PLoS ONE: Owadożerny Šikšnosparniai Digest chitino skrandyje naudojimas rūgštus žinduolių Chitinase

Anotacija

virškinimo trakto gyvūnų pritaikytas jų pirminio šaltinio maisto optimizuoti išteklių naudojimą ir energijos suvartojimą. Vidutinio klimato šikšnosparnių rūšys, daugiausia minta nariuotakojų. Tai yra energijos turtingas angliavandenių Chitinas, kuri yra suskaldyti už endogeninių fermentų tipiškas žinduolių virškinimo trakte. Tačiau virškinimo trakte šikšnosparnių rūšių turėtų būti pritaikytas prie savo mitybą ir galės suvirškinti Chitinas. Mes iškėlė hipotezę, kad (i) Europos vespertilionid šikšnosparnių rūšys turi virškinimo fermentų chitinase ir kad (ii) chitinolytic veikla yra žarnyne, kaip Šiaurės Amerikos šikšnosparnių rūšių buvo rasta. Virškinimo traktas septynių šikšnosparnių rūšių ( Pipistrellus Pipistrellus
Plecotus auritus
Myotis bechsteinii
Myotis nattereri
Myotis daubentonii
Myotis Myotis, parsisiųsti ir Nyctalus leisleri
) buvo išbandytas chitinolytic veiklos difuzijos tyrimu. Virškinimo nedirbamos p. Pipistrellus
P. auritus
M. nattereri
M. Myotis, parsisiųsti ir N. leisleri
buvo tiriama, rūgščioje žinduolių chitinase pagal Vakarų dėmė analizė. Audinių skyriai virškinimo trakto p. Pipistrellus
buvo immunohistochemically analizuojami suraskite rūgštus žinduolių chitinase. Chitinolytic veikla buvo aptikta visų šikšnosparnių rūšių skrandžius. Vakarų dėmė analizė patvirtino rūgštus žinduolių chitinase skrandžio mėginius. Imunohistocheminis iš P. Pipistrellus
virškinimo trakto nurodė, kad rūgštus žinduolių chitinase yra skrandžio vyriausiųjų ląstelių ties skrandžio liaukų bazę. Taigi, Europos vespertilionid šikšnosparnių rūšys turi rūgščią žinduolių chitinase, kad yra gaminamas skrandžio liaukos, skrandžio. Todėl virškinimo nedirbamos Owadożerny šikšnosparnių rūšių išsivystė fermentinį prisitaikyti prie savo dietos

Citavimo:. Strobel S Roswag A, Becker, NI, Trenczek TE, Encarnação JA (2013) Owadożerny Šikšnosparniai Digest "Chitinas skrandyje Naudojant rūgštinis žinduolių Chitinase. PLoS ONE 8 (9): e72770. Doi: 10,1371 /journal.pone.0072770

redaktorius: François Blachier, nacionalinis institutas agronomijos tyrimų, Prancūzija

Įstojo: Kovo 26, 2013; Priimta 12 Liepos 2013 m Paskelbta rugsėjo 3 d 2013

Visos teisės saugomos: © 2013 Strobel et al., Tai atviros prieigos straipsnis platinama pagal Creative Commons Attribution licencija, kuri leidžia nevaržomai naudotis, paskirstymo ir dauginimąsi bet kokioje laikmenoje sąlygomis, su sąlyga, kad pirmasis autorius ir šaltinis įskaitomos

Finansavimas:. Autoriai neturi paramą ar finansavimą pranešti

konkuruojančių interesų:.. autoriai paskelbė, kad konkuruojantys interesai egzistuoja

Įvadas

Gyvūnai praryja ir virškinti maistą, kad būtų užtikrintas nenutrūkstamaią jų vidaus metabolizmo padengiant, pavyzdžiui, jų energija, baltymai ir vitaminų reikalavimai [1]. Daugiapakopis procesas virškinimo apima mechaninius, cheminius ir fermentiniai veiksmus tam, kad paverstų maistinių medžiagų [2]. Šikšnosparnių rūšių turi aukštą masinės specifinis energijos poreikis, nes jų mažo dydžio ir gebėjimas aktyviai plaukioti [3], [4]. Į plaukiojančių gyvūnų, maisto reikia apdoroti, greitai sumažinti energijos poreikį, kurį sukelia [2] padidėjo skrydžio masės. Europos šikšnosparnių rūšys turi mityba, kurią sudaro daugiausia nariuotakojų [5]. Jie turi trumpus sulaikymo trukmė [6], bet aukštas virškinimo efektyvumas [7]. Tai rodo, kad jų virškinimo trakto (VT) takų yra labai pritaikyti savo mitybą, nes jis virškina nariuotakojų greitai ir kruopščiai. Todėl galima teigti, kad Europos šikšnosparnių rūšys priklauso nuo nariuotakojų konkrečių virškinimo fermentų. Nuo nariuotakojų sudaro iki 75% chitino (energijos kiekis 21,2 kJ /g, [8]), tai labai tikėtina, kad šikšnosparnių rūšys gali virškinti chitinous medžiagą, kaip buvo įrodyta kitų stuburinių, kaip antai Europos žaliosios driežas ( , Lacerta viridis
), The juodasis strazdas (, Turdus merula
) ir rudoji lapė (, vulpes vulpes
) [9], [10].

Chitinas gali skaldo chitinases (EB 3.2.1.14) ir kai lizocimų (EB 3.2.1.17) [11], [12]. Žinduolių, tik du chitinases buvo nustatyta: chitotriosidase ir rūgštus žinduolių chitinase (AMCase) [13], kurie abu yra klasifikuojami kaip endochitinases [14]. Chitotriosidase daugiausia išskiriami phagocytes ir veikia prieš Chitinas, kurių sudėtyje yra patogenų [15]. AMCase šiol tik buvo nustatytas pelėms (Mus musculus), makakų (Macaca fascicularis) ir žmonėms [16], [17]. Jis yra labai išreikštas skrandžio ir plaučių, nurodant dvejopą virškinimo ir imunologinę funkciją [16], [17]. Chitinolytic veikla taip pat gali kilti iš endogeninių fermentų, praryti maisto, esančių virškinimo trakto, arba gaminamų fermentų mikroorganizmų [18], [19].

Chitinolytic veikla virškinimo trakto buvo rastas kelių Owadożerny šikšnosparnių rūšių [8], [9]. Tačiau, nėra jokios informacijos apie apie atitinkamą fermento. Jeuniaux [9] patikrino chitinolytic veiklą virškinimo trakto ir Rhinolophus ferrumequinum
, Europos šikšnosparnių šeimos rūšys Rhinolophidae. Whitaker ir kt. [8] parodė chitinolytic veiklą virškinimo trakto Šiaurės Amerikos vespertilionid šikšnosparnių rūšių, genčių Myotis
Eptesicus
Nycticeius
Lasiurus
Pipistrellus parsisiųsti ir Lasionycteris
. Jie izoliuoti chitinase gaminančių bakterijų padermes iš žarnyno, kaip už chitinolytic veiklos šaltinis. Priešingai, [9] Jeuniaux rado įrodymų, chitinolytic veiklos skrandžio gleivinės į Rhinolophus ferrumequinum
skrandžio o žarnyno eksponuojami ne chitinolytic veiklą. Tačiau, Buchholz, Wells & Conaway [20] negalėjo aptikti bet kokį chitinase į Owadożerny šikšnosparnių rūšių Pipistrellus subflavus parsisiųsti ir Myotis grisescens
. Be chitinases, kai lizocimų sugeba tirpinti chitino [11], [12]. Pavyzdžiui, Phillips, Weiss & Tandler [21] aptikta lizocimą seilių liaukų Owadożerny šikšnosparnių rūšių ir spėliojo, kad jis galėtų veikti kaip chitinolytic fermento seiles. Tačiau lizocimų daugiausia antibakterinis ir yra svarbi imuninės sistemos [22] arba virškinimo bakterijų atrajotojų [12].

hipotezę kad (i) Europos Owadożerny bat šeimos rūšys Vespertilionidae turi chitinolytic veiklą virškinimo trakto, kaip buvo įrodyta, Šiaurės Amerikos Owadożerny šikšnosparnių rūšių [8] ir vienos Europos šikšnosparnių rūšių šeimos Rhinolophidae [9] ir (ii) chitinolytic veikla yra žarnyne, kaip buvo parodyta Šiaurės Amerikos rūšis [8]. Šiame tyrime mes įsikūrę chitinolytic veiklą ir nustatė atitinkamą fermentą kaip AMCase naudojant fermentą testą, imunoblotas ir imunohistocheminis.
Naudojamas

Medžiagos ir metodai

Etika pareiškimas

Visi asmenys šiame tyrime mirė savanoriškų reabilitacijos centrų šikšnosparniai. Jie buvo pristatyti savanoriai be jokio grąžinimo natūra. Pasak Vokietijos gyvūnų gerovės įstatymas (TSchG §4 (3)) ir Federalinio gamtos apsaugos įstatymo (BNatSchG §45 (4)) nereikia jokio leidimo dirbti skerdenų. Pelė skrandis buvo pateikta kaip Anatomijos instituto tyrimo ir ląstelės biologijos Justus-Liebigo-Gyseno universitetas, kuris buvo patvirtintas regioninės tarybos (Nr V54-19C20 /15C Giessen 20/23 400AZ) likutis. Joks gyvūnas buvo nužudytas dėl šio tyrimo tikslais.

Audinių saugojimo

Skerdenos buvo saugomi iš karto po mirties -20 ° C temperatūroje. Šikšnosparniai ant ledo t sušaldytos į Giessen universiteto buvo pristatytas. Skerdenos buvo saugomi ne ilgiau kaip šešis mėnesius iki -80 ° C iki audinių preparatuose. Makro- ir mikroskopiniai pastabos patikrino labai gerą išsaugojimą organų ir ląstelių, kad padarė fermentiniai ir histologiniai tyrimai audinių įmanoma.

Audinių paruošimas

Skerdenos septynių Owadożerny šikšnosparnių rūšių be jokių puvimo požymių ( Pipistrellus Pipistrellus
( N
= 14) Plecotus auritus
( N
= 3), Myotis bechsteinii
( N
= 1), Myotis nattereri
( N
= 3), Myotis daubentonii
( N
= 2) Myotis Myotis
( N
= 1) ir Nyctalus leisleri
( N
= 1)) buvo naudojami šiame tyrime (1 lentelė) , Po atidarymo pilvo sieną, GI trakto buvo pašalintas, plaunamas 0,9% NaCl, ir išdžiovintas filtrinio popieriaus. Virškinimo trakto buvo padalintas į stemplę, skrandį, dvylikapirštę žarną, tuščiosios /klubinės žarnos, klubinės žarnos /dvitaškis ir storosios žarnos /tiesiosios žarnos po Ishikawa et al. [23] ir pasveriami remiantis skaitmeninio masto (EW2200-2NM, tikslumas: 0,01 g; Kern & SOHN GMBH, Balingenas, Vokietija). Be to, iš Mus musculus pervežimas skrandis (padermės linija C57BL /6, juodos 6 N
= 1). Buvo naudojamas kaip teigiama kontrolė AMCase aptikti iki Imunoblotingo

paruošimas tirpių baltymų frakcijų

virškinimo trakto segmentų nefiksuotų, švieži egzempliorių p. Pipistrellus
( N
= 11) P. auritus
( N
= 3) M. bechsteinii
( N
= 1), M. nattereri
( N
= 3) M. daubentonii
( N
= 2) M. Myotis
( N
= 1) ir N. leisleri
( N
= 1) ir M skrandį. musculus
individualiai žemės iki grūstuvėje ir grūstuvu su itin grynas jūros smėlio (Merck, Vokietija) ir 0,9% NaCl (standartizuotą audinio kiekį 1 ml per 100 mg audinio). Homogenatai buvo inkubuojami per naktį 4 ° C [10] ir tada centrifuguojamas (20 min, 3500 g, 4 ° C). Supernatantq buvo laikomi -20 ° C iki tolesnei analizei

nustatymas chitinolytic veiklos

Jei matuoti chitinolytic veiklą, agarozės gelyje plokštelės buvo paruoštas kaip aprašyta Zou, Nonogaki &.; Welbaum [24] su tam tikrais pakeitimais. Fosforo rūgštis sutinsta chitino buvo paruošti sumaišant 10 g chitino iš krabų kriauklių (Roth, Vokietija) su 100 ml 85% fosforo rūgšties ir inkubuojami 48 h, esant 4 ° C temperatūroje. Tada 2 L šalto vandens iš čiaupo buvo ir susidaręs paplotis perplautas iki buvo pasiektas pH 6,5 [25], [26]. Agarozės (1,6%) buvo ištirpinta inkubavimo buferio (pH 5,0) [24], mikrobangų krosnelėje, ir atšaldomas iki 50-60 ° C temperatūroje. Po to, fosforo rūgštis sutinsta chitino (0,5%) buvo pridėta ir 10 ml šio sustabdymo buvo pipete į 85 mm Petri lėkštelių. Po polimerizacijos, 4 mm skersmens gręžiniai buvo perforuoti į agarozės ir gelio kūrinių buvo ištrintas naudojant vandens srauto pompą

liofilizuoto milteliai standartinio chitinase iš Serratia marcescens
(5 U. "; sigma-Aldrich, Vokietija) buvo ištirpinta 1 ml inkubavimo buferio kaip etaloninio pradinio tirpalo. Žinomas koncentracija standartinio chitinase buvo įtraukta į kiekvienos plokštelės kaip nuoroda ir buferis inkubacinis buvo naudojamas kaip neigiama kontrolė. Pirma, 6 iL pavyzdžiai kiekvieno tirpalo buvo pipete už gerai, po kurio lėkštelės buvo inkubuojamos 20 min kambario temperatūroje, kad būtų galima mėginiai, kad būtų difunduoja į agaro. Tada papildomas L Pavyzdžio buvo įtraukta į kiekvieną šulinėlį ir plokštelės buvo inkubuotos kambario temperatūroje 20 min, po 37 ° C temperatūroje inkubuojant 20 h. tada agarozės plokštelės buvo tamsintas su 0,1% calcofluor (Calcofluor paryškinimo M2R; Sigma, MO, JAV) 10 min ir nuplauti distiliuotu vandeniu 2 val. Lizės zonos buvo ryškinamos naudojant ultravioletinėje šviesoje ir tada fotografavo. Skersmenys lizės zonas buvo matuojami naudojant GIMP (2.6.11 versiją; www.gimp.org). Naudojant nuoroda skiedimo eilutės apie chitinase tirpalo su inkubacinis buferinių fermentų veiklą buvo apskaičiuojamas zonos skersmens lyginant logaritmas koncentracijos ir variacijos tarp plokščių buvo pakoreguotos vidaus chitinase standartų, naudojamų kiekvieno Petri lėkštelę.

Jei analizuoti fermentiniu aktyvumu skirtingu pH verčių, gelio plokštelės buvo parengta kaip ir anksčiau, bet su skirtingais pH (pH 4.0, pH 5,0, pH 6,0, pH 7,0 ir pH 8,0). Supernatantai skrandžio, dvylikapirštės žarnos, tuščiosios /klubinės žarnos, klubinės žarnos /dvitaškis ir storosios žarnos /tiesiosios žarnos vieno asmens iš p. Pipistrellus
buvo naudojami. Lizės zonos buvo ryškinamos naudojant ultravioletinėje šviesoje ir analizuojami kaip ir anksčiau. Be to, pH vertės virškinimo trakto skyriuose penkių individų P. Pipistrellus
buvo matuojamas naudojant daugiaspalvis koduotos pH popieriaus (pH 0,0-6,0: Acilit, tikslumas 0,5; pH 6,5-10,0: Specialusis indikatorius, tikslumas 0,3; "Merck).

išraiška chitinase į virškinimo trakto

Vakarų dėmė analizė.

imunoblotingu buvo atliekama siekiant nustatyti ir biochemiškai rasti chitinase į virškinimo trakto Europos šikšnosparnių rūšių ir pašalinti chitinolytic veikla sukelia lizocimų. Supernatantai audinių mėginių iš šešių šikšnosparnių rūšių (virškinimo trakto skyriuje pavyzdžiai (skrandžio, dvylikapirštės žarnos tuščioji žarna /klubinė žarna, klubinė žarna /dvitaškis ir storosios žarnos /tiesiosios žarnos). P Pipistrellus
( N
= 2 ) P. auritus
( N
= 2) M. nattereri
( N
= 1), M. Myotis
( N
= 1) ir , N leisleri
( N
= 1); papildomos skrandžio mėginius.. P Pipistrellus
( N
= 9), M. nattereri
( N
= 1), M. daubentonii
( N
= 2)) ir M skrandį. Musculus
naudojamas kaip teigiama kontrolė [27] buvo atliktas natrio dodecilsulfato-poliakrilamido elektroforezės (SDS-PAGE) (Laeminli [28] modifikuotas po Sambrook, Fritsch & Maniatis [29]).

supernatantų, kiekvienos 750 mikrogramų audinio buvo sumaišyti 1:1 2 × SDS gelio-buferinio tirpalo ir kaitinama iki 95 ° C temperatūroje 3 min. Kiekvieno mėginio, 15 pL buvo atliktas 12% skaidymo gelio ir 5% krovimas gelio. Elektroforezės buvo atliktas pagal redukcinės sąlygos yra 100 V Atskirti baltymai buvo electroblotted 1 h įtampos esant pastoviam srovės 0,8 mA /cm ^{2 dėl PVDF membranas. Kad dėmės buvo blokuotos 5% ne-riebalų sauso pieno Tris buferio druskų tirpalu (TBS, pH 7,5), kuriame yra 0,1% Tween 20 (Roth) 1 val prieš inkubacijos su triušio polikloninio antikūnu, nukreiptu prieš N-terminalo rūgščiojo chitinase ( AVIVA sistemų biologija, CA, JAV; atskiesti 1:1000 į TBS, kuriose yra 1% BSA), esant 4 ° C naktį. Po plovimo su TBS, kurių sudėtyje yra 0,05% Tween 20 ir 0,1% BSA, membranos buvo inkubuojami 1 h su šarminės fosfatazės-konjuguoto ožkos polikloninio antikūno į triušio IgG (H & L) (Roth, kovos triušis-AP 4751; atskiesti 1:7500 į TBS, kurių sudėtyje yra 1% BSA). Į dėmės buvo plaunami keturis kartus ir antikūnų privalomas buvo regimos inkubacijos su bromochloroindoyl fosfatas (Bethesda tyrimų laboratorijas, MD, JAV) ir nitrotetrazolio tetrazolio substrato (Biotech Trade & SERVICE GMBH, Vokietija) pagal Harlow ir Lane [30]}

imunohistocheminis.

Jei lokalizuoti AMCase ant ląstelių lygyje, imunohistocheminis analizė buvo atlikta virškinimo trakto segmentuose p. Pipistrellus
( N
= 3). Virškinimo trakto dalys buvo nustatytos 4% paraformaldehido tirpalo fosfato buferio druskų tirpalu (pH 7,0) 24 h, kol jie buvo plaunamos 4 × 1 val su TBS. Tada audinio blokai buvo dehidratuotas surūšiuoti etanolio serijos (30%, 50%, 70%, 90%, 100%) ir galiausiai įdėta į parafiną. Parafino blokai buvo supjaustyti skyriuose 4-9 mikronų storio naudojant rogės Mikrotoms (Leitz, Vokietija) ir buvo džiovinti naktį. Norėdami gauti prieinamas antigenų jungimosi vietų, audinių dalys buvo paruoštas vartojimui su pepsino (Sigma) po Pereiti et al. [27]. Skyriai buvo plaunamas 0,01% Tween 20 TBS. Nespecifinių vietos buvo užblokuotas 5% ožkos serumas (Merck) 3% BSA (AppliChem, Vokietija). Skyriai buvo veikiami triušis polikloniniu antikūną prieš N-terminalo rūgštus chitinase (AVIVA sistemų biologijai, praskiesto 1:200 į TBS, kuriose yra 1% BSA) drėgnoje kameroje. Neribojama antikūnai buvo ištrintas, plaunant TBS prieš antrinio antikūno (ChromeoTM 546, Abcam, Jungtinė Karalystė; atskiesti 1:2500 0,5% BSA TBS) buvo taikomas. Dėl branduolinės counterstaining skyriai buvo inkubuojami su 0,05% 4 ", 6-diamidino-2-fenilindolo (DAPI) (AppliChem). Po galutinio skalavimo su TBS, sekcijos buvo sumontuoti su 1,4-diazabiciklo [2.2.2] oktano tirpalo (DABCO) (Sigma),. Kontrolės autofluorescenciją ir privalomo specifiškumo antikūnus skyriai buvo tvarkomi su fluoresceino izotiocijanato (FITC) paženklinti antriniais antikūnais, bet be pirminio antikūno. Skyriai buvo įvertintas naudojant fluorescencijos mikroskopijos ( "Olympus BX60, F-3;" Olympus Optical Co. LTP, Vokietija).

Rezultatai

Chitinolytic veikla

Mes galėjome aptikti chitinolytic veikla skrandžio mėginius visų asmenų (pavyzdžiui, 1 pav.) ir storosios žarnos /tiesiosios žarnos mėginį vienos M. Myotis M. nattereri parsisiųsti ir N. leisleri
kiekvienas (2 lentelė). Nėra chitinolytic veikla gali būti išmatuota dvylikapirštės žarnos, tuščiosios /klubinės žarnos arba klubinė žarna /dvitaškis pavyzdžius. Chitinolytic aktyvumas skrandžio mėginių buvo didžiausias tarp pH 5,0 ir pH 6,0 (2 pav.). Paremti mūsų ankstesnius rezultatus, ne chitinolytic veikla buvo aptikta kitų regionų virškinimo trakto, nepriklausomai nuo pH vertės. Vidutinis pH GN trakto P. Pipistrellus
( n
= 5) buvo 5,6 ± 0,2 iš skrandžio, 7,0 ± 0,3 į dvylikapirštės žarnos, 7,1 ± 0,2 į tuščiosios /klubinės žarnos, 7,0 ± 0,2 į klubinės žarnos /gaubtinės žarnos ir 7,0 ± 0,5 iš storosios žarnos /tiesiosios žarnos.

išraiška chitinase į virškinimo trakto

Vakarų dėmė analizė M. Musculus
skrandžio parodė, būdingą juosta esant santykinę molekulinę masę 46 k, nurodant AMCase buvimą. Be to, visais skrandžio mėginius P. Pipistrellus, p auritus M. nattereri
M. Myotis
, ir N. leisleri
buvo nustatyta aiški baltymų grupė sudaro 46 k (tipiškiems Vakarų dėmė vaizdų, žr 3. Pipistrellus parsisiųsti ir 4 pav. Plecotus, Myotis parsisiųsti ir Nyctalus
). Šis baltymas juosta nebuvo aptikta stemplės, dvylikapirštės žarnos, tuščiosios /klubinės žarnos, klubinės žarnos /gaubtinės arba tiesiosios žarnos /tiesiosios žarnos mėginiai šikšnosparnių rūšių (3 pav.). Visi imunohistocheminius rezultatai buvo kontroliuojami autofluorescenciją ir nespecifinė privalomas antrinio FITC sujungtas antikūnų. Skrandžio skyriai buvo teigiamas anti-AMCase antikūnų ženklinimo, o stemplės, dvylikapirštės žarnos, tuščiosios /klubinės žarnos, klubinės žarnos /dvitaškis ir storosios /tiesiosios žarnos skyriai buvo aptikta ne privalomas. Skrandyje skyriuose, anti-AMCase ženklinimas buvo apribota skrandžio liaukų palei skrandžio gleivinės aplink DAPI tamsintas ląstelių branduolių apačioje (5 pav.).

Diskusijos

hipotezę kad Europos Owadożerny bat šeimos rūšys Vespertilionidae turi virškinimo fermentų chitinase. Ši hipotezė buvo patvirtinta chitinolytic veiklos buvimas tirtų rūšių skrandžius. Be to, tikras chitinase, daugiau ypač AMCase, gali būti biochemiškai aptikta visuose skrandžio mėginių. Aktyvios chitinases yra dažni ir užkonservuoti tarp žinduolių [14]. Tačiau vieta ir funkcija AMCase skiriasi tarp rūšių ir nėra visiškai išspręsta [31].

Mes taip pat iškėlė hipotezę, kad chitinolytic veikla yra žarnyne, ypač plonojoje žarnoje, nes ji yra svetainė, kurioje pagrindinis fermentinis virškinimas ir absorbcija vyksta [32]. Mūsų rezultatai nepatvirtino šią hipotezę, nes chitinolytic veikla buvo lokalizuotas daugiausia skrandyje ir trijų asmenų mažomis veiklos lygių gaubtinės žarnos /tiesiosios žarnos. Aukšto kintamumas chitinolytic veiklos tirtų asmenų gali būti sukeltas skirtingus virškinimo veiklą asmenų mirties metu. Tai yra palaikoma skirtingų dydžių maisto rasti skrandžio ir žarnų trakto. Chitinolytic veikla skrandžio mėginius, bet ne dvitaškis /tiesiosios žarnos mėginių galima atsekti į AMCase veiklą, o ne į Vakarų-sugeriamojo lizocimo. GPGB AMCase veikla buvo optimalus pH nuo 5,0 ir pH 6,0. Šie pH lygis yra panašus į rūgščioje aplinkoje į Owadożerny šikšnosparnių rūšių skrandžiai, išmatuota šio tyrimo ir pranešė Naumova ir Zharova [33]. Tai yra pirmas požymis mineralizuojami šio virškinimo trakto dalies per biologinę reikšmę AMCase. Tačiau tolesni eksperimentai, pavyzdžiui, virškinimo efektyvumo tyrimai turėtų būti atliekami siekiant patikrinti, jei AMCase veikla kelia biologinį reikšmingumą chitino virškinimą. AMCase turi dvejopą funkciją imunitetą ir virškinimą Chitinas turinčių organizmų [34], [35]. Pavyzdžiui, žmogaus AMCase nepritaikyta rūgščioje aplinkoje skrandyje, skirtingai nei AMCase rasta pelių [31]. Skrandis AMCase iš M. Musculus
yra aminorūgščių pakaitas, kurie yra būtini Derinimo su rūgščioje aplinkoje, skrandžio [31]. Be to, įkrovos ir kt. [17] parodė, kad AMCase iRNR ir M. musculus
randama tik skrandį. Jei šie aminorūgščių pakeitimai yra pateikti į šikšnosparnių rūšių AMCase dar rodomas.

imunohistocheminius Šio tyrimo rezultatai paramą iš AMCase lokalizavimo šikšnosparnių rūšių skrandžio, ypač skrandžio liaukų gleivinės , Be to, mes nustatėme, kad fermentas buvo įsikūrusi ar aplink pagrindinių ląstelių, esančių ties skrandžio liaukų bazę, kaip anksčiau buvo parodyta, kad skrandžio AMCase iš M. musculus
[27], [31], [34]. Aukštieji ląstelės išskiria virškinimo fermentų [36], kad yra įsikūrę daug citoplazmos granulėse [37]. Bendra pagamintas pagal šį skrandžio ląstelių tipo fermentas yra pepsinogen, priklausantis proteolitinis fermentas pepsino [38] pirmtakas. Goto ir kt. [27] parodė, kad gamybos vieta skrandžio AMCase iš M. musculus
yra šių sekrecijos granulių. Todėl labiausiai tikėtina, kad AMCase taip pat išskiriami skrandžio vyriausiųjų ląstelių šikšnosparnių rūšių. Tai prieštarauja Whitaker et al rezultatus. [8], kuris nurodė, kad chitinase į šikšnosparnių rūšių gaminamas chitinase gaminančių bakterijų padermių (daugiausia apie Enterobacteriaceae šeimos) žarnyne. Yra žinoma, kad žarnyno bakterijos gamina chitinase patenkinti savo mitybos reikalavimus [39]. Tačiau chitinase gaminančių enterobakterijos taip pat galima rasti per GN nedirbamos žinduolių, kurie neturi maitinasi chitinous medžiagos [19]. Tai rodo, kad nėra glaudaus ryšio tarp chitino virškinimą ir chitinolytic bakterijų. Šiame tyrime, mažai chitinolytic veikla buvo išmatuotas tik kelių asmenų žarnyne, o ne AMCase gali būti aptiktas, kai atskiriant žarnyną nuo skrandžio. Tai kartais chitinolytic veikla gali būti paaiškinta vežti AMCase skrandyje gaminama į žarnyną su maistu, kaip aptarta Suzuki et al. [34] ir įkrovos ir kt. [17]. Be to, mažas chitinolytic veikla žarnyne gali būti sukeltas chitinase-gaminant enterobakterijų [8]. Tačiau kiekybinis šių bakterijų reikėtų patikrinti į chitino virškinimo dalyvavimą šių simbiontų. Todėl tikėtina, kad Chitinas į Owadożerny šikšnosparnių rūšių yra suardomas iš endogeninių skrandžio AMCase kartu ir chitinase išskiriami žarnyno bakterijų, kaip buvo siūloma, M. musculus
[17]. Šis tyrimas aiškiai rodo, kad Europos Owadożerny šikšnosparniai šeimos Vespertilionidae turi virškinimo fermentų AMCase. Mes parodėme, kad šis fermentas yra aktyvus ir įsikūręs skrandžio, ypač ar aplink pagrindinių ląstelių ties skrandžio liaukų bazę.

Padėka

Mes dėkojame E. Mühlbach, R. Keil N. Dittrich ir S. Wiegand už gyvūnų mėginių ir J. Kühnel C. von Bredow A. Diebel ir žinduolių ekologijos grupė už pagalbą.

• PLoS ONE: Sonic the Hedgehog Tarpininkauja proliferaciją ir įdarbinimas transformuota mezenchiminių kamieninių ląstelių į skrandį
• PLoS ONE: Sąlyginis išraiška Wnt9b į Six2 teigiamas Cells sutrikdo skrandžio ir inkstų funkciją