absztrakt katalógusa
Hogyan sejtek integrálni több mintázás jelzéseket az elején endodermalis régiókba is nagymértékben ismeretlen. Között gasztruláció és neurulation retinsav (RA) jelzésre van szükség, míg a Wnt /β-catenin jelátvitel kell elfojtott specifikációja a hasnyálmirigy, a nyelőcső, a gyomor és a nyombél primordia Xenopus katalógusa embriók. Kísérletet szűrésére RA szabályozott gének Xenopusban katalógusa endodermalis azonosítottunk közvetlen RA megcélzott gén, N-myc gén downstream szabályozott 1a ( ndrg1a katalógusa), amely azt mutatta, kifejezés kora archenteron tető endoderma és késői a fejlődő hasnyálmirigy, a nyelőcső, a gyomor és a nyombélben. Mindkét antiszensz oligonukleotid morfolino- közvetített kiütése ndrg1a katalógusa Xenopus laevis katalógusa és a transzkripciós aktivátor-szerű effektor nukleázok (TALEN) által közvetített zavar ndrg1 katalógusa Xenopus tropicalis Citation: Zhang T Guo X, Y Chen (2013) retinsav-aktivált Ndrg1a elfojtja Wnt /β-catenin jelátviteli Engedélyezés Xenopusban katalógusa hasnyálmirigy, Nyelőcső, gyomor, és Duodenum specifikáció. PLoS ONE 8 (5): e65058. doi: 10,1371 /journal.pone.0065058 katalógusa Vágó: Michael Schubert, Laboratoire de Biologie du Développement de Villefranche-sur-Mer, Franciaország katalógusa Beérkezett: December 29, 2012-ben; Elfogadva: április 22, 2013; Megjelent: május 31, 2013 katalógusa Copyright: © 2013 Zhang et al. Ez egy nyílt hozzáférésű cikk feltételei szerint terjeszthető a Creative Commons Nevezd meg! Licenc, amely engedélyezi a korlátlan használatát, a forgalmazás és a reprodukció bármilyen adathordozón, feltéve, hogy az eredeti szerző és a forrás jóváírásra. Katalógusa Forrás: Ez a munka támogatta pénzeszközöket a Nemzeti Alap Research Program of China (2009CB941200) és a Nemzeti Természettudományi Alapítvány Kína (31271554). A finanszírozók nem volt szerepe a tanulmány tervezés, adatgyűjtés és elemzés, döntés, hogy közzéteszi, vagy a készítmény a kézirat. Katalógusa Érdekütközés: A szerzők kijelentették, hogy nem ellentétes érdekek léteznek. Katalógusa Bevezető régiókba endodermalis jelentkezik egyidejűleg a kialakulása során gasztruláció. Végére gasztruláció, széles anteroposzterior (AP) tartományok a endodermalis hoztak létre, amint azt az anterior kifejezése Hhex katalógusa, vpp1 katalógusa, Sox2 A retinsav (RA) jelátvitel játszik konzervált szerepet AP mintázás gerinces endoderma már gasztruláció [9]. Tanulmányok béka, madárinfluenza, és egerekben azt jelzi, hogy az RA jelzést kifejezetten szükséges a kialakulásához háti hasnyálmirigy, a nyelőcső, a gyomor és a nyombél primordia [10], [11], [12], [13], [14], [15]. Zebradánió, RA jelátviteli vége előtt gasztruláció szükséges a kezdeti fejlődése mind máj- és hasnyálmirigyrák endoderma [16]. RA aktivált expresszióját RA-bontó enzim cyp26a1 kanonikus Wnt jelátvitel is fontos szerepet játszik az AP mintázatának gerinces endodermalis. Egereknél vegyület kieséses Tcf1 katalógusa és Tcf4 N-myc downstream szabályozott gén 1 (NDRG1) tartozik a NDRG fehérje család négy tagból álló, NDRG1-4, amelyeket az jellemez, amely egy NDR doménnel és egy α /β-hidroláz-szeres motívum [27]. NDRG1 katalógusa egy RA-indukálható gén különböző sejtvonalakon és humán betegeknél [28], [29], [30], [31]. Ndrg1 katalógusa hiányosság egerek vezet Schwann sejt diszfunkció, ami arra utal, hogy a NDRG1 elengedhetetlen fenntartása a mielin hüvelyének a perifériás idegek [32], [33]. Ndrg1 katalógusa -null egerek is kimutatta, csökkent mast sejtek érését és degranulációt és legyengített allergiás reakciók [34]. Xenopusban katalógusa, ndrg1 katalógusa azonosították gént dúsított expresszió endodermalis és pronephros [35], [36]. Egy nemrégiben készült tanulmány segítségével rákos sejtvonalak kiderül, hogy a tumor metasztázis szupresszor gén NDRG1, elfojtja Wnt /β-catenin jelátvitel által közvetlen kölcsönhatásban áll a Wnt receptor, LRP6, így okozva a elnyomása Wnt /β-catenin megcélzott gén, ATF3 katalógusa kifejezés [37]. Aktiváló transzkripciós faktor 3 (ATF3) tartozik az ATF /ciklikus AMP érzékeny elemet megkötő család alapvető leucin cipzár transzkripciós faktorok. Ez egy adaptív válasz gén és működhet mind a transzkripciós aktivátor vagy represszor függően a sejt típusától és inger [38], [39], [40]. ATF3 katalógusa egerek normálisan fejlődtek, és nem mutatott semmilyen észrevehető fenotípus normál körülmények között [41]. Ezzel szemben, a expresszáló transzgén egereken ATF3 a májban, a hasnyálmirigy ductalis epithelium, vagy a hasnyálmirigy β-sejtek vezetett májműködési zavar, hibák endokrin hasnyálmirigy fejlesztés vagy szigetsejtek diszfunkció, illetve [41], [42], [43]. Ebben a tanulmányban használt DNS microarray kombinációban whole mount in situ hibridizáció átvizsgálására RA szabályozott gének Xenopus Eredmények katalógusa ndrg1a katalógusa, RA szabályozott Gene fejezik kora endodermális Archenteron Roof katalógusa tekintettel endodermális organogenesis Xenopus ndrg1a katalógusa Expression in Archenteron tető endodermalis Cells közvetlenül működteti RA további igazolása a microarray adatok, elemeztük ndrg1a katalógusa kifejezést BMS453 és RA kezelt embriók whole mount in situ hibridizáció. Amikor BMS453 kezelés, nem ndrg1a katalógusa átiratokat mutattunk archenteron tető endodermalis sejtek (ábra. 2E) és csak nyomokban ndrg1a katalógusa mRNS maradt háti endodermalis stádiumú embriók 22 (ábra. 2H) . Később, ndrg1a katalógusa kifejezés teljesen elfojtották háti hasnyálmirigy, a nyelőcső, a gyomor és a nyombél és részlegesen gátolt ventrális hasnyálmirigy (ábra. 2K, N). Ezzel szemben, a másik RA antagonista BMS493 csak részlegesen gátolja a ndrg1a kell, ha RA közvetlenül szabályozzák ndrg1a katalógusa kifejezés kezeltünk Xenopus katalógusa embriókat cycloheximide (CHX), a fehérjeszintézis gátló, 15 perc múlva alkalmazása RA. Adataink azt mutatják, hogy az RA okozta bővülése ndrg1a katalógusa kifejezést archenteron tető endodermalis nem befolyásolta CHX (ábra. 2S), támogatja az elképzelést, hogy az RA közvetlenül aktiválja ndrg1a katalógusa kifejezést archenteron tető endodermalis sejtekben. Sőt, egy RA válasz elemet azonosítottak Xenopus tropicalis ndrg1 katalógusa promoter régió (AGTTCAacAGTTCA -1496bp a -1509bp). Ellentétben Xenopus laevis katalógusa, a diploid Xenopus tropicalis katalógusa van egy ndrg1 katalógusa gént. A generál ndrg1a katalógusa morphants vásároltunk két ndrg1a katalógusa antiszensz morfolino- oligo (MO) származó Gene Tools. Az egyik kiterjed az ATG startkodon (MO1), a másik (MO2) elhelyezi az 5 'nem transzlálódó régióban a ndrg1a a teszt ha Ndrg1a funkcionálisan közvetíteni RA jelző adja előbél endodermalis, mi injektált MO1, MO2, vagy a Como külön a növényi rész mind a négy blasztomerjéből 4-sejtes embriókat, összegyűjtött az embriók fázisban 36. és 42., és elemeztük a panel endodermális marker géneket. ptf1a katalógusa / p48 katalógusa specifikus hasnyálmirigy prekurzor sejtek embriogenezis során és később korlátozottá válik a külső elválasztású hasnyálmirigy [10], [44], [45]. pdx1 A kapott adatok azt mutatják, hogy MO1 és MO2 ugyanilyen hatékonyan megszüntette inzulin katalógusa, ptf1a katalógusa / p48 katalógusa, PDIP katalógusa, pdx1 katalógusa, és Sox2 katalógusa kifejezést hasnyálmirigy, a nyelőcső, a gyomor és a nyombél, de még kismértékben befolyásolja darmin katalógusa, hhex katalógusa, és nkx2 katalógusa. 1 katalógusa kifejezés a bélben, a máj, a pajzsmirigy és a tüdő, amely nagyon hasonló a hatása BMS453 (4A. és [10]). Az egyetlen különbség az, hogy nincs ventrális hasnyálmirigy kifejezése ptf1a katalógusa / p48 katalógusa, PDIP katalógusa, vagy a pdx1 katalógusa figyeltek ndrg1a Injekciós még 4 ng ndrg1a katalógusa mRNS Xenopus katalógusa embriók okozott sem morfológiai rendellenesség sem kifejezése változások a marker gének elemzett (ábra. S2A, B). Co-injekciót ndrg1a katalógusa mRNS annak MOS nem megmenteni a MO fenotípus vagy (nem közölt adatok). Úgy tűnik, hogy nem tudtuk, hogy a funkcionális Ndrg1a fehérje Xenopus katalógusa embriókat a rutin mRNS injekciós protokoll működik a legtöbb, ha nem az összes többi gén elemezték. Egy Ndrg1a-GFP konstrukciót kimutatták, hogy a fehérje képződik (ábra. S3) .Mi a közelmúltban létrehozott TALEN közvetített gén célzott Xenopus katalógusa [54]. További igazolása az MO fenotípus, terveztünk ndrg1 katalógusa Talens belül harmadik exonjában Xenopus tropicalis ndrg1 katalógusa gén (ábra. 5A), amely hatékonyan okozott szomatikus mutációk a megcélzott loci (ábra. 5B). Összhangban van a MO fenotípus kapott Xenopus laevis katalógusa embriók, inzulin katalógusa és pdx1 katalógusa kifejezés súlyosan gátolt ndrg1 katalógusa TALEN mRNS injektált Xenopus tropicalis katalógusa embriók (ábra. 5C), bár kisebb gyakorisággal, összehasonlítva a MO injektált is, ami megtörtént az is, hogy az alkalmazás az ptf1a /p48 katalógusa Talens a korábbi tanulmány [54]. A stabil ndrg1 katalógusa kieséses béka vonal még létre kell hozni. Mi boncolt 25 froglets azt mutatta, hasnyálmirigy, gyomor, nyombél és hypoplasia vagy akár aplasiával de normális máj és az epehólyag fejlesztettek ki (ábra. 5D). Ezek az adatok tehát megerősítik a ndrg1a katalógusa MO fenotípus kapott Xenopus laevis katalógusa. Elvileg, NDRG1 kölcsönhatásba léphet Wnt receptor LRP6 és blokkolja Wnt /β-catenin jelátvitel rákos sejtvonalak [37]. Kérni, ha RA aktivált Ndrg1a lehet elnyomni Wnt /β-catenin jelátvitel Xenopus katalógusa embriók, összehasonlítottuk a nukleáris β-catenin szintjét ndrg1a katalógusa pozitív archenteron tető endodermalis sejtjei szakaszban 20 embriók voltak vetjük alá, RA, BMS453 kezelést, vagy MO1 injekció. Immunolocalization nukleáris β-catenin egy megbízható módszer jellemzésére Wnt /β-catenin jelátviteli aktivitás Xenopus A teszt, ha RA, Ndrg1a és Wnt /β-catenin jelátvitel van funkcionálisan kapcsolódó ugyanabban a kaszkád szabályozásában hasnyálmirigy, a nyelőcső, a gyomor és nyombél specifikáció, mi együtt fecskendeztük ndrg1a a teljes egyetértésben a korábbi tanulmány [22], aktiválása kanonikus Wnt jelátviteli Xenopus Azt mutatja, hogy ATF3, a Wnt /β-catenin cél gén rákos sejtvonalak [37], lehet akár a transzkripció elnyomására Pdx1 katalógusa kifejezés [59], vagy fizikailag kölcsönhatásba PDX1 blokkolni PDX1 közvetített transzaktivációját egy rágcsáló β-sejtvonal [60]. Alatt Xenopusban katalógusa embriogenezis, atf3 katalógusa alig kimutatható whole mount in situ hibridizáció (ábra. S4). RT-PCR analízis azt jelezte, hogy atf3 Vita katalógusa ndrg1a katalógusa közvetlenül aktiválja RA a archenteron tető endodermalis sejtjei Xenopusban katalógusa neurulae. Nukleáris β-catenin szintje nagyon alacsony a archenteron tető endoderma sejteket, és úgy tűnik, hogy az RA aktivált Ndrg1a represszálja Wnt /β-catenin jelátvitel ezekben a sejtekben. Kiütése ndrg1a ndrg1a katalógusa lehet egy specifikus marker génje háti hasnyálmirigy, Nyelőcső, gyomor, és a nyombél prekurzorok Xenopus katalógusa Neurulae katalógusa Számos tanulmány leírta microarray alapú szűrés RA reagáló gének Xenopus katalógusa [61], vagy zebrahal [17], [18], [62] az embriók. Microarray kombinálva whole mount in situ hibridizáció, tudtuk azonosítani archenteron tető endodermalis specifikus gén ndrg1a. Ndrg1a elengedhetetlen Xenopusban katalógusa hasnyálmirigy, Nyelőcső, gyomor, és a nyombél Specifikáció katalógusa a korai endodermális kifejezése cyp26a1 katalógusa és cdx4 katalógusa zebradánió embriók tűnik, hogy ellensúlyozza RA jelzéseket leválasztja mezodermából beállítani az elülső és hátsó határain hasnyálmirigy területén volt [17], [64]. ndrg1a számos tanulmány azt mutatják, hogy overexpressziója NDRG1 a rákos sejtvonalakban generál szembetűnő fenotípusok [27]. Azt is leírták, hogy túltermelése Ndrg1a Xenopus katalógusa embriók csökkentését eredményezi pronephros és szervezetlen szomitok [36]. Ismeretlen okból nem tudtunk méhen kívüli Ndrg1a függvényében Xenopus katalógusa embriók. Meg kell jegyezni, hogy egy csonka változatát Ndrg1a az első 48 aminosav az N-terminális hiányzó használunk mind mRNS injekció és a Mo kialakítás a korábbi vizsgálatban [36]. Megpróbáltuk mRNS injekció ezzel a rövid változat, az injektált embriókat egészséges még magas dózisú (4 ng mRNS). Nem tudtuk megmenteni a ndrg1a katalógusa MO fenotípus ezzel csonkított változatát Ndrg1a sem. Végül, az erős endodermális kifejezése ndrg1a katalógusa szemlélteti a tanulmányi és leírt Costa et al. [35] nem volt kimutatható, hogy a vizsgálatban [36]. Katalógusa Ndrg1a közvetített áthallás RA és Wnt /β-catenin jelzés van korlátozva, Xenopusban katalógusa hasnyálmirigy, Nyelőcső, gyomor, és a nyombél Formázás Cells embriogenezis során a sejteket folyamatosan meg kell integrálni több jelátviteli utak, hogy elérjék a különböző sorsa a megfelelő időben és helyen. Az integrált szerepe FGF, RA, és Wnt jelátviteli utak meghatározó tüdő primordium és ellenőrző tüdő bimbónövekedést meghatározott egerekben [65] konzerválódott Xenopus katalógusa [66]. Egereken, úgy tűnik, hogy az RA elfojtja Wnt antagonista Dkk1 katalógusa kifejezést a leendő tüdő endodermalis az E8.5-E9.5 embriók, így lehetővé teszi a kanonikus Wnt jelátvitel közvetített pulmonális specifikáció [65]. RA és Wnt utak kötik össze RA downstream target gének OSR1 katalógusa és OSR2 katalógusa fenntartani hátuszony fejlesztés zebradánió [67]. Együttesen ezek az esetekben válik egy körülmény, hogy az RA elősegíti Wnt /β-catenin jelátvitel. Katalógusa Itt vagyunk, hogy meggyőző bizonyítékot az első alkalommal, a tudásunk, hogy az RA-aktivált endodermális kifejezése Ndrg1a elfojtja Wnt /β katenin jelző- és következésképpen felszabadítja elnyomása aktivitását Wnt /β-catenin jelátviteli a Xenopusban katalógusa hasnyálmirigy, a nyelőcső, a gyomor, a nyombél és kialakulását, amely nem vonatkozik a máj és a tüdő specifikáció. Alátámasztására a megállapítás túltermelése szekretált Wnt antagonista Sfrp5 helyettesítheti az RA tekintetében az indukciós exokrin hasnyálmirigy differenciálódás Vegt befecskendezett állat sapkák Xenopus katalógusa [24]. A káros hatások korai méhen kívüli Wnt /β-catenin jelátvitel aktiválása a májban és a tüdőben bud formáció látható ez a tanulmány, valamint egy korábbi tanulmányban [22] nem mond ellent, hogy a pozitív szerepét a kanonikus Wnt jelátviteli előmozdításában májban és a tüdőben fejlődés, ami volt megfigyelhető, amikor a Wnt /β-catenin jelátvitel aktiválódott Xenopus
bizonyítják, hogy mint RA jelzés, Ndrg1a kifejezetten szükséges a specifikáció Xenopusban katalógusa hasnyálmirigy, a nyelőcső, a gyomor és a nyombél primordia. Immunfluoreszcenciás adatok arra utalnak, hogy az RA-aktivált Ndrg1a elnyomja Wnt /β-catenin jelátvitel Xenopus katalógusa archenteron tető endodermalis sejteket. Blokkoló Wnt /β-catenin jelátvitel mentettek Ndrg1a akciós fenotípus. Továbbá túltermelése feltételezett Wnt /β-catenin célgén Atf3 phenocopied kiütése Ndrg1a vagy gátlása RA jelző, míg Atf3 leütés lehet megmenteni Ndrg1a akciós fenotípus. Végül a hasnyálmirigy /gyomor /nyombél transzkripciós faktor Pdx1 tudott megmenteni Atf3 túltermelése vagy Ndrg1a akciós fenotípus. Együtt következtetni, hogy az RA aktivált Ndrg1a elfojtja Wnt /β-catenin jelátviteli hogy a specifikáció a hasnyálmirigy, a nyelőcső, a gyomor és a nyombél progenitor sejtek Xenopus katalógusa embriók.
és Foxa2 katalógusa és a hátulsó kifejezés a caudalis típusú homeobox katalógusa gének Cdx1 katalógusa, 2 |, és 4 katalógusa [1], [2], [3]. Végül, a endoderma ad okot, hogy a hámban a légúti és gyomor-bél traktus és a hozzájuk kapcsolódó szervek, mint például a pajzsmirigy, a tüdő, a hasnyálmirigy, a máj és az epehólyag. A családfa felkutatása a gerinces endodermális organogenesis nagymértékben függ a vitális festék címkézés alapú sors mapping tanulmány [4], [5], [6], [7], [8]. A korai kifejeződése hhex katalógusa és vpp1 katalógusa Xenopus katalógusa embriók is szolgálhat, hogy tükrözze a prekurzorok a májra és a ventrális pankreasából [3]. Eddig kevés specifikus marker gének jelentett, amely körülhatárolja prekurzorok háti hasnyálmirigy, a nyelőcső, a gyomor és a nyombél alatt gasztruláció és neurulation. Katalógusa
az elülső törzs endoderma viszont modulálja RA jelátvitel és meghatározza az elülső határvonal a hasnyálmirigy mező zebradánió embriók [17]. mnx1 katalógusa azonosították RA downstream gén, amely elősegíti a béta-sejtek kialakulását a fejlődő zebrahal pancreas [18], míg RA downstream gén exdpf katalógusa szabályozza hal exokrin hasnyálmirigy fejlesztés [19]. A endodermális RA célgének hogy közvetítik korai tevékenységét RA jelátviteli hogy meghatározza a hasnyálmirigy, a nyelőcső, a gyomor és nyombél Anlagen megfelelő még meg kell határozni.
vezetett elülső átalakítása nyombél a gyomor vagy kevés bél kifejlesztett [20]. A gyomor mesenchymalis transzkripciós faktor Barx1-mediált szekréciót a Wnt antagonisták SFRP1 és SFRP2 van szükség, hogy gátolja endodermális Wnt /β-catenin jelátvitel, és így lehetővé teszi specifikáció a gyomor epithelium [21]. Következetesen, a Xenopus katalógusa, Wnt /β-catenin jelátvitel kell elfojtott anterior endoderma között gasztrula és korai szomit fejlettségű, hogy tegye lehetővé a máj, valamint a hasnyálmirigy, a gyomor és nyombél primordia [ ,,,0],22], [23]. A kiválasztott Wnt antagonista sfrp5
kifejezett ventrális előbél endodermalis koordinálja a máj és a hasnyálmirigy hasi leírás antagonizálása mind a kanonikus és noncanonical Wnt jelátviteli [24], [25]. Ezen túlmenően, kimutatták, hogy a RA elnyomják Xenopus
blasztula Wnt /β-catenin jelátvitel [26].
endoderma. ndrg1a katalógusa ben azonosított és igazolt, hogy közvetlenül aktiválja RA a archenteron tető endodermalis végén és a fejlődő hasnyálmirigy, a nyelőcső, a gyomor, és a nyombélben. Biztosítunk bizonyítékok implicating, hogy az RA-aktivált Ndrg1a represszálja Wnt /β-catenin jelátvitel a archenteron tető endoderma sejtek és következésképpen felszabadítja a gátló hatása Wnt /β-catenin jelátvitel tevékenységek kialakulását hasnyálmirigy, a nyelőcső, a gyomor és a nyombélben.
kezelt embriók egy RA-antagonista, BMS453, vége előtt gasztruláció megjelenített specifikus veszteséget a dorzális hasnyálmirigy és részben a ventrális hasnyálmirigy, a gyomor és nyombél [10]. Azonosításához RA szabályozott gének endoderma, először tette microarray összehasonlításával gén expressziós szintek között a vad típusú és RA-hiányos embriók, amelyek kezeltük BMS453 elején gasztruláció és gyűjtöttünk szakaszaiban 12., 23., és 34., illetve a . A kapott adatok azt mutatják, hogy a gének leszabályozott több mint 2-szerese a három különböző szakaszaiban szerint korlátozott átfedés (ábra. S1 és táblázat S1). Az embriók gyűjtött szakaszban 23, vannak 138 gének, amelyek leszabályozott több mint 2-szeres után BMS453 kezelést. Szerint a 138 gének "strukturális és funkcionális információ áll rendelkezésre a NCBI adatbázisban, adtunk prioritásokat transzkripciós faktorok, kinázok, az RNS-kötő fehérjék, transzmembrán fehérjék, valamint a gének mutató endodermális kifejezés, és így úgy döntött, 9 gén (táblázat S1) a tovább elemezni embrionális expressziós mintázat whole mount in situ hibridizáció. Egyikük, ndrg1a katalógusa, mutatott specifikus expressziót korán archenteron tető endodermalis (ábra. 1B), amely nem volt kimutatható a korábbi tanulmányok, feltehetően elégtelen érzékenysége az egész hegy in situ hibridizációs technikával a korábbi publikációk [35], [36]. Egyetértésben a jelentést a Zorn laboratóriumban [35], adataink azt mutatják, hogy ndrg1a katalógusa átiratokat mutattunk háti endodermalis korai farka bud fejlődési szakaszban (ábra. 1C, D, E, G). Késő farok bud és az ebihal fejlettségű, amellett, hogy az expressziót szem, proctodaeum prekurzorok és pronephros, ndrg1a katalógusa mutatott specifikus kifejezést a gége, a nyelőcső, gyomor, a nyombél és (ábra. 1E , F, H, I, J). Nem tudtuk kimutatni ndrg1a katalógusa kifejezés a májban [35]. Ehelyett tiszta ndrg1a katalógusa jel volt megfigyelhető a fejlődő epehólyag (ábra. 1I, J). Katalógusa
expresszió hasnyálmirigy, a nyelőcső, a gyomor és nyombél [11]. Ezen túlmenően, ndrg1a katalógusa kifejezést pronephric proximális tubulus is súlyosan gátolta BMS453 (ábra. 2 n). Meg kell jegyezni, hogy a ndrg1a katalógusa kifejezést szem, az agy, és az epehólyag kevésbé volt érintett upon BMS453 kezelés (ábra. 2K, N). Ez egy gyakori jelenség, hogy a géneket a hasnyálmirigy, valamint a szem és a központi idegrendszerre, mint a ndrg1a katalógusa, esr10 katalógusa, neurod katalógusa, és ptf1a /p48 katalógusa, csak a hasnyálmirigy kifejezés gátolt upon BMS453 kezelés (ábra. 2K, N és [10]). Ezzel szemben alkalmazása RA Xenopus katalógusa embriók indukált jelentős bővítése ndrg1a katalógusa kifejezés domain archenteron tető endodermalis (ábra. 2F), háti endodermalis (ábra. 2I), hasnyálmirigy, a nyelőcső, a gyomor és nyombél (ábra. 2L, O). Így RA jelátvitel szükséges és elégséges, hogy aktiválja ndrg1a katalógusa kifejezést a archenteron tető endodermalis sejteket. Katalógusa
ndrg1a katalógusa Knockdown Xenopus
embriókat Phenocopies BMS453 kezelés katalógusa
cDNS-t. A hatékonyság úgy vizsgáltuk, hogy egy in vivo vizsgálat, amelyben a GFP-kódoló szekvenciát fuzionálva egy Mo kötőhely, és a kapott mRNS-t együtt fecskendeztük be a MO be Xenopus
megtermékenyített tojásokat, hogy értékelje az élő GFP fordítást embriók . Mindkét MO1 (ábra. 3B) és MO2 (ábra. 3F) képesek voltak hatékonyan gátolják fordítását GFP nyitott leolvasási keret követi a megfelelő MO1 vagy MO2 kötő szekvenciát, illetve, míg a kontroll MO (Como) elmulasztotta megtenni (ábra. 3A, E). katalógusa
kifejezetten elhatárolja fejlődő hasnyálmirigy, a gyomor és a nyombél [46]. inzulin katalógusa, endokrin marker gén kizárólag kifejezett háti hasnyálmirigy bimbója Xenopus katalógusa farok bud állapotú embriók [47], [48]. PDIP katalógusa egy exokrin hasnyálmirigy specifikus marker gén [49]. Sox2
jelzi a nyelőcső, a gyomor és egy elülső része, a duodenum [50]. darmin katalógusa egy bélben specifikus marker gén [35], [51]. hhex katalógusa szolgál máj és a pajzsmirigy marker gén [52]. nkx2 katalógusa. 1 katalógusa jelek fejlődő tüdő és pajzsmirigy [53]. Katalógusa
morphants, de nyomokban ptf1a katalógusa / p48 katalógusa, PDIP katalógusa, és pdx1 katalógusa kifejezést a ventrális hasnyálmirigy rügyek tartottuk BMS453 kezelt embriók (4A. és [10]). A morfológiai fenotípus ndrg1a katalógusa kiütése is hasonlít BMS453 kezelést. Embriók fecskendeznek MO1 vagy MO2 normálisnak tűnt, mielőtt a szakaszban a 40. és azt követően jelenik meg a súlyos bél rendellenességek veszteséggel bél tekercselő és ödéma kialakulása (ábra. 4B és [10]). Mivel MO1 és MO2 okozott azonos fenotípust, szoktuk MO1 elvégzéséhez a többi tanulmányokat. Együttesen ezek az adatok arra utalnak, hogy az RA és Ndrg1a ugyanabban a genetikai hierarchia ellenőrző hasnyálmirigy, a nyelőcső, a gyomor és a nyombél fejlesztés. Katalógusa
RA aktivált Ndrg1a elfojtja Wnt /β-catenin jeltovábbítás Archenteron Tető endodermalis Cells engedélyezése Hasnyálmirigy , Nyelőcső, gyomor, és a nyombél Specifikáció katalógusa
embriók [55]. A kiválasztott terület archenteron tető endodermalis, néhány sejt mutatott sejtmagi β-catenin festés normál állapotban, ami lett további rövidebb időn RA kezelésére. Ezzel ellentétben, a szám a nukleáris β-catenin pozitív sejtek a archenteron tető endoderma jelentősen megnövekedett upon BMS453 kezelést, vagy MO1 injekció (a 6A., B). Ezek az adatok arra utalnak, hogy az RA és Ndrg1a elnyomják Wnt /β-catenin jelátvitel Xenopus katalógusa archenteron tető endodermalis sejteket. Katalógusa
MO1 a GR-ΔNTcf3, domináns negatív formáját Tcf3 olvasztott a hormon-kötő domén a glükokortikoid receptor, amely elnyomni Wnt /β-catenin jelátvitel esetén dexametazon indukció [56]. Adataink azt mutatják, hogy elnyomja Wnt /β-catenin jelátvitel mentettek ndrg1a katalógusa knockdown fenotípus (ábra. 7A, B). Méhen kívüli aktiválása nkx2 katalógusa. 1 katalógusa (ábra. 7B44, 45), Sox2 katalógusa (ábra. 7A19, 20 és B24, 25), és a foxa1 katalógusa (ábra. 7B14, 15), a forkhead transzkripciós faktor jelölés gyomor, duodenum, és proctodaeum [44], korrelál a veszteség darmin katalógusa kifejezés (ábra. 7A24, 25, 7B29, 30 ) az injekció beadása után 0,25 ng GR-ΔNTcf3 mRNS-t. Összhangban az előző tanulmány [22], nagyobb dózisban (0,8 ng) GR-ΔNTcf3 mRNS kiváltásához szükséges ectopiás expresszióját pdx1 katalógusa és for1 katalógusa, a máj specifikus marker gén [ ,,,0],22], [57], a Xenopus katalógusa embriók (nem közölt adatok). katalógusa
endoderma által növényi injekció 0,5 ng GR-LEFΔN-βCTA mRNS tartalmú Lef1 DNS-kötő domént és a β-catenin transzaktivációs domént [58], 4 blasztomerek a 4-sejtes állapotú embriók eredményezett azonos fenotípust okozott Ndrg1a knockdown keretében a hasnyálmirigy, a nyelőcső, a gyomor és nyombél fejlesztés (ábra. 7A, B). Az elnyomás hatása Wnt /β-catenin jelátvitel kialakulását máj (ábra. 7A27 32, B32, 37) és a tüdő (ábra. 7A37, B42), nem volt látható a Ndrg1a morphants, ami arra utal, hogy a korai elnyomása Wnt /β-catenin jelátvitel területén májban és a tüdőben alkotó endodermalis lefut eltérő tényezők RA aktivált Ndrg1a. Összefoglalva, ezek az adatok azt sugallják, hogy a Wnt /β-catenin jelátvitel downstream Ndrg1a és elfojtott által Ndrg1a, hogy lehetővé tegye a specifikáció a hasnyálmirigy, a nyelőcső, a gyomor és a nyombélben.
Atf3, egy feltételezett Wnt /β- catenin célgén Xenopusban katalógusa embriókat, specifikusan gátolja a Xenopusban katalógusa hasnyálmirigy, Nyelőcső, gyomor, és Aduodenum Specifikáció katalógusa
expressziót felülszabályozott upon ndrg1a
knockdown vagy β-catenin túltermelése Xenopus
embriók (ábra. 8A). Találtunk három fő köbláb /Lef kötőhelyek (5'-A /TA /T CAAAG-3 ') Xenopus tropicalis atf3 katalógusa promoter régió, mely keresse meg -1467 bp (TACAAAG) -5591 bp ( AACAAAG) és -8889 bp (AACAAAG), ill. Ezek az adatok arra utalnak, hogy atf3 katalógusa is Wnt /β-catenin célgén Xenopus katalógusa embriók. Meglepő túltermelése Atf3 Xenopus katalógusa endodermalis vezetett a teljes veszteség inzulin katalógusa, ptf1a katalógusa / p48 katalógusa, PDIP katalógusa pdx1 katalógusa, foxa1 katalógusa, és Sox2 katalógusa kifejezést a hasnyálmirigy, a nyelőcső, a gyomor, a nyombél és, de nem volt nyilvánvaló hatása a darmin katalógusa hhex katalógusa, és nkx2 katalógusa. 1 katalógusa kifejezés (ábra. 8B, C), ami csak azonos ndrg1a katalógusa knockdown fenotípus (ábra . 4A). Ennél is fontosabb, atf3 katalógusa MO, ami már önmagában emiatt kisebb hatást gyakorol a markergének expresszióját elemeztük, képes volt megmenteni inzulin katalógusa, ptf1a katalógusa / p48
, PDIP katalógusa, foxa1 katalógusa, és Sox2 katalógusa kifejezés gátolja ndrg1a katalógusa MO (ábra. 9A, B). Továbbá Pdx1 tudott megmenteni Atf3 túltermelése vagy Ndrg1a knockdown fenotípus tekintetében ptf1a katalógusa / p48 katalógusa, PDIP katalógusa, foxa1 katalógusa, és Sox2 katalógusa kifejezés kivéve a inzulin katalógusa (ábra. 9A, B). Köztudott, hogy Pdx1 nem szükséges és nem elégséges az aktiválás korai inzulin katalógusa kifejezést Xenopus katalógusa embriók [44]. Összességében, a mi az adatok azt sugallják egy episztázis, hogy az RA aktivált Ndrg1a represszálja Wnt /β-catenin jelátvitel és következésképpen felszabadítja a elnyomása aktivitását Wnt /β-catenin jelátviteli tevékenységek, amelyek lehetnek részlegesen által közvetített Atf3, a hasnyálmirigy, a nyelőcső, a gyomor és nyombél kialakulását.
utánozza gátlása RA jelző- vagy aktiválását Wnt /β-catenin jelátvitel Xenopus
embriók vonatkozásában a hasnyálmirigy, a nyelőcső, a gyomor és nyombél fejlesztés, amely ahhoz vezet, hogy csaknem teljes elvesztése a specifikáció az említett szerv primordia. Blokkoló Wnt /β-catenin jelátvitel lehet megmenteni ndrg1a katalógusa akciós fenotípus. Így Ndrg1a koordináták RA és Wnt /β-catenin jelátvitel a leírásából Xenopusban katalógusa hasnyálmirigy, a nyelőcső, a gyomor, és a nyombélben. Katalógusa
A létfontosságú festéssel alapú sors feltérképezése tanulmány kimutatta, hogy archenteron tető endodermalis sejtek később ad okot háti hasnyálmirigy , a nyelőcső, a gyomor és nyombél [5]. Sirin katalógusa látszik kifejezni Xenopus katalógusa archenteron tető endodermalis, de közben azt is kifejezi, mezodermából és ectoderma [63]. fetuinish katalógusa kifejezetten jelzi a archenteron tető endodermalis Xenopus katalógusa korai neurulae, de később jeleníti kifejezést máj és belek nélkül kifejezést hasnyálmirigy, a nyelőcső, a gyomor és a nyombél [35]. Csak ndrg1a
mutatja következetes kifejezés kora archenteron tető endoderma és később a hasnyálmirigy, a nyelőcső, a gyomor és a nyombélben. Úgy gondoljuk, hogy ndrg1a katalógusa szolgálhat egy adott háti hasnyálmirigy, a nyelőcső, a gyomor és a nyombél prekurzor marker gén Xenopus katalógusa, amelyet még ellenőrizni kell a genetikai leszármazás felkutatása tanulmányokat. Katalógusa
az első gén azonosítható, amely közvetlenül működteti RA korai Xenopus
archenteron tető endoderma sejteket és közvetíti RA jelzés, hogy pozitívan minta endoderma sejtek hasnyálmirigy, a nyelőcső, a gyomor és nyombél . Mindkét MO alapú kiütése ndrg1a katalógusa és TALEN közvetített zavar ndrg1a katalógusa bizonyítják, hogy a Ndrg1a tevékenység Xenopus katalógusa endodermalis mintázás elengedhetetlen, ami nem volt megfigyelhető Ndrg1 katalógusa egerek [32], [33], [34]. Ennek egyik magyarázata az eltérés, hogy az alapvető szerepe Ndrg1a Xenopus katalógusa endodermális mintázat nem konzervált emlősöknél. Alternatív nincs endodermális szerv jelentett hibák egér Ndrg1 katalógusa gén célzott vizsgálatok oka lehet szivárgó kifejezése NDRG1 Ndrg1 katalógusa hiányos egerekben [32], [33], vagy mert a funkcionális redundancia között NDRG családtagok 1-4 egerekben.
embrióinak szakaszában 30-42 máj és szakaszok 28-35 tüdő-, illetve [22], [66]. Az elnyomás hatása RA a Xenopus katalógusa blasztula Wnt /β-catenin jelátvitel [26] nem valószínű közvetíti Ndrg1a, hiszen