Kaip ląstelės integruoti keletą modeliavimas signalus pasiekti anksti Endoderma regionus išlieka beveik nežinomas. Tarp gastrulation ir neurulation, retino rūgštis (RA) signalizacijos reikia, o WNT /β-kateninai signalizacijos turi būti represuoti už kasos, stemplės, skrandžio specifikacijos ir dvylikapirštės žarnos primordia į Xenopus nurodomoji dalis:. Zhang, T Guo X Chen Y (2013) retino rūgštimi aktyvuotas Ndrg1a malšina WNT /ß-kateninai signalo Leiskite Xenopus redaktorius Mykolas Schuberto Laboratoire de Biologie du Développement de Villefranche-sur-Mer, Prancūzija Įstojo: Gruodžio 29 2012; Priėmė: Balandžio 22, 2013 m Paskelbta: Gegužės 31, 2013 Visos teisės saugomos: © 2013 Zhang et al., Tai atviros prieigos straipsnis platinama pagal Creative Commons Attribution licencija, kuri leidžia nevaržomai naudotis, paskirstymo ir dauginimąsi bet kokioje laikmenoje sąlygomis, su sąlyga, kad pirmasis autorius ir šaltinis įskaitomos Finansavimas:. Šis darbas parėmė lėšas iš nacionalinio pagrindinių mokslinių tyrimų programą Kinijos (2009CB941200) ir nacionalinio Gamtos mokslo fondo Kinijos (31271554). Į finansuotojai neturėjo vaidmenį studijų dizainas, duomenų rinkimo ir analizės, sprendimų skelbti, ar ruošiant rankraštį konkuruojančių interesų.. Autoriai pareiškė, kad nėra konkuruojantys interesai egzistuoja Įvadas iš Endoderma regionalizacija atsiranda kartu su jo formavimosi gastrulation metu. Iki gastrulation pabaigoje buvo nustatyta plati Antero-užpakalinės (AP) domenai Per Endoderma, nes atspindi priekinės išraiška Hhex retino rūgštis (RA) signalizacijos vaidina apsaugotą vaidmenį AP modeliavimas stuburinių Endoderma anksčiau kaip gastrulation [9]. Tyrimai varlių, paukščių, ir pelių rodo, kad RA signalizacijos yra konkrečiai reikia pagal nugaros kasos, stemplės, skrandžio formavimui, taip pat dvylikapirštės žarnos primordia [10], [11], [12], [13], [14], [15]. Be zebrafish, signalizacijos rojaus iki gastrulation pabaigoje reikia pradinio vystymosi tiek kepenų ir kasos Endoderma [16]. Rojaus aktyvuota išraiška RA-žeminančio fermento cyp26a1 Canonical WNT signalizacijos taip pat vaidina svarbų vaidmenį AP modeliavimas ir stuburinių Endoderma. Pelėms, junginys nokautas iš Tcf1 N-MYC pasroviui reguliuoja genų 1 (NDRG1) priklauso NDRG baltymų šeimos, kurią sudaro keturi nariai, NDRG1-4, kurie pasižymi turintis NDR domeną ir α /ß hidrolizės kartus motyvas [27]. NDRG1 šiame tyrime mes naudojamas DNR mikrogardeliq kartu su visa kalno in situ hibridizacijos į ekraną RA reguliuojamų genų Xenopus rezultatai ndrg1a dėl endodermal organogenezės Xenopus Jei dar kartą patikrinti mikrogardeliq duomenis, mes analizuojami ndrg1a Jei adresą, jei rojaus gali tiesiogiai reguliuoti ndrg1a Jei generuoti ndrg1a Norėdami išbandyti, jei Ndrg1a gali funkciškai tarpininkauti signalizacijos RA nurodyti Priekinis žarna Endoderma, mes švirkščiamas MO1 MO2, ar como atskirai į augalinės dalis visų keturių blastomeres 4-ląstelių stadijos embrionų, surinkta etapuose, 36 ir 42, ir analizuotų su endodermal žymeklis genų skydelyje embrionai. ptf1a Gauti duomenys rodo, kad MO1 ir MO2 vienodai efektyviai panaikinta , insulino Naudojimasis net 4 ng ndrg1a mechaniškai, NDRG1 gali sąveikauti su WNT receptorių LRP6 ir blokuoti WNT /β-kateninai signalizacijos vėžio ląstelių linijų [37]. Norėdami paklausti, ar rojaus aktyvuota Ndrg1a gali slopinti WNT /β-kateninai signalizacijos Xenopus Norėdami išbandyti, jei RA Ndrg1a ir WNT /β-kateninai signalizacijos yra funkciškai susietos ta pačia kaskados kontroliuoti kasos, stemplės, skrandžio, dvylikapirštės žarnos ir specifikacijos, mes bendradarbiaujame švirkščiamas ndrg1a visiškai sutinka su ankstesniu tyrimu [22], aktyvavimo kanoninės WNT signalizacijos Xenopus buvo parodyta, kad ATF3 A WNT /β-kateninai tikslas geno vėžio ląstelių linijų [37], gali arba transkripciškai nuslopinti Pdx1 Diskusijos ndrg1a Keletas tyrimų aprašyti Mikrogardelė pagrįsta atranka RA reaguoja genų, Xenopus Ndrg1a yra būtinas, Xenopus Ankstyvas endodermal išraiška cyp26a1 Daugybė tyrimų rodo, kad padidėjusią NDRG1 vėžiu ląstelių linijų generuoja matomoje fenotipų [27]. Jis taip pat pranešė, kad Ndrg1a raiška į Xenopus embriogenezės metu ląstelės turi nuolat integruoti keletą signalų kelius pasiekti savo atskirą likimą reikiamu laiku ir vietoje. Integruotas vaidmuo FGF, RA ir WNT signalizacijos kelius nurodant plaučių primordium ir kontroliuoti plaučių pumpurų augimą apibrėžtą pelėms [65] yra užkonservuotas, Xenopus Čia mes pateikti įtikinamų įrodymų, pirmą kartą, mūsų žiniomis, kad rojaus aktyvuota endodermal išraiška Ndrg1a malšina WNT /ß -catenin signalizacijos ir todėl atleidžia slopinimo aktyvumą WNT /beta-kateninai signalizavimas, Xenopus
embrionų. Be bandant ekranas RA reguliuojamų genų, Xenopus
Endoderma, mes nustatyti tiesiogiai RA tikslinio geno, N-MYC pasroviui reguliuoja genų 1a ( ndrg1a
), kad parodė išraišką anksti archenteron stogo Endoderma ir vėlai besivystančios kasos, stemplės, skrandžio, dvylikapirštės žarnos ir. Tiek Priešprasminis morfolinas oligonukleotidas tarpininkaujant nokdaunas iš ndrg1a
Xenopus laevis parsisiųsti ir transkripcijos aktyvatorių-kaip Efektorinės nukleazių (languages) tarpininkaujant sutrikdymo ndrg1
Xenopus tropicalis
įrodyti, kad kaip signalizacijos RA, Ndrg1a konkrečiai reikia iš Xenopus
kasos, stemplės, skrandžio, dvylikapirštės žarnos ir primordia specifikaciją. IMUNOFLUORESCENCIJOS duomenys rodo, kad rojaus aktyvuota Ndrg1a slopina WNT /β-kateninai signalizacijos Xenopus
archenteron stogo Endoderma ląsteles. Blokavimo WNT /β-kateninai signalizacijos išgelbėtų Ndrg1a triuškinantis fenotipą. Be to, padidėjusi apie spėjamą WNT /β-kateninai taikinio geno Atf3 phenocopied triuškinantis iš Ndrg1a ar slopinimu signalizacijos rojaus, o Atf3 nokdaunas gali išgelbėti Ndrg1a triuškinantis fenotipą. Galiausiai, kasa /skrandžio /dvylikapirštės žarnos transkripcijos faktorius Pdx1 galėjo išgelbėti Atf3 padidėjusi arba Ndrg1a triuškinantis fenotipą. Kartu galime daryti išvadą, kad RA aktyvuota Ndrg1a malšina WNT /ß-kateninai signalizacijos leisti kasos, stemplės, skrandžio specifikacija ir dvylikapirštės žarnos kamieninių ląstelių Xenopus
embrionų
kasos Stemplė, skrandžio, dvylikapirštės žarnos ir specifikaciją. PLoS ONE 8 (5): e65058. Doi: 10,1371 /journal.pone.0065058
vpp1
Sox2
ir Foxa2 parsisiųsti ir užpakalinės išraiška uodegos tipo homeozinis genas
genai Cdx1
2
, ir 4
[1], [2], [3]. Galiausiai, Endoderma sukelia į kvėpavimo ir virškinimo trakto takų ir su jomis susijusių organų, pavyzdžiui, skydliaukės, plaučių, kasos, kepenų ir tulžies pūslės epitelyje. Lineage atsekti už stuburinių endodermal organogenezės labai priklauso nuo gyvybinių dažai ženklinimas pagrindu likimas žemėlapių tyrimų [4], [5], [6], [7], [8]. Anksti išraiška hhex parsisiųsti ir vpp1
į Xenopus
embrionai galėtų būti atspindėti už kepenis ir pilvo kasos pirmtakų, atitinkamai [3]. Iki šiol, yra keletas konkrečių paženklintų genų pranešta, kuris gali atskiria pirmtakai nugarinius kasos, stemplės, skrandžio, dvylikapirštės žarnos ir gastrulation ir neurulation metu.
į priekinės bagažinės Endoderma savo ruožtu moduliuoja signalizacijos RA ir nurodoma priekinės sienos kasos srityje zebrafish embrionų [17]. mnx1
identifikuojama kaip rojaus vartotojų geno, kuris skatina beta ląstelių susidarymą besivystančiame zebrafish endokrininės kasos [18], o rojaus pasroviui genas exdpf
reguliuoja žuvų egzokrininė kasos plėtros [19]. Į endodermal rojaus tikslinės genus, kurie tarpininkauja anksti veiklą signalizacijos rojaus nurodyti kasos, stemplės, skrandžio, dvylikapirštės žarnos ir Anlagen tinkamai likti būtų galima identifikuoti.
ir Tcf4
lėmė priekinės transformacijos dvylikapirštės žarnos į skrandį su mažai arba jokio žarnyno išvystyta [20]. Skrandis mezenchiminių transkripcijos faktorius Barx1 tarpininkaujant sekrecijos WNT antagonistai SFRP1 ir SFRP2 privalo slopinti endodermal WNT /β-kateninai signalizacijos ir tokiu būdu, kad būtų galima specifikacija skrandžio epitelio [21]. Nuosekliai, kad Xenopus
, WNT /β-kateninai signalizacijos turi būti represuoti į priekinės Endoderma tarp gastrula ir ankstyvo somite vystymosi etapuose leisti kepenų formavimąsi, taip pat kasos, skrandžio, dvylikapirštės žarnos ir primordia [ ,,,0],22], [23]. Išsiskyrusios WNT antagonistas, sfrp5
išreikštas pilvo Priekinis žarna Endoderma koordinuoja kepenų ir ventralinių kasos specifikaciją nuteikti tiek kanoninę ir nekanoninių WNT signalizacijos [24], [25]. Be to, buvo įrodyta, kad RA gali slopinti Xenopus
blastulė WNT /β-kateninai signalizacijos [26].
yra RA-indukuojamąją genas įvairių ląstelių linijų ir sergančių žmonių [28], [29], [30], [31]. Ndrg1
trūkumas pelėms sukelia švano ląstelės disfunkcija, o tai rodo, kad NDRG1 yra būtinas priežiūrai mielinui makštų periferinių nervų [32], [33]. Ndrg1
-null pelėms taip pat parodė, sutrikusi putliųjų ląstelių brendimą ir degranuliacijos ir susilpnintos alerginių reakcijų [34]. Be Xenopus
ndrg1
buvo identifikuota kaip geno praturtinta raiškos Endoderma ir pronephros [35], [36]. Neseniai atliktas tyrimas, naudojant vėžio ląstelių linijas rodo, kad navikas metastazės slopintuvas genų, NDRG1, malšina WNT /β-kateninai signalizacijos tiesiogiai bendrauja su WNT receptorių, LRP6, todėl sukelia į WNT /β-kateninai taikinio geno slopinimą ATF3
išraiška [37]. Įjungimas transkripcijos faktorius 3 (ATF3) priklauso ATF /ciklinio AMP reaguoja elementas privalomas šeimos pagrindinių leucinas užtrauktuką transkripcijos veiksnių. Ji yra prisitaikymo genas ir gali veikti ir kaip transkripcijos aktyvatoriaus arba slopinančioje priklausomai nuo ląstelių tipo ir stimulo [38], [39], [40]. ATF3
pelç paprastai kuriamos ir neparodė jokių pastebimi fenotipų normaliomis sąlygomis [41]. Priešingai, transgeninių pelių išreiškiantys ATF3 kepenyse, kasos latakų epitelio, ar kasos beta ląstelių buvo kepenų funkcijos sutrikimų, defektų endokrininės kasos plėtros, arba salelių disfunkcija, atitinkamai [41], [42], [43].
Endoderma. ndrg1a
buvo nustatyti ir patikrintus yra tiesiogiai įjungia RA į archenteron stogo Endoderma ir vėlai besivystančios kasos, stemplės, skrandžio, dvylikapirštės žarnos ir. Mes teikiame įrodymus implicating RA aktyvuota Ndrg1a malšina WNT /β-kateninai signalizacijos sistema archenteron stogo Endoderma ląstelių, todėl išleidžia slopinantį poveikį WNT /β-kateninai signalizacijos veiklą dėl kasos, stemplės, skrandžio ir dvylikapirštės žarnos formavimas.
, RA Reguliuojama Genų, išreiškiama anksti Endodermal Archenteron Stogo
embrionai, apdoroti RA antagonistas, BMS453, prieš prasidedant gastrulation pabaigoje rodomas konkretus nuostolis iš nugaros kasos ir dalis pilvo kasos, skrandžio, ir dvylikapirštės žarnos [10]. Norėdami nustatyti RA reguliuojamų genų Endoderma, mes pirmą kartą padarė mikrogardeliq išanalizavę genų ekspresijos lygį tarp laukinio tipo ir RA-stokojančių embrionus, kurie buvo gydomi BMS453 ties gastrulation pradžioje ir buvo surinkta etapuose 12, 23, ir 34, atitinkamai , Gauti duomenys rodo, kad genai žemyn reguliuojama daugiau nei 2-kartų didesnė už trijų skirtingų etapais parodė, ribotas suartėjimas (pav. S1 ir lentelė S1). Surinktų 23 etape embrionų, yra 138 genus, kurie buvo žemyn reguliuojamos daugiau nei 2 kartus ant BMS453 gydymui. Pagal 138 genų "turimą struktūrinę ir funkcinę informacijos NCBI duomenų bazėje, mes davė prioritetus transkripcijos faktorius, kinazės, RNR surišančių baltymų, transmembranines baltymus, taip pat genus rodo endodermal išraišką, ir taip pasirinkusių 9 genus (lentelė S1) į toliau analizuoti savo embrionines raiškos modelius pagal visas kalnas in situ hibridizacija. Vienas iš jų ndrg1a
parodė, konkreti išraiška anksti archenteron stogo Endoderma (1b pav.), Kuri nebuvo nustatyta ankstesniuose tyrimuose, matyt dėl nepakankamo jautrumo visas kalnas in situ hibridizacijos metodu praėjusią publikacijos [35], [36]. Pagal susitarimą su pranešimu Zorn laboratorijoje [35], mūsų duomenys rodo, kad ndrg1a
nuorašai buvo aptikta nugaros Endoderma ankstyvuoju uodega pumpurų vystymosi stadijoje (pav. 1C, D, E, G). Tuo pabaigoje uodegos pumpuro ir buožgalvis vystymosi etapuose, be to, savo išraiška akyje, proctodaeum pirmtakų ir pronephros ndrg1a
parodė konkrečią išraišką ryklės, stemplės, kasos, skrandžio, dvylikapirštės žarnos ir (pav. 1E , F, H, I, J). Mes negalėjome aptikti ndrg1a
išraiška kepenyse [35]. Vietoj to, aišku, ndrg1a
signalas buvo stebimas besivystančiose tulžies pūslės (pav. 1I, J).
ndrg1a
raiška Archenteron Stogo Endoderma ląstelių tiesiogiai įjungia RA
išraišką BMS453 ir RA gydytų embrionų visas kalnas in situ hibridizacija. Po BMS453 gydymo nėra, ndrg1a
nuorašai buvo aptikta archenteron stogo Endoderma ląstelių (. 2E pav) ir tik pėdsakai, ndrg1a
iRNR liko nugaros Endoderma stadijos 22 embrionai (2H pav.) , Vėliau ndrg1a
išraiška buvo visiškai represuoti į nugarinius kasos, stemplės, skrandžio, dvylikapirštės žarnos ir buvo iš dalies slopinamas pilvo kasos (2K pav., N). Priešingai, kitas rojaus antagonistas BMS493 gali tik iš dalies slopina ndrg1a
išraiška kasos, stemplės, skrandžio, dvylikapirštės žarnos ir [11]. Be to, ndrg1a
išraiška pronephric proksimaliniuose kanalėliuose taip pat buvo smarkiai slopinamas BMS453 (2N pav.). Reikėtų pažymėti, kad ndrg1a
išraišką akis, smegenis, ir tulžies pūslės buvo mažiau nukentėjo nuo BMS453 gydymo (2K pav., N). Tai dažnas reiškinys, kad genų ekspresiją kasos, taip pat akių ir centrinės nervų sistemos, kaip antai ndrg1a
esr10
neurod
, ir ptf1a /P48
, tik jų kasos išraiška yra slopinamas nuo BMS453 gydymo (2K pav., N ir [10]). Priešingai, taikymas RA iki Xenopus
embrionai sukeltas didelis išplėtimas ndrg1a pervežimas išraiška domenų archenteron stogo Endoderma (2F pav.), Nugaros Endoderma (2I pav.), Kasos, stemplės, skrandžio , ir dvylikapirštės žarnos (pav. 2L, o). Taigi, rojaus signalizacijos yra būtina ir pakankama, kad aktyvuoti ndrg1a
išraiška archenteron stogo Endoderma ląsteles.
išraiška, mes elgiamasi Xenopus
embrionai su cikloheksimidui (chx), baltymų sintezės inhibitorių, 15 minučių prieš RA taikymo. Mūsų duomenys rodo, kad rojaus sukeltas plėtra, ndrg1a
išraiška archenteron stogo Endoderma nepaveikė chx (pav 2S.), Remti idėją, kad RA tiesiogiai aktyvuoja ndrg1a
išraišką archenteron stogo Endoderma ląstelės. Iš tiesų, atsakymas rojaus elementas buvo nustatyta, Xenopus tropicalis ndrg1
rengėjas regionas (AGTTCAacAGTTCA -1496bp į -1509bp). Skirtingai Xenopus laevis pervežimas, diploidinis Xenopus tropicalis pervežimas turi vieną ndrg1
geną.
ndrg1a
triuškinantis į Xenopus
embrionai Phenocopies BMS453 gydymo
morphants, mes įsigijome du ndrg1a
Priešprasminis morfolino oligos (MO) genų Įrankiai. Vienas apima ATG pradžia kodono (MO1) ir kita (MO2) suranda 5 'neišverstas regione ndrg1a pervežimas kDNR. Jų efektyvumas buvo išbandytas in vivo tyrimo, kuriame GFP kodavimo seka buvo kondensuotas su MO prisijungimo vietą ir dėl to iRNR buvo bendrai švirkščiamas su MO į Xenopus
apvaisintų kiaušinėlių įvertinti gyvai GFP vertimą embrionais , Tiek MO1 (pav 3B.) Ir MO2 (3F pav.) Galėjo efektyviai slopina GFP atviras skaitymo rėmelis vertimą po atitinkamos MO1 arba MO2 privalomą sekas, atitinkamai, o kontrolė MO (Como) to nepadarė (pav. 3A, E).
/ P48
yra specifinis kasos blastas per anksti embriogenezės o vėliau tampa apribota egzokrininės kasos [10], [44], [45]. pdx1
specialiai pažymėtų plėtoti kasos, skrandžio, ir dvylikapirštės žarnos [46]. , insulino
, endokrininių markeris genas, yra išskirtinai išreikštas nugaros kasos pumpuro iš Xenopus
uodega pumpuras scenos embrionų [47], [48]. PDIP
yra egzokrininės kasos specifinis markeris genas [49]. sox2
žymi stemplės, skrandžio ir priekinį dalį dvylikapirštės žarnos [50]. darmin
yra žarnynas specifinis markeris genas [35], [51]. hhex
tarnauja kaip kepenų ir skydliaukės žymeklio geno [52]. nkx2
. 1
ženklai susirgti plaučių ir skydliaukės [53].
ptf1a
/ P48
PDIP
pdx1
, ir sox2
išraiška kasos, stemplės, skrandžio, dvylikapirštės žarnos ir, bet turėjo nedidelę įtaką darmin
hhex
, ir nkx2
. 1
išraiška žarnyno, kepenų, skydliaukės, plaučių, kuris yra labai panašus į BMS453 efekto (. 4A pav ir [10]). Vienintelis skirtumas yra tai, kad nėra pilvo kasos išraiška ptf1a
/ P48
PDIP
arba pdx1
buvo pastebėta, ndrg1a
morphants, bet pėdsakai, ptf1a
/ P48
PDIP
, ir pdx1
išraiška pilvo kasos pumpurų buvo prižiūrimi BMS453 elgiamasi embrionų (. 4A pav ir [10]). Morfologinis fenotipas ndrg1a pervežimas triuškinantis taip pat primena, kad BMS453 gydymą. Embrionai sušvirkšta MO1 ar MO2 pasirodė normalus prieš 40 etape ir vėliau rodomas sunkių žarnyno apsigimimų su žarnų coiling nuostolių ir formavimo edema (pav. 4B ir [10]). Kaip MO1 ir MO2 sukelia identiškas fenotipų, mes panaudojome MO1 atlikti poilsio studijas. Kartu šie duomenys rodo, kad RA ir Ndrg1a yra tokia pačia genetine hierarchijos kontroliuoti kasos, stemplės, skrandžio, dvylikapirštės žarnos ir plėtrą.
iRNR į Xenopus
embrionai sukelia nei morfologiniai anomalija nei ekspresijos pokyčiai Ženklinimo genų analizuojami (pav. S2A B). Bendras injekcija, ndrg1a
iRNR su MOS negalėjo išgelbėti MO fenotipą arba (duomenys neparodyti). Atrodo, kad mes negalėjome gauti funkcinę Ndrg1a baltymų Xenopus
embrionai per įprastinį iRNR injekcijos protokolą, kad dirba dauguma, jei analizuojami ne visi kiti genai. Ndrg1a-GFP konstruktas parodė, kad baltymų buvo pagamintas (pav. S3) Mes neseniai įsteigta TALEN tarpininkaujant genas orientuojantis į Xenopus
[54]. Norėdami dar kartą patikrinti MO fenotipą, mes sukūrėme, ndrg1
Talens trečiojo egzono iš (5a pav.), Xenopus tropicalis ndrg1
genas, kuris efektyviai sukelia somatinių mutacijų, tuo tikslingai lokusų (Pav. 5B). Suderinamas su MO fenotipo gautos Xenopus laevis
embrionai insulino parsisiųsti ir pdx1
išraiška buvo smarkiai slopinamas ndrg1
languages mRNR švirkščiamas Xenopus tropicalis
embrionai (pav. 5C), nors ir su mažesniu dažniu, palyginti su MO švirkščiamas tuos, kurie taip pat atsitiko taikymo ptf1a /P48
Talens mūsų ankstesniame tyrime [54]. Stabili, ndrg1
nokautas varlė linija dar turi būti nustatyta. Mes išpjaustytų 25 froglets, kad parodė, kasos, skrandžio, dvylikapirštės žarnos ir hipoplazija ar net aplazija bet su normaliu kepenų ir tulžies pūslės išvystyta (. 5D pav). Taigi, šie duomenys patvirtina ndrg1a
MO fenotipas gauti Xenopus laevis
.
rojaus aktyvuotos Ndrg1a malšina WNT /β-kateninai signalizacijos Archenteron Stogo Endoderma Cells leisti kasos , Stemplė, skrandžio, dvylikapirštės žarnos ir specifikacija
embrionų, mes palyginti branduolinio β-kateninai lygį, ndrg1a
teigiami archenteron stogo Endoderma ląstelės etape 20 embrionai, kurie buvo taikoma RA, BMS453 gydymo, ar MO1 injekcijos. Immunolocalization branduolinės beta-kateninai yra patikimas būdas apibūdinti WNT /β-kateninai signalizacijos veiklą Xenopus
embrionų [55]. Pasirinktoje srityje archenteron stogo Endoderma, kelios ląstelės parodė branduolinę β-kateninai dažymo normaliomis sąlygomis, o tai dar labiau mažiau tapo nuo gydymo rojaus. Priešingai, branduolinės β-kateninai teigiamų ląstelių skaičius archenteron stogo Endoderma žymiai padidėjo nuo BMS453 gydymo, ar MO1 injekcijos (pav. 6A, B),. Kartu šie duomenys rodo, kad RA ir Ndrg1a nuslopinti WNT /β-kateninai signalizacijos Xenopus
archenteron stogo Endoderma ląsteles.
MO1 su GR-ΔNTcf3, dominuojančia neigiamos formos Tcf3 lydyto su hormonų rišantis domenas iš gliukokortikoidų receptorių tarnauja nuslopinti WNT /β-kateninai signalizacijos nuo deksametazono indukcijos [56]. Mūsų duomenys rodo, kad represuoti WNT /β-kateninai signalizacijos išgelbėtų ndrg1a
nokdaunas fenotipas (pav. 7A, B),. Negimdinis aktyvavimo nkx2
. 1
(7B44 45 pav.,) sox2
(7A19 20 pav., Ir B24, 25), ir foxa1
(7B14 pav., 15) A forkhead transkripcijos faktorius ženklinimas skrandžio, dvylikapirštės žarnos ir proctodaeum [44], yra susijęs su darmin
išraiška (7A24 pav., 25, 7B29, 30 praradimo ) po injekcijos 0,25 ng GR-ΔNTcf3 mRNR. Laikantis ankstesnio tyrimo [22], didesnę dozę (0,8 ng) GR-ΔNTcf3 iRNR turi sukelti negimdinis išraišką pdx1 parsisiųsti ir for1 pervežimas, kepenų specifinis genas [ ,,,0],22], [57], į Xenopus
embrionai (duomenys neparodyti).
Endoderma iki augalinės injekcijos 0,5 ng GR-LEFΔN-βCTA mRNR, kuriame Lef1 DNR privalomą domeną ir β-kateninai transactivation domeną [58] į 4 blastomeres iš 4-ląstelių stadijos embrionų lėmė tapataus fenotipo sukelia Ndrg1a triuškinantis atsižvelgiant į kasos, stemplės, skrandžio, ir dvylikapirštės žarnos plėtros (. 7A pav B) kontekste. Spaudimas poveikis WNT /β-kateninai signalizacijos nuo kepenų formavimosi (7A27 pav., 32, B32, 37) ir plaučių (7A37 pav., B42), nebuvo matyti Ndrg1a morphants, tai rodo, kad pradžioje vykusiose WNT /β-kateninai signalizacijos kepenų ir plaučių formavimo Endoderma teritorijoje vykdo veiksnių išskyrus RA aktyvintos Ndrg1a. Kartu paėmus, šie duomenys rodo, kad WNT /β-kateninai signalizacijos yra pasroviui nuo Ndrg1a ir sutramdomas Ndrg1a leisti kasos, stemplės, skrandžio, dvylikapirštės žarnos ir specifikacijos.
Atf3, tariamą WNT /β- kateninai Tikslinė genas Xenopus
embrionai, ypač Slopina Xenopus
kasos Stemplė, skrandžio ir Aduodenum specifikacija
išraiška [59] arba fiziškai bendrauti su PDX1 blokuoti PDX1 tarpininkaujant transactivation pelių β-ląstelių linijos [60]. Per Xenopus
embriogeneza atf3
vargu aptikti viso kalno in situ hibridizacijos (S4 pav.). AT-PGR analizė parodė, kad atf3
išraiška buvo iki reguliuojama nuo ndrg1a
nokdaunas arba β-kateninai ekspresija, Xenopus
embrionai (8a pav.). Mes nustatėme tris pagrindinius TCF /LEF jungimosi vietų (5'-A /TP /T CAAAG-3 ") į Xenopus tropicalis atf3
rengėjas regionas, rasti ne -1467 bp (TACAAAG) -5591 bp ( AACAAAG) ir -8889 BP (AACAAAG), atitinkamai. Kartu šie duomenys rodo, kad atf3
taip pat yra WNT /β-kateninai tikslas genas Xenopus
embrionų. Įdomu pastebėti, padidėjusią Atf3 į Xenopus
Endoderma atvedė į visišką netekimą, insulino
ptf1a
/ P48
PDIP
pdx1
foxa1
, ir sox2
išraiška kasos, stemplės, skrandžio, dvylikapirštės žarnos ir, bet neturėjo akivaizdaus poveikio, darmin
hhex
, ir nkx2
. 1
išraiška (pav. 8B C), kuris yra tiesiog identiška ndrg1a pervežimas triuškinantis fenotipo (pav 4A.). Dar svarbiau, kad atf3
MO, kuris vienintelis sukelia smulkius poveikį žymėtų genų raiškos analizuojami galėjo išgelbėti , insulino
ptf1a
/ P48
PDIP
foxa1
, ir sox2
išraiška slopinamas ndrg1a
MO (pav. 9A, B),. Be to, Pdx1 galėjo išgelbėti Atf3 padidėjusi arba Ndrg1a triuškinantis fenotipą atžvilgiu, ptf1a
/ P48
PDIP
foxa1
, ir sox2
išraiška išskyrus , insulino
(pav. 9A, B). Yra žinoma, kad Pdx1 nėra nei būtina, nei pakankama, kad anksti aktyvavimo, insulino
išraiška Xenopus
embrionų [44]. Iš viso, mūsų duomenys rodo Epistaza RA aktyvuota Ndrg1a malšina WNT /β-kateninai signalizacijos ir todėl atleidžia slopinimo aktyvumą WNT /beta-kateninai signalizacijos veiklą, kuri gali būti iš dalies procesų, kuriuose Atf3, ant kasos, stemplės, skrandžio ir dvylikapirštės žarnos formavimas.
yra tiesiogiai įjungia RA į archenteron stogo Endoderma ląstelių Xenopus
neurulae. Branduolinė β-kateninai lygis yra labai žemas archenteron stogo Endoderma ląstelių ir atrodo, kad rojaus aktyvuota Ndrg1a malšina WNT /β-kateninai signalizacijos šių ląstelių. Nokdaunas iš ndrg1a
imituoja slopinimas signalizacijos rojaus ar aktyvavimo WNT /β-kateninai signalizacijos, Xenopus
embrionai, atsižvelgiant į kasos, stemplės, skrandžio, dvylikapirštės žarnos ir plėtrą, kuri lemia beveik baigtas nuostolis iš šių organų primordia specifikaciją. Blokavimo WNT /β-kateninai signalizacijos gali išgelbėti ndrg1a
nokdaunas fenotipas. Taigi, Ndrg1a koordinuoja RA ir WNT /β-kateninai signalizacijos į Xenopus
kasos, stemplės, skrandžio, dvylikapirštės žarnos ir specifikacijos.
ndrg1a
gali būti specifinis žymeklis genas Dorsal kasos, stemplės, skrandžio, dvylikapirštės žarnos ir pirmtakų, Xenopus
Neurulae
[61], arba Danio rerio [17], [18], [62] embrionai. Naudojant mikrogardeliq kartu su visa kalno in situ hibridizacija, mes galėjome nustatyti archenteron stogo Endoderma konkretų geną, ndrg1a.
Gyvybiškai dažų dėmių remiantis likimas kartografavimo tyrimas parodė, kad archenteron stogo Endoderma ląstelės vėliau sukelti nugaros kasos , stemplės, skrandžio, ir dvylikapirštės žarnos [5]. , Shirin
atrodo, išreikštas Xenopus pervežimas archenteron stogo Endoderma, bet tuo tarpu jis taip pat išreikšta Mezoderma ir ectoderm [63]. fetuinish
specialiai žymi archenteron stogo Endoderma į Xenopus
pradžioje neurulae, tačiau vėliau ji rodo išraišką kepenyse ir žarnyne, be jokių kasos, stemplės, skrandžio išraiškos ir dvylikapirštės žarnos [35]. Tik ndrg1a
rodo nuoseklų išraišką anksti archenteron stogo Endoderma o vėliau kasos, stemplės, skrandžio, dvylikapirštės žarnos ir. Mes spėlioti, kad ndrg1a
gali tarnauti kaip tam tikros nugaros kasos, stemplės, skrandžio, dvylikapirštės žarnos ir pirmtakas žymeklio geno Xenopus
, kuri dar reikia patikrinti genetinių linijos? Atsekti tyrimus.
kasos Stemplė, skrandžio, dvylikapirštės žarnos ir specifikacijos
ir cdx4
zebrafish embrionai atrodo neutralizuoti signalizacijos RA iš Mezoderma nustatyti priekinis ir užpakalinis ribas kasos teritorijoje atitinkamai [17], [64]. ndrg1a
yra pirmasis genas nustatė, kad yra tiesiogiai įjungia RA anksti Xenopus
archenteron stogo Endoderma ląstelių ir tarpininkauja signalizacijos RA teigiamai modelis Endoderma ląsteles į kasos, stemplės, skrandžio, dvylikapirštės žarnos ir , Tiek MO remiantis nokdaunas iš ndrg1a parsisiųsti ir TALEN tarpininkaujant sutrikdymą, ndrg1a
įrodyti, kad Ndrg1a veikla Xenopus
Endoderma modeliavimas yra būtinas, kuri nebuvo pastebėta, Ndrg1
pelç [32], [33], [34]. Vienas paaiškinimas šiam neatitikimui yra tai, kad svarbu vaidmuo Ndrg1a į Xenopus
endodermal raštas nėra užkonservuotas žinduolių. Arba nėra endodermal organų defektai, pasireiškusios pele Ndrg1
genų orientacija studijas gali būti dėl skylėtu išraiška NDRG1 į Ndrg1
trūkumas pelių [32], [33] arba dėl funkcinio atleidimo tarp NDRG šeimos nariai 1-4 pelėmis.
embrionų rezultatų sumažintą pronephros ir neorganizuotas somites [36]. Dėl nežinomų priežasčių, mes negalėjome gauti negimdinis Ndrg1a funkcija yra Xenopus
embrionų. Reikia pažymėti, kad sutrumpintas versija Ndrg1a su per pirmąsias 48 amino rūgščių, esančių N-galinių trūkstamą naudojamas tiek iRNR įpurškimo ir MO dizaino ankstesnio tyrimo [36]. Mes taip pat bandė iRNR įpurškimo sistemą su šį trumpą versiją ir švirkščiamas embrionai buvo sveiki net didelės dozės (4 ng mRNR). Mes negalėjome gelbėti mūsų ndrg1a
MO fenotipą su šiuo nupjauto versija Ndrg1a arba. Galiausiai, stiprus endodermal išraiška ndrg1a
iliustruoja mūsų tyrime ir aprašyta Kosta et al. [35] nebuvo aptikta šio tyrimo [36].
Ndrg1a keisdamas Crosstalk tarp RA ir WNT /β-kateninai signalizacijos apsiriboja Xenopus
kasos Stemplė, skrandžio, dvylikapirštės žarnos ir formavimas ląstelės
[66]. Pelėms, atrodo, kad rojaus malšina WNT antagonistas Dkk1
išraiška būsimasis plaučių Endoderma iš E8.5 E9.5-embrionais, taip leidžia Canonical WNT signalizacijos tarpininkaujant plaučių specifikacija [65]. RA ir WNT keliai yra susiję RA pasroviui tikslinių genų osr1 parsisiųsti ir OSR2
išlaikyti nugarinio peleko plėtrą zebrafish [67]. Kartu šie atvejai parodo aplinkybė, kad rojaus skatina WNT /β-kateninai signalizacijos.
kasos, stemplės, skrandžio, dvylikapirštės žarnos ir formavimas, kuris netaikomas kepenų ir plaučių specifikaciją. Grįsdama savo išvadą, raiška iš išskiriami WNT antagonistas Sfrp5 gali pakeisti RA atžvilgiu į egzokrininė kasos diferenciacijos Vegt indukcijos švirkščiamas gyvūnų dangtelius į Xenopus
[24]. Kenksmingas poveikis ankstyvosios negimdinio WNT /β-kateninai signalizacijos aktyvavimo dėl kepenų ir plaučių pumpurų formavimosi matyti šiame tyrime taip pat ankstesnio tyrimo [22] nėra prieštaringi į teigiamą vaidmenį kanoninės WNT signalizacijos skatinant kepenų ir plaučių plėtra, kuri buvo pastebėta, kai WNT /β-kateninai signalizacijos buvo aktyvuota, Xenopus
embrionai iš etapų 30 42 kepenims ir iš etapų 28 35 plaučių, atitinkamai [22], [66]. Represijos poveikis rojaus Xenopus