PLoS ONE: elektroakupunktury ne ST36 Pagerina skrandžio ištuštinimą ir gelbsti tinklai intersticinės ląstelės Cajal diabetinės Rats

Anotacija

išeikvojimas Tarpusienio ląstelių Cajal (TBT) yra sertifikuoti cukriniu diabetu sergantiems pacientams skrandį , Nors elektroakupunktury (AE) ne ST36 yra veiksminga terapija reguliuoti skrandžio motoriką, EA mechanizmai ST36 skrandžio išsituštinimą ir tinklų TBT dar reikia išsiaiškinti. Šio tyrimo tikslas buvo ištirti EA poveikį skrandžio ištuštinimo ir remiantis ICC tinklų pakeitimai. Žiurkės buvo randomizuoti į kontrolės, cukriniu diabetu žiurkės (DM), cukriniu diabetu žiurkės su nevykusios EA (DM + jūroje), cukriniu diabetu su žiurkėmis žemo dažnio EA (DM + LEA), ir diabetinė žiurkių su aukšto dažnio EA grupių (DM + HEA). C-rinkinio kiekvieno skrandžio sienelės sluoksnio išraiška buvo įvertintas Imunoblotingo. Iš TBT proliferacija identifikuojama immunolabeling c-rinkinys ir KI67 kaip TBT apoptozė išnagrinėjo TUNEL dažymo. Rezultatai buvo taip: (1) skrandžio ištuštinimo buvo labai uždelsta DM grupės, bet sparčiau LEA ir HEA grupės, ypač LEA grupės. (2) c-KIT kiekvieno sluoksnio išraiška buvo sumažintas matyt DM grupės, bet ir iki-reguliuojami Lea HEA grupei. (3) gausiai padaugėjo TBT (c-KIT + /KI67 +), formavimo krzaczkowatą tinklus su c-KIT + ląstelių buvo pastebėtas Lea HEA grupės, o apoptozės ląstelių (c-KIT + /TUNEL +) buvo sunkiai fiksuojami Lea HEA grupės , Apibendrinant, žemo ir aukšto dažnio AE ne ST36 gelbėti sugadintas tinklus TBT slopina apoptozę ir didinti platinimu į diabetu žiurkių skrandžio, todėl pagerėjo skrandžio ištuštinimo

nurodomoji dalis:. Chen Y Xu JJ Liu S Hou XH (2013) elektroakupunktury ne ST36 Pagerina skrandžio ištuštinimą ir gelbsti tinklai intersticinės ląstelės Cajal diabetinės Rats skrandį. PLoS ONE 8 (12): e83904. Doi: 10,1371 /journal.pone.0083904

redaktorius: Yvette Tache, Kalifornijos universitetas, Los Andželas, Jungtinės Amerikos Valstijos

Įstojo: rugpjūčio 9, 2013; Priėmė: Lapkričio 8, 2013 m Paskelbta: Lapkritis 31, 2013

Visos teisės saugomos: © 2013 Chen et al., Tai atviros prieigos straipsnis platinama pagal Creative Commons Attribution licencija, kuri leidžia nevaržomai naudotis, paskirstymo ir dauginimąsi bet kokioje laikmenoje sąlygomis, su sąlyga, kad pirmasis autorius ir šaltinis įskaitomos

Finansavimas:. Darbas buvo iš dalies remiama dotacijas iš nacionalinio Gamtos mokslo fondo Kinijos (Nr 30670775, Nr 81.270.458). gauta jokios papildomos išorinės finansavimas šiame tyrime. Į finansuotojai neturėjo vaidmenį studijų dizainas, duomenų rinkimo ir analizės, sprendimų skelbti, ar ruošiant rankraštį

konkuruojančių interesų.. Autoriai pareiškė, kad nėra konkuruojantys interesai egzistuoja

Įvadas

rūšys virškinamojo trakto motoriką sutrikimų nuo funkcinės dispepsijos į gastroparezę smarkiai paveikti pacientų gyvenimo kokybę dešimtmečius cukrinio diabeto [1]. Gastroparezės, pasižymi uždelstu skrandžio ištuštinimo, įvyksta iki 30% asmenų, sergančių 1 tipo diabetas [2]. Nors įvairūs gydymo priemones, įskaitant farmacijos gydymo ir kai ne vaistams buvo išbandyta, Gydomosios efektai gastroparezę lieka nepatenkinama.

Akupunktūra buvo empiriškai gydyti virškinimo sistemos sutrikimai rytietiškų šalių tūkstančius metų. Elektroakupunktury (AE), kuri yra tradicinės akupunktūros modifikacija, labiau tinka klinikinių ir pagrindinių mokslinių tyrimų parametrus savo pasikartojimu. Zusanli
(ST36) yra dažna acupoint dažnai naudojamas gydyti virškinimo trakto ligomis. Pastaraisiais metais, EA reiškiniai ST36 skrandžio motorikos buvo įvertintas daugelyje tyrimų. Gyvūnams AE ne ST36 gerokai padidėjo skrandžio motoriką sąmonę žiurkėmis ir geresne atidėtas skrandžio ištuštinimą į STZ-sukeltas diabetu žiurkių [3], [4]. Be to, žmonėms, AE ne ST36 paspartino skrandžio ištuštinimą ir atleidžiamas dispepsiniai simptomus funkcinės dispepsijos pacientų ir cukriniu diabetu asmenų su gastroparezę [5], [6]. Nors šių tyrimų buvo priimtas tik žemo dažnio AE, aukšto dažnio AE taip pat buvo pranešta, skatinti stemplės ir distalinio storosios žarnos peristaltiką gyvūnais [7], [8]. Taigi, skirtingų dažnių EA skrandžio motorikos poveikis ir pagrindiniai mechanizmai atkreipti žmonių dėmesį.

Tarpinio ląstelės Cajal (TBT), gerai įsteigti kaip stimuliatorių generavimo bei dauginamosios lėtai bangų, įgijo reikšmę reguliuojant virškinimo trakto judrumas per keletą dešimtmečių [9]. Trys potipiai TBT, įskaitant raumenis ICC (TBT-MP), myenteric ICC (TBT-MY) ir pogleivio TBT (TBT-SM) forma nepažeistos tinklus skrandžio sienos [10]. Tinklai TBT nėra statiški net fiziologinių sąlygų; apoptozė ir transdifferentiation švino ICC praradimo, o TBT taip pat gali būti atkurta platinimu, papildymo iš kamieninių ląstelių ir padidinti išgyvenimo [11], [12]. Platus tyrimai dokumentais, kad nuostoliai ir žala TBT sukėlė netvarkingai virškinamojo trakto motoriką gyvūnų modeliais ir cukriniu diabetu sergantiems pacientams [13] - [15]. Neseniai tolesni tyrimai pranešė, kad AE palengvino storosios žarnos TBT lėtai tranzito užkietėjimas žiurkėmis ir žiurkėmis padidėjimą po enteroenterostomy [16], [17]. Mūsų Neseniai atliktas tyrimas taip pat parodė, kad AE ne ST36 gali atkurti sutrikimas TBT diabetinės žiurkių [18] dvitaškis. Tuo tarpu, ji yra susirūpinęs, kad AE skatinamas proliferaciją ir slopina apoptozę smegenų ląstelės hipokampo [19], [20]. Tačiau yra tuščias apie EA poveikis tuo ST36 apie TBT diabeto gastroparezę ir mechanizmą ar platinimu ir apoptozę TBT dalyvauja

Todėl šio tyrimo tikslai buvo šie: 1). Įvertins skirtingų dažnių EA skrandžio išsituštinimą poveikis; 2) ištirti EA poveikį ne ST36 apie TBT tinklų diabetu žiurkių; 3) patvirtinti, ar apoptozė ir platinimo TBT dalyvavo.

Medžiagos ir metodai

Etika pareiškimas

žiurkės gavo žmogaus priežiūrą ir šis tyrimas buvo atliktas griežtai laikantis su vadove dėl priežiūros ir naudojimo laboratorinių gyvūnų iš nacionalinių sveikatos institutų rekomendacijos, su visomis etikos gairėmis Huazhong universiteto mokslo ir technologijų gyvūnų priežiūros ir naudojimo komiteto Tongji medicinos kolegijoje, patvirtintų operacijų.

Gyvūnai

Sprague-Dawley žiurkės svėrė 250-300 g buvo atrinkti šios studijos. Žiurkės buvo gauti iš eksperimento Gyvūnų centras Tongji medicinos koledžo (Huazhong universiteto mokslo ir technologijų, Uhanas, Kinija) ir saugomi normaliomis laboratorinėmis sąlygomis (22 ° C, 12/12 h šviesos ir tamsos ciklo) su laisvos prieigos prie maisto ir sterilus vanduo. Po vienos savaitės prisitaikanti pašarams, gyvūnai buvo oficialiai priimtas į mūsų eksperimentams.

Diabetinė modelis

Po nakties nevalgius, tačiau nemokama prieiga prie vandens, modeliai buvo įsteigta vienu injekciją į pilvą iš streptozotocin į žiurkės (STZ, 60 mg /kg, ty 1 ml /100 g kūno masės; Alexis Biochemicals, San Diego, CA, JAV) šviežiai ištirpinti 20 mm citrato buferio tirpalo (pH = 4,5; Sigma, St Louis, MO, JAV) , Kontrolinė grupė buvo suleista su tokio paties tūrio citrato buferio. Visi žiurkės buvo laikomi tokios pat būklės, su vandens nepritekliaus 4 val, bet iki soties pervežimas maitinti. Vieną savaitę po injekcijos, diabetas buvo patvirtinta skirtingu laiku matuojant gliukozės tam tikrą skaičių visų lašus kraujo, gauto pradurtas, kad liekamąsias laivo galo. Gliukozės kiekis kraujyje ≥16.7 mmol /L buvo priimtas kaip sėkmingo modelio standartus. Kraujo gliukozės buvo tikrinami punktualiai prieš injekciją ir 1, 4 ir 8 savaitę po injekcijos. Be to, svorio netekimas, polidipsija, poliurija ir buvo toliau rodiklius įrodymus sėkmingą paskatų diabetinės žiurkės.

Eksperimentiniai protokolai

Žiurkės buvo randomizuoti į penkias grupes (10 žiurkių kiekviena grupė), įskaitant kontrolės , diabetinė grupė (DM), cukriniu diabetu žiurkės su nevykusios EA grupės (jūrų, tik akupunktūra be elektros srovės, 30 min /d), cukriniu diabetu su žiurkėmis žemo dažnio EA grupėje (LEA, 10 Hz, 1-3 mA, 30 min /d ) ir cukriniu diabetu žiurkės su aukšto dažnio EA grupėje (HEA, 100 Hz, 1-3 mA, 30 minutės /d). AE buvo įgyvendinta acupoint ST36 su elektros stimuliatoriumi (G6805-2A; Šanchajus Huayi Medical Instrument Factory, Šanchajus, Kinija) kasdien nuo 8 savaičių. Elektros srovė buvo įkurta pagal šiek tiek drebėdamas iš apatinių galūnių. Norėdami pasiekti panaikinti streso įtaką paskirtį, gyvūnai buvo leista laisvai judėti savo korpuso metu EA tvarka.

Po eilės intervencijos 8 savaites, kiekvienos grupės žiurkės buvo išbandytas skrandžio išsituštinimą. Tada jie buvo aukojami ir pavyzdžiai antralinėje dalyje buvo atidžiai gauti. Kiekvieną bandinį buvo padalintas į keletą dalių, palyginti nedidelė vienas prie -80 ° C temperatūroje Imunoblotingo analizės po to, kai sluoksniai šviežiai individualus ir gabalas buvo dedamas į 2,5% glutaraldehido už elektroniniu mikroskopu, o likusi dalis buvo fiksuoti ZAMBONI fiksatoriumi (2 % paraformaldehidas ir 1,5% sočiųjų picric rūgšties tirpalas 0,1 M fosfatinio buferinio tirpalo (PBS, pH 7,4) už imunofluorescenciniam.

matavimas skrandžio ištuštinimą

skrandžio ištuštinimą atliko pakeitimo, kaip nurodyta anksčiau [21]. bandymas miltai, kurių sudėtyje yra fenolio raudonasis (0,5 mg /ml), kaip indikatoriaus ir karboksimetilceliuliozės (15 mg /ml) buvo nuolat maišomas ir po to paliekamas 37 ° C temperatūroje. Po to, kai maisto-netenka per naktį, buvo gauti žiurkės 2 ml fenolio raudona miltai skiriamas per įvedant pro skrandžio zondą adata. Trisdešimt minučių vėliau, gyvūnai buvo greitai numarinamos gimdos kaklelio sutrikdymo. visa skrandžio buvo pašalintas atidžiai po ligavimo tuo Cardia ir prievarčio, ​​ir tada skrandžio buvo atvira ir jos turinys buvo pilamas į mėgintuvėlį ir plaunamas 40 ml distiliuoto vandens. Tuo eksperimento pabaigoje, NaOH tirpalo (20 ml, 1 M) buvo įtraukta į kiekvieną mėgintuvėlį sukurti didžiausią spalvos intensyvumas. Bandinio absorbcija skaityti 560 nm su spektrofotometru (HITACHI U-2900) buvo atspindėti fenolio raudonojo likutį į skrandį. Skrandžio išsituštinimo norma buvo apskaičiuojamas pagal šią formulę: skrandžio ištuštinimo (%) = 100 × (1 - X /Y), X reiškia absorbcija fenolio raudonojo surinkta iš gyvūnų, skrandžio paaukotos 30 min po bandymo valgio. Y žymi sugeriamumas Fenolio raudonasis atsigavo nuo kontrolinio gyvūno skrandžio žuvo iš karto po bandymo valgio administracija.

Imunoblotingo

Švieži pavyzdžiai skrandžio antralinėje dalyje buvo prikabintos prie Sylgard patiekalas ir kiekvienas sluoksnis buvo kruopščiai atskirtas aštriu skrodimo pašalinus gleivinę. Su smulkiais smailus žnyplės ir mikrochirurgijos žirklės pagalba pagal tam Sekcijiniai mikroskopu, buvo gauti sluoksniai ICC-SM, ICC-IM ir TBT-my. Visi manipuliacijos buvo padaryta ant ledo, kad būtų išvengta baltymų praradimą. Ir tada mėginiai ICC-SM, ICC-IM ir ICC-MY buvo laikomi -80 ° C temperatūroje.

šaldytos mėginiai buvo sutraiškytas į ląstelių suspensijos ir homogenizuoti Ripa buferis (Upstate, Temecula, CA , JAV) su proteazės inhibitorių ( "Sigma Chemical Co, St Louis, Misūrio valstija, JAV). Mišinys centrifuguojamas 12000 g 10 min, esant 4 ° C, ir supernatantų, buvo surinkti kaip bendras baltymų. Baltymų koncentracija buvo nustatomas pagal Bradfordo metodu. Vėliau, ekvivalentai 50 mg, išgautų baltymų buvo palaipsniui atskirti 10% natrio dodecilsulfatas poliakrilamido gelio elektroforezės (SDS-PAGE) ir perkelti į PVDF membrana (Millipore, Bedford, MA, JAV). Po blokavimo nespecifinių privalomus dėmės su 5% Nonfat sauso pieno Tris-buferio druskų tirpalu, kurių sudėtyje yra 0,1% Tween 20 (TBST) kambario temperatūroje 1 h, šie Membranos buvo inkubuojami su pirminiais antikūnais, kad anti-c-Kit (1:200, Santa cruz biotechnologijos, Inc ") naktį 4 ° C, kartu su triušio prieš jūros pelės aktino (1:400, Santa Cruz Biotechnology, Inc) tarnavo kaip vidaus kontrolė. Po trijų plovimų su TBST, Membranos inkubuojami su HRP susijusi antrinė antikūnų (HRP susijęs triušių anti-ožkų ir HRP susijęs ožkos anti-pelės, 1:5000) 1 val kambario temperatūroje. Po trijų plovimų iš TBST, juostos buvo ryškinamos cheminės reakcijos su padidintu cheminės liuminescencijos agentu (Amersham Pharmacia Biotech, Piskatavėjus NJ) ir dėmė buvo atliktas autoradiografiją. Densitometry analizė buvo atlikta pagal kiekį One "programinė įranga (Bio-Rad technikos tarnybos departamentas, versija 4.6.2).

IMUNOFLUORESCENCIJOS tyrimai

Nenugriebto mount dažymo preparatų, skrandžio buvo atidarytas ir išskalautos keletas kartus su PBS. Skrandžio Ertmė buvo prikabintos prie Sylgard indą ir ištemptas iki 150% savo pradinio dydžio, ir tada tvirtinama su ZAMBONI fiksatoriumi 24 h kambario temperatūroje. Fiksuotos audiniai plaunami PBS ir tada gleivinė buvo pašalintas aštriu išpjaustymu. TBT-SM nukreipiantys po gleivine paviršiaus sukamaisiais raumenų sluoksnis, TBT-MP susimaišymas tarp lygiųjų raumenų ląstelių ir TBT-MY kartu su myenteric nervų rezginio buvo kruopščiai parengta naudojant bauda smailių žnyplės ir mikrochirurgijos žirklės pagal Sekcijiniai mikroskopu.

imunodažymu procedūros aptikti ICC tinklus ir platinimu buvo aprašyta anksčiau [22]. KI67, branduolinis baltymų išreiškė metu visų aktyvių etapų ląstelių ir dingo ramybės ląstelių, buvo taikomas aptikti dauginimosi TBT [23]. Po plovimo šešis kartus su PBS 1 h, audiniai buvo inkubuojamos su 5% normalaus galvijų serumo PBS, kurio sudėtyje yra 0,3% Triton X-100 (PBST) 1 val kambario temperatūroje, ir inkubuojami su pirminiais antikūnais c-Kit (1:100; Santa Krusas, Kalifornija, JAV) ir KI67 (1:100; Abcam, Kembridžas, Jungtinė Karalystė) per naktį 4 ° C temperatūroje. Po perskalaujamos PBST 30 min, The reaktyvumas buvo aptiktas naudojant Alexa Fluor 594 konjuguoto vidurinį antikūnas (asilas kovos su ožkos IgG, 1:100) ir Alexa Fluor 488 konjuguoto antriniais antikūnais (asilas kovos su RABIT IgG, 1:100) 37 ° C temperatūroje 1 valandą, o, po to perskalaujamos PBS tris kartus po 30 min, ir inkubuojami su DAPI (0,1 mg /ml, kuri Sigma, St Louis, MO, JAV) 30 min, kaip branduolinės atsakomają dėmių. Perskalauti PBS du kartus, audiniai buvo prasidėjusios ant skaidrės. Confocal lazerinis skenavimas mikroskopas ( "Nikon", Japonija) buvo naudojamas išnagrinėti immunolabeled audinius. Siekiant įtraukti visus teigiamai tamsintas ląstelių ir procesų lygius, optimalus Z klojimo confocal vaizdų buvo nustatytas 5 mkm intervalais.

Apoptozę TBT buvo aptikta tunelis ženklinimu, apoptozė aptikimo Kit (Roche, Vokietija). Sveikos-mount preparatai buvo inkubuojami su pirminiais antikūnais c-KIT (1:100; Santa Krusas, Kalifornija, JAV), per naktį 4 ° C ir antrinio antikūno (Alexa Fluor 594 asilas kovos su ožkos IgG, 1:100) 37 ° C temperatūroje 30 min. Pagal temperatūroje drėgnoje ir tamsiai aplinkybė, audiniai buvo inkubuojamos su TUNEL reakcijos buferinio tirpalo (ženklinimo tirpalas: fermentų tirpalas = 9:1) 37 ° C temperatūroje 1 val. Po triskart plaunami 30 min pašalinti nesusijusį fluoresceino-dUTP ir inkubuojami su DAPI kaip branduolinės kovos dėmių, egzemplioriai buvo pastebėtas po confocal skenavimo lazeriu mikroskopu.

elektronų mikroskopija

Po gleivinė pašalintas, kurių pavyzdžiai antralinėje dalyje buvo panardintas į fiksuojantį tirpalą 2,5% glutaraldehido, esant 4 ° C temperatūroje 2 val. Tada jie buvo skalaujami 0,1 M PBS du kartus 20 min, po nustatoma 1% Oso _{4 (pH 7,4) 1 h, dehidratuoti su rūšiuojami alkoholio, paaiškinti propileno oksido ir įdėta į EPON naudojant fiksuotus pelėsis. Plono skyriai buvo gauti su ultramicrotome ( "Leica ULTRACUTU, Vokietija), ir tamsintas su švino citrato 10 min iki peržiūrai su perdavimo elektronų mikroskopu (Tecnai G ^{212, FEI, Nyderlandai).}}

Statistinė analizė

imunofluorescenciniam analizės, skrandžio Ertmė iš kiekvienos eksperimentinių gyvūnų buvo imami mėginiai, toje pačioje vietoje, skrandžio. TBT buvo pripažintas c-KIT reaktyvumas ir gausiai korinio procesų buvimą. Plinta ir aprotoninis TBT buvo identifikuoti pagal c-KIT reaktyvumas ir KI67 /TUNEL tamsintas branduolio gaubiančio su c-KIT teigiamas membraninių struktūrų. Dešimt atsitiktinių laukų (× 200 priartinimas, 0,2607 mm ^{2) už visa-mount rengimą buvo imtasi nuotraukomis C-KIT teigiamų ląstelių, c-KIT + /KI67 + ir C-krepšys + /Tünel + paženklinti ląsteles. Šie nuotraukos taip pat dirbo įvertinti sluoksnių storis kiekvieno aukšto su DAPI žymėtųjų branduolių pagalba kaip viršutinių ir apatinių ribų sluoksnių žymeklį. C-KIT teigiamų ląstelių skaičius, c-KIT /KI67 c-Kit /Tünel dvigubai paženklinti ląstelės buvo skaičiuojamas vaizdo ProPlus 5,0 (Media Kibernetika). Visi duomenys buvo pateikti kaip vidurkis ± SEM. Bent dešimt vizijos buvo imtasi kiekvieno gyvūno. Iš dispersijos (ANOVA) ir Stjudento t-testas analizė buvo naudojama palyginti tarp skirtingų grupių skirtumus. P-vertė mažesnė nei 0,05 buvo laikomas statistiškai reikšmingą skirtumą.}

Rezultatai

Kūno svoris ir kraujo gliukozės lygis

Po 8 savaičių, mirties dėl nelaimingo atsitikimo įvyko DM grupės (du žiurkėms) ir jūroje grupės (viena žiurkė). Žiurkėms buvo tikrinami dėl tos pačios pradinio kūno svorio tarp grupių (1 lentelė). Pasibaigus 1, 4 ir 8 savaitės pabaigoje, buvo gerokai sumažėjo, palyginti su kontrolės įstaiga svoris DM grupė ( P
= 0,009, 0,000 ir 0,000). Nebuvo jokio reikšmingo skirtumo tarp jūros ir DM grupės ( P
> 0,05). Tačiau, priešingai nei DM grupės, kūno svoris buvo padidėjusi LEA grupės 8 savaičių ( P
< 0,001) ir HEA grupė yra 4 ir 8 savaičių ( P
= 0,003 p
. < 0,001 atskirai)

Kaip parodyta 2 lentelėje, jokių skirtumų buvo pažymėta pradinis kraujo gliukozės lygį tarp grupių. Cukriniu diabetu sergantys modeliai buvo sėkmingai užmegzti su aukšto kraujo gliukozės lygio DM grupėje, palyginti su tuo 1, 4 ir 8 savaičių kontrolės (visi P pervežimas < 0,001). Tuo tarpu, gliukozės kiekis kraujyje jūroje, Lea HEA grupės buvo iš esmės nepasikeitė, palyginti su DM grupės (visi P
> 0,05).

Poveikis EA skrandžio išsituštinimą

1 pav parodė EA poveikį ne ST36 skrandžio išsituštinimą skirtingose ​​grupėse. Skrandžio ištuštinti DM grupės buvo smarkiai vėluoja priešingai kontrolės ( P
= 0,012). Palyginti su DM grupės SAV neturėjo reikšmingos įtakos skrandžio išsituštinimą ( P
= 0,338), tačiau Lea HEA ženkliai paspartino uždelsto skrandžio ištuštinimo nuo 43.96 ± 5.02% iki 69.72 ± 3.02% ir 59.06 ± 3.70% ( P
< 0,001 ir P
= 0,013, atitinkamai). Palyginimas tarp Lea HEA grupės, statistinis reikšmingumas buvo pasiektas ( P
= 0,04), ty, kad LEA poveikis akivaizdžiai viršijo HEA.

Poveikis EA dėl C išraiškos -kit

iš 2 pav, buvo įvertintas c-KIT išraiška kiekvienoje skrandžio sienelės sluoksnis. TBT-IM, c-KIT į DM grupės buvo akivaizdžiai sumažėjo, palyginti su kontrole (0,47 ± 0,04 vs 0,69 ± 0,05 P
= 0,001). Priešingai, Lea HEA dramatiškai sustiprino c-KIT išraiška palyginti su DM grupė (0,65 ± 0,04 vs 0,47 ± 0,04 P
= 0,004; 0,66 ± 0,03 vs 0,47 ± 0,04 p
= 0,002, atitinkamai). TBT-my, C-kit išraiška buvo žymiai sumažintas DM grupės priešingai kontrolės (0,57 ± 0,04 vs 0,83 ± 0,05 P
< 0,001). Tačiau reikšmingas skirtumas buvo tiek pasiekta Lea HEA grupėje, lyginant su DM grupė (0,78 ± 0,05 vs 0,57 ± 0,04 P
= 0,002; 0,76 ± 0,04 & 0,57 ± 0,04 p
= 0,004, atitinkamai). TBT-SM, C-rinkinys iš DM grupės buvo akivaizdžiai sumažėjęs nuo normalaus lygio pagrindu (0,56 ± 0,03 vs 0,77 ± 0,04 P
= 0,001). Nuosekliai, Lea HEA akivaizdžiai padidino c-KIT išraiška palyginti su DM grupė ( P
= 0,003 ir P
= 0,007). Tačiau jokio reikšmingo skirtumo nerasta tarp jūros ir DM grupės TBT-IM, ICC-mano ir TBT-SM ( P
= 0,597 P
= 0,853 ir P
= 0,172).

Poveikis EA dėl TBT tinklų

alternations TBT tinklų ypač TBT morfologijos ir tankis buvo rodomas Fig.3. Nebuvo reikšmingas skirtumas tarp abiejų sluoksnių storis tarp grupių. Susijęs su lygiųjų raumenų ląstelių, c-KIT reaktyvumas už TBT-MP buvo pastebėtas raumenų sluoksnius, rodo, kad TBT-MP turėjo du poliariniai procesus formuojant korinio ryšio tinklą su kontroline grupe. Į DM grupės, ilgas procesai ICC-IM buvo sumažėjusi, matyt, ir c-KIT teigiamų ląstelių tankis buvo sumažintas iki maždaug 50% normalaus kontrolės ( P
< 0,001). Palyginti su DM grupės, nėra reikšmingas pokytis buvo pažymėta SEA grupė. Tačiau beveik nepaliestas korinio ryšio tinklo buvo ryškinamos į Lea HEA grupės ir c-KIT teigiamą ICC-MP tankis beveik atkurta normalaus lygio (tiek P, pervežimas < 0,001, palyginti su DM grupės ).

TBT-MY apvijos aplink myenteric rezginio buvo, esančių tarp išilginės ir žiedinės lygiųjų raumenų sluoksnių. Daugiapolis TBT-MY su daugeliu šakų formavimo sveika korinio ryšio tinklą buvo aiškiai parodė, kontrolinėje grupėje. Į DM grupė, c-KIT + ląstelių pasirodė su lieknas ląstelių įstaigų ir sulaužytas procesus, o TBT-MY tankis buvo akivaizdžiai sumažėjo ( P
< 0,001). Į jūrą grupėje, ICC-MY tankis reikšmingai nepakito, palyginti su DM grupė ( P
= 0.762). Tačiau beveik nepaliestas korinio ryšio tinklo egzistavo aplink myenteric rezginio ir ICC-MANO tankio dalinai išieškota per LEA ir HEA grupės (tiek P, pervežimas < 0,001, palyginti su DM grupės)
<. H3> Poveikis EA dėl apoptozės ICC

apoptozę TBT buvo aptikta TUNEL ženklinimo, siekiant nustatyti, ar apoptozė dalyvavo trūkumas TBT diabeto (4 pav). Iš viso kalno preparatų kontrolės, keli branduoliai TBT buvo susitepę TUNEL metodą raumenų sluoksnis, myenteric sluoksnio ir submucosa sluoksniu. Daug c-KIT + /TUNEL + TBT-MP, ICC-mano ir TBT-SM buvo pastebėtas DM grupės (18,48 ± 1,88 mm, ^{-2, 26.51 ± 1,87 mm, -2 ir 12.03 ± 1.27 mm -2, atitinkamai). C-krepšys + korinių tinklų buvo neišsami ir apoptozės TBT pateikiami kaip sutrumpintas procesų mažiau šakų. Daug c-KIT + /Tünel + ląstelių taip pat buvo užtvindyti visose SAV grupės sluoksniu. Pagal Lea HEA įgyvendinimo Apoptozinės komplektas + ląstelės buvo sunkiai rasti TBT-IM (1,79 ± 0,33 mm -2 ir 2,05 ± 0,30 mm -2), ICC-mano (2,24 ± 0,40 mm, -2 ir 2.48 ± 0,40 mm, -2) ir TBT-SM (1,09 ± 0,25 mm -2 ir 1,39 ± 0,20 mm, -2). Korinių tinklų užfiksuoti c-KIT imunodažymu parodė didelio tankio ir storio korinio procesų Lea HEA grupei.}

Poveikis EA dėl gausėjančių ICC

Atsižvelgiant į padidėjusį skaičių TBT į Lea HEA grupė, KI67 teigiamas TBT buvo aptiktas atskleisti TBT platinimu trijų sluoksnių (5 pav). Kontrolinėje grupėje, iš c-KIT numeris /Ki67 dvigubai paženklinti ląstelės buvo pastebėtas TBT-IM (8.82 ± 1.02 mm ^{-2), ICC-mano (10.64 ± 0.92 mm -2) ir ICC -SM (4,67 ± 0,96 mm, -2). Iš TBT sulaužytas šakas skaičius buvo stebėtinai sumažinama, o tinklai buvo labai negausūs su keliomis proliferuojančias ląstelių tiek DM ir jūros grupei. Tačiau, Lea HEA grupės, c-KIT /KI67 dvigubai paženklinti ląstelės TBT-IM buvo būdingas greta ląstelių įstaigų ir gana dvipolių procesų ir vidutinis tankis siekė iki 18.37 ± 1.60 mm -2 ir 15.27 ± 1.81 mm 2 (abu P
< 0,001). Be to, gausu c-KIT + /KI67 + TBT-MY į Lea HEA grupės (tiek P
< 0,001) formavimo nepaliestas tinklus su c-KIT + ląstelių atlikti apvalų ląstelių kūną ir ilgas lieknas procesus. TBT-SM, kartu su nepažeistu tinklo TBT, kad plinta ląsteles Lea HEA grupės tankis buvo santykinai didesnis priešingai nei DM grupė ( P
= 0,016 ir p
= 0,003).}

Poveikis EA ant ultrastruktūros pakitimų ICC

Tipiniai ULTRASTRUKTŪRINIAI charakteristikos TBT buvo atskleista perdavimo elektroniniu mikroskopu (6 pav). Kontrolinėje grupėje, TBT-MP ir TBT-Mano turtingas gerai išsivysčiusios ląstelių organoidus pratęstas ilgai procesus, kurių sudėtyje yra mitochondrijas, ir grubus ir sklandų Endoplazminis tinklas. Polimorfinės TBT-SM įsikūręs gleivine paviršiaus sukamaisiais raumenų sluoksnio parodė didesnį elektronų tankus citoplazmos, daug mitochondrijas ir Endoplazminis tinklas. Į DM group ", dramatical sumažėjimas TBT pažeistiems ultrastruktūros funkcijų skaičius išnagrinėjo elektroniniu mikroskopu. Šios ląstelės su patinę mitochondrijas, sutrikdė cristaed ir kondensuotas chromatino parodė neišsamią membraną ir sutrumpinti procesus. Šie pokyčiai taip pat buvo pastebėtas SEA grupė. Į Lea HEA grupėje, TBT skaičius buvo reikšmingas padidėjo ir jie glaudžiai susiję su nervinių skaidulų ir lygiųjų raumenų ląstelių, sudarančių Synaptic struktūrą ir atotrūkis sankryžas. Išvalyti mitochondrijos maksimumo, tvarkingai pasiskirsto šiurkštus Endoplazminis tinklas ir ribosomų dalelės buvo laikomas klasikinės bruožai ICC-MP MP-mano ir TBT-SM.

Diskusijos

Šiame tyrime mes nustatyta, kad tiek mažai ir aukšto dažnio AE ne ST36 slopino TBT apoptozę ir suaktyvino TBT platinimu į STZ-sukeltas diabetu žiurkių skrandžiui. Kaip rezultatas, gelbėjimo TBT tinklų buvo susijęs su apsaugojimo nuo ligų efektas uždelsto skrandžio ištuštinimo.

kaip veiksmingą procedūrą, su mažiau šalutinių poveikių, E. kartu su akupunktūra ir elektros srovė stimuliacijos Vietoje rankinio manipuliacijų yra palaipsniui priimti Vakarų šalyse. ST36 yra vienas iš dažniausiai naudojamų kiekis gydyti virškinimo trakto sutrikimai, nurodant, įskaitant: epigastriumo skausmas, pykinimas, vėmimas, prasta apetitas ir pilvo tempimas. Tuo pačiu metu, mūsų Ankstesnis tyrimas parodė EA ne ST36 gali padidinti storosios varomųjų judėjimą, tačiau nepastebėta grupėje su EA ne ne acupoints. Uždelstas skrandžio ištuštinimą, bendra pobūdis cukriniu diabetu sergantiems pacientams gastroparezę ir taip pat vienas iš pagrindinių veiksnių, prisidedančių prie simptomų gastroparezę. Per pastaruosius dešimtmečius eksperimentai sąmoningas žiurkėmis parodė, kad žemo dažnio AE (10 Hz) žymiai paspartėjo skrandžio ištuštinimą [3], [24], [25]. Be to, 100 Hz, AE buvo veiksminga sukelti dinorphin ir serotonino išsiskyrimą paskatinti analgezija [26]. Nors aukšto dažnio AE (100 Hz), taip pat buvo pranešta, skatinti stemplės ir distalinio storosios žarnos peristaltiką gyvūnais [7], [8], 100 Hz EA poveikis skrandžio motorikos jau vargu ar tiriami. Tokiu būdu, parametrai (10 ir 100 Hz) EA buvo atrinkti pagal preliminariniais eksperimentų, kad nurodytų stimuliuojantį poveikį virškinamojo trakto motorikai. Mūsų rezultatai parodė, kad tiek žemo dažnio AE (10 Hz) ir aukštų dažnių AE (100 Hz) ne ST36 žymiai pagerėjo uždelsto skrandžio ištuštinimą diabetu žiurkių, ir rezultatas taip pat atskleidė, kad žemo dažnio EA poveikis buvo gerokai rimtesnis, nei iš aukštos dažnis AE.

Daugybė tyrimų įrodė, kad TBT atlieka svarbų vaidmenį skrandžio peristaltiką reglamento pagrindinis veiksnys skrandžio ištuštinimą [27], [28]. Kaip TBT egzistuoja įvairių sluoksnių skrandžio antralinėje dalyje tinkluose forma vivo
, yra svariai būti laikoma pakitimai TBT tinkluose. Jų skaičiaus sumažinimo ir morfologinių pokyčių ICC-mano ir TBT-IM diabetinės pelių skrandžio buvo įrodytas ankstesnio tyrimo [14]. Be to, buvo pastebėtas žymus nuostolis TBT-IM ir TBT-SM į antralinėje dalyje iš STZ-sukeltų diabetu žiurkių, bet TBT-MY buvo reikšmingai nepaveikė išskyrus jungčių praradimas nervų struktūras [15]. Šios išvados skiriasi šių dviejų tyrimų tikriausiai buvo susiję su gyvūnų rūšių. Nuo 28 pacientams, sergantiems gastroparezę tyrime buvo nustatyta sumažinta skaičius TBT į myenteric rezginio iki normalaus storio antralinių biopsijų [29]. Mūsų rezultatai parodė, kad TBT-MP, TBT-mano ir TBT-SM į STZ-sukeltas diabetu žiurkių antralinėje dalyje buvo žymiai sumažintas remiantis technika Imunoblotingo ir imunofluorescenciniam ir toliau pažeistą struktūrą TBT buvo parodė Transmisinės elektroniniu mikroskopu , Laimei, jis pranešė, kad žemo dažnio AE pagerina TBT išraišką dvitaškis lėtai tranzito užkietėjimas žiurkių [17]. Be to, mūsų Ankstesnis tyrimas parodė, kad tiek mažai ir aukšto dažnio AE atstato TBT išraišką dvitaškis diabetu žiurkių [18]. Tačiau šių tyrimų, jie ištirti TBT keisti kaip visuma ir kitokio dažnio EA poveikį TBT skrandyje nebuvo išaiškintas. Taigi, skirtingų dažnių EA poveikis tris potipius TBT skrandžio įskaitant TBT-IM, ICC-mano ir TBT-SM buvo šio tyrimo dėmesio centre. Mūsų rezultatai parodė, kad TBT trijų sluoksnių išraiška buvo gerai matomoje išgelbėti mažą ir aukšto dažnio EA, tai rodo, kad mažos ir aukšto dažnio AE renovuotas tinklus TBT-IM, ICC-mano ir TBT-SM ir toliau galėtų prisidėti prie regeneruota skrandžio ištuštinimą.

Pažymėtina, kad TBT tinklų balansą daugiausia lemia apoptozės ir platinimu TBT [11], [12]. Todėl galima mechanizmas skrandžio motorikai ir apie TBT tinklų EA tuo ST36 poveikis buvo ištirta per aptikti platinimu ir apoptozės TBT pakeitimus. Neseniai aprotoninis ląstelių mirtis Pranešama, kad nuolatinis procesas ICC tinklų ir apoptozės sveikos dvitaškis lygio rodo, kad šios ląstelės turi būti nuolat regeneruojama išlaikyti nepaliestas tinklus [12]. Be to, rezultatai suaugusiųjų jūrų kiaulytėms nurodė, kad žarnyno išemija ir reperfuzijos paskatino sumažinti skaičių TBT per apoptozės, kurie gali prisidėti prie virškinamojo trakto motoriką sutrikimų [30]. Be to, neseniai ataskaita parodė, kad terapija AE sumažintas apoptozės procentą juodosios medžiagos ląstelių Parkinsono žiurkių [31]. Šis tyrimas aiškiai sujungtos, kad aprotoninis TBT aptikta Tünel metodai buvo potvynis TBT tinklų diabetinės žiurkių skrandžio ir spėliojo, kad išeikvojimas TBT tinkluose taip pat gali sukelti skrandžio sutrikimų judrumą. Bet per žemo ir aukšto dažnio EA stimuliacijos intervencijos, tunelis + branduolys buvo sunkiai rasti, o tai rodo apoptozę TBT buvo sumažintas iki žemo lygio, kaip įprasta.

neplatinimo, taip pat kitos pagrindinis reguliatorius palaiko tinklus TBT. Ankstesni rezultatai parodė, kad proliferacija dalyvauja ICC atsigavimo, kai jis buvo prarasta suaugusiems gyvūnams [32], [33].

• PLoS ONE: Savęs Pranešė skrandžio sutrikimų ir klajoklių kruiziniuose pagrindu ir sausumos kelionių paketų
• PLoS ONE: Nikotinas slopina aktyvinimas audinio Resident makrofagų Mouse skrandžio per b2 nikotino acetilcholino receptorių