + /Ki67 +) koji tvore gust mreže s c-kit + stanica zabilježene su u Lea i HEA skupini, dok apoptoze stanice (c-kit + /TUNEL +) jedva su zarobljeni u Lea i HEA grupe , Kolektivno, niske i visoke frekvencije EA na ST36 spasiti oštećene mreže ICC inhibirajući apoptoza i pojačavanje proliferacije u želucu dijabetičkih štakora, što rezultira poboljšanom pražnjenja želuca pregled

Izvor:. Chen Y, Xu JJ Liu s, Hou XH (2013) Electroacupuncture na ST36 ublažava želučano pražnjenje i spašava mreže intersticijske stanice Cajal u želucu kod štakora. PLoS ONE 8 (12): e83904. doi: 10,1371 /journal.pone.0083904 pregled

Urednik: Yvette Tache, University of California, Los Angeles, United States of America pregled

Primljeno: 9. kolovoza 2013; Prihvaćeno: 8. studenog 2013; Objavljeno: 31. prosinca 2013 pregled

Copyright: © 2013 Chen i sur. Ovo je otvorenog pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan

financiranja. Rad je djelomično podržan od strane potpore iz Nacionalne zaklade prirodoslovni Kine (br 30670775, broj 81270458). Nema dodatnih vanjsko financiranje dobila za ovo istraživanje. U financijeri nisu imali ulogu u studiju dizajna, prikupljanja i analize podataka, Odluka o objavi, ili pripremu rukopisa pregled

U konkurenciji interese.. Autori su izjavili da ne postoje suprotstavljeni interesi pregled

Uvod pregled

Vrste poremećaja gastrointestinalnog motiliteta, od funkcionalne dispepsije gastropareze jako utječe na kvalitetu života pacijenata s desetljeća diabetes mellitus [1]. Gastropareza, odlikuje usporenim pražnjenjem želuca, pojavljuje se i do 30% osoba s dijabetesom tipa 1 [2]. Iako su različiti terapijski postupci, uključujući farmaceutske liječenje i neke ne-droga tretmani su pokušali, ljekovit učinak za gastropareza uvijek nezadovoljavajući. Pregled

Akupunktura je empirijski se koristi za liječenje gastrointestinalnih poremećaja u orijentalnim zemljama već tisućama godina. Electroacupuncture (EA), koja je modifikacija tradicionalnog akupunkture, je više prikladan za kliničku i osnovne postavke istraživanja za svoje obnovljivosti. Zusanli pregled (ST36) je čest acupoint često koristi za liječenje gastrointestinalnih bolesti. U posljednjih nekoliko godina, učinci EA na ST36 na želučane pokretljivosti je procijenjena u brojnim studijama. Za životinje, EA na ST36 znatno povećao pokretljivosti želuca kod štakora pri svijesti i poboljšavamo odgođeno pražnjenje želuca kod dijabetičnih štakora STZ-inducirani [3], [4]. Osim toga, kod ljudi, EE u ST36 ubrzano pražnjenje želuca i olakšanje dispeptičke simptome kod funkcijske dispepsije bolesnika i sa šećernom bolešću s gastropareze [5], [6]. Iako je u tim istraživanjima prihvaćen je samo niske frekvencije EA, visoka frekvencija EA je također izvijestio promovirati jednjaka i distalni debelog crijeva motilitet u životinja [7], [8]. Dakle, efekti različitih frekvencija EA na želučane pokretljivosti i mehanizmi u podlozi skrenuti pozornost ljudi. Pregled

Međuprostorne stanice Cajal (ICC), dobro uspostavljena su pejsmejkeri proizvode i šire spore valove, stekli značaj u regulaciji probavnog pokretljivost tijekom nekoliko desetljeća [9]. Tri podtipa ICC uključujući intramuskularno ICC (ICC-IM), myenteric ICC (ICC-MY) i submukozne ICC (ICC-SM) obliku nedirnuta mreža u stijenku želuca [10]. Mreže ICC nisu statične ni u fiziološkim uvjetima; apoptoza i transdiferencijacija dovesti do gubitka ICC, a ICC također može vratiti proliferacije, nadopunjavanje iz matičnih stanica i povećava preživljavanje [11], [12]. Opsežna istraživanja su zabilježila da je gubitak i šteta od ICC-a izazvao neurednu gastrointestinalni motilitet u životinjskim modelima i pacijenata s dijabetesom [13] - [15]. Nedavno su daljnja istraživanja izvijestio je da EA je omogućio povećanje kolona ICC u slow tranzitni zatvor štakora i štakora nakon enteroenterostomy [16], [17]. Naša nedavna studija je također pokazala da EA na ST36 mogao vratiti oslabljenu ICC u debelo crijevo dijabetičkih štakora [18]. U međuvremenu, on je zabrinut da EA promovira proliferaciju i inhibiran apoptozu stanica mozga u hipokampusu [19], [20]. Međutim, tu je prazno o učincima EA na ST36 o ICC-u dijabetičku gastropareza i mehanizmu li proliferacije i apoptoze ICC su uključeni pregled

Stoga su ciljevi ovog istraživanja bili su:. 1) procjenu učinak različitih frekvencija EA na želučanog pražnjenja; 2) ispitati učinke EA na ST36 o ICC-mreža u dijabetičnih štakora; 3) potvrditi da li je apoptoze i proliferacije ICC su uključeni. Pregled

materijali i postupci

Etika izjava pregled

Štakori primio ljudsku brigu i ova studija je provedena strogo u skladu sa preporukama u Vodiču za njegu i korištenje laboratorijskih životinja iz National Institutes of Health, sa svim operacijama koje su odobrile etičkim smjernicama iz njega i uporaba odbora životinja od Tongji Medical College, Huazhong Sveučilišta znanosti i tehnologije.

Životinje pregled

Muški Sprague-Dawley težio 250-300 g izabrani su u ovom istraživanju. Štakori su dobiveni iz pokusa na životinjama Center of Tongji Medical College (Huazhong Sveučilištu znanosti i tehnologije, Wuhan, Kina) i čuva u normalnim laboratorijskim uvjetima (22 ° C, 12/12 h ciklusu svjetlost-tama) uz slobodan pristup hrani i sterilne vode. Nakon tjedan dana adaptivne hranjenja, životinje su službeno usvojen u našim eksperimentima. Pregled

Dijabetička Model pregled

Nakon prekonoćnog posta, ali slobodan pristup vodi, modeli su osnovana s jedne intraperitonealne injekcije streptozotocina u štakori (STZ, 60 mg /kg, odnosno 1 ml /100 g tjelesne težine, Alexis biokemijske, San Diego, CA, USA), svježe otopljene u 20 mM citrat pufer otopinu (pH 4.5, Sigma, St. Louis, MO, USA) , Kontrolna skupina je injektiran isti volumen citratnog pufera. Svi štakori su bili smješteni u istom stanju, sa smanjenjem vode kroz 4 sata, ali ad libitum
hranjenja. Tjedan dana nakon injekcije, dijabetes je potvrđeno u različito vrijeme mjerenjem glukoze u kapljici pune krvi dobivene probijanje vršak repa broda. Razina glukoze u krvi ≥16.7 mmol /L je uzeta kao standard za uspješan model. Glukoza u krvi je prikazan pravovremeno prije injekcije i 1., 4. i 8. tjedna nakon injekcije. Nadalje, gubitak težine, polidipsija i poliurija daljnji su indikatori dokaze uspješan poticaj dijabetičke rat. Pregled

Eksperimentalni protokoli

Štakori su nasumično podijeljeni u pet skupina (10 štakora svaka skupina), uključujući i kontrolu , dijabetička skupina (DM), dijabetičnih štakora s sham EA skupinu (moru, akupunktura bez električne struje, 30 min /d), dijabetičnih štakora s niske frekvencije EA skupinu (LEA, 10 Hz, 1-3 mA, 30 min /d ) i dijabetičnih štakora pomoću visoke frekvencije EA grupe (hEA, 100 Hz, 1-3 mA, 30 min /d). EA je proveden na acupoint ST36 s električnim stimulatora (G6805-2A; Shanghai Huayi medicinski instrument Factory, Šangaju, Kina) svaki dan tijekom 8 tjedana. Električna struja je osnovan u skladu s malo drhtala donjih ekstremiteta. Postići svrhu eliminiranja utjecaj stresa, životinje su ostavljene da se slobodno kretati u svom plašta tijekom postupka EA. Pregled

Nakon uzastopnog zahvata tijekom 8 tjedana, štakora u svakoj skupini su testirani na pražnjenja želuca. Tada su bili žrtvovani, i pažljivo su dobiveni primjerci antruma. Svaki primjerak bio podijeljen na nekoliko dijelova, relativno mala je pohranjen na -80 ° C, zapadnoj upijajući analize nakon sloja svježe odvojiti i dio je stavljen u 2,5% glutaraldchidu za elektronsku mikroskopiju, a ostatak su fiksirani u Zamboni je fiksativ (2 % paraformaldehid i 1.5% pikrinske kiseline zasićene otopine u 0,1 M otopini fosfatnog pufera (PBS, pH 7,4) za imunofluorescencije bojanja. pregled

Mjerenje gastričkog pražnjenja pregled

pražnjenje izvedeno je modificiranom kako je opisano prije [21]. Test obrok sadrži fenol-crvenog (0,5 mg /ml), kao pokazatelj i karboksimetilceluloze (15 mg /ml) se stalno miješa i potom se održava pri 37 ° C. Nakon što je hrana ostavljeni preko noći, štakori su primili 2 ml fenola crveni obrok daju pomoću igle za kljukanje. Trideset minuta kasnije životinje su brzo žrtvovane cervikalnom dislokacijom. cijeli želudac se pažljivo odstraniti nakon podvezivanja u kardija i pilorusa, a zatim je trbuh otvoren i njegov sadržaj prebaci u epruvetu i ispere s 40 ml destilirane vode. Na kraju eksperimenta, dodana je otopina NaOH (20 ml, 1 M) u svaku epruvetu da razviju maksimalnog intenziteta boje. Apsorbancija uzorka očita na 560 nm sa spektrofotometrom (Hitachi U-2900) je da odražavaju količinu fenol crvenog preostale u želucu. Brzina pražnjenja želuca izračunat je prema sljedećoj formuli: Pražnjenje (%) = 100 × (1 - X /Y), X predstavlja apsorbanciju fenol crvenog sakupljene iz želuca životinja žrtvovani 30 min nakon testnog obroka. Y predstavlja apsorbancija fenol crvenog oporavio od želuca kontrole životinja ubila odmah nakon davanja testnog obroka. Pregled

Western blot-pregled

Svježe uzoraka želučane antruma su zabodena na Sylgard posudu i svaki sloj je pažljivo izdvoje seciranjem oštrim nakon uklanjanja sluznice. Uz pomoć fine ukazao pincetom i mikrokirurške škare pod mikroskopom, dobiveni su slojevi ICC-SM, ICC-IM i ICC-my. Sve manipulacije su učinili na ledu kako bi izbjegli gubitak proteina. A onda uzorci ICC-SM, ICC-IM i ICC-Moja su pohranjeni na -80 ° C. Pregled

Svježe smrznuti uzorci su slomiti u suspenziju stanica i homogenizira u RIPA puferu (Upstate, Temecula, CA , USA) s inhibitorima proteaze (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO, USA). Smjesa se centrifugira pri 12000 g tijekom 10 minuta na 4 ° C, a supernatanti su sakupljeni kao ukupnog proteina. Koncentracija proteina određena je Bradford metodom. Zatim se ekvivalenta 50 mg ekstrahiranih proteina postupno se odvoje od 10% natrijevog laurilsulfata poliakrilamid gel elektroforeze (SDS-PAGE), te preneseni na PVDF membrane (Millipore, Bedford, MA, USA). Zatim blokiranje nespecifičnih vezajućih mjesta s 5% nemasnog suhog mlijeka u Tris-puferiranoj slanoj otopini koja sadrži 0.1% Tween 20 (PBST) na sobnoj temperaturi tijekom 1 h, te membrane su bile inkubirane s primarnim protutijelom na anti-c-kit (1:200, Santa Cruz Biotechnology, Inc.) preko noći na 4 ° C zajedno sa zečjim anti-mišjim aktin (1:400, Santa Cruz Biotechnology, Inc.) služi kao unutarnje kontrole. Nakon tri ispiranja s TBST, membrane inkubirane s HRP vezan sekundarna protutijela (HRP-vezani zečjeg anti-kozjeg i HRP vezan kozjeg anti-mišjeg, 1:5000) tijekom 1 sata na sobnoj temperaturi. Zatim s tri ispiranja po TBST i trake su vizualizirani kemijsku reakciju s poboljšanom sredstvom kemiluminescencije (Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ) i blot se podvrgne autoradiografijom. Denzitometrija analiza provedena je po količini One softvera (Bio-Rad tehničku službu, verzija 4.6.2). Pregled

imunofluorescencijom pregled

Za čitavih-mount bojenje preparata, Trbuh je otvoren i ispere nekoliko puta s PBS. Antruma želuca zabodena na Sylgard posudu i rastegnut na 150% svoje originalne veličine, a zatim fiksni s Zamboni je fiksativ 24 sata na sobnoj temperaturi. Fiksne tkiva su isprane s PBS-om i zatim se sluznicu se ukloni oštrim seciranje. ICC-SM locirati na submukozne površinu kružnog mišića sloj, ICC-IM ispreplitanja između glatkih mišićnih stanica i ICC-MY zajedno sa myenteric živčanih pleksusa su pažljivo pripremljeni pomoću fine šiljaste pincetu i mikrokirurških škare pod mikroskopom. Pregled

procedure imunološko otkrivanje ICC mreže i proliferaciju su prethodno opisano [22]. Ki67, nuklearni protein izražen tijekom svih aktivnih faze stanica i nestao u mirovanju stanice, primijenjena je za otkrivanje proliferativni ICC [23]. Nakon ispiranja šest puta sa PBS tijekom 1 sata, tkiva se inkubiraju s 5% normalnog goveđeg seruma u PBS koji sadrži 0,3% Triton X-100 (PBST) tijekom 1 sata na sobnoj temperaturi, a zatim inkubirane s primarnim protutijelom c-kit (1:100; Santa Cruz, CA, USA) i Ki67 (1:100; Abcam, Cambridge, UK) preko noći na 4 ° C. Nakon ispiranja u PBST 30 minuta, imunoreaktivnost je detektiran pomoću Alexa Fluor 594-konjugiranog sekundarnog antitijela (majmunskim anti-kozjim IgG, 1:100) i Alexa Fluor 488-konjugiranog sekundarnog antitijela (magareće anti-IgG RABIT, 1:100) na 37 ° C kroz 1 sat, nakon čega slijedi ispiranje u PBS tri puta tijekom 30 minuta, te se inkubira sa DAPI (0,1 mg /mL, Sigma, St. Louis, MO, USA) kroz 30 minuta, kao nuklearnog brojača mrlja. Isprati u PBS-u dva puta, tkiva su odvijala na slajd. Konfokalnog laserskog skenirajući mikroskop (Nikon, Japan) se koristi za ispitivanje imuno tkiva. Kako bi se uključiti sve razine pozitivno obojenih stanica i procesa, optimalni Z slaganje Osnove optike slika je postavljena na 5 lm intervalima. Pregled

Apoptoza ICC su detektirane TUNEL označavanje, što je za detekciju apoptoze Kit (Roche, Njemačka). Cijelog Mount pripravci su inkubirani sa primarnim protutijelom c-kit (1:100, Santa Cruz, CA, USA) preko noći na 4 ° C i sekundarnih protutijela (Alexa Fluor 594 majmunskim anti-kozjim IgG, 1:100) na 37 ° C 30 min. U vlažnoj i tamna okolnostima, tkiva su inkubirani s TUNEL reakcijskog pufera (označavanja otopina: otopina enzima = 9:1) na 37 ° C tijekom 1 sata. Nakon ispiru tri puta po 30 minuta da se ukloni nepovezani fluoresceinom dUTP i inkubirane sa DAPI kao nuklearnu brojača bojom, uzorci se promatraju pod laser scanning mikroskopom. Pregled

Elektronska mikroskopija pregled

Nakon sluznica uklonjena, primjerci antruma su uronjene u otopinu za fiksiranje 2.5% glutaraldehida na 4 ° C tijekom 2 h. Zatim su ona bila isprana s 0.1 M PBS dva puta tijekom 20 minuta, nakon fiksirane u 1% OSO _{4 (pH 7.4) tijekom 1 sata, dehidriran u stupnjevitog alkoholom razjašnjavaju propilen oksida i uronjen u Epon pomoću ravne plijesni. Veoma tanki dijelovi su dobiveni sa ultramikrotom (Leica ULTRACUTU, Njemačka) i obojeni olova citrata 10 min prije gledanja sa transmisijskim elektronskim mikroskopom (Tecnai G ^{212, FEI, Nizozemska). Pregled}}

Statistička analiza pregled

imunofluorescencija bojenje analizu antruma želuca iz svake eksperimentalne životinje je uzorkovana na istom mjestu u želucu. ICC je priznala c-kit imunoreaktivnost i prisutnosti obilnih staničnih procesa. Razmnožavanje i apoptoze ICC su identificirani c-kit imunoreaktivnost i Ki67 /TUNEL obojenog jezgre okružuje sa c-kit pozitivno membranskih struktura. Deset slučajna polja (× 200 uvećanja, 0,2607 mm ^{2) po cijeli montirati pripreme su uzeti za fotografije c-kit pozitivnih stanica, c-kit + /Ki67 + i c-kit + /Tunel + označenim stanicama. Te fotografije su također iskorišteni za procjenu debljinu slojeva u svakom snopu uz pomoć DAPI obilježenih jezgara kao biljeg gornje i donje granice slojevima. Brojevi c-kit pozitivnih stanica, c-kit /Ki67 i c-kit /tunel dvostruko označene stanice su prebrojane s slika ProPlus 5,0 (Media Cvbernetics). Svi podaci su izraženi kao srednja vrijednost ± SEM. Najmanje deset vizije odvedeni u svaku životinju. Analiza varijance (ANOVA) i t-test je korišten za usporedbu razlike među različitim skupinama. P vrijednost manja od 0,05 uzeta je kao statistički značajna razlika. Pregled}

Rezultati

Tjelesna težina i razina glukoze u krvi pregled

Nakon 8 tjedana, slučajno je smrt nastupila u DM skupine (dvije štakori) i na moru skupini (jedan štakor). Štakori su testirane na istu osnovnu težinu između grupa (Tablica 1). Na kraju 1, 4 i 8 tjedana, tjelesne mase DM skupini bila je značajno smanjen u odnosu na kontrolu ( P pregled = 0,009, 0,000 i 0,000). Nije bilo značajne razlike između mora i DM grupe ( P izvoznici > 0,05). Međutim, za razliku od DM skupinom, tjelesna težina bila povišena u LEA skupini nakon 8 tjedana ( P pregled < 0,001) HEA grupa na 4 i 8 tjedana ( P pregled = 0.003, p pregled. < 0.001 zasebno) pregled

Kao što je prikazano u tablici 2, nema razlika zabilježena je u razini glukoze u krvi osnovica među skupinama. Dijabetes modeli su uspješno uspostavljena s visokom razinom glukoze u krvi u DM skupini u odnosu na kontrolnu na kraju 1, 4 i 8 tjedana (sve P izvoznici < 0,001). U međuvremenu, razina glukoze u krvi u moru, Lea i HEA skupine nisu se značajno promijenila u odnosu na DM grupe (sve P izvoznici > 0,05). Pregled

Efekti EA na želučanog pražnjenja

Slika 1 je pokazala učinke EA na ST36 na želučanog pražnjenja u različitim skupinama. Želučani pražnjenje DM grupe je znatno odgođen u suprotnosti s kontrolom ( P pregled = 0,012). U usporedbi s DM grupi, SEA imala značajan utjecaj na želučano pražnjenje ( P pregled = 0,338), ali Lea i HEA znatno ubrzala usporeno pražnjenje želuca od 43,96 ± 5,02% do 69.72 ± 3.02%, a do 59.06 ± 3,70% ( P izvoznici < 0,001 i P pregled = 0.013, respektivno). Usporedba između Lea i HEA skupine, postignuta statistička značajnost ( P pregled = 0,04), što predstavlja da je učinak LEA očito premašio onaj Hea. Pregled

Efekti EA na ekspresiju c -komplet pregled

S slici 2, ekspresija c-kit u svakom sloju želučanu stijenku je određena. U ICC-IM, c-kit u DM grupa je očito smanjen u odnosu na kontrolu (0,47 ± 0,04 vs 0,69 ± 0,05, P pregled = 0,001). S druge strane, a LEA HEA dramatično poboljšana ekspresiju c-kit usporedbi s DM skupinom (0,65 ± 0,04 vs 0,47 ± 0,04 P pregled = 0,004; 0,66 ± 0,03 vs 0,47 ± 0,04 P
= 0.002, respektivno). U ICC-mom, izraz c-kit značajno je smanjena u DM grupi, za razliku od kontrole (0,57 ± 0,04 vs 0,83 ± 0,05, P izvoznici < 0,001). No, značajna razlika je i ostvaren je u Lea i HEA skupine u odnosu na DM grupe (0,78 ± 0,05 vs 0,57 ± 0,04, P pregled = 0,002; 0,76 ± 0,04 & 0,57 ± 0,04, P
= 0,004, respektivno). U ICC-SM je c-kit u DM skupine očito je smanjen na osnovu normalne razine (0,56 ± 0,03 vs 0,77 ± 0,04 P pregled = 0,001). Dosljedno, Lea i HEA očito povećava ekspresiju c-kit usporedbi s DM skupinom ( P pregled = 0,003 i P pregled = 0.007). Međutim, nema značajne razlike između mora i DM grupe u ICC-IM, ICC-Moja i ICC-SM ( P pregled = 0,597, P pregled = 0,853 i P pregled = 0,172). pregled

Efekti EA na ICC mrežama pregled

izmjenjivanjem ICC mreža posebno ICC morfologije i gustoće su prikazani na slici 3. Nije bilo značajne razlike u debljini sloja unutar skupina. Povezan s glatkih mišićnih stanica, c-kit imunoreaktivnost za ICC-IM zabilježeno je u slojevima mišića, što pokazuje da ICC-IM imao dvije polarne procesa formiranja mobilne mreže u kontrolnoj skupini. U DM skupini duge procesi ICC-IM oslabljen očito i gustoća c-kit pozitivne stanice je smanjen na oko 50% normalnom kontrolom ( P pregled < 0,001). U usporedbi s DM grupi, bez značajnih promjena zabilježen je u moru grupi. Međutim, gotovo netaknuti mobilne mreže vizualizira se u Lea i HEA skupini i gustoća c-kit pozitivne ICC-IM gotovo vraćena na normalnu razinu (i P izvoznici < 0.001, u usporedbi s DM grupe ). pregled

ICC-MY namota oko myenteric plexus su smještene između uzdužnih i kružnih glatkih slojeva mišića. Multipolarni ICC-MY s brojnim granama formira netaknut mobilne mreže su jasno pokazali u kontrolnoj skupini. U DM skupine, c-kit + stanice se pojavila s vitkim stanične tijela i prijelom procesa, a gustoća ICC-Moja očito je smanjena ( P izvoznici < 0,001). U moru skupini, gustoća ICC-Moja nisu značajno promijenjene u odnosu na DM grupe ( P pregled = 0.762). Međutim, gotovo netaknuti mobilne mreže postojalo oko mienterijskom pleksusa i ICC-Moja gustoće djelomično pokriti na Lea i HEA grupe (i P izvoznici < 0.001, u usporedbi s DM grupi) pregled <. h3> Efekti EA na apoptozu ICC Netlogu

apoptoza ICC je otkriven TUNEL označavanje kako bi se utvrdilo je li apoptoza je bio uključen u deficit od ICC-a u dijabetesu (sl.4). Od pripreme cjelovitih montirati na kontroli, nekoliko jezgre ICC su obojeni TUNEL metodom u mišićnom sloju, mienteričkim sloja i submukoza sloja. Obilje c-kit + /TUNEL + ICC-IM, ICC-Moja i ICC-SM zabilježene u DM skupini (18,48 ± 1,88 mm ^{-2, 26.51 ± 1.87 mm -2 i 12,03 ± 1,27 mm -2, respektivno). C-kit + pokretne mreže su nepotpuni i apoptoze ICC predstavlja kao skraćene postupke s manje grane. Veliki broj c-kit + /Tunel + stanice su također poplava u svim sloju mora grupi. Pod provedbe LEA i HEA, apoptotične kit + stanice se jedva naći u ICC-IM (1,79 ± 0,33 mm -2 i 2,05 ± 0,30 mm -2), ICC-MY (2,24 ± 0,40 mm -2 i 2,48 ± 0,40 mm -2) i ICC-SM (1,09 ± 0,25 mm -2 i 1.39 ± 0.20 mm -2). Pokretne mreže koje otkriva c-kit imunološkim pokazali visoku gustoću i debljinu od staničnih procesa u Lea i HEA grupi. Pregled}

Efekti EA na proliferaciju ICC Netlogu

S obzirom na povećan broj ICC-u Lea i HEA skupina, Ki67 pozitivne ICC je otkriven da bi se otkrilo širenje ICC u tri sloja (Slika 5). U kontrolnoj skupini, broj c-kit /Ki67 dvostruko označene stanice su zabilježene u ICC-IM (8,82 ± 1,02 mm ^{-2), ICC-MY (10,64 ± 0,92 mm -2) i ICC -SM (4,67 ± 0,96 mm -2). Broj ICC s prelomljenim grana je znakovito smanjuje, a mreže su vrlo rijetke, uz nekoliko proliferacijom stanica, kako u DM i more grupi. Međutim, u Lea i HEA skupine, c-kit /Ki67 dvostruko označene stanice u ICC-IM obilježili su usko susjednih stanica tijela i relativno bipolarni procesa i srednje gustoće postignut do 18.37 ± 1.60 mm -2 i 15,27 ± 1,81 mm 2 (oba P izvoznici < 0,001). Slično tome, u izobilju c-kit + /Ki67 + ICC-MY u Lea i HEA grupe (i P izvoznici < 0,001) formiranje netaknute mreže sa c-kit + stanica obavlja tijelo okrugli stanica i duge vitke procese. U ICC-SM, u pratnji netaknutom mrežom ICC, gustoća razmnožavanje stanica u Lea i HEA skupine bile su relativno veće, za razliku od DM grupe ( P pregled = 0,016 i P
= 0.003). pregled}

Efekti EA na ultrastrukturnih izmjenama ICC Netlogu

Tipične ultrastrukturalne karakteristike ICC je otkriveno transmisijskim elektronskim mikroskopom (Slika 6). U kontrolnoj skupini, ICC-IM i ICC-Moj bogata dobro razvijene stanične organele druge duge procese koji sadrže mitohondrije i grube i glatke endoplazmatska mrežica. Polimorfne ICC-SM nalazi na submukozne površinu kružnog mišića sloja pokazuju višu elektron-guste citoplazmu, brojne mitohondrije i endoplazmatska mrežica. U DM skupinu, dramatični pad broja ICC s oštećenim ultrastrukturalne značajke ispitana je elektronskim mikroskopom. Te stanice s natečene mitohondrijima, poremetio cristaed i kondenzirane kromatina pokazao nepotpunu membranu i skratiti procese. Ove promjene su također vidjeli u moru grupi. U Lea i HEA skupine, broj ICC-a bila je značajna povećana, a oni su usko povezani sa živčanim vlaknima i glatkih mišićnih stanica koje tvore sinaptičkih struktura i GAP spojeve. Vedro mitohondriji brijeg, uredno distribuira grubi endoplazmatska mrežica i ribosomal čestice smatra se da je klasična obilježja ICC-IM, IM-Moja i ICC-SM. Pregled

Rasprava pregled

U ovom istraživanju smo utvrdili da obje niske i visoke frekvencije EA na ST36 potisnut apoptoze ICC i aktivira proliferaciju ICC u želucu dijabetičkih štakora STZ-inducirani. Kao rezultat toga, spašavanje ICC mreža bila je povezana s sprječava učinak na usporenim pražnjenjem želuca. Pregled

Kao djelotvoran postupak s manje nuspojava, EA u kombinaciji s akupunkturom i električne struje stimulacije umjesto ručnog manipulacija postupno prihvaćaju zapadne zemlje. ST36 je jedan od najčešće korištenih točaka za liječenje gastrointestinalnih poremećaja, s indikacijama uključujući: epigastričan bol, mučnina, povraćanje, slab apetit i trbušne rastegnutost. Istovremeno, naša prethodna studija pokazala je EA na ST36 može povećati kolona pogonsku pokret, ali nije uočen u skupini s EA na ne-akupunkturne točke. Odgođeno pražnjenje želuca je čest lik dijabetičara s gastropareza i jedan od glavnih čimbenika koji pridonose simptomima gastropareze. Tijekom proteklih desetljeća, pokusi na svjesnih štakora pokazala su da niske frekvencije EA (10 Hz) značajno ubrzava pražnjenje želuca [3], [24], [25]. Dodatno, 100 Hz EA bio je učinkovit da uzrokuje otpuštanje dinorphin i serotonina u uzrokovati analgeziju [26]. Iako visoke frekvencije EA (100 Hz) također je izvijestio promovirati jednjaka i distalni debelog crijeva motilitet u životinja [7], [8], efekti 100 Hz EA na želučane pokretljivosti su jedva istražen. Dakle, parametri (10 i 100 Hz) EA odabrani su prema preliminarnim eksperimentima koje je navedeno stimulativni učinak gastrointestinalnog motiliteta. Naši su rezultati pokazali da su niske frekvencije EA (10 Hz) i visoke frekvencije EA (100 Hz), na ST36 značajno poboljšana odgođeno pražnjenje želuca kod štakora, a rezultati su također pokazali da je učinak niske frekvencije EA bio dramatičan nego visoko učestalost EA. pregled

Brojne studije su pokazale da ICC igra važnu ulogu u regulaciji peristaltike želuca, glavna odrednica pražnjenja želuca [27], [28]. Kao ICC postoji u različitim slojevima želučanog antruma u obliku mreže in vivo pregled, promjene ICC mreže su vrijedno uzeti u obzir. Smanjenje broja i morfološke promjene ICC-Moja i ICC-IM u želucu dijabetičnih miševa su pokazali u prethodnom istraživanju [14]. Isto tako, značajan gubitak ICC-IM i ICC-SM u antruma STZ-izazvanih dijabetičnih štakora zabilježeno je, ali ICC-MY nije značajno utjecalo osim za gubitak veza sa živčanim strukturama [15]. Te razlike u nalazima u ova dva istraživanja su vjerojatno povezane sa životinjskim vrstama. Iz studije od 28 pacijenata sa gastropareza smanjenje broja ICC pronađen je u mienterijskom pleksusu prema punoj debljina antralnim biopsijama [29]. Naši rezultati pokazuju da ICC-IM, ICC-MY i ICC-SM u antruma dijabetičkih štakora STZ-inducirani dramatično su smanjene na temelju tehnike zapadnoj upijajući i imunofluorescencije mrlja i dalje oštećenu strukturu ICC je pokazao transmisijskim elektronskim mikroskopom , Srećom, to je izvijestio da je niska frekvencija EA poboljšava izraz ICC u debelom crijevu sporo tranzitni zatvor štakora [17]. Osim toga, naša ranija istraživanja su pokazala da niske i visoke frekvencije EA vraća ekspresiju ICC u debelom crijevu dijabetičkih štakora [18]. Međutim, u tim istraživanjima, oni istražuju promjenu ICC u cjelini i učinke različitih frekvencija EA na ICC u želucu nisu razjašnjeni. Dakle, efekti različitih frekvencija EA na tri podtipa ICC u želucu, uključujući ICC-IM, ICC-Moja i ICC-SM bili su u središtu ovog rada. Naši rezultati pokazuju da je ekspresija ICC u tri sloja su upadljivo spasio niske i visoke frekvencije EA, sugerirajući da niske i visoke frekvencije EA obnovljena mreža ICC-IM, ICC-Moja i ICC-SM i dalje mogu doprinijeti oporavio pražnjenje želuca. pregled

Važno je napomenuti da je ravnoteža ICC mreža uglavnom se određuje apoptoze i proliferacije ICC [11], [12]. Stoga je mogući mehanizam na želučane pokretljivosti i učinci na ICC mrežama EA na ST36 su istraženi kroz otkrivanje promjene proliferacije i apoptoze ICC. Nedavno, apoptoze smrt stanica je izvijestila da se u tijeku proces ICC mreža i razinu apoptoze u zdravom debelom crijevu upućuje na to da su te stanice moraju neprestano regeneriraju tijekom netaknute mreže [12]. Osim toga, rezultati odraslih zamorcima pokazali da crijevna ishemija i odbijanje zacjeljivanja rane dovelo do smanjenja broja ICC putem apoptoze koji mogu doprinijeti poremećaja gastrointestinalnog motiliteta [30]. Osim toga, nedavno izvješće pokazalo je da EA terapija smanjuje apoptotičnog postotak substantia nigra stanica u Parkinsonove štakora [31]. Ova studija je jasno artikulirao da apoptoze ICC otkriven tunel metode su poplavu u ICC mrežama dijabetičke želuca štakora i nagađa se da je osiromašeni ICC mreže također može dovesti do poremećaja pokretljivosti želuca. Ali kroz intervencije niske i visoke stimulacije EA frekvencije, Tunel + jezgra bilo teško pronaći, što sugerira apoptozu ICC svedeni su na niskoj razini, kao i obično. Pregled

proliferacije je također još jedan glavni regulator za održavanje mreže ICC. Prethodni rezultati su pokazali da je proliferacija bio uključen u oporavku ICC nakon što je izgubio u odraslih životinja [32], [33].

• PLoS ONE: Self-Izvijestio prevrnut želuca u Putnike na Cruise-Based i kopna paket Holidays
• PLoS ONE: Nikotin slabi Aktivacija tkiva rezidentnim makrofagima u miša želuca kroz P2 razgradnja Receptor