PLoS ONE: Electroacupuncture at ST36 ameliorates mahalaukun tyhjenemistä ja Rescues Networks Interstitiumin soluja Cajal vatsaan diabeettisen Rats

tiivistelmä

ehtyminen interstitiaalinen solujen Cajal (ICC) on sertifioitu vatsassa diabetespotilaiden . Vaikka electroacupuncture (EA) at ST36 on tehokas hoito säädellä mahalaukun motiliteetin, mekanismit EA ST36 mahalaukun tyhjenemistä ja verkostojen ICC on vielä selvittämättä. Tavoitteet Tämän tutkimuksen tutkia vaikutuksia EA mahalaukun tyhjenemistä sekä korjauksilla ICC verkoissa. Rotat satunnaistettiin ohjaus, diabeettisten rottien (DM), diabeettisissa rotissa huijausta EA (DM + SEA), diabeettisissa rotissa matalataajuista EA (DM + LEA) ja diabeettisissa rotissa suurtaajuus EA ryhmät (DM + HEA). Ekspression c-kit kunkin kerroksen mahalaukun seinämän arvioitiin western-blottauksella. Leviämisen ICC tunnistettiin immunoleimaus c-kit ja Ki67 kuin apoptoosin ICC tutkittiin TUNEL värjäys. Tulokset olivat seuraavat: (1) mahalaukun tyhjenemistä pahasti viivästynyt DM ryhmässä, mutta kiihtyi LEA ja HEA ryhmä, erityisesti LEA ryhmässä. (2) Ilmaisu c-kit kussakin kerroksessa laskettiin ilmeisesti DM ryhmässä, mutta myös säädellään ylöspäin LEA ja HEA ryhmä. (3) Runsas lisääntyneet ICC (c-kit + /Ki67 +) muodostavat tuuhea verkkoja c-kit + soluja, havaittiin LEA ja HEA ryhmä, kun taas apoptoottisten solujen (c-kit + /TUNEL +) on tuskin jää LEA ja HEA ryhmä . Yhdessä matalan ja korkean taajuuden EA ST36 pelastaa vaurioituneet verkostojen ICC estämällä apoptoosin ja parantaa lisääntymistä vatsassa diabeettisten rottien, tuloksena parannettu mahalaukun tyhjenemistä.

Citation: Chen Y, Xu JJ Liu S, Hou XH (2013) Electroacupuncture at ST36 ameliorates mahalaukun tyhjenemistä ja Rescues Networks Interstitiumin soluja Cajal vatsassa diabeettisten rottien. PLoS ONE 8 (12): e83904. doi: 10,1371 /journal.pone.0083904

Editor: Yvette Tache, University of California, Los Angeles, Yhdysvallat

vastaanotettu: 9. elokuuta, 2013 Hyväksytty: 08 marraskuu 2013; Julkaistu: 31 joulukuu 2013

Copyright: © 2013 Chen et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Työ oli osittain tuettu avustuksia National Natural Science Foundation of China (nro 30670775, nro 81270458). Ei ylimääräistä ulkoista rahoitusta saanut tätä tutkimusta varten. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Erilaiset ruoansulatuskanavan motiliteetin häiriöiden vaihtelevat toiminnallinen dyspepsia ja gastropareesia vakavasti vaikuttaa elämänlaatuun potilaiden vuosikymmenten diabetes [1]. Gastropareesi, tunnettu viivästynyt mahalaukun tyhjenemistä, tapahtuu jopa 30% yksilöiden tyypin 1 diabetes [2]. Vaikka eri hoitomuotojen kuten lääkehoidosta ja joitakin ei-lääkehoitoon on kokeiltu, parantavat vaikutukset varten gastroparesis ole tyydyttäviä.

Akupunktio on empiirisesti käytetty hoitoon ruoansulatuskanavan häiriöt itämainen maissa tuhansia vuosia. Electroacupuncture (EA), joka on muunnos perinteisen akupunktion, sopii paremmin kliinisen tutkimuksen ja perustutkimuksen asetukset sen toistettavuus. Zusanli
(ST36) on yleinen acupoint käytetään usein hoitoon ruoansulatuskanavan sairaudet. Viime vuosina vaikutukset EA ST36 on mahan on arvioitu useissa tutkimuksissa. Eläimille, EA ST36 huomattavasti mahan tajuissaan rotilla ja paranivat viivästynyt mahalaukun tyhjenemistä STZ aiheuttaman diabeettisten rottien [3], [4]. Lisäksi ihmisillä, EA ST36 kiihtyi mahalaukun tyhjenemistä ja helpottunut happovaivat in toiminnallinen dyspepsia potilasta ja diabeettisen yksilöiden gastropareesi [5], [6]. Vaikka näissä tutkimuksissa vain matalataajuista EA hyväksyttiin, korkean taajuuden EA raportoitiin myös edistämään ruokatorven ja distaalisen paksusuolen motiliteetin eläimillä [7], [8]. Siten vaikutukset eri taajuudella EA mahan ja taustalla olevien mekanismien kiinnittää ihmisten huomion.

Interstitial solujen Cajal (ICC), vakiintunut kuten sydämentahdistin tuottavien ja etenevän hitaasti aaltoja, ovat saaneet merkitystä gastrointestinaalisen motiliteetti usean vuosikymmenen [9]. Kolme alatyyppiä ICC lukien lihakseen ICC (ICC-IM), myenteeri- ICC (ICC-MY) ja limakalvon alaista ICC (ICC-SM) muodossa ehjä verkkojen mahalaukun seinämän [10]. Verkostoja ICC eivät ole staattisia edes fysiologisissa olosuhteissa; apoptoosin ja transdifferentiation lukemiin ICC menetys, kun taas ICC myös voidaan palauttaa leviämisen, täydennystä kantasoluista ja lisäämällä selviytyminen [11], [12]. Laajat tutkimukset ovat dokumentoitu, että vahingot ICC aiheuttamien huonokuntoinen suoliston toimintaa eläinmalleissa ja diabetes [13] - [15]. Äskettäin lisätutkimukset raportoitu, että EA helpotti lisäystä paksusuolen ICC hitaan läpikulun ummetusta rotilla ja rotilla enteroenterostomy [16], [17]. Meidän tuore tutkimus osoitti myös, että EA ST36 voisi palauttaa heikentynyt ICC paksusuolessa diabeettisten rottien [18]. Samalla se on huolissaan siitä, että EA edistetään lisääntymistä ja inhiboi apoptoosia aivosolujen hippokampuksessa [19], [20]. Kuitenkin on tyhjä noin vaikutuksista EA ST36 ICC diabeettisessa gastropareesi mekanismi onko lisääntymistä ja apoptoosia ICC ovat mukana.

Siksi Tutkimuksen tarkoituksena oli: 1) arvioida vaikutukset eri taajuudella EA mahalaukun tyhjenemistä; 2) vaikutusten tutkiminen EA ST36 ICC verkoissa diabeettisissa rotissa; 3) selvittämään, apoptoosin ja leviämisen ICC olivat mukana.

Materiaalit ja menetelmät

Ethics selvitys

Rotat saivat ihmisen hoitoa ja tämä tutkimus toteutettiin tiukasti mukaisesti suositusten oppaasta Care ja käyttö Laboratory Animals of National Institutes of Health, kaikkine n hyväksymät eettiset ohjeet siitä Animal Care ja käyttö komitean Tongji lääketieteellisen tiedekunnan, Huazhong tiede ja teknologia.

Eläimet

Sprague-Dawley rotat painoivat 250-300 g valittiin tässä tutkimuksessa. Rotat saatu Experiment Animal Center of Tongji Medical College (Huazhong tiede ja teknologia, Wuhan, Kiina) ja pidettiin normaaleissa laboratorio-olosuhteissa (22 ° C, 12/12 h valo-pimeä sykli) on vapaa pääsy ruokaan ja steriiliä vettä. Viikon kuluttua adaptiivisen ruokinta eläimet virallisesti hyväksytty osaksi meidän kokeita.

Diabeettinen malli

Kun paasto yön yli, mutta vapaasti vettä, mallien perustettiin yhdellä vatsaonteloon streptozotocin vuonna rotat (STZ, 60 mg /kg, eli 1 ml /100 g kehon painoa; Alexis Biochemicals, San Diego, CA, USA), juuri liuotettu 20 mM sitraattipuskuria (pH 4,5; Sigma, St Louis, MO, USA) . Kontrolliryhmä injektoitiin sama tilavuus sitraattipuskuria. Kaikki Rottia samassa kunnossa, vedellä puutteesta 4 h mutta halun
ruokinta. Viikon kuluttua injektion, diabetes varmistettiin eri aikaan mittaamalla glukoosin tippa kokoverta saatiin puhkaisemalla hännän aluksen. Verensokerin taso ≥16.7 mmol /l otettiin standardina onnistunut malli. Verensokerin seulottiin täsmällisesti ennen injektiota ja ensimmäinen, neljäs ja kahdeksas viikko injektion jälkeen. Lisäksi laihtuminen, polydipsia ja polyuria olivat edelleen indikaattoreita todistamaan onnistunut kannustin diabeettisen rotan.

Kokeellinen protokollia

Rotat satunnaistettiin viiteen ryhmään (10 rottaa kussakin ryhmässä), mukaan lukien valvonta , diabeettinen ryhmä (DM), diabeettisissa rotissa huijausta AE-ryhmän (SEA, vain akupunktio ilman sähkövirtaa, 30 min /d), diabeettisissa rotissa matalataajuista AE-ryhmän (LEA, 10 Hz, 1-3 mA, 30 min /d ) ja diabeettisissa rotissa suurtaajuus AE-ryhmän (HEA, 100 Hz, 1-3 mA, 30 min /d). EA pantiin täytäntöön acupoint ST36 kanssa sähköstimulaattori (G6805-2A; Shanghai Huayi Medical Instrument Factory, Shanghai, Kiina) joka päivä 8 viikon ajan. Sähkövirta perustettiin mukaan hieman vapina alaraajojen. Tavoitteen saavuttamiseksi poistaa vaikutuksen stressi, eläinten annettiin liikkua vapaasti omassa koteloon aikana EA menettelyssä.

Kun peräkkäisiä intervention 8 viikon ajan, rotat jokaisessa ryhmässä testattiin mahalaukun tyhjenemistä. Sitten he tapettiin, ja yksilöt antrum huolellisesti saatiin. Kukin näyte jaettiin useaan osaan, suhteellisen pieni säilytettiin -80 ° C: ssa western blotting-analyysi sen jälkeen, kun kerrokset juuri irrallaan ja palanen asetettiin 2,5% glutaraldehydin elektronimikroskoopilla, ja loput kiinnitettiin Zamboni fiksatiiviin (2 % paraformaldehydiä ja 1,5% tyydyttyneitä pikriinihappo liuosta 0,1 M fosfaattipuskuriliuosta (PBS, pH 7,4) immunofluoresenssivärjäyksen.

Measurement mahalaukun tyhjenemisen

mahalaukun tyhjenemistä suoritettiin muutos, kuten on kuvattu aiemmin [21]. testi sisältävän aterian fenolipunaista (0,5 mg /ml), kuten indikaattori ja karboksimetyyliselluloosa (15 mg /ml) sekoitettiin jatkuvasti ja pidettiin sitten 37 ° C: ssa. sen jälkeen kun ruoka-menettänyt yli yön, rotat saivat 2 ml fenolia punainen ateria annettiin letkuruokintaneulan. Kolmekymmentä minuuttia myöhemmin, eläimet nopeasti tapettiin katkaisemalla kaula. koko vatsa poistettiin huolellisesti jälkeen ligaatiolla cardia ja mahanportin, ja sitten vatsa oli auki ja sen sisältö kaadettiin koeputkeen ja pestiin 40 ml: lla tislattua vettä. Lopussa kokeen, NaOH-liuosta (20 ml, 1 M) lisättiin kuhunkin putkeen kehittää enimmäisintensiteetti väri. Absorbanssi näytteestä luetaan 560 nm: ssä spektrofotometrillä (HITACHI U-2900) oli vastaa summaa, fenolipunaista jäljellä mahassa. Määrä mahalaukun tyhjenemistä laskettiin seuraavan kaavan mukaisesti: Mahalaukun tyhjenemistä (%) = 100 x (1 - X /Y), X edustaa absorbanssi fenolipunaista kerättiin vatsan eläinten tapettiin 30 minuutin kuluttua testin aterian. Y absorbanssi fenolipunaliuosta toipunut vatsaan Verrokkieläimen lopetettava välittömästi antamisen jälkeen testin aterian.

Western-blottaus

Tuoreet näytteet mahalaukkua oli puristuksiin on Sylgard lautasen ja kunkin kerros irrotetaan varovasti terävien leikkely poistamisen jälkeen limakalvon. Avulla ohutkärkisellä pihdit ja mikrokirurgisesta sakset alla preparointimikroskooppia, kerrokset ICC-SM, ICC-IM ja ICC-MY saatiin. Kaikki käsittelyt tehtiin jäällä välttää proteiinin tappion. Ja sitten näytteitä ICC-SM, ICC-IM ja ICC-MY säilytettiin -80 ° C: ssa.

Pakastemarjat näytteet murskattiin solususpensiota ja homogenisoitiin RIPA Buffer (Upstate, Temecula, CA , USA) proteaasi-inhibiittori (Sigma Chemical Co., St Louis, MO, USA). Seosta sentrifugoitiin 12000 g: llä 10 minuutin ajan 4 ° C: ssa, ja supernatantit kerättiin proteiinin kokonaismäärästä. Proteiinipitoisuus määritettiin Bradfordin menetelmällä. Sen jälkeen, ekvivalenttia 50 mg uutettiin proteiinit vähitellen erotettiin 10% natriumdodekyylisulfaatti-polyakryyliamidigeelielektroforeesi (SDS-PAGE) ja siirrettiin PVDF-kalvolle (Millipore, Bedford, MA, USA). Seuraaja estää epäspesifinen sitoutuminen täplien 5% rasvatonta kuivamaitoa Tris-puskuroidussa suolaliuoksessa, joka sisälsi 0,1% Tween 20: tä (TBST), huoneenlämpötilassa 1 tunnin ajan, näitä membraaneja inkuboitiin primaarisen vasta-aineen ja anti-c-kit (1:200, Santa Cruz Biotechnology, Inc) yön yli 4 ° C: ssa yhdessä kanin anti-hiiri-Actin (1:400, Santa Cruz Biotechnology, Inc) toimi sisäisen valvonnan. Kolmen pesun jälkeen TBST: llä, kalvoja inkuboitiin HRP-kytketty sekundaarinen vasta-aine (HRP-kytketty kaniinin anti-vuohi ja HRP-kytketty vuohen anti-hiiri, 1:5000) 1 h huoneen lämpötilassa. Seurasi kolme pesua ja TBST, nauhojen visualisoitiin kemiallisen reaktion tehostettu kemiluminesenssi aineen (Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ), ja blotti altistettiin autoradiografialle. Densitometria analyysi suoritettiin Määrä Yksi ohjelmisto (Bio-Rad tekniseen palveluun, versio 4.6.2).

immunofluoresenssitutkimukset

Koko-kohteen värjäys valmisteet, vatsa avattiin ja huuhdeltiin useita kertaan PBS: llä. Mahalaukkua oli kiinnitetty joka Sylgard lautasen ja venytetään 150% alkuperäisestä koosta, ja sitten kiinnitettiin Zamboni fiksatiivi 24 tuntia huoneenlämmössä. Kiinteän kudokset pestiin PBS: llä ja sitten limakalvon poistettiin terävää dissektiota. ICC-SM paikantaminen on submukosaalisen pinnalla pyöreä lihaksen kerros, ICC-IM intermingling keskuudessa sileitä lihassoluja ja ICC-MY yhdessä myenteeri- hermo plexus huolellisesti valmisteltu käyttäen ohutkärkisellä pihdit ja mikrokirurgisesta sakset alla preparointimikroskooppia.

immuunivärjäystä menettelyt havaitsemiseksi ICC verkkojen ja leviämisen on kuvattu aiemmin [22]. Ki67, tumaproteiini ilmaistiin kaikkien vaikuttavien vaiheissa solun ja katosi lepää solussa, on sovellettu tunnistamaan proliferatiivinen ICC [23]. Kun oli pesty kuusi kertaa PBS: ssä 1 h, kudoksia inkuboitiin 5% tavallista naudan seerumilla PBS: ssä, joka sisälsi 0,3% Triton X-100 (PBST) 1 tunnin ajan huoneenlämpötilassa ja inkuboitiin sitten primaarisen vasta-aineen c-kit (1:100; Santa Cruz, CA, USA) ja Ki67 (1:100; Abcam, Cambridge, UK) yön yli 4 ° C: ssa. Huuhtelun jälkeen PBST: ssa 30 minuuttia, immunoreaktiivisuus havaittiin käyttäen Alexa Fluor 594-konjugoidulla sekundaarisella vasta-aineella (aasin anti-vuohi lgG: llä, 1:100) ja Alexa Fluor 488-konjugoidulla sekundaarisella vasta-aineella (aasin anti-rabit IgG, 1:100) 37 ° C: ssa 1 h, mitä seurasi huuhtelu PBS: ssä kolme kertaa 30 minuutin ajan, ja inkuboitiin DAPI (0,1 mg /ml; Sigma, St Louis, MO, USA) 30 minuutin ajan, kuten ydin- vasta tahra. Huuhdeltiin PBS kahdesti, kudokset olivat taittamatonta levyllä. Konfokaalisella laserskannaus mikroskoopilla (Nikon, Japani) käytettiin tutkimaan immunomerkatut kudoksiin. Jotta sisältävät kaikki tasot positiivisesti värjäytyneiden solujen ja prosessit, optimaalinen Z pinoaminen konfokaali kuvien asetettiin 5 pm välein.

apoptoosi ICC tunnistettiin TUNEL merkintöjä, apoptoosin havaitsemiseen Kit (Roche, Saksa). Koko-mount valmisteita inkuboitiin primaarisen vasta-aineen c-kit (1:100; Santa Cruz, CA, USA) yön yli 4 ° C: ssa ja sekundaarisen vasta-aineen (Alexa Fluor 594 aasin anti-vuohi lgG: llä, 1:100) 37 ° C: ssa 30 min. Kostutetussa ja tumma seikka, kudokset inkuboitiin TUNEL-reaktiopuskuria (merkinnät liuos: entsyymiliuosta = 9:01) 37 ° C: ssa 1 h. Kun pestään kolme kertaa 30 minuutin ajan poistamiseksi kytkemättä fluoreseiini-dUTP ja inkuboitiin DAPI Ydinvoimalaitoksen laskuri tahra, näytteet havaittiin alle konfokaali laserkeilauksen mikroskooppi.

elektronimikroskopialla

Kun limakalvon poistettu, näytteet antrum upotettiin fiksatiiviin liuokseen, jossa oli 2,5% glutaraldehydiä 4 ° C: ssa 2 tuntia. Sitten ne huuhdeltiin 0,1 M PBS: kahdesti 20 minuutin ajan, jälkifiksattiin 1% OsO _{4 (pH 7,4) 1 h, kuivattu asteittaisella alkoholi, selkeytettävä propyleenioksidin ja upotettiin Epon käyttäen tasainen muotteja. Ultrathin leikkeitä Saadaan ultramikrotomilla (Leica ULTRACUTU, Saksa), ja värjättiin lyijyn citrate 10 minuuttia ennen katselu transmissioelektronimikroskoopin (Tecnai G ^{212, FEI, Alankomaat).}}

Tilastollinen analyysi

Immunofluoresenssivärjäystä analyysiä, mahan antrum jokaisesta koe-eläimen otettiin näytteet samassa paikassa vatsaan. ICC tunnustettiin c-kit immunoreaktiivisuus ja läsnäolo runsas solun prosesseja. Lisääntyvät ja apoptoottista ICC tunnistettiin c-kit immunoreaktiivisuus ja Ki67 /TUNEL värjätään tuma liittäen c-kit positiivinen kalvo rakenteita. Kymmenen satunnainen kentät (× 200 suurennus, 0,2607 mm ^{2) kohti koko-mount valmiste otettiin valokuvia c-kit-positiivisiin soluihin, c-kit + /Ki67 + ja c-kit + /TUNEL + leimattuja soluja. Nämä valokuvat käytettiin myös arvioimaan kerrosten paksuuden kunkin pinon avulla DAPI merkitty ytimien markkerina ylä- ja alarajat kerrokset. Numerot c-kit-positiivisia soluja, c-kit /Ki67 ja c-kit /TUNEL kaksi kertaa leimattu solut laskettiin Image-ProPlus 5,0 (Media Cybernetics). Kaikki tiedot ilmaistiin keskiarvona ± SEM. Ainakin kymmenen näyt otettiin jokaisen eläimen. Varianssianalyysi (ANOVA) ja Studentin t-testiä käytettiin vertaamaan eroja eri ryhmiin. P-arvo alle 0,05 otettiin tilastollisesti merkitsevää eroa.}

Tulokset

Paino ja veren glukoosipitoisuus

8 viikon kuluttua, tapaturmainen kuolema tapahtui DM ryhmässä (kaksi rotat) ja SEA ryhmässä (yksi rotta). Rotat seulottiin samalla lähtötason painosta ryhmien kesken (taulukko 1). Lopussa 1, 4 ja 8 viikon kehon paino DM ryhmä pieneni merkitsevästi verrattuna kontrolliin ( P
= 0,009, 0,000 ja 0,000). Ei ollut merkittävää eroa SEA ja DM ryhmä ( P
> 0,05). Kuitenkin toisin kuin DM ryhmään, kehon paino oli koholla LEA ryhmässä 8 viikon kohdalla ( P
< 0,001) ja HEA ryhmä 4 ja 8 viikon ajan ( P
= 0,003, P
< 0,001 erikseen).

Kuten taulukosta 2, ei havaittu eroja vuonna perustason verensokerin ryhmien kesken. Diabeetikon mallit perustettiin menestyksekkäästi korkean verensokerin taso DM ryhmässä verrattuna kontrolliryhmään lopussa 1, 4 ja 8 viikon ajan (kaikki P
< 0,001). Samaan aikaan veren glukoosipitoisuutta SEA, LEA ja HEA ryhmät eivät muuttuneet merkittävästi verrattuna DM ryhmän (kaikki P
> 0,05).

Effects of EA mahalaukun tyhjenemistä

Kuva 1 osoitti vaikutuksia EA ST36 mahalaukun tyhjenemistä eri ryhmissä. Mahalaukun tyhjenemistä DM ryhmä hidasti dramaattisesti toisin kuin kontrolli ( P
= 0,012). Verrattuna DM ryhmä, SEA ei ollut merkittävää vaikutusta mahalaukun tyhjenemistä ( P
= 0,338), mutta LEA ja HEA merkittävästi nopeuttanut hidastunut mahalaukun tyhjeneminen alkaen 43.96 ± 5,02%: sta 69,72 ± 3,02% ja 59,06 ± 3,70% ( P
< 0,001 ja P
= 0,013, tässä järjestyksessä). Vertailu LEA ja HEA ryhmä, tilastollinen merkittävyys saavutettiin ( P
= 0,04), joka edustaa että vaikutus LEA ilmeisesti ylitti HEA.

Effects of EA ilmenemistä c -Kit

Vuodesta Kuvio 2: n ilmentyminen c-kit kunkin kerroksen mahalaukun seinämän arvioitiin. ICC-IM, c-kit DM ryhmässä oli ilmeisesti väheni kontrolliin verrattuna (0,47 ± 0,04 vs. 0,69 ± 0,05, P
= 0,001). Käänteisesti LEA ja HEA paranee dramaattisesti ilmentymistä c-kit verrattuna DM ryhmän (0,65 ± 0,04 vs. 0,47 ± 0,04, P
= 0,004; 0,66 ± 0,03 vs. 0,47 ± 0,04, P
= 0,002, vastaavasti). ICC-MY ilmaisu c-kit väheni merkittävästi DM ryhmän toisin kuin kontrolli (0,57 ± 0,04 vs. 0,83 ± 0,05, P
< 0,001). Mutta merkittävä ero sekä saavutettiin LEA ja HEA ryhmässä verrattuna DM ryhmän (0,78 ± 0,05 vs. 0,57 ± 0,04, P
= 0,002; 0,76 ± 0,04 & 0,57 ± 0,04, P
= 0,004, vastaavasti). ICC-SM, c-kit DM ryhmä ilmeisesti vähentynyt pohjalta normaalilla tasolla (0,56 ± 0,03 vs. 0,77 ± 0,04, P
= 0,001). Tasaisen, LEA ja HEA ilmeisesti lisännyt ilmentymistä c-kit verrattuna DM ryhmän ( P
= 0,003 ja P
= 0,007). Ei kuitenkaan havaittu merkittävää eroa välillä SEA ja DM ryhmä ICC-IM, ICC-MY ja ICC-SM ( P
= 0,597, P
= 0,853 ja P
= 0,172).

Effects of EA ICC verkoissa

museoksi ICC verkkojen erityisesti ICC morfologia ja tiheys olivat esillä kuvassa 3. Ei ollut mitään merkittävää eroa kerrosten paksuuden ryhmien kesken. Liittyy sileän lihaksen soluissa, c-kit immunoreaktiivisuus ICC-IM havaittiin lihaksen kerroksia, jotka osoittavat, että ICC-IM oli kaksi napa-prosessit muodostavat matkapuhelinverkon kontrolliryhmässä. Vuonna DM ryhmässä, pitkä prosessit ICC-IM heikensi ilmeisesti ja tiheys c-kit positiivinen solu aleni noin 50% normaalista kontrolli ( P
< 0,001). Verrattuna DM ryhmä, mitään merkittävää muutosta havaittiin SEA ryhmässä. Kuitenkin lähes ehjä matkapuhelinverkon havainnollistettiin LEA ja HEA ryhmän ja tiheys c-kit positiivisia ICC-IM lähes palautettu normaalitasolle (molemmat P
< 0,001, verrattuna DM ryhmä ).

ICC-MY lakkauttamista ympäri myenteeri- plexus olivat välissä pitkittäis- ja pyöreän sileän lihaksen kerroksia. Moninapainen ICC-MY lukuisia oksat muodostavat ehjän matkapuhelinverkon selvästi osoittivat kontrolliryhmässä. Vuonna DM ryhmä, c-kit + solut näyttivät hoikka solurungoissa ja murtunut prosesseja, ja tiheys ICC-MY ilmeisesti vähentynyt ( P
< 0,001). Vuonna SEA ryhmässä, tiheys ICC-MY eivät muuttuneet merkittävästi verrattuna DM ryhmän ( P
= 0,762). Kuitenkin lähes ehjä matkapuhelinverkon olemassa ympäri myenteeri- plexus ja ICC-MY tiheys kasvoi jonkin verran LEA ja HEA ryhmä (molemmat P
< 0,001, verrattuna DM ryhmä).

vaikutukset EA apoptoosin ICC

apoptoosi ICC havaittiin TUNEL merkintöjä onko apoptoosin oli mukana puute ICC diabeteksessa (kuva 4). Kokonaisista-mount valmisteita ohjaus, harvat ytimiä ICC värjättiin TUNEL menetelmällä lihaksen kerros, myenteeri- kerros ja submukoosassa kerros. Runsaasti c-kit + /TUNEL + ICC-IM, ICC-MY ja ICC-SM havaittiin DM ryhmässä (18,48 ± 1,88 mm ^{-2, 26.51 ± 1,87 mm -2 ja 12,03 ± 1,27 mm -2, vastaavasti). C-kit + matkapuhelinverkoissa olivat puutteellisia ja apoptoottisten ICC esitetään lyhennetty prosesseja vähemmän oksat. Suuri määrä c-kit + /TUNEL + solut myös tulva kaikissa kerrokseen SEA ryhmään. Alle täytäntöönpanoa LEA ja HEA, apoptoottiset kit + soluja tuskin löytyy ICC-IM (1,79 ± 0,33 mm -2 ja 2,05 ± 0,30 mm -2), ICC-MY (2,24 ± 0,40 mm -2 ja 2,48 ± 0,40 mm -2) ja ICC-SM (1,09 ± 0,25 mm -2 ja 1,39 ± 0,20 mm -2). Matkapuhelinverkot paljasti c-kit immunovärjäys osoitti suuren tiheyden ja paksuuden soluprosesseja LEA ja HEA ryhmä.}

Effects of EA leviämisen ICC

Kun otetaan huomioon lisääntynyt määrä ICC vuonna LEA ja HEA ryhmä, Ki67-positiivisia ICC havaittiin paljastaa leviämisen ICC on kolme kerrosta (kuvio 5). Kontrolliryhmässä, useita c-kit /Ki67 kaksinkertainen leimattuja soluja havaittiin ICC-IM (8,82 ± 1,02 mm ^{-2), ICC-MY (10,64 ± 0,92 mm -2) ja ICC a-SM (4,67 ± 0,96 mm -2). Määrä ICC kanssa murtuneiden oksat oli huomattavan alentunut ja verkot olivat hyvin harvassa muutamia lisääntyvät solut sekä DM ja SEA ryhmä. Kuitenkin LEA ja HEA ryhmä, c-kit /Ki67 kaksoismerkattua solujen ICC-IM leimasi läheisyydessä solurungoissa ja suhteellisen kaksisuuntainen prosesseja ja keskimääräinen tiheys saavutettu 18,37 ± 1,60 mm -2 ja 15,27 ± 1,81 mm -2 (molemmat P
< 0,001). Samoin runsas c-kit + /Ki67 + ICC-MY in LEA ja HEA ryhmä (molemmat P
< 0,001), joka muodostaa ehjä verkkoja c-kit + solujen suoritetaan pyöreä solun elin ja pitkä hoikka prosesseja. ICC-SM, mukana ehjä verkko ICC tiheys jakautuviin soluihin LEA ja HEA ryhmä oli suhteellisesti korkeampi verrattuna DM ryhmään ( P
= 0,016 ja P
= 0,003).}

Effects of EA Mikroskooppitutkimus korjauksilla ICC

tyypillisiä Mikroskooppitutkimus ominaisuudet ICC paljastuivat trans- (Kuva6). Kontrolliryhmässä, ICC-IM ja ICC-MY rikas hyvin kehittynyt soluorganellien pidentää pitkiä prosesseja sisältäviä mitokondrioita, ja karkea ja sileä endoplasmakalvoston. Polymorfiset ICC-SM sijaitsee submukosaalisen pinnalla pyöreä lihaksen kerroksen osoitti korkeamman elektronitiheisiin solulimassa, lukuisia mitokondrioita ja Endoplasmakalvosto. Vuonna DM ryhmä, dramaattista väheneminen ICC on vaurioitunut Mikroskooppitutkimus ominaisuuksia tutkittiin elektronimikroskoopilla. Nämä solut turvonneet mitokondrioita, häiritsi cristaed ja tiivistetyn chromatin osoitti epätäydellistä kalvo ja lyhentää prosesseja. Näitä muutoksia havaittiin SEA ryhmässä. Vuonna LEA ja HEA ryhmä, määrä ICC oli merkittävästi lisätä ja ne liitetään tiiviisti hermosyiden ja sileät lihassolut muodostavat synaptic rakenne ja aukkoliitokset. Kirkas mitokondriot harja, hallittu jaetaan karkea Endoplasmakalvosto ja ribosomaalisen partikkelit pidettiin klassisen ominaisuuksia ICC-IM, IM-MY ja ICC-SM.

Keskustelu

Tässä tutkimuksessa olemme todettiin, että sekä matalan ja korkean taajuuden EA ST36 tukahdutti apoptoosin ICC ja aktivoitu leviämisen ICC vatsaan STZ-indusoidun diabeettisten rottien. Tämän seurauksena pelastus ICC verkkojen liittyi estää vaikutus mahalaukun viivästynyttä tyhjentymistä.

Koska tehokas menettely joilla on vähemmän sivuvaikutuksia, EA yhdistettynä akupunktio ja sähkövirta stimulaation sijaan manuaalista manipulointi on vähitellen hyväksynyt Läntiset maat. ST36 on yksi useimmin käytetty pisteitä ruoansulatuskanavan häiriöiden hoitoon, joissa merkinnät, mukaan lukien: vatsakipu, pahoinvointi, oksentelu, ruokahaluttomuus ja vatsan turvotus. Samanaikaisesti edellisessä tutkimuksessa on osoitettu EA ST36 voisi lisätä paksusuolen propulsiohyötysuhteen liikettä, mutta ei havaittu ryhmässä EA ei-acupoints. Viivästynyt mahalaukun tyhjenemistä on yleinen luonne diabetespotilaat gastropareesi ja myös yksi tärkeimmistä syistä oireita gastroparesis. Viime vuosikymmenten aikana, kokeiluja tajuissaan rotilla osoittivat, että matalataajuista EA (10 Hz) merkittävästi kiihtynyt mahalaukun tyhjenemistä [3], [24], [25]. Lisäksi, 100 Hz EA oli tehokas aiheuttamaan vapautumista dinorphin ja serotoniinin indusoimaan analgesian [26]. Vaikka korkean taajuuden EA (100 Hz) raportoitiin myös edistämään ruokatorven ja distaalisen paksusuolen motiliteetin eläimillä [7], [8], vaikutukset 100 Hz: EA mahan ole juurikaan tutkittu. Niinpä parametrit (10 ja 100 Hz) EA valittiin mukaan alustavat kokeet ilmoitettua stimuloiva vaikutus suoliston toimintaa. Tuloksemme osoittivat, että molemmat matalataajuista EA (10 Hz) ja korkea taajuus EA (100 Hz), ST36 paransi viivästynyt mahalaukun tyhjenemistä diabeettisissa rotissa, ja tulos paljasti myös, että vaikutus matalataajuista EA oli voimakkaampaa kuin korkea taajuus EA.

Useat tutkimukset ovat osoittaneet, että ICC on tärkeä rooli sääntelyn mahalaukun peristaltiikan, määräävä tekijä mahalaukun tyhjenemistä [27], [28]. Kuten ICC olemassa eri kerroksissa mahan antrum muodossa verkkojen in vivo
, korjauksilla ICC verkkojen arvokkaalla pidetään. Määrän väheneminen ja morfologiset muutokset ICC-MY ja ICC-IM vatsassa diabeettisen hiirten osoitettiin aikaisemmassa tutkimuksessa [14]. Samoin merkittävä menetys ICC-IM ja ICC-SM in antrum STZ-indusoidun diabeettisten rottien havaittiin, mutta ICC-MY ei vaikuttanut merkittävästi paitsi menetys yhteyksiä hermo rakenteita [15]. Nämä erot havaintojen näissä kahdessa tutkimuksessa oli luultavasti liittyy eläinlajeja. Vuodesta tutkimuksen 28 potilasta gastroparesis, pienempi määrä ICC havaittiin myenteeri- plexus by täyspaksu antral koepaloja [29]. Tuloksemme osoittivat, että ICC-IM, ICC-MY ja ICC-SM Antrumin STZ-indusoidun diabeettisen rotat vähentynyt voimakkaasti perustuu tekniikkaan Western blotting ja Immunofluoresenssivärjäystä ja edelleen vaurioitunut rakenne ICC oli osoitti transmissioelektronimikroskopialla . Onneksi on raportoitu, että matalan taajuuden EA parantaa ilmentymistä ICC paksusuolen hitaan läpikulun ummetusta rotilla [17]. Lisäksi meidän edellinen tutkimus on ehdottanut, että sekä matalan ja korkean taajuuden EA palauttaa ilmaus ICC paksusuolen diabeettisten rottien [18]. Kuitenkin näissä tutkimuksissa, he tutkia muuttaminen ICC kokonaisuutena ja vaikutuksia eri taajuudella EA ICC mahassa ei ole selvitetty. Siten vaikutukset eri taajuudella EA kolmeen alatyyppejä ICC mahassa myös ICC-IM, ICC-MY ja ICC-SM olivat painopiste tässä tutkimuksessa. Tuloksemme osoittivat, että ilmentyminen ICC kolmessa kerrokset näkyvästi pelastivat matalan ja korkean taajuuden EA, mikä viittaa siihen, että matalan ja korkean taajuuden EA kunnostettu verkostojen ICC-IM, ICC-MY ja ICC-SM ja edelleen saattaa osaltaan talteen mahalaukun tyhjenemistä.

on huomionarvoista, että tasapaino ICC verkkojen määräytyy pääasiassa apoptoosin ja leviämisen ICC [11], [12]. Siksi mahdollinen mekanismi mahan ja vaikutukset ICC verkostojen EA ST36 kartoitettiin läpi havaitsemaan muutokset leviämisen ja apoptoosin ICC. Äskettäin apoptoottista solukuolemaa on raportoitu olevan jatkuva prosessi, ICC verkkojen ja taso apoptoosin terveen paksusuolen osoittaa, että nämä solut on jatkuvasti regeneroida säilyttämistä kokonaisuudessaan verkkoihin [12]. Lisäksi tulokset aikuisen marsut osoitti, että suoliston iskemia ja reperfuusiovaurio johti määrän väheneminen ICC apoptoosin kautta, jotka voivat edistää suoliston toimintaa häiriöt [30]. Lisäksi viimeaikainen raportti osoitti, että EA hoito vähensi apoptoottisten prosenttiosuus mustatumake solujen Parkinson rotilla [31]. Tämä tutkimus on selkeästi ilmaistu, että apoptoottinen ICC havaita TUNEL menetelmät olivat tulvan ICC verkoissa diabeettisen rotan mahan ja arveltu, että ehtyminen ICC verkot voivat myös aiheuttaa mahan sairaudet. Mutta kautta väliintulon matalan ja korkean taajuuden EA stimulaatio, TUNEL + tuma oli tuskin löytää, mikä viittaa apoptoosin ICC alennettiin alhaiselle tasolle kuin normaali.

leviämisen myös toinen pääsäätimeen ylläpitää verkostoja ICC. Edelliset tulokset ovat osoittaneet, että nopea lisääntyminen oli mukana elpyminen ICC kun se hävisi aikuisilla eläimillä [32], [33].

• PLoS ONE: Self-Raportoitu vatsavaivoja vuonna matkustavilla Cruise-pohjainen ja maalta Package Holidays
• PLoS ONE: Nikotiini Vaimentaa aktivointi Tissue Resident makrofagien Hiiri Vatsa kautta β2 asetyylikoliinin nikotiinireseptorin