Wéi Zellen Multiple patterning Signaler intégréieren fréi endoderm regionalization ze erreechen bleift gréisstendeels onbekannt. Tëscht gastrulation an neurulation, retinoic Seier (RA) sécher ass néideg, iwwerdeems Wnt /β-catenin wéi sécher fir d'Antrach vun der Bauchspaicheldrüs, esophagus, Mo, an Ausléiser primordia zu Xenopus VerfÜgung embryonal repressed gin huet. An Versuch fir RA reegelen Genen an Écran Xenopus VerfÜgung endoderm, identifizéiert mir en direkten RA Zil- Gentherapie, N-myc afgerappt reegelen Gentherapie 1a ( ndrg1a VerfÜgung) dass Ausdrock zougedréckt fréi am archenteron Daach endoderm a spéit an der Bauchspaicheldrüs, esophagus, Mo, an Ausléiser entwéckelen. Béid antisense morpholino oligonucleotide mediated knockdown vun ndrg1a VerfÜgung zu Xenopus laevis VerfÜgung an der Transkriptiouns activator-wëll effector nucleases (TALEN) mediated Stéierungen ndrg1 VerfÜgung zu Xenopus tropicalis VerfÜgung bewisen, datt wëll RA sécher ass Ndrg1a speziell néideg fir d'Antrach vun Xenopus VerfÜgung Bauchspaicheldrüs, esophagus, Mo, an Ausléiser primordia. Immunofluorescence Donnéeën hindeit, datt RA-ageschalt Ndrg1a Hien Wnt /β-catenin sécher am Xenopus VerfÜgung archenteron Daach endoderm Zellen. Outil Wnt /β-catenin sécher gerett Ndrg1a knockdown phenotype. Ausserdeem, overexpression vun der putative Wnt /β-catenin Zil- Gentherapie phenocopied Atf3 knockdown vun Ndrg1a oder inhibition vun RA sécher, iwwerdeems Atf3 knockdown Ndrg1a knockdown phenotype retten kann. Styl, war d'Bauchspaicheldrüs /Mo /Ausléiser Transkriptiouns Faktor Pdx1 gebass Atf3 overexpression oder Ndrg1a knockdown phenotype ze retten. Zesumme, schléissen mir dass RA ageschalt Ndrg1a Wnt /β-catenin vun der Antrach vun Bauchspaicheldrüs, esophagus, Mo, an Ausléiser Grënner Zellen am Xenopus VerfÜgung embryonal ze erlaben sécher VerfÜgung Fro:. Zhang T , Yinan X, Y Chen (2013) Retinoic Saier-ageschalt Ndrg1a Represses Wnt /β-catenin zu Erlaabt sécher Xenopus VerfÜgung Lëtzebuergesch, Oesophagus, Mo, an Ausléiser bestëmmen. PLoS NËMMEN 8 (5): e65058. Doi: 10.1371 /journal.pone.0065058 VerfÜgung Redakter: Michael Schubert, Laboratoire de Biologie du Développement de Villefranche-sur-Mer, Frankräich VerfÜgung Arnaque: 29. Dezember 2012; Akzeptéiert: 22. Abrëll 2013; Publizéiert: Mee 31, 2013 VerfÜgung Copyright: © 2013 Zhang et al. Dëst ass eng oppen-Zougang Artikel ënnert de Bedingunge vun der Lizenz BY Creative Commons verdeelt, déi bereet benotzen Genehmegungen, Distributioun, an Reproduktioun vun all mëttelgrouss, gëtt d'Original Auteur an d'Quell Kaiser sinn VerfÜgung Funding:. Dës Aarbecht war déi Fongen vun der National Grondakommes Research plangen vu China (2009CB941200) an der National Natural Science Foundation of China (31271554) ënnerstëtzt. D'funders hu keng Roll am Etude Design, Daten Kollektioun an Analyse, Décisioun, oder Virbereedung vun der mëttelalterlech Handschrëft ze publizéieren VerfÜgung Wettsträit Interessen:.. D'Auteuren hunn deklaréiert, datt keng Competitioun Interessen existéieren VerfÜgung D'regionalization vun endoderm iwwerhaapt soll mat senge Opstellung während gastrulation. Mam Enn vun gastrulation, breet Antero-posterior (AP) Domainen am endoderm gegrënnt goufen, wéi déi vun der anterior Ausdrock spigelt vun Hhex VerfÜgung, vpp1 VerfÜgung, Sox2 Retinoic Seier (RA) sécher spillt eng conserved Roll an der AP patterning vun Wierbeldéieren endoderm esou fréi wéi gastrulation [9]. Studien an Fräsch, Vullegripp, an Mais weg datt d'RA sécher stellen, fir d'Équipe vun däischtere Bauchspaicheldrüs, esophagus, Mo. néideg ass, a Ausléiser primordia [10], [11], [12], [13], [14], [15]. An zebrafish, RA sécher virun Enn vun gastrulation ass fir d'éischte Entwécklung vun zwou hepatic an pancreatic endoderm [16] néideg. RA ageschalt Ausdrock vun RA-onwiirdeg Aktivitéit cyp26a1 VerfÜgung an der anterior raumen endoderm am Tour modulates RA sécher an definéiert d'anterior Grenz vun pancreatic Terrain zu zebrafish embryonal [17]. mnx1 VerfÜgung ass wéi eng RA afgerappt Gentherapie identifizéiert datt Beta Zell Opstellung vun den Entwécklungslänner zebrafish endocrine Bauchspaicheldrüs ënnerstëtzt [18], während RA afgerappt Gentherapie exdpf VerfÜgung Fësch exocrine Bauchspaicheldrüs Entwécklung reguléieren [19]. D'endodermal RA Zil- Genen déi fréi Aktivitéite vun RA sécher Mediate ze spezifizéieren der Bauchspaicheldrüs, esophagus, Mo, an Ausléiser anlagen adäquate identifizéiert gin bleiwen. VerfÜgung kanonesche Wnt sécher spillt och eng wichteg Roll an der AP patterning vun Wierbeldéieren endoderm. An Mais, Massa Knockout vun Tcf1 VerfÜgung a Tcf4 VerfÜgung fir eng anterior Transformatioun vun Ausléiser an Mo. Nerve mat wéineg oder keen Daarm entwéckelt [20]. De Mo mesenchymal Transkriptiouns Faktor Barx1-mediated secretion vun der Wnt antagonists SFRP1 an SFRP2 ass néideg endodermal Wnt /β-catenin sécher ze inhibit an domat Antrach vum Mo. epithelium zu Antenn [21]. Konsequent, an Xenopus VerfÜgung, Wnt /β-catenin sécher muss an anterior endoderm tëscht gastrula a fréi somite Etappe vun der Entwécklung repressed gin der Opstellung vun der Liewer souwéi d'Bauchspaicheldrüs, Mo, an Ausléiser primordia [ze erlaben ,,,0],22], [23]. D'secreted Wnt neien sfrp5 VerfÜgung am Friessfeinde foregut endoderm Koordinate der Liewer an Friessfeinde Bauchspaicheldrüs Antrach ausgedréckt esouwuel kanonesche an noncanonical Wnt sécher antagonizing [24], [25]. Ausserdeem, ass et dass RA kann gewise géint Xenopus VerfÜgung blastula Wnt /β-catenin sécher [26]. VerfÜgung N-myc afgerappt Gentherapie 1 (NDRG1) gereegelt gehéiert zu der NDRG FAQ Famill aus véier Memberen, NDRG1-4, déi mat engem NDR Domain an eng α /β hydrolase-fantastesch Motif [27] charakteriséiert sinn. NDRG1 VerfÜgung ass eng RA-inducible Gentherapie zu verschiddenen Zell Linnen a mënschlech Patienten [28], [29], [30], [31]. Ndrg1 VerfÜgung hunn zu Mais féiert zu Schwann Zell Viagra suggeréiert datt NDRG1 fir den Ënnerhalt vun den myelin sheaths zu Randerscheinung Bank- essentiel ass [32], [33]. Ndrg1 VerfÜgung -null Mais och leider Mast Zell maturation an degranulation zougedréckt a attenuated allergescher Äntwerte [34]. An Xenopus VerfÜgung, ndrg1 VerfÜgung war wéi e Gene beräichert fir Ausdrock vun endoderm an pronephros [35], identifizéiert [36]. Eng rezent Etude Kriibs Zell Linnen mat verréid eis, datt d'entholl Metastasen suppressor Gentherapie, NDRG1, Wnt /β-catenin sécher represses déi direkt mat der Wnt receptor, LRP6 proposéiert, doduercher d'Ennerdréckung vun Wnt /β-catenin Zil- Gentherapie dauernd, ATF3 VerfÜgung Ausdrock [37]. Activating Transkriptiouns Faktor 3 (ATF3) gehéiert zu der ATF /cyclic responsiven Element bindend Famill vun Basis leucine kridd Transkriptiouns Facteuren. Et ass e Lycée Äntwert Gentherapie a kann souwuel als transcriptional activator oder repressor Akt jee op der Zell Typ an Impulser [38], [39], [40]. ATF3 VerfÜgung Knockout Mais normalerweis entwéckelt a weisen hutt keng discernable phenotypes ënner normale Konditioune [41]. Am Géigesaz, transgenic Mais ATF3 an der Liewer, pancreatic ductal epithelium ausdrécken, oder pancreatic β Zellen Nerve Liewer Viagra, Mängel an endocrine Bauchspaicheldrüs Entwécklung, oder islet Viagra, bzw. [41], [42], [43]. VerfÜgung an dëser Etude, déi mir DNA microarray a Kombinatioun mat ganz hannen am situ hybridization RA reegelen Genen vun Xenopus VerfÜgung endoderm zu Ecran. ndrg1a VerfÜgung war identifizéiert a Fra gëtt duerch RA an der archenteron Daach endoderm a spéit an der Entwécklung Bauchspaicheldrüs, esophagus, Mo, an Ausléiser direkt ageschalt. Mir bidden dofir SREL datt RA-ageschalt Ndrg1a represses Wnt /β-catenin sécher an der endoderm Zellen archenteron Daach an doduercher verëffentlecht der inhibitory Effet vun Wnt /β-catenin sécher Aktivitéiten op d'Équipe vun Bauchspaicheldrüs, esophagus, Mo, an Ausléiser. ndrg1a VerfÜgung, eng RA reegelen Gene, ass deelgeholl Early an der endodermal Archenteron wouer VerfÜgung mat Respekt fir endodermal organogenesis, Xenopus ndrg1a VerfÜgung Expression zu Archenteron wouer Endoderm BTS ass direkt ausgeléist duerch RA VerfÜgung fir weider der microarray Donnéeën behaapt, mir analyséieren ndrg1a VerfÜgung Ausdrock vun BMS453 an RA behandelt embryonal vum ganze Bierg vun situ hybridization. Beim BMS453 Behandlung, gët VerfÜgung keen ndrg1a sech zu archenteron Daach endoderm Zellen fonnt (Figebam. 2E) an nëmmen Spure vun ndrg1a VerfÜgung mRNA bleift an däischtere endoderm vun Etapp 22 embryonal (Figebam. 2H) . Méi spéit op, ndrg1a VerfÜgung Ausdrock war an däischtere Bauchspaicheldrüs, esophagus, Mo, an Ausléiser komplett repressed a war an Friessfeinde Bauchspaicheldrüs (Figebam. 2K, N) deelweis inhibited. Am Géigesaz, kann en RA neien BMS493 inhibit nëmmen deelweis ndrg1a VerfÜgung Ausdrock vun Bauchspaicheldrüs, esophagus, Mo, an Ausléiser [11]. Zousätzlech, ndrg1a VerfÜgung Ausdrock vun pronephric proximal tubules war och vun BMS453 (Figebam. 2N) streng inhibited. Et ass ze bemierken, datt ndrg1a VerfÜgung Ausdrock am Aa, Gehir, a Gal BBC sech manner dacks op BMS453 Behandlung (Figebam. 2K, N). Et ass eng gemeinsam Phänomen dat fir Genen vun Bauchspaicheldrüs souwéi am Aan an zentraler nervös System ausdrécken, wéi ndrg1a VerfÜgung, esr10 VerfÜgung, neurod VerfÜgung, an ptf1a /p48 VerfÜgung, nëmmen hir pancreatic Ausdrock op BMS453 Behandlung (Figebam. 2K, N an [10]) inhibited ass. Ëmgedréit, Applikatioun vun RA zu Xenopus VerfÜgung embryonal entschlof Opschwong vun ndrg1a VerfÜgung Ausdrock Domainen an archenteron Daach endoderm (Figebam. 2F), däischtere endoderm (Figebam. 2I), Bauchspaicheldrüs, esophagus, Mo. , an Ausléiser (Figebam. 2L, O). Sou, RA sécher ass néideg a genuch ze aktivéieren ndrg1a VerfÜgung Ausdrock vun der archenteron Daach endoderm Zellen. VerfÜgung Fir Adress wann RA direkt regléieren kann ndrg1a VerfÜgung Ausdrock, mir behandelt Xenopus VerfÜgung embryonal mat cycloheximide (CHX), e Protein Synthes inhibitor, 15 Minutten virun der Applikatioun vun RA. Eis Daten weg datt RA entschlof Ausbau vun ndrg1a VerfÜgung Ausdrock vun archenteron Daach endoderm war net vun CHX (Figebam. 2S) betraff, d'Notioun ënnerstëtz datt RA direkt activéiert ndrg1a VerfÜgung Ausdrock vun archenteron Daach endoderm Zellen. Iwwerhaapt, war am Xenopus tropicalis ndrg1 VerfÜgung Promoteur Regioun (AGTTCAacAGTTCA -1496bp zu -1509bp) eng RA Äntwert Element identifizéiert. Anescht wéi Xenopus laevis VerfÜgung, de behënnerte Xenopus tropicalis VerfÜgung huet een ndrg1 VerfÜgung Gentherapie. VerfÜgung ndrg1a VerfÜgung Knockdown zu Xenopus VerfÜgung embryonal Phenocopies BMS453 Prefabrizéierten VerfÜgung Fir generéieren ndrg1a VerfÜgung morphants, kaaft mir zwee ndrg1a VerfÜgung antisense morpholino oligos (MO) vum Gene Tools. Een deckt de ATG Start codon (MO1) an déi aner (MO2) locates an der 5 'untranslated Regioun vun der ndrg1a VerfÜgung cDNA. Hir Effizienz vun enger vun VIVO assay getest gouf, an déi GFP coding féieren zu engem verbindlechen Site d'MO Äonen war an der entstoent mRNA mat de MO Co-heijen war an Xenopus VerfÜgung Eeër befrucht an embryonal liewen GFP Iwwersetzung ze diskutéieren . Béid MO1 (Figebam. 3B) an MO2 (Figebam. 3F) konnt an effizient der Iwwersetzung vun GFP oppen liesen Frame inhibit folgenden den entspriechende MO1 oder MO2 bindend Message, respektiv, iwwerdeems Kontroll MO (Swärdby) dunn sou ze maachen (Figebam. 3A, E). VerfÜgung fir Test wann Ndrg1a kann System RA sécher Mediate foregut endoderm ze spezifizéieren, mir heijen MO1, MO2, oder Swärdby getrennt an der vegetal Deel vun all véier blastomeres vun 4-Zell Etapp embryonal, gesammelt d'embryonal um Etappen 36 a 42, an mat engem Rot vu endodermal Bewaacher Genen analyséiert. ptf1a VerfÜgung / p48 VerfÜgung ass fir pancreatic Virleefer Zellen am Ufank embryogenesis spezifesch a méi spéit gëtt un de exocrine Bauchspaicheldrüs limitéiert [10], [44], [45]. pdx1 VerfÜgung speziell demarcates Entwécklungslänner Bauchspaicheldrüs, Mo, an Ausléiser [46]. Insulin VerfÜgung, eng endocrine Bewaacher Gentherapie, ass an der däischtere pancreatic Keim vun Xenopus VerfÜgung Schwäif Keim Etapp embryonal [47], [48] exklusiv ausgedréckt. pdip VerfÜgung ass eng exocrine Bauchspaicheldrüs spezifesch Bewaacher Gentherapie [49]. sox2 VerfÜgung Spuren der esophagus, Moo an eng anterior Deel vun den Ausléiser [50]. darmin VerfÜgung ass eng Daarm spezifesch Bewaacher Gentherapie [35], [51]. hhex VerfÜgung déngt als Liewer an Schild Bewaacher Gentherapie [52]. nkx2 VerfÜgung. 1 VerfÜgung Spuren Entwécklungslänner haett an Schild [53]. VerfÜgung Déi kritt Donnéeën weg datt MO1 an MO2 gläich effizient ofgeschaf Insulin VerfÜgung, ptf1a VerfÜgung / p48 VerfÜgung, pdip VerfÜgung, pdx1 VerfÜgung, an sox2 VerfÜgung Ausdrock vun Bauchspaicheldrüs, esophagus, Mo, an Ausléiser, mä déi kleng Afloss op darmin VerfÜgung, hhex VerfÜgung, an nkx2 VerfÜgung. 1 VerfÜgung Ausdrock am Daarm, Liewer, Schild, an haett, wat ass ähnlecht bis den Effet vun BMS453 (Figebam. 4A an [10]). Den eenzegen Ënnerscheed ass, datt kee Friessfeinde pancreatic Ausdrock vun ptf1a VerfÜgung / p48 VerfÜgung, pdip VerfÜgung, oder pdx1 VerfÜgung zu observéiert gouf ndrg1a Ausbueraarbecht vun souguer 4 NG vun ndrg1a VerfÜgung mRNA an Xenopus VerfÜgung embryonal ëmmer weder morphological Anomalie nach Ausdrock hire Restaurant vun der Bewaacher Genen analyséiert (Figebam. S2A, B). Co-Sprëtz vun ndrg1a VerfÜgung mRNA mat sengem Moş konnt net de MO phenotype Rettungsplang entweder (Donnéeën net gewisen). Et schéngt, datt mir zu funktionell Ndrg1a FAQ gespillt Xenopus VerfÜgung embryonal duerch d'Iddi mRNA Sprëtz Protokoll, datt fir déi Aarbechten, wann net all aner Genen analyséiert knapp waren. An Ndrg1a-GFP bauen bewisen, dass d'FAQ produzéiert gouf (Figebam. S3) .We hunn kuerzem etabléierten TALEN mediated Gentherapie gezielt an Xenopus VerfÜgung [54]. Fir weider de MO phenotype behaapt, mir entworf ndrg1 VerfÜgung TALENs am drëtte Exon vun Xenopus tropicalis ndrg1 VerfÜgung Gentherapie (Figebam. 5A), déi effizient somatic kennen viséieren loci (Lalumi verursaacht. 5B). Konsequent mat der MO phenotype kritt an Xenopus laevis VerfÜgung embryonal, Insulin VerfÜgung a pdx1 VerfÜgung Ausdrock vun dësem inhibited war ndrg1 VerfÜgung TALEN mRNA heijen Xenopus tropicalis VerfÜgung embryonal (Figebam. 5C), dato mat engem nidderegen Frequenz am Verglach zu der MO heijen gelackelt, déi och vun ptf1a /p48 VerfÜgung TALENs an eiser leschter Etude [54] zu der Applikatioun geschitt. A stabil ndrg1 VerfÜgung Knockout Fräsch Linn ass nach gegrënnt gin. Mir Leschten 25 froglets datt Bauchspaicheldrüs, Mo, an Ausléiser hypoplasia oder souguer aplasia mä mat normal Liewer an Gal BBC entwéckelt (Figebam. 5D) gewisen. Sou, confirméiert dës Donnéeën den ndrg1a VerfÜgung MO phenotype kritt an Xenopus laevis VerfÜgung. VerfÜgung RA ageschalt Ndrg1a Represses Wnt /β-catenin sécher an Archenteron wouer Endoderm BTS Lëtzebuergesch ze Erlaabt , Oesophagus, Mo, an Ausléiser Antrach VerfÜgung Mechanistically, mat Wnt receptor LRP6 an Spär Wnt /β-catenin sécher zu Kriibs Zell Linnen [37] zesummekomm NDRG1 kann. Ze froen, ob RA Ndrg1a ausgeléist kënne Wnt /β-catenin sécher am Xenopus VerfÜgung embryonal géint, am Verglach mir nuklear β-catenin Niveauen am ndrg1a VerfÜgung positive archenteron Daach endoderm Zellen vun Etapp 20 Embryo'en sech ënnerworf zu RA, BMS453 behandelen, oder MO1 Sprëtz. Immunolocalization vun nuklearem β-catenin ass eng zouverlässeg Method Wnt /β-catenin sécher Aktivitéit am Xenopus VerfÜgung embryonal [55] zu Markenzeeche. Am ausgewielten Beräich vun archenteron Daach endoderm, huet e puer Zellen nuklear β-catenin staining ënner normal Konditioun, déi weider manner op RA behandelt gouf. Am Géigesaz, huet d'Zuel vun nuklearem β-catenin positive Zellen am archenteron Daach endoderm vill op BMS453 behandelen, oder MO1 Sprëtz (Figebam. 6A, B). Zesumme, proposéiere dës Donnéeën, déi RA an Ndrg1a géint Wnt /β-catenin sécher am Xenopus VerfÜgung archenteron Daach endoderm Zellen. VerfÜgung Fir Test wann RA, Ndrg1a, an Wnt /β-catenin sécher sinn System vun der selwechter CASCADE Hausnummeren Bauchspaicheldrüs, esophagus, Mo, an Ausléiser bestëmmen an Kontrollfunktioun, mir Co-heijen ndrg1a VerfÜgung MO1 mat GR-ΔNTcf3, eng dominant negativ Form vun Tcf3 Method mat der Hormon-verbindlech Domän vun der glucocorticoid receptor fräie Wnt /β-catenin sécher op dexamethasone Aféierungs- [56] zu géint. Eis Daten weg datt repressing Wnt /β-catenin sécher gerett ndrg1a VerfÜgung knockdown phenotype (Figebam. 7A, B). Ectopic Aktivatioun vun nkx2 VerfÜgung. 1 VerfÜgung (Figebam. 7B44, 45), sox2 VerfÜgung (Figebam. 7A19, 20 an B24, 25), an foxa1 VerfÜgung (Figebam. 7B14, 15), mat engem Faktor forkhead Transkriptiouns Marquage Mo Ausléiser, an proctodaeum [44], ass mat de Verloscht vun soll darmin VerfÜgung Ausdrock (Figebam. 7A24, 25, 7B29, 30 upon) Sprëtz vun 0,25 NG vun GR-ΔNTcf3 mRNA. An Linn mat der leschter Etude [22], héich Dosis (0,8 NG) vun GR-ΔNTcf3 mRNA ass néideg ectopic Ausdrock vun pdx1 VerfÜgung an zu induce for1 VerfÜgung, eng Liewer spezifesch Bewaacher Gentherapie [ ,,,0],22], [57], an Xenopus VerfÜgung embryonal (Donnéeën net gewisen). VerfÜgung an all d'Accord mat der éischter Etude [22], Aktivatioun vun kanonesche Wnt sécher am Xenopus Atf3, engem Putative Wnt /β- catenin Target Gene vun Xenopus VerfÜgung embryonal, bremst speziell Xenopus VerfÜgung Lëtzebuergesch, Oesophagus, Mo, an VerfÜgung Aduodenum Antrach Et war dës déi ATF3, eng Zilscheif Wnt /β-catenin Gene zu Kriibs Zell Linnen [37], kann entweder transcriptionally géint Pdx1 VerfÜgung Ausdrock [59] oder kierperlech mat PDX1 zesummekomm PDX1 mediated transactivation zu engem murine β-Zell Linn [60] ze blockéieren. Während Xenopus VerfÜgung embryogenesis, atf3 VerfÜgung kaum vum ganze Bierg vun situ hybridization nogewise ass (Figebam. S4). RT-Hinnen alleguer Analyse uginn dass atf3 VerfÜgung Ausdrock an-gereegelt gouf op ndrg1a VerfÜgung knockdown oder β-catenin overexpression zu Xenopus VerfÜgung embryonal (Figebam. 8A). Mir hunn dräi Grondprinzipien Tcf /Lef bindend Siten (5'-A /TA /T CAAAG-3 ") an Xenopus tropicalis atf3 VerfÜgung Promoteur Regioun, déi um -1467 BP (TACAAAG) Geldautomat, -5591 BP ( AACAAAG) a -8889 BP (AACAAAG), bzw.. Zesumme, proposéiere dës Donnéeën, déi atf3 VerfÜgung ass och eng Wnt /β-catenin Zil- Gentherapie zu Xenopus VerfÜgung embryonal. Contreras, overexpression vun Atf3 zu Xenopus VerfÜgung endoderm gefouert Verloscht fir komplett vun Insulin VerfÜgung, ptf1a VerfÜgung / p48 VerfÜgung, pdip VerfÜgung , pdx1 VerfÜgung, foxa1 VerfÜgung, an sox2 VerfÜgung Ausdrock vun der Bauchspaicheldrüs, esophagus, Mo, an Ausléiser, mee hu keng kloer Effekt op darmin VerfÜgung , hhex VerfÜgung, an nkx2 VerfÜgung. 1 VerfÜgung Ausdrock (Figebam. 8B, C), déi fir just identesch ass ndrg1a VerfÜgung knockdown phenotype (Lalumi 4A.). Méi wichteg ass, atf3 VerfÜgung MO, déi eleng minor Auswierkungen op den Ausdrock vun Tandel Genen analyséiert ëmmer, konnt Insulin VerfÜgung, ptf1a VerfÜgung / p48 ze retten ndrg1a VerfÜgung vun RA an der archenteron Daach endoderm Zellen vun Xenopus VerfÜgung neurulae direkt ageschalt ass. Nuclear β-catenin Niveau ass an der archenteron Daach endoderm Zellen Niddereg an et schéngt dass RA ageschalt Ndrg1a represses Wnt /β-catenin sécher an deenen Zellen. Knockdown vun ndrg1a VerfÜgung mimics inhibition vun RA sécher oder Aktivatioun vun Wnt /β-catenin sécher am Xenopus VerfÜgung embryonal mat Respekt un d'Bauchspaicheldrüs, esophagus, Mo, an Ausléiser Entwécklung, wat fir eng féiert bal komplett Verloscht vun der Antrach vun deene Uergel primordia. Outil Wnt /β-catenin sécher kann retten ndrg1a VerfÜgung knockdown phenotype. Sou, koordinéiert Ndrg1a RA an Wnt /β-catenin sécher an der Antrach vun Xenopus VerfÜgung Bauchspaicheldrüs, esophagus, Mo, an Ausléiser. VerfÜgung ndrg1a VerfÜgung vläicht e Spezifësch context ginn Gene fir däischtere Lëtzebuergesch, Oesophagus, Mo, an Ausléiser Etüd vun Xenopus VerfÜgung Neurulae VerfÜgung puer Studien hunn beschriwwen microarray baséiert Kontroll vun RA responsiven Genen vun Xenopus VerfÜgung [61] oder zebrafish [17], [18], [62] embryonal. Benotzt microarray a Kombinatioun mat ganz hannen am situ hybridization, mir kënnen sech Daach endoderm spezifesch Gentherapie z'identifizéieren archenteron ndrg1a. VerfÜgung huet A kruzial Hoerfaarw staining baséiert Schicksal androën Etude dass archenteron Daach endoderm Zellen dës spéider Lut ginn Bauchspaicheldrüs zu däischtere , esophagus, Mo, an Ausléiser [5]. Shirin VerfÜgung ebenfalls Xenopus VerfÜgung archenteron Daach endoderm ausgedréckt ginn, mä an der Tëschenzäit ass et och zu mesoderm an ectoderm ausgedréckt [63]. fetuinish VerfÜgung speziell Spuren der archenteron Daach endoderm zu Xenopus VerfÜgung fréi neurulae, mä spéider weist et Ausdrock vun Liewer an Daarm mat keen Ausdrock vun Bauchspaicheldrüs, esophagus, Mo, an Ausléiser [35]. Nëmmen ndrg1a VerfÜgung weist konsequent Ausdrock fréi an der archenteron Daach endoderm a spéider zu Bauchspaicheldrüs, esophagus, Mo, an Ausléiser. Mir spekuléieren, datt ndrg1a VerfÜgung kann wéi e spezifeschen däischtere Bauchspaicheldrüs déngen, esophagus, Mo, an Ausléiser Virleefer Bewaacher Gentherapie zu Xenopus VerfÜgung, déi genetesch antike nogezunn Studien ubelaangt gin bleift. VerfÜgung Ndrg1a ass néideg fir Xenopus VerfÜgung Lëtzebuergesch, Oesophagus, Mo, an Ausléiser Antrach VerfÜgung Early endodermal Ausdrock vun cyp26a1 VerfÜgung a cdx4 VerfÜgung zu zebrafish embryonal schéngt RA sécher aus mesoderm zu Krise anterior an posterior Grenze vun pancreatic Territoire ze setzen respektiv [17], [64]. ndrg1a VerfÜgung ass déi éischt Gentherapie identifizéiert dass direkt vun RA fréi am Xenopus VerfÜgung archenteron Daach endoderm Zellen ageschalt ass an et mediates sécher RA zu positiv Zellen Muster endoderm an Bauchspaicheldrüs, esophagus, Mo, an Ausléiser . Béid MO baséiert knockdown vun ndrg1a VerfÜgung an TALEN mediated Stéierungen ndrg1a VerfÜgung bewisen, datt d'Ndrg1a Aktivitéit am Xenopus VerfÜgung endoderm patterning ass onverzichtbar, déi net zu observéiert gouf Ndrg1 VerfÜgung Knockout Mais [32], [33], [34]. Eng Erklärung fir dës Ënnerscheeder ass, datt de wesentleche Roll vun Ndrg1a zu Xenopus VerfÜgung endodermal patterning net zu Mamendéieren conserved ass. Alternativ, an Maus gemellt kee endodermal Uergel Mängel Ndrg1 VerfÜgung Gentherapie Studien gezielt kéint ginn wéinst leaky Ausdrock vun NDRG1 zu Ndrg1 VerfÜgung erhéijen Mais [32], [33] oder wéinst funktionell Redundanz ënnert NDRG Familljememberen 1-4 zu Mais. VerfÜgung Eng Rei vu Studien weisen, dass overexpression vun NDRG1 zu Kriibs Zell Linnen opfällegen phenotypes generéiert [27]. Et ass am Rapport och dass overexpression vun Ndrg1a zu Xenopus VerfÜgung embryonal Resultater zu engem reduzéierten pronephros an desorganiséiert somites [36]. Aus Grënn onbekannt, konnt mer net ectopic Ndrg1a zu Funktioun kréien an Xenopus VerfÜgung embryonal. Et soll dodrun ginn, datt e gekierzt Versioun vun Ndrg1a mat den éischten 48 Aminosaier Saieren vun der N-Uschloss vermësst fir béid mRNA Sprëtzen an MO Design an der éischter Etude benotzt gouf [36]. Mir hu probéiert och mRNA Sprëtz mat dëser kuerzer Versioun an der heijen embryonal sech gesond och um héich Dosis (4 NG vun mRNA). Mir konnten net retten eis ndrg1a VerfÜgung MO phenotype mat dësem gekierzt Versioun vun Ndrg1a entweder. Gudder Lescht, déi staark endodermal Ausdrock vun ndrg1a VerfÜgung vun eiser Etude illustréiert an duerch Costa et al beschriwwen. [35] war zu där Etude net nogewise [36]. VerfÜgung Ndrg1a Mediated Crosstalk tëscht RA an Wnt /β-catenin sécher ass limitéiert op Xenopus VerfÜgung Lëtzebuergesch, Oesophagus, Mo, an Ausléiser administrativ Zellen VerfÜgung an embryogenesis, Zellen muss permanent méi sécher Weeër intégréieren hir Frae Schicksal op der rietser Zäit a Plaz ze erreechen. Déi integréiert Roll vun FGF, RA, an Wnt Weeër sécher haett primordium an Détailer an Kontrollfunktioun Wuesstem haett Keim zu Mais definéiert [65] ass conserved zu Xenopus VerfÜgung [66]. An Mais, schéngt et, datt RA represses Wnt neien Dkk1 VerfÜgung Ausdrock am mèi haett endoderm vun E8.5-E9.5 embryonal, also kanonesche Wnt sécher mediated hin Antrach erlaabt [65]. RA an Wnt Weeër duerch RA afgerappt Zil- Genen verbonne sinn osr1 VerfÜgung a osr2 VerfÜgung Éierekapitular fin Entwécklung vun zebrafish ze erhalen [67]. Zesumme, léist dëse Fäll engem Fall, datt RA Wnt /β-catenin sécher ënnerstëtzt. VerfÜgung Hei, déi mir iwwerzeegend Beweiser fir d'éischte Kéier ze weisen, fir eist Wëssen, datt RA endodermal Ausdrock vun Ndrg1a represses Wnt /β ageschalt -catenin sécher an doduercher verëffentlecht Negatioun Aktivitéit vun Wnt /β-catenin sécher op Xenopus VerfÜgung Bauchspaicheldrüs, esophagus, Mo, an Ausléiser Équipe, déi net zu der Liewer an haett Antrach zielt. An Ënnerstëtzung vun eisem fannen, overexpression vun engem secreted Wnt neien Sfrp5 kann fir RA am Respekt zu den Aféierungs- vun exocrine Bauchspaicheldrüs dat am VegT Auswiesselspiller heijen Déier Mutzen op Xenopus VerfÜgung [24]. D'demokratesch gefouert Auswierkunge vun fréi ectopic Wnt /β-catenin sécher Aktivéierung op der Liewer an Opstellung haett Keim an dëser Etude, wéi och an enger éischter Etude gesinn [22] ass net widderspréchlech zu der positiv Roll vu kanonesche Wnt sécher doran Liewer an Hëftprothes Entwécklung, déi observéiert huet wéi Wnt /β-catenin sécher an ausgeléist gouf Xenopus VerfÜgung Embryo'en vun Etappen 30 bis 42 fir Liewer an aus Etappen 28 bis 35 fir haett, bzw. [22], [66]. Der Repressioun Effet vun RA op Xenopus VerfÜgung blastula Wnt /β-catenin sécher [26] ass onwahrscheinlech vun Ndrg1a, mediated zënter ndrg1a VerfÜgung ass net maternally gëtt a seng zygotic Ausdrock ass net virun neurulation ageschalt wéi déi zwee ganz verroden, hannen am situ hybridization an RT-Hinnen alleguer analyséiert (Figebam. 1A, [36] an Daten net gewisen). Et bleift ze propagéieren gin wann Ndrg1a mat Lrp6 so kann a wéi Ndrg1a represses Wnt /β-catenin sécher am Aféierung VerfÜgung
a Foxa2 VerfÜgung an der posterior Ausdrock vun der caudal Typ homeobox VerfÜgung Genen em <> Cdx1 VerfÜgung, 2 VerfÜgung, an 4 VerfÜgung [1], [2], [3]. Kooperativ, gëtt de endoderm klammen bis de epithelia vun der Otmungsproblemer an gastrointestinal tracts an hirem Organer, wéi d'Schild, Longen, Bauchspaicheldrüs, Liewer an Gal BBC. D'antike fir Wierbeldéieren endodermal organogenesis nogezunn ass haaptsächlech hänkt op der onëmgänglecher Hoerfaarw Etikette-baséiert Schicksal androën Studien [4], [5], [6], [7], [8]. Déi fréi Ausdrock vun hhex VerfÜgung a vpp1 VerfÜgung zu Xenopus VerfÜgung embryonal d'Etüd vun der Liewer an Friessfeinde Bauchspaicheldrüs ze maachen kéint déngen, bzw. [3]. Esou wäit, et sin e puer spezifesch Bewaacher Genen gemellt, déi Etüd fir däischtere Bauchspaicheldrüs, esophagus, Mo, an Ausléiser während gastrulation an neurulation demarcate kann. VerfÜgung
Resultater VerfÜgung
embryonal mat enger RA neien behandelt, BMS453, virun Enn vun gastrulation ugewisen spezifesch Verloscht vun den däischtere Bauchspaicheldrüs an Deel vun Friessfeinde Bauchspaicheldrüs, Mo, an Ausléiser [10]. Fir RA reegelen Genen vun endoderm identifizéieren, hu mir éischt microarray Analyse vergläichen Gentherapie Ausdrock Niveau tëscht Wildwest-Typ an RA-erhéijen embryonal, déi mat BMS453 um Ufank vun gastrulation behandelt goufen a sech op Etappen 12 gesammelt, 23, an 34, respektiv . D'Daten kritt weg datt Genen verwandelt-reegelen méi wéi 2-fantastesch op dräi verschiddenen Etappen awer limitéiert iwwerlageren (Figebam. S1 an Table S1). An embryonal um Etapp 23 gesammelt, sinn et 138 Genen datt verwandelt-reglementéiert waren méi wéi 2-fantastesch op BMS453 Behandlung. Laut der disponibel Informatiounen "138 Genen strukturell a funktionell an der NCBI Datebank, huet mer Prioritéite Faktoren, kinases zu Transkriptiouns, RNS bindend Proteinen, transmembrane Proteinen, souwéi Genen endodermal Ausdrock weist, a konnt domat 9 Genen (Table S1) ze analyséieren weider hir embryonal Ausdrock Musteren vum ganze Bierg vun situ hybridization. Ee vun hinnen, ndrg1a VerfÜgung, zougedréckt spezifesch Ausdrock fréi an der archenteron Daach endoderm (Figebam. 1B), déi net vun der leschter Etude nogewise gouf, viraussiichtlech wéinst genuch Empfindlechkeet vun der ganzer Bierg zu situ hybridization technique zu virdrun Publikatiounen [35], [36]. Am Accord mat de Rapport vun de Laboratoire Zorn [35], eisen Daten weg datt ndrg1a VerfÜgung gët sech an däischtere endoderm um fréie Schwäif Keim Etapp vun der Entwécklung (Figebam. 1c, D, E, G) fonnt. Um Enn Schwäif Keim an Kauzekapp Etappe vun der Entwécklung, nieft hiren Ausdrock an Aen, proctodaeum Etüd, a pronephros, ndrg1a VerfÜgung zougedréckt spezifesch Ausdrock vun der pharynx, esophagus, Bauchspaicheldrüs, Mo, an Ausléiser (Figebam. 1E , F, H, I, J). Mir waren knapp z'entdecken ndrg1a VerfÜgung Ausdrock an der Liewer [35]. Amplaz, eng kloer ndrg1a VerfÜgung Signal war an Entwécklungslänner Gal BBC observéiert (Figebam. 1I, J). VerfÜgung
morphants, mä Spure vun ptf1a VerfÜgung / p48 VerfÜgung, pdip VerfÜgung, an pdx1 VerfÜgung Ausdrock vun der Friessfeinde pancreatic verzauberen sech zu BMS453 haten behandelt embryonal (Figebam. 4A an [10]). D'morphological phenotype vun ndrg1a VerfÜgung knockdown gläicht och déi vun BMS453 Behandlung. Embryonal mat MO1 oder MO2 heijen wossten normal virun Etapp 40 an dono schwéieren GUT féieren mat engem Verloscht vun GUT coiling an Opstellung vun edema (Figebam. 4B an [10]) ugewisen. Als MO1 an MO2 identesch phenotypes verursaacht, déi mir MO1 fir de Rescht Studien gräift. Zesumme, proposéiere dës Donnéeën, déi RA an Ndrg1a an der selwechter genetesch Hierarchie sinn an Kontrollfunktioun Bauchspaicheldrüs, esophagus, Mo, an Ausléiser Entwécklung. VerfÜgung
endoderm vun vegetal Sprëtz vun 0,5 NG vun GR-LEFΔN-βCTA mRNA Lef1 DNA-verbindlech Domain an de β-catenin transactivation public [58] wou an 4 blastomeres vun der 4-Zell Etapp embryonal schéinen identesch phenotype déitlech Ndrg1a knockdown am Kontext vun Bauchspaicheldrüs, esophagus, Mo, an Ausléiser Entwécklung (Figebam. 7A, B). D'Ophiewe Effet vun Wnt /β-catenin sécher op d'Équipe vun Liewer (Figebam. 7A27, 32, B32, 37) an haett (Figebam. 7A37, B42), war net zu Ndrg1a morphants gesinn, suggeréiert datt de fréie Repressioun vun Wnt /β-catenin wéi sécher an den Territoire vun Liewer an haett administrativ endoderm ass duerch Facteuren aner ausgeléist Ndrg1a wéi RA higeriicht. Geholl zesummen, dës Donnéeën hindeit, datt Wnt /β-catenin sécher vun Ndrg1a afgerappt ass an ass repressed vun Ndrg1a der Antrach vun Bauchspaicheldrüs, esophagus, Mo, an Ausléiser ze erlaben. VerfÜgung
, pdip VerfÜgung, foxa1 VerfÜgung, an sox2 VerfÜgung Ausdrock inhibited vun ndrg1a VerfÜgung MO (Figebam. 9A, B). Doriwwer eraus, war Pdx1 gebass Atf3 overexpression oder Ndrg1a knockdown phenotype mat Respekt ze ptf1a VerfÜgung / p48 VerfÜgung, pdip VerfÜgung, foxa1 VerfÜgung, an ze retten sox2 VerfÜgung Ausdrock ausser Insulin VerfÜgung (Figebam. 9A, B). Et ass bekannt, datt Pdx1 weder néideg ass nach genuch fir den Aktivéierungscode vu fréi Insulin VerfÜgung Ausdrock vun Xenopus VerfÜgung embryonal [44]. Ofzeschafen, proposéiere eis Daten eng epistasis datt RA ageschalt Ndrg1a Wnt /β-catenin sécher represses an doduercher verëffentlecht Negatioun Aktivitéit vun Wnt /β-catenin Aktivitéiten sécher, déi deelweis vun Atf3, op Bauchspaicheldrüs, esophagus, Mo, an Ausléiser mediated kann Équipe. VerfÜgung Diskussioun VerfÜgung