PLoS ONE: bubojed Šišmiši Digest hitin u želucu upotrebom kiselih sisavaca Chitinase

Sažetak pregled

probavnom traktu životinja je prilagođen primarni izvor hrane optimizirati korištenje resursa i unos energije. Umjerena vrsta šišmiša uglavnom se hrane člankonožaca. Oni sadrže energetski bogatog ugljikohidrata hitin, što je neprobavljiva za endogenih enzima tipične gastrointestinalnog trakta u sisavaca. Međutim, gastrointestinalni trakt vrsta šišmiša treba prilagoditi svojoj prehrani i moći probaviti hitin. Mi smo pretpostavili da je (i) europske vrste šišmiša vespertilionid imaju probavni enzim chitinase i da (ii) chitinolytic aktivnost se nalazi u crijevima, kao što je utvrđeno za sjevernoameričkih vrsta šišmiša. Želučano-crijevnog trakta sedam vrsta šišmiša ( Pipistrellus pipistrellus pregled, Plecotus auritus pregled, Myotis bechsteinii pregled, Myotis nattereri pregled, Myotis daubentonii
Myotis Myotis, pregled i Nyctalus leisleri
) su testirani na aktivnost chitinolytic difuzijom testu. Gastrointestinalni trakt kod str. pipistrellus pregled, P. auritus pregled, M. nattereri pregled, M. Myotis, pregled i N. leisleri pregled ispitani su kisele chitinase sisavca Western blot analizom. Uzorci tkiva probavnog trakta str. pipistrellus pregled su imunohistokemijski analizirane kako bi se pronašli kiseli chitinase sisavaca. Chitinolytic aktivnost otkrivena je u želucima svih vrsta šišmiša. Western blot analiza potvrdila je kiseli chitinase sisavaca u uzorcima želučane. Imunohistokem od str. pipistrellus pregled gastrointestinalnog trakta naznačeno da kisela hitinaza sisavca nalazi se u glavni želucu stanica u podnožju želučanim žlijezdama. U zaključku, europski vespertilionid vrste šišmiša imaju kiselu hitinaza sisavaca, koja je nastala u želučanim žlijezdama želuca. Stoga, gastrointestinalni trakt kod bubojed vrsta šišmiša razvio enzimsku prilagodbu svojoj prehrani

Citation. Strobel S, Roswag A, Becker NI, Trenczek TE, Encarnação ja (2013) bubojed Šišmiši Digest hitin u želucu Korištenje kiseli sisavaca chitinase. PLoS ONE 8 (9): e72770. doi: 10,1371 /journal.pone.0072770 pregled

Urednik: François Blachier, Nacionalni institut za agronomska istraživanja, Francuska pregled

Primljeno: 26. ožujka 2013. godine; Prihvaćeno: 12. srpnja 2013; Objavljeno: 3. rujna 2013 pregled

Copyright: © 2013 Strobel i sur. Ovo je otvorenog pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan

financiranja. Autori nemaju podršku ili sredstva za prijaviti pregled

suprotstavljenih interesa:.. autori su izjavili da ne postoje suprotstavljeni interesi pregled

Uvod pregled

Životinje moraju uzimati i probaviti hranu kako bi se osiguralo kontinuirano funkcioniranje njihove interne metabolizam pokrivanjem, na primjer, njihova energija, proteina i vitamina zahtjevi [1]. Multi-stupanjski proces probave uključuje mehaničke, kemijske i enzimske koraka za pretvaranje hranjivih tvari [2]. Vrsta šišmiša imaju visoku potražnju masovno specifične energije zbog svoje male veličine i sposobnost da se aktivno letjeti [3], [4]. U letećih životinja, hrana treba obraditi brzo smanjiti potražnju energije uzrokovano povećanom masom leta [2]. Europske vrste šišmiša imaju dijeta se sastoji pretežno od člankonožaca [5]. Oni su kratke vremena retencije [6], ali visoka probavni učinkovitost [7]. Ovo sugerira da je njihova gastrointestinalni (GI) trakta vrlo prilagođen za prehranu jer se brzo i potpuno probavlja artropoda. Dakle, moglo bi se tvrditi da su europske vrste šišmiša ovise o člankonožaca specifičnih probavnih enzima. Od člankonožaca sadržavati do 75% hitin (energetskom sadržaju 21,2 kJ /g, [8]), vrlo je moguće da vrsta šišmiša su u stanju probaviti hitinski materijala, kao što je pokazano u drugih kralježnjaka kao što su Europski zeleni gušter ( Lacerta viridis pregled) je kos ( Turdus merula pregled) i lisica ( Vulpes vulpes pregled) [9], [10]. pregled

Kitin može se razgraditi hitinaze (EC 3.2.1.14) kao i nekih lisozime (EC 3.2.1.17) [11], [12]. U sisavaca, identificirani su samo dva hitinaze: chitotriosidase i kiselu hitinaza sisavca (AMCase) [13], pri čemu su oba klasificirani kao endochitinases [14]. Chitotriosidase uglavnom izlučuje fagocita i djeluje protiv patogenih hitina koji sadrži [15]. AMCase je do sada samo je identificiran u miševa (Mus musculus), majmuna (Macaca fascicularis) i ljudi [16], [17]. To je visoko izražen u želucu i plućima, što ukazuje na dvostruku probavni i imunološki funkciju [16], [17]. Chitinolytic aktivnost može potjecati od endogenih enzima, pojedene hrane koja se nalazi u GI traktu, ili enzimima koje proizvode mikroorganizmi [18], [19]. Pregled

Chitinolytic aktivnost u GI sustavu je nađen i u nekoliko bubojed vrsta šišmiša [8], [9]. Međutim, ne postoji znanje o odgovarajućeg enzima. Jeuniaux [9] provjereno chitinolytic aktivnost u GI traktu Rhinolophus ferrumequinum pregled, europski vrsta šišmiša obitelji Rhinolophidae. Whitaker et al. [8] je pokazao chitinolytic aktivnost u GI traktu sjevernoameričkog vespertilionid šišmiša vrste rodova Myotis pregled, Eptesicus pregled, Nycticeius pregled, Lasiurus pregled Pipistrellus pregled i Lasionycteris pregled. Oni su izolirani hitinaze proizvodnju sojeva bakterije iz crijeva kao izvor za chitinolytic aktivnosti. Nasuprot tome, Jeuniaux [9] pronađen dokaz chitinolytic aktivnosti u želučanoj sluznici želuca Rhinolophus ferrumequinum pregled dok crijevo ne pokazuje chitinolytic aktivnost. Međutim, Buchholz, Wells & Conaway [20] nije mogao otkriti bilo chitinase u bubojed vrsta šišmiša Pipistrellus subflavus pregled i Myotis grisescens pregled. Osim hitinaze, neki lizozime su u mogućnosti da raspusti hitin [11], [12]. Na primjer, Phillips, Weiss & Tandler [21] Otkrili lizozima u žlijezdama slinovnicama bubojed vrsta šišmiša, a nagađa se da bi to moglo djelovati kao chitinolytic enzima u slini. Međutim, lizozime su uglavnom anti-bakterijska i važan su dio imunološkog sustava [22] ili za probavu bakterija u preživača [12]. Pregled

Mi pretpostavljamo da (i) europske bubojed vrsta šišmiša obitelji Vespertilionidae posjeduju chitinolytic aktivnost u probavnom sustavu, kao što je pokazano za sjevernoameričke vrste bubojed šišmiša [8] i jedna europska vrsta šišmiša porodice Rhinolophidae [9] i (ii) chitinolytic aktivnost se nalazi u crijevima, kao što je bio što je prikazano na sjevernoameričke vrste [8]. U ovom istraživanju, nalazi se chitinolytic aktivnost i identificirati odgovarajući enzim kao AMCase pomoću enzima u testu, imunoupijač i imunohistokemijski. Pregled

materijali i postupci

Etika izjava pregled

Svi pojedinci koriste u ovom istraživanju je umro u dobrovoljnim rehabilitacijskim centrima za šišmiše. Oni su održali volonteri bez ikakvog povrata. Prema Zakonu o dobrobiti životinja njemački (TSchG § 4 (3)) i Zakona o Saveznom zaštitu prirode (BNatSchG §45 (4)) Dozvola nije potrebna za rad na polovicama. Miš trbuh ostatak studiji Instituta za anatomiju i staničnu biologiju na Justus-Liebig-University of Giessen koji je odobren od strane regionalnog vijeća (br V54-19C20 /15C Giessen 20/23 400AZ). Nijedna životinja je ubijen za potrebe ovog istraživanja. Pregled

Tissue skladištenje pregled

Trupla su pohranjeni odmah nakon smrti na -20 ° C. Šišmiši su isporučena na ledu tj zamrznuta na Sveučilištu Giessen. Trupla su spremljeni najviše šest mjeseci na temperaturi od -80 ° C do pripreme tkiva. Makro- i mikroskopske opažanja potvrdili vrlo dobre očuvanje organa i stanica koji je napravio enzimatske i histološke pregledi tkiva moguće. Pregled

Priprema tkiva pregled

Lešine sedam bubojed vrsta šišmiša, bez ikakvih znakova truljenja ( pipistrellus pipistrellus pregled ( N pregled = 14), Plecotus auritus pregled ( N pregled = 3), Myotis bechsteinii pregled ( N pregled = 1), Myotis nattereri pregled ( N pregled = 3), Myotis daubentonii pregled ( N pregled = 2) Myotis Myotis
( N pregled = 1) i Nyctalus leisleri pregled ( N pregled = 1)) su korišteni u ovom istraživanju (tablica 1) , Nakon otvaranja abdominalne zid GI trakta odvoji, ispire s 0,9% NaCl, te isušena na filter papir. GI trakta je bila podijeljena u jednjak, želudac, dvanaesnik, jejunum /ileuma, tanko /debelo crijevo i debelo crijevo /rektuma nakon Ishikawa i sur. [23] i izvagan na digitalnoj vagi (EW2200-2NM, točnost: 0,01 g; Kern & Sohn GmbH, Balingen, Njemačka). Osim toga, želudac od Mus musculus
(C57BL /6, crni 6; n pregled = 1). Korišten je kao pozitivna kontrola za detekciju AMCase western blotting pregled

Priprema topljivih proteinskih frakcija pregled

segmente GI trakt nije fiksna, svježe primjerke p. pipistrellus pregled ( N pregled = 11), P. auritus pregled ( N pregled = 3), M. bechsteinii pregled ( N pregled = 1), M. nattereri pregled ( N pregled = 3), M. daubentonii pregled ( N pregled = 2), M. Myotis
( N pregled = 1) i N. leisleri pregled ( N pregled = 1), a trbuh M. musculus pregled su pojedinačno masu u tarioniku sa ekstra čist mora pijeska (Merck, Njemačka) i 0,9% NaCl (standardiziranog količini tkiva: 1 mL po 100 mg tkiva). Homogenati su inkubirani preko noći na 4 ° C, [10], a zatim centrifugiraju (20 minuta, 3500 g, 4 ° C). Supernatanti su čuvane na -20 ° C do daljnje analize pregled

Određivanje aktivnosti chitinolytic pregled

mjerenje chitinolytic aktivnosti, agarozni gel ploče su pripremljene kao što je opisano Zou, Nonogaki &. Welbaum [24] s nekim izmjenama. Fosforna kiselina nabubri hitin je pripremljena miješanjem 10 g hitin od rakova ljuske (Roth, Njemačka) s 100 mL 85% fosfornom kiselinom i inkubira 48 sata na 4 ° C. Zatim se doda 2 L vode hladnu vodu, a dobivena kolač se ispire do pH 6.5 je postignut [25], [26]. Agaroza (1,6%) je otopljen u puferu za inkubaciju (pH 5,0), [24] u mikrovalnoj pećnici i ohladi na 50-60 ° C. Nakon toga, dodana je fosforna kiselina otečene hitin (0.5%) i 10 mL ove suspenzije je pipetiran u 85 mm Petrijevim zdjelicama. Nakon polimerizacije, 4 mm promjera bušotine se uguraju u agaroznih i gel komada su uklonjeni pomoću mlaza vode pumpa pregled

liofilizirani prašak standardne chitinase od Serratia marcescens
(5 U. sigma-Aldrich, Germany) se otopi u 1 ml pufera za inkubaciju kao standardne matične otopine. Poznata koncentracija standardne chitinase je dodan na svaku ploču kao referenca i inkubacija pufer je korišten kao negativna kontrola. Prvo, 6 uL uzorka svake otopine je pipetirano u svaku jažicu, nakon čega su ploče inkubirane su 20 minuta na sobnoj temperaturi kako bi se omogućilo da se uzorci difundiraju u agaru. Tada se doda dodatna uzorak L je dodan u svaku jažicu i ploče se inkubiraju na sobnoj temperaturi tijekom 20 minuta, nakon čega slijedi inkubacija na 37 ° C tijekom 20 sati. Agaroze Ploče su zatim obojene s 0.1% calcofluor (Calcofluor bjelila M2R; Sigma, MO, USA) tijekom 10 minuta, ispere s destiliranom vodom kroz 2 sata. Litičke zone su vizualizirani pomoću UV transiluminatoru a zatim fotografirao. Promjeri litičkim zone su mjereni pomoću GIMP (verzija 2.6.11, www.gimp.org). Koristeći niz referentna razvodnjavanja hitinaza stok otopina sa inkubacijski pufer enzimskih aktivnosti su izračunate promjera zone u odnosu na logaritam koncentracije i razlike između ploča su prilagođeni internih standarda chitinase koriste na svakom Petrijevoj zdjelici. Pregled

Za analizu enzimsku aktivnost pri različitim pH vrijednostima, gel ploče su pripravljeni kao i prije, ali s različitim pH vrijednostima (pH 4.0, pH 5.0, pH 6.0, pH 7,0 i pH 8,0). Supernatanti iz želuca, dvanaesnika, jejunuma /ileuma, tanko /debelo crijevo i debelo crijevo /rektuma jedne osobe iz str. pipistrellus pregled su korišteni. Litička zone vizualizaciju pomoću UV transiluminacijom i analizirani kao i prije. Osim toga, pH vrijednosti dijelovima probavnog trakta pet pojedinaca P. pipistrellus pregled mjerene su pomoću višebojne kodirani pH papir (pH 0,0-6,0: Acilit, točnost 0,5 pH 6,5 do 10,0: Posebna Indikator, točnost 0,3; Merck). pregled

Izražavanje chitinase u probavnom sustavu pregled

Western blot analiza. pregled

Western blot provedena je identificirati i biokemijski locirati chitinase u probavnom sustavu europskih vrsta šišmiša i isključiti chitinolytic aktivnosti uzrokovane lisozomi. Supernatant uzorka tkiva iz šest vrsta šišmiša (uzorcima presjeka GI trakta (želudac, duodcnum /ileum, ileum /debelog crijeva i kolona /rektuma). P pipistrellus pregled ( n = 2 pregled ), P. auritus pregled ( N pregled = 2), M. nattereri pregled ( N pregled = 1), M. Myotis pregled ( N pregled = 1) i N leisleri pregled ( N pregled = 1); dodatni uzorci u trbuhu., P pipistrellus pregled ( N pregled = 9), M. nattereri pregled ( N pregled = 1), M. daubentonii pregled ( N pregled = 2)) i želudac od M. musculus pregled korišten kao pozitivna kontrola [27] su podvrgnuti natrijevim dodecil sulfat-poliakrilamid elektroforezom (SDS-PAGE) (Laemmli [28] mijenjati nakon Sambrook, Fritsch i Maniatis [29]). pregled

supernatantima svake 750 ug tkiva su pomiješani 1:1 u 2 × SDS-gel-pufera za nanošenje i zagrijava do 95 ° C tijekom 3 minute. Svakog uzorka, 15 uL se podvrgne poliakrilamidni gel 12% i 5% skupljenom gelu. Elektroforeza je provedena pod redukcijskim uvjetima pod naponom od 100 V. Izlučeni proteini elektroblotiran 1 h pri konstantnom strujom od 0,8 mA /cm ^{2 na PVDF membrane. Mrlje su blokirani s 5% bezmasnim suhim mlijekom u Tris-puferiranoj fiziološkoj otopini (TBS, pH 7,5) koji sadrži 0,1% Tween 20 (Roth) 1 h prije inkubacije sa zečjim poliklonskim protutijelom usmjerenim na N-terminalni kraj kisele chitinase ( AVIVA Systems Biology, CA, USA, razrijedi 1:1000 u TBS koji sadrži 1% BSA) pri 4 ° C preko noći. Nakon ispiranja s TBS-om koji sadrži 0,05% Tween 20 i 0,1% BSA, membrane se inkubiraju 1 sat s alkalnom fosfatazom-konjugiranim kozjim polikloskim antitijelima na zečjim IgG (H &L) (Roth, protukunićje-AP 4751 razrijeđena 1:7500 u TBS koji sadrži 1% BSA). Mrlje su isprane četiri puta i veže protutijelo vizualizira se inkubacijom s bromochloroindoyl fosfata (Bethesda Research Laboratories, MD, USA) i tetrazolija supstrata (Biotech trgovine & Service GmbH, Njemačka), u skladu s Harlow and Lane [30]}

Imunohistokem. pregled

Kako lokalizirati AMCase na staničnoj razini, imunohistokemijska analiza je provedena na GI segmentima sustava za str. pipistrellus pregled ( N pregled = 3). Dijelovi GI trakta su fiksirane u 4% paraformaldehidu u fiziološkoj otopini puferiranoj fosfatom (pH 7.0) kroz 24 h prije nego što se ispere 4 × 1 h s TBS-om. Zatim blokira tkiva su dehidrirana u serijama gradiranog etanola (30%, 50%, 70%, 90%, 100%) i na kraju u parafin. Parafinsko blokovi su izrezani u odjeljcima 4-9 debljine um pomoću bata mikrotoma (Leitz, Njemačka) i osuši preko noći. Da biste dobili pristupačne vezanja antigena, dijelovi tkiva su predigested s pepsin (Sigma) nakon Goto et al. [27]. Sekcije su isprane sa 0.01% Tween 20 u TBS. Nespecifično mjesta blokirana s 5% kozjim serumom (Merck) u 3% BSA (AppliChem, Njemačka). Sekcije su izloženi zečjim poliklonskim protutijelom usmjerenim na N-terminalni kraj kiseli hitinaza (Aviva biološke sustave razrijeđenog 1:200 u TBS koji sadrži 1% BSA) u vlažnoj komori. Nevezane antitijela se uklanja pranjem sa TBS-om, prije sekundarnog protutijela (ChromeoTM 546, Abcam, UK, razrijedi 1:2500 u 0.5% BSA u TBS-u) je primijenjena. Za sekcije nuklearne counterstaining inkubirani su sa 0.05% 4 ', 6-diamidino-2-fenilindol (DAPI) (AppliChem). Nakon konačnog ispiranja s TBS, sekcije su postavljene s 1,4-diazabiciklo [2.2.2] oktan Otopina (DABCO) (Sigma). Za kontrolu autoflorescencijom i specifičnost vezanja protutijela sekcije su obrađene s fluorscein izotiocijanat (FITC), sekundarnog antitijela označenog ali bez primarnog antitijela. Sekcije su procijenjene pomoću fluorescentnim mikroskopom (Olympus BX60 F-3, Olympus Optical Co. LTP, Njemačka). Pregled

Rezultati

Chitinolytic aktivnost pregled

Mi smo bili u mogućnosti otkriti chitinolytic aktivnost u uzorcima želučane svih pojedinaca (na primjer sl. 1), a iz uzorka kolona /rektuma jednog, M. Myotis, M. nattereri pregled i N. leisleri pregled svaki (Tablica 2). Ne chitinolytic aktivnost može se mjeriti u dvanaesterac, jejunum /crijevu ili uzoraka ileum /crijeva. Chitinolytic aktivnost u uzorcima želučane je najviši između pH 5.0 i pH 6.0 (sl. 2). Potpora naše prethodne rezultate, bez chitinolytic aktivnost je otkrivena u drugim dijelovima probavnog trakta, bez obzira na pH vrijednosti. PH vrijednost srednja GI traktu str. pipistrellus pregled ( n pregled = 5) bio je 5,6 ± 0,2 u želucu, 7,0 ± 0,3 u dvanaesniku, 7.1 ± 0.2 u jejunum /ileumu, 7.0 ± 0.2 u ileum /kolona i 7,0 ± 0.5 u debelo crijevo /rektuma. pregled

Izražavanje chitinase u GI traktu pregled

Western blot analiza M. musculus
želudac pokazala karakteristično traku kod relativne molekulske mase od 46 K, što upućuje na prisutnost AMCase. Nadalje, u svim uzorcima želuca str. pipistrellus, P. auritus, M. nattereri pregled, M. Myotis pregled i N. leisleri
jasna proteinski lanac na 46 k je identificiran (za reprezentativne Western blot slike, vidi sl. 3 za Pipistrellus pregled i sl. 4 za Plecotus, Myotis pregled i Nyctalus pregled). Ova proteinska traka nije detektiran u jednjak, duodenum, jejunum /ileum, tanko /kolona ili uzoraka kolona /rektuma vrsta šišmiša (Sl. 3). Svi imunohistokemijski rezultati su kontrolirano autofluorescencija i nespecifično vezanje sekundarnog FITC-povezanog antitijela. Želuca sekcije su bili pozitivni na anti-AMCase označavanje protutijela, dok je u jednjak, duodenum, jejunum /ileum, tanko i debelo crijevo /crijeva /rektuma dijelova bez vezanja je otkriven. U odjeljcima u želucu, protiv AMCase obilježavanje je ograničena na dnu želučanim žlijezdama duž sluznice želuca oko jezgri stanice DAPI-stained (Sl. 5). Pregled

Rasprava pregled

Mi smo pretpostavili da europski bubojed vrsta šišmiša obitelji Vespertilionidae imaju probavni enzim chitinase. Ova hipoteza je potvrđena prisutnost chitinolytic aktivnosti u želucima istraživanim vrstama. Osim toga, pravi hitinaza, točnije AMCase, mogao bi biti biokemijski identificirati u svim uzorcima želuca. Aktivni hitinaze su uobičajene i očuvan među sisavcima [14]. Međutim, mjesto i funkcija AMCase razlikuju među vrstama i nisu u potpunosti riješeni [31]. Pregled

nadalje hipoteza da chitinolytic aktivnost se nalazi u crijevu, naročito u tankom crijevu, kao što je to mjesto gdje je glavni enzimska probava i apsorpcija odvija [32]. Naši rezultati nisu potvrdili tu hipotezu chitinolytic aktivnost je lokaliziran uglavnom u želucu, a za tri osobe po niskim razinama aktivnosti u debelo crijevo /rektuma. Visoka varijabilnost chitinolytic aktivnosti u ispitivanim osobama moglo biti uzrokovano promjenom probavni aktivnostima pojedinaca u trenutku smrti. Tome u prilog različitim količinama hrane koje se nalaze u GI traktu. Chitinolytic aktivnost u uzorcima želučane ali ne u uzorcima debelog crijeva /rektuma može se pratiti natrag do aktivnošću AMCase, a ne na lizozim western-blot. Aktivnost šišmiša AMCase bila optimalna između pH 5.0 i pH 6.0. Ove pH razine su usporedivi s kiselom sredinom u želucima bubojed vrsta šišmiša, mjereno u ovom istraživanju i izvijestila Naumova i Zharova [33]. Ovo je prvi znak za biološku važnost AMCase tijekom probave u ovom dijelu gastrointestinalnog trakta. Međutim, daljnji eksperimenti poput probavnih ispitivanjima učinkovitosti treba biti provedena kako bi se ispitalo da li je aktivnost AMCase predstavlja biološki značaj hitina probavu. AMCase ima dvostruku ulogu u imunosti i probavu organizama hitina sadržavaju [34], [35]. Na primjer, ljudska AMCase nije prilagođen kisele sredine u želucu, za razliku od AMCase naći u miševa [31]. Želudac AMCase od M. musculus pregled sadrži supstitucije amino kiselina koje su potrebne za prilagodbu na kiseloj sredini želuca [31]. Nadalje, Boot i sur. [17] pokazala da je AMCase mRNA m. musculus pregled je pronađen samo u želucu. Ako su prisutni u AMCase vrsta šišmiša ove zamjene aminokiselina i dalje će biti prikazan. Pregled

imunohistokemijski rezultati ovog istraživanja podršku lokalizaciju AMCase u želucu vrsta šišmiša, osobito u želučanim žlijezdama sluznice , Nadalje, utvrdili smo da je enzim nalazi u ili oko glavnih stanica koje su smještene u podnožju želučanih žlijezda, kao što je prethodno pokazano za želudac AMCase od M. musculus pregled [27], [31], [34]. Glavni stanice luče probavne enzime [36] koje se nalaze u brojnim citoplazmatske granule [37]. Čest enzim proizvodi ovog tipa stanica želučane je pepsinogen, prekursor je proteolitički enzim pepsin [38]. Goto et al. [27] pokazalo je da mjesto proizvodnje želučane AMCase od M. musculus pregled je u tim izlučivanje granula. Dakle, to je vrlo vjerojatno da AMCase također luče želučane glavnih stanica u šišmiša. To je u suprotnosti s rezultatima Whitaker et al. [8], koji je navedeno da hitinaza u šišmiša proizvodi hitinaza proizvode sojevima bakterija (najčešće iz obitelji Enterobacteriaceae) u crijevima. Poznato je da crijevne bakterije proizvode chitinase da zadovolje svoje vlastite prehrambene potrebe [39]. Međutim, hitinaza proizvodnju enterobakterija se također mogu naći u GI traktu sisavaca koji ne se hrane hitinski materijalu [19]. To ukazuje da ne postoji bliska veza između hitin probavu i chitinolytic bakterija. U ovom istraživanju, niske chitinolytic aktivnost mjerena je u crijevima samo nekoliko osoba, a ne mogu se detektirati AMCase prilikom odvajanja crijevo od želuca. To povremeno chitinolytic aktivnost može se objasniti prijevozom AMCase proizvedene u želudac u tanko crijevo s hranom, kao što je objašnjeno od strane Suzuki et al. [34] i Boot i sur. [17]. Dodatno, mala chitinolytic aktivnost u crijevu može biti uzrokovana hitinaza proizvode enterobakterija [8]. Međutim, kvantifikacija tih bakterija će biti potrebna kako bi potvrdili sudjelovanje u hitin probavu tih simbionata. Stoga je moguće da hitin u bubojed vrsta šišmiša probavlja kombinacijom endogenog želuca AMCase i chitinase luče crijevnih bakterija, kao što je bio predložen za M. musculus pregled [17]. Ova studija jasno pokazuje da europske bubojed šišmiši obitelji Vespertilionidae imaju probavni enzim AMCase. Pokazali smo da je aktivan i nalazi se u želucu ovaj enzim, osobito u ili oko glavnih stanica u podnožju želučanih žlijezda. pregled

Izvori pregled

Zahvaljujemo E. Muhlbach, R. Keil N. Dittrich i S. Wiegand za uzorke životinjskih i Y. Kuhnel, C. von Bredow, A. Diebel i sisavaca Ekologija Grupa za pomoć. pregled