Extracto
¿Cómo las células integrar múltiples señales de modelado para lograr la regionalización endodermo temprana sigue siendo en gran parte desconocido. Entre la gastrulación y neurulación, se requiere que el ácido retinoico (RA) de señalización, mientras que la señalización de Wnt /β-catenina tiene que ser reprimido para la especificación del páncreas, esófago, estómago, duodeno y primordios en Xenopus Visto:. Zhang T , Guo X, y Chen (2013) activado por ácido retinoico Ndrg1a reprime Wnt /β-catenina señalización para permitir Xenopus Editor: Michael Schubert, Laboratorio de Biología du Développement de Villefranche-sur-Mer, Francia | Recibido: 29 Diciembre, 2012; Aceptado: 22 de abril de 2013; Publicado: 31 de mayo de 2013 Derechos de Autor © 2013 Zhang et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan Financiación:. Este trabajo recibió el apoyo de los fondos del Programa Nacional de Investigación básica de China (2009CB941200) y la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (31271554). Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia Introducción La regionalización del endodermo se produce simultáneamente con su formación durante la gastrulación. Hacia el final de la gastrulación, se han establecido los dominios amplia antero-posterior (AP) dentro del endodermo, como se refleja en la expresión anterior de HHEX El ácido retinoico (RA) de señalización desempeña un papel conservado en el patrón AP de vertebrado endodermo tan pronto como la gastrulación [9]. Los estudios en ranas, aves y ratones indican que la señalización de la AR se requiere específicamente para la formación de páncreas dorsal, el esófago, el estómago y los primordios duodeno [10], [11], [12], [13], [14], [15]. En el pez cebra, se requiere RA de señalización antes de que el final de la gastrulación para el desarrollo inicial de ambos hepática y endodermo pancreático [16]. RA activa la expresión de la enzima degradadora de RA cyp26a1 señalización canónica de Wnt también juega un papel importante en el patrón de AP endodermo vertebrado. En ratones, el compuesto de final de TCF1 N-myc aguas abajo regulado gen 1 (NDRG1) pertenece a la proteína NDRG familiar que consta de cuatro miembros, NDRG1-4, que se caracterizan por contener un dominio NDR y una α /β hidrolasa veces motivo [27]. NDRG1 en este estudio, hemos utilizado microarrays de ADN en combinación con todo el montaje hibridación in situ para detectar RA genes regulados en Xenopus resultados ndrg1a con respecto a la organogénesis endodérmico, Xenopus a fin de verificar los datos de microarrays, se analizaron ndrg1a Para hacer frente a si la AR puede regular directamente ndrg1a Para generar ndrg1a para probar si Ndrg1a puede mediar en la señalización de la AR funcionalmente para especificar endodermo del intestino anterior, que inyecta MO1, MO2, o de Como por separado en la parte vegetal de los cuatro blastómeros de embriones en estado de 4 células, recogido los embriones en las etapas 36 y 42, y se analizaron con un panel de genes marcadores endodérmico. Ptf1a Los datos obtenidos indican que MO1 y MO2 igualmente abolidas de manera eficiente La inyección de incluso 4 ng de ndrg1a Mecánica, NDRG1 pueden interactuar con LRP6 receptor de Wnt y bloquear la señalización de Wnt /β-catenina en líneas celulares de cáncer [37]. Para preguntar si la AR activa Ndrg1a puede reprimir la señalización /β-catenina Wnt en Xenopus Para probar si la AR, Ndrg1a, y la señalización de Wnt /β-catenina son unido funcionalmente de la misma cascada en el control de páncreas, esófago, estómago, duodeno y en la memoria, que co-inyectaron ndrg1a en pleno acuerdo con el estudio anterior [22], la activación de la señalización canónica de Wnt en Xenopus se demostró que ATF3, un objetivo /β-catenina vía de genes en líneas celulares de cáncer [37], o bien puede reprimir transcripcionalmente Pdx1 Discusión ndrg1a Varios estudios han descrito cribado basado en microarrays de genes de respuesta de RA en Xenopus Ndrg1a es indispensable para Xenopus de cyp26a1 Un número de estudios indican que la sobreexpresión de NDRG1 en líneas celulares de cáncer genera fenotipos visibles [27]. También se informa de que la sobreexpresión de Ndrg1a en Xenopus Durante la embriogénesis, las células deben integrar constantemente múltiples vías de señalización para alcanzar su destino distinta en el momento y lugar adecuados. La función integrada de FGF, RA, y Wnt vías de señalización en la especificación de primordio de pulmón y el control del crecimiento yema pulmonar se define en ratones [65] se conserva en Xenopus A continuación, nos proporcionan pruebas convincentes que muestra por primera vez, a nuestro entender, que la AR activa la expresión de Ndrg1a endodérmico reprime Wnt /β catenina de señalización y por lo tanto libera la actividad de supresión de Wnt /β-catenina señalización en Xenopus
embriones. En un intento por detectar RA genes regulados en Xenopus
endodermo, hemos identificado un gen diana RA directa, N-myc aguas abajo regulado 1a gen ( ndrg1a
) que mostró expresión temprana en el techo archenteron endodermo y tarde en el desarrollo del páncreas, esófago, el estómago y el duodeno. Tanto mediada desmontables antisentido morfolino oligonucleótidos de ndrg1a
en Xenopus laevis
y las nucleasas de transcripción activador de efectores (TALEN) de interrupción mediada por NDRG1
en Xenopus tropicalis
demostrar que al igual que la señalización de la AR, Ndrg1a se requiere específicamente para la especificación de Xenopus
páncreas, esófago, estómago y duodeno primordios. los datos sugieren que la inmunofluorescencia activado por RA Ndrg1a suprime la señalización /β-catenina Wnt en Xenopus
archenteron células del endodermo techo. El bloqueo de la señalización /β-catenina vía rescató Ndrg1a desmontables fenotipo. Además, la sobreexpresión del gen diana Wnt /β-catenina putativo ATF3 phenocopied desmontables de Ndrg1a o la inhibición de la señalización de RA, mientras que ATF3 caída puede rescatar Ndrg1a desmontables fenotipo. Por último, el páncreas /estómago /duodeno factor de transcripción Pdx1 fue capaz de rescatar la sobreexpresión o ATF3 Ndrg1a desmontables fenotipo. Juntos, llegamos a la conclusión de que la AR activa Ndrg1a reprime Wnt /señalización para permitir la especificación de páncreas, esófago, estómago células progenitoras duodeno β-catenina, y en Xenopus embriones
páncreas, esófago, estómago y duodeno Especificación. PLoS ONE 8 (5): e65058. doi: 10.1371 /journal.pone.0065058
, VPP1
, Sox2
y Foxa2
y la expresión posterior de la tipo de caudal homeobox genes
CDX1
, 2
, y 4
[1], [2], [3]. Finalmente, el endodermo da lugar a los epitelios de las vías respiratorias y gastrointestinales y de sus órganos asociados, tales como el tiroides, pulmones, páncreas, hígado y la vesícula biliar. El linaje endodérmico el seguimiento para la organogénesis de los vertebrados depende en gran medida de los estudios de mapeo de destino basados en el etiquetado colorante vital [4], [5], [6], [7], [8]. La expresión temprana de HHEX
y VPP1 Hoteles en Xenopus
embriones podrían servir para reflejar los precursores para el páncreas hígado y ventral, respectivamente [3]. Hasta el momento, hay pocos genes marcadores específicos reportados, los cuales pueden demarcar precursores de páncreas dorsal, el esófago, el estómago y el duodeno durante la gastrulación y neurulación.
en el endodermo tronco anterior a su vez modula la señalización de RA y define el límite anterior del campo de páncreas en embriones de pez cebra [17]. mnx1
es identificado como un gen aguas abajo RA que promueve la formación de las células beta en el páncreas endocrino desarrollo de pez cebra [18], mientras que aguas abajo del gen AR exdpf
regula el pescado desarrollo exocrina del páncreas [19]. Los genes diana endodérmico RA que median las primeras actividades de la señalización de RA para especificar el páncreas, esófago, estómago, duodeno y Anlagen adecuada quedan aún por identificar.
y TCF4
ha llevado a una transformación anterior del duodeno en el estómago con poca o ninguna delgado desarrollado [20]. El factor de transcripción mesenquimales estómago secreción Barx1 mediada por Wnt de la Antagonistas SFRP1 y SFRP2 se requiere para inhibir endodérmico señalización Wnt /β-catenina y por lo tanto para permitir la especificación del epitelio del estómago [21]. Consistentemente, en Xenopus
, la señalización /β-catenina Wnt se deben reprimir en endodermo anterior entre gástrula y etapas somite tempranas de desarrollo para permitir la formación del hígado, así como el páncreas, el estómago y el duodeno primordios [ ,,,0],22], [23]. El antagonista Wnt secretada SFRP5
ha expresado en el endodermo del intestino anterior ventral coordina la especificación de hígado y páncreas ventral antagonizando tanto canónica y no canónica de señalización Wnt [24], [25]. Además, se ha demostrado que la AR puede reprimir Xenopus
blástula señalización Wnt /β-catenina [26].
es un gen AR-inducible en diversas líneas celulares y pacientes humanos [28], [29], [30], [31]. NDRG1
deficiencia en ratones conduce a la disfunción de las células de Schwann, lo que sugiere que NDRG1 es esencial para el mantenimiento de las vainas de mielina en los nervios periféricos [32], [33]. NDRG1
-null ratones también mostraron deterioro en la maduración de los mastocitos y degranulación y atenúa las respuestas alérgicas [34]. En Xenopus
, NDRG1
fue identificado como un gen enriquecida para la expresión en endodermo y pronefros [35], [36]. Un estudio reciente utilizando líneas celulares de cáncer revela que el gen supresor de la metástasis tumoral, NDRG1, reprime la señalización de Wnt /β-catenina mediante la interacción directa con el receptor de Wnt, LRP6, provocando en consecuencia la supresión de gen diana Wnt /β-catenina, ATF3
expresión [37]. La activación de factor de transcripción 3 (ATF3) pertenece a la /AMP cíclico de la familia de unión al elemento de respuesta ATF de factores de transcripción básicos de cremallera de leucina. Es un gen de respuesta adaptativa y puede actuar tanto como un activador transcripcional o represor en función del tipo de célula y de estímulo [38], [39], [40]. ratones knockout ATF3
desarrollaron normalmente y no mostraron ningún fenotipos discernibles en condiciones normales [41]. En contraste, los ratones transgénicos que expresan ATF3 en el hígado, el epitelio ductal pancreático, o de las células ß pancreáticas llevaron a disfunción hepática, defectos en el desarrollo del páncreas endocrino, o disfunción de los islotes, respectivamente [41], [42], [43].
endodermo. ndrg1a
fue identificado y verificado que se ha activado directamente por la AR en el endodermo techo archenteron y tarde en el desarrollo del páncreas, esófago, el estómago y el duodeno. Proporcionamos evidencias que implican que activado-RA Ndrg1a reprime la señalización /β-catenina Wnt en las células del endodermo techo archenteron y por consiguiente libera el efecto inhibidor de las actividades de señalización /β-catenina Wnt en la formación de páncreas, esófago, estómago y duodeno.
, un gen regulado por la AR, se expresa temprano en el tejado arquenteron endodérmico
embriones tratados con un antagonista de RA, BMS453, antes del final de la gastrulación muestran pérdida específica del páncreas dorsal y parte de páncreas ventral, el estómago y el duodeno [10]. Para identificar la AR genes regulados en el endodermo, hicimos un primer análisis de microarrays se comparan los niveles de expresión génica entre los de tipo salvaje y embriones RA-deficientes, que fueron tratados con BMS453 al comienzo de la gastrulación y se recogieron en las etapas 12, 23 y 34, respectivamente . Los datos obtenidos indican que los genes regulados hacia abajo más de 2 veces en tres etapas diferentes mostraron limitada superposición (Fig. S1 y el cuadro S1). En los embriones recogidos en la etapa 23, hay 138 genes que son regulados hacia abajo más de 2 veces en el tratamiento BMS453. De acuerdo a la información estructural y funcional de los 138 genes 'disponible en la base de datos NCBI, dimos prioridades a factores de transcripción, quinasas, RNA proteínas, proteínas transmembrana, así como genes de unión que muestra la expresión endodérmico, y por lo tanto elegir 9 genes (Tabla S1) a la evaluación de sus patrones de expresión de embriones por todo el montaje hibridación in situ. Uno de ellos, ndrg1a
, mostró expresión específica temprana en el endodermo techo archenteron (Fig. 1B), que no fue detectada por estudios previos, probablemente debido a la insuficiente sensibilidad de todo el montaje en la técnica de hibridación in situ en los anteriores publicaciones [35], [36]. De acuerdo con el informe del laboratorio Zorn [35], nuestros datos indican que ndrg1a
se detectaron transcritos en endodermo dorsal en la etapa de yema de cola temprana de desarrollo (Fig. 1C, D, E, G). A finales de yema de cola de renacuajo y etapas de desarrollo, además de su expresión en los ojos, precursores proctodaeum, y pronefros, ndrg1a
mostró una expresión específica en la faringe, esófago, páncreas, estómago y duodeno (fig. 1E , F, H, I, J). No se pudo detectar ndrg1a
expresión en el hígado [35]. En su lugar, una clara ndrg1a
se observó señal en el desarrollo de la vesícula biliar (Fig. 1I, J).
ndrg1a
expresión en células arquenteron Techo endodermo está activada directamente por RA
expresión en embriones tratados con AR BMS453 y por todo el montaje hibridación in situ. Tras el tratamiento BMS453, sin ndrg1a
transcripciones se detectaron en las células del endodermo archenteron techo (Fig. 2E) y sólo trazas de ndrg1a
ARNm se mantuvo en endodermo dorsal de la etapa 22 embriones (Fig. 2H) . Más tarde, ndrg1a
expresión fue completamente reprimida en el páncreas dorsal, el esófago, el estómago y el duodeno y se inhibió parcialmente en el páncreas ventral (Fig. 2 K, N). Por el contrario, otro antagonista RA BMS493 puede inhibir sólo parcialmente ndrg1a
expresión en el páncreas, esófago, estómago, duodeno y [11]. Además, ndrg1a
expresión en los túbulos proximales pronéfricos fue también severamente inhibida por BMS453 (Fig. 2 N). Cabe señalar que ndrg1a
expresión en el ojo, cerebro, vesícula biliar y se vio menos afectada por tratamiento BMS453 (Fig. 2K, N). Es un fenómeno común que los genes que expresan en el páncreas, así como en los ojos y el sistema nervioso central, tales como ndrg1a
, esr10
, NeuroD
, y Ptf1a /p48
, sino únicamente su expresión pancreático es inhibida por tratamiento BMS453 (Fig. 2 K, N y [10]). Por el contrario, la aplicación de RA a Xenopus embriones
inducida expansión significativa de ndrg1a
dominios de expresión en el techo archenteron endodermo (Fig. 2F), endodermo dorsal (Fig. 2I), páncreas, esófago, estómago y el duodeno (Fig. 2L, O). Por lo tanto, la señalización de la AR es necesaria y suficiente para activar ndrg1a
expresión en las células del endodermo del techo archenteron.
expresión, nos trataron Xenopus
embriones con cicloheximida (CHX), un inhibidor de la síntesis de proteínas, 15 minutos antes de la aplicación de la AR. Nuestros datos indican que la expansión inducida por RA de ndrg1a
expresión en endodermo techo archenteron no se vio afectada por CHX (Fig. 2S), apoya la idea de que la AR activa directamente ndrg1a
expresión en archenteron endodermo techo Células. De hecho, un elemento de respuesta a RA fue identificado en Xenopus tropicalis NDRG1
promotor de la región (AGTTCAacAGTTCA -1496bp a -1509bp). A diferencia de Xenopus laevis
, el diploide Xenopus tropicalis
tiene un NDRG1
gen.
ndrg1a
caída en Xenopus Los embriones
Fenocopias Tratamiento BMS453
morphants, que compró dos ndrg1a
antisentido morpholino oligos (MO) de Gene Herramientas. Uno de ellos cubre el codón ATG de inicio (MO1) y el otro (MO2) localiza en la región no traducida 5 'del ndrg1a
ADNc. Su eficacia se puso a prueba mediante un ensayo in vivo, en el que la secuencia de codificación GFP se fusionó al sitio de unión de un MO y el ARNm resultante se co-inyectados con el MO en Xenopus
ha fertilizado los huevos para evaluar traducción GFP en vivo en embriones . Tanto MO1 (Fig. 3B) y MO2 (Fig. 3F) fueron capaces de inhibir eficazmente la traducción de marco de lectura abierto GFP tras la MO1 correspondiente o MO2 secuencias, respectivamente vinculante, mientras que el control MO (Como) no lo hizo (Fig. 3A, E).
/ p48
es específico para las células precursoras pancreáticas durante la embriogénesis temprana y más tarde se restringe al páncreas exocrino [10], [44], [45]. Pdx1
específicamente demarca el desarrollo de páncreas, el estómago y el duodeno [46].
la insulina, un gen marcador endocrino, se expresa exclusivamente en el dorsal brote pancreático de Xenopus
embriones en estadio de yema de cola [47], [48]. PDIP
es un páncreas exocrinas gen marcador específico [49]. sox2
marca el esófago, el estómago y una porción anterior del duodeno [50]. Darmin
es un gen marcador específico delgado [35], [51]. HHEX
sirve como un hígado y la tiroides marcador de genes [52]. nkx2
. 1 | marcas en desarrollo pulmón y tiroides [53].
la insulina, Ptf1a
/ p48
, PDIP
, Pdx1
, y sox2
expresión en el páncreas, esófago, estómago y duodeno, pero tuvo influencia menor en Darmin
, HHEX
, y nkx2
. 1 | expresión en el intestino, hígado, tiroides y pulmón, que es muy similar al efecto de BMS453 (Fig. 4A y [10]). La única diferencia es que no hay expresión de páncreas ventral de Ptf1a
/ p48
, PDIP
, o Pdx1
se observó en ndrg1a
morphants, pero los rastros de Ptf1a
/ p48
, PDIP
, y Pdx1
expresión en las yemas de páncreas ventral se mantuvieron en BMS453 tratada embriones (Fig. 4A y [10]). El fenotipo morfológico de ndrg1a
caída también se asemeja a la del tratamiento BMS453. Los embriones inyectados con MO1 o MO2 parecían normales antes de la etapa 40 y, posteriormente, muestran malformaciones intestinales graves con una pérdida de bobinado intestino y la formación de edema (Fig. 4B y [10]). Como MO1 y MO2 causados fenotipos idénticos, se utilizó MO1 para llevar a cabo los estudios de descanso. En conjunto, estos datos sugieren que la RA y Ndrg1a están en la misma jerarquía genética en el control de páncreas, esófago, estómago, duodeno y el desarrollo.
ARNm en Xenopus
embriones causados ni morfológicas anormalidad ni expresión alteraciones de los genes marcadores analizados (Fig. S2A, B). Co-inyección de ndrg1a
mRNA con sus OMs no pudo rescatar el fenotipo MO o bien (datos no mostrados). Parece que no fuimos capaces de obtener proteínas Ndrg1a funcional en Xenopus
embriones a través del protocolo de inyección de ARNm rutina que funcione para la mayoría, si no todos los otros genes analizados. Una construcción Ndrg1a-GFP demostró que la proteína se produce génica mediada TALEN (Fig. S3) .Hemos establecido recientemente en la orientación Xenopus
[54]. A fin de verificar el fenotipo MO, diseñamos NDRG1
Talens dentro del tercer exón del Xenopus tropicalis NDRG1
gen (Fig. 5A), lo que provocó de manera eficiente mutaciones somáticas en los loci objetivo (Fig. 5B). Consistente con el fenotipo MO obtenido en Xenopus laevis embriones
, insulina
y Pdx1
expresión estaba severamente inhibida en NDRG1
TALEN ARNm inyectado Xenopus tropicalis
embriones (Fig. 5C), aunque con una menor frecuencia en comparación con el MO inyectado queridos, que sucedieron también a la aplicación de Ptf1a /p48
Talens en nuestro estudio anterior [54]. Un establo aún no se ha establecido NDRG1
nocaut línea de rana. Disecamos 25 ranitas que mostraban el páncreas, el estómago y el duodeno hipoplasia o aplasia aún pero con hígado normal y la vesícula biliar desarrollado (Fig. 5D). Por lo tanto, estos datos confirman la ndrg1a
MO fenotipo obtenido en el Xenopus laevis
.
AR Activado Ndrg1a reprime la señalización Wnt /β-catenina en las células del páncreas para permitir arquenteron Techo endodermo , esófago, estómago, duodeno y especificación
embriones, se compararon los niveles de β-catenina nuclear en ndrg1a
células del endodermo techo archenteron positivos de la etapa 20 embriones que eran sometido a RA, el tratamiento BMS453, o inyección MO1. Inmunolocalización de β-catenina nuclear es un método fiable para caracterizar la actividad de señalización Wnt /β-catenina en Xenopus
embriones [55]. En el área seleccionada del endodermo techo archenteron, unas pocas células mostraron tinción de β-catenina nuclear bajo condiciones normales, que se hizo aún más al menos tratamiento de la AR. En contraste, el número de células positivas β-catenina nuclear en el endodermo techo archenteron aumentó significativamente tras el tratamiento BMS453, o inyección MO1 (6A. Fig, B). En conjunto, estos datos sugieren que la AR y Ndrg1a reprimen la señalización de Wnt /β-catenina en Xenopus
archenteron células del endodermo del techo.
MO1 con GR-ΔNTcf3, una forma dominante negativa de TCF3 fusionado con el dominio de unión a hormonas de la receptor de glucocorticoides que sirve para reprimir la señalización /β-catenina vía tras la inducción con dexametasona [56]. Nuestros datos indican que la represión de la señalización /β-catenina vía rescató ndrg1a
desmontables fenotipo (Fig. 7A, B). la activación ectópica de nkx2
. 1 | (Fig. 7B44, 45), sox2 gratis (Fig. 7A19, 20 y B24, 25), y FoxA1
(Fig. 7B14, 15), una marca de estómago, duodeno, y proctodaeum [44] factor de transcripción forkhead, se correlaciona con la pérdida de Darmin
expresión (Fig. 7A24, 25, 7B29, 30 ) después de la inyección de 0,25 ng de GR-ΔNTcf3 mRNA. De acuerdo con el estudio anterior [22], la dosis más alta (0,8 ng) del GR-ΔNTcf3 ARNm se requiere para inducir la expresión ectópica de Pdx1
y for1
, un hígado marcador específico de genes [ ,,,0],22], [57], en Xenopus
embriones (datos no mostrados).
endodermo por inyección vegetal de 0,5 ng de GR-LEFΔN-βCTA mRNA que contiene el dominio Lef1 de unión a ADN y el dominio de β-catenina transactivación [58] en 4 blastómeros de los embriones en la etapa de 4 células resultaron en fenotipo idéntico causada por Ndrg1a knockdown en el contexto de páncreas, esófago, estómago, duodeno y el desarrollo (Fig. 7A, B). El efecto de supresión de la señalización /β-catenina Wnt en la formación de hígado (Fig. 7A27, 32, B32, 37) y pulmón (Fig. 7A37, B42), no se observó en morphants Ndrg1a, lo que sugiere que la pronta represión de Wnt /señalización de β-catenina en el territorio de hígado y de pulmón endodermo formando es ejecutado por factores distintos de Activación RA Ndrg1a. Tomados en conjunto, estos datos sugieren que la señalización de Wnt /β-catenina está aguas abajo de Ndrg1a y es reprimida por Ndrg1a para permitir la especificación de páncreas, esófago, estómago y el duodeno.
ATF3, un putativo Wnt /β- catenina gen diana en Los embriones de Xenopus
, inhibe específicamente Xenopus
páncreas, esófago, estómago, y Aduodenum Especificación
expresión [59] o físicamente interactuar con PDX1 bloquear PDX1 transactivación mediada en una línea de células β murino [60]. Durante Xenopus
embriogénesis, ATF3
apenas es detectado por todo el montaje hibridación in situ (Fig. S4). RT-PCR análisis indicó que ATF3
expresión es regulada hasta en ndrg1a
desmontables o sobreexpresión β-catenina en Xenopus
embriones (Fig. 8A). Encontramos tres sitios de unión del núcleo Tcf /Lef (5'-A /TA /T CAAAG-3 ') en Xenopus tropicalis ATF3
promotor de la región, que sitúan a -1467 pb (TACAAAG), -5591 pb ( AACAAAG) y -8889 pb (AACAAAG), respectivamente. En conjunto, estos datos sugieren que ATF3
es también un objetivo de genes Wnt /β-catenina en Xenopus
embriones. Sorprendentemente, la sobreexpresión de ATF3 en Xenopus
endodermo llevado a la pérdida completa de
la insulina, Ptf1a
/ p48
, PDIP
, Pdx1
, FoxA1
, y sox2
expresión en el páncreas, esófago, el estómago y el duodeno, pero no tuvo ningún efecto evidente sobre Darmin
, HHEX
, y nkx2
. 1 | expresión (Fig. 8B, C), que es sólo idéntica a ndrg1a
desmontables fenotipo (Fig . 4A). Más importante aún, ATF3
MO, que por sí solo causó efectos menores sobre la expresión de genes marcadores analizados, fue capaz de rescatar a
la insulina, Ptf1a
/ p48
, PDIP
, FoxA1
, y sox2
expresión inhibida por ndrg1a
MO (Fig. 9A, B). Por otra parte, Pdx1 fue capaz de rescatar la sobreexpresión o ATF3 Ndrg1a desmontables fenotipo con respecto al Ptf1a
/ p48
, PDIP
, FoxA1
, y sox2
expresión a excepción de insulina gratis (Fig. 9A, B). Se sabe que Pdx1 no es ni necesaria ni suficiente para la activación de los principios de insulina
expresión en Xenopus
embriones [44]. En conjunto, nuestros datos sugieren una epistasis que la AR activa Ndrg1a reprime la señalización de Wnt /β-catenina y por lo tanto libera la actividad de supresión de Wnt /β-catenina actividades de señalización, que puede estar parcialmente mediada por ATF3, en el páncreas, el esófago, el estómago y el duodeno la formación.
se activa directamente por la AR en las células del endodermo archenteron techo de Xenopus
neurulae. nivel de β-catenina nuclear es muy baja en las células del endodermo del techo archenteron y parece que la AR activa Ndrg1a reprime la señalización de Wnt /β-catenina en estas células. Desmontables de ndrg1a
imita la inhibición de la RA de señalización o activación de la señalización /β-catenina Wnt en Xenopus
embriones con respecto al páncreas, esófago, estómago, duodeno y el desarrollo, lo que conduce a una pérdida casi completa de la especificación de los primordios de órganos. El bloqueo de la señalización /β-catenina puede rescatar ndrg1a
desmontables fenotipo. Por lo tanto, Ndrg1a coordenadas AR y Wnt /β-catenina señalización en la especificación de Xenopus
páncreas, esófago, el estómago y el duodeno.
ndrg1a
podría ser un marcador específico gen de la dorsal de páncreas, esófago, estómago y duodeno Precursores en Xenopus
Neurulae
[61] o el pez cebra [17], [18], [62] embriones. El uso de microarrays en combinación con todo el montaje hibridación in situ, hemos sido capaces de identificar genes específicos archenteron techo endodermo ndrg1a.
Un estudio suerte de cartografía basada tinción de colorante vital ha demostrado que las células del endodermo techo archenteron más adelante dan lugar a páncreas dorsal , el esófago, el estómago y el duodeno [5]. shirin
parece expresarse en Xenopus
archenteron endodermo techo, pero mientras tanto también se expresa en el mesodermo y ectodermo [63]. fetuinish
específicamente marca el endodermo techo archenteron en Xenopus
neurulae temprano, pero más tarde se muestra la expresión en el hígado y el intestino sin ninguna expresión en el páncreas, esófago, estómago y duodeno [35]. Sólo ndrg1a
muestra la expresión consistente temprano en el endodermo techo archenteron y más tarde en el páncreas, esófago, estómago y el duodeno. Especulamos que ndrg1a
puede servir como un páncreas dorsal específica, el esófago, el estómago y el duodeno gen marcador precursor en Xenopus
, que aún no se ha comprobado mediante estudios genéticos linaje rastreo.
páncreas, esófago, estómago y duodeno Especificación
expresión endodérmico temprana
y cdx4
en el pez cebra embriones parece contrarrestar la señalización de la AR del mesodermo para establecer límites anterior y posterior del territorio de páncreas, respectivamente [17], [64]. ndrg1a
es el primer gen identificado que se activa directamente por la AR temprana en Xenopus
archenteron células del endodermo techo y media la señalización de la AR a positivo en las células del endodermo patrón en el páncreas, esófago, estómago y duodeno . Tanto caída basada MO de ndrg1a Opiniones y TALEN interrupción mediada por ndrg1a
demostrar que la actividad Ndrg1a en Xenopus
patrón endodermo es indispensable, que no se observó en NDRG1
ratones knockout [32], [33], [34]. Una explicación para esta discrepancia es que el papel esencial de Ndrg1a en Xenopus
patrón endodérmico no se conserva en mamíferos. Por otra parte, no hay defectos de órganos endodérmico reportados en ratón NDRG1
la orientación de genes estudios podrían deberse a filtraciones expresión de NDRG1 en NDRG1
ratones deficientes [32], [33] o debido a la redundancia funcional entre miembros de la familia NDRG 1-4 en ratones.
embriones se traduce en una reducción de pronefros y somitas desorganizados [36]. Por razones desconocidas, no pudimos conseguir ectópico Ndrg1a en función de Xenopus
embriones. Cabe señalar que se utilizó una versión truncada de Ndrg1a con los primeros 48 aminoácidos en la que falta N-terminal, tanto para la inyección de mRNA y el diseño de MO en el estudio anterior [36]. También probamos la inyección de ARNm con esta versión corta y los embriones inyectados estaban sanos, incluso a altas dosis (4 ng de ARNm). No hemos podido rescatar a nuestro ndrg1a
MO fenotipo con esta versión truncada de Ndrg1a tampoco. Por último, la fuerte expresión endodérmico de ndrg1a
se ilustra en nuestro estudio y descrito por Costa et al. [35] no fue detectado en este estudio [36].
Ndrg1a mediada por diafonía entre la AR y la señalización Wnt /β-catenina se limita a Xenopus
páncreas, esófago, estómago y duodeno Formando las células
[66]. En los ratones, parece que la AR reprime Wnt antagonista Dkk1
expresión en el endodermo pulmón prospectivo de embriones E8.5-E9.5, por lo tanto permite la señalización de Wnt canónica mediada especificación pulmonar [65]. RA y Wnt vías están unidas por RA genes diana aguas abajo OSR1
y OSR2
para mantener el desarrollo de la aleta pectoral en el pez cebra [67]. En conjunto, estos casos ponen de manifiesto una circunstancia que la AR promueve la señalización de Wnt /β-catenina.
páncreas, esófago, estómago, duodeno y la formación, que no se aplica a la especificación de hígado y de pulmón. En apoyo de nuestra conclusión, la sobreexpresión de un antagonista Wnt secretada SFRP5 puede sustituir a la AR con respecto a la inducción de la diferenciación exocrina del páncreas en VEGT inyectada en los polos animales Xenopus
[24]. Los efectos perjudiciales de ectópico Wnt /β-catenina activación de la señalización temprana en la formación de hígado y yema pulmonar observada en este estudio, así como en un estudio anterior [22] no es contradictorio con el papel positivo de la señalización de Wnt canónica en la promoción de hígado y de pulmón el desarrollo, que se observó cuando la señalización /β-catenina se activó en Xenopus
embriones a partir de las etapas 30 a 42 para el hígado y de las etapas 28 a 35 de pulmón, respectivamente [22], [66]. El efecto de la represión de la AR en Xenopus