A dräi-Gentherapie Ënnerschrëft als potentiell predictive uweist fir irinotecan Empfindlechkeet vun gastric cancer

A dräi-Gentherapie Ënnerschrëft als potentiell predictive uweist fir irinotecan Empfindlechkeet vun gastric Kriibs VerfÜgung méiglech VerfÜgung Objective- VerfÜgung Privatauto Chimiotherapie baséiert op molekulare biomarkers kann anticancer schreift Effizienz. Mir schaffen un predictive biomarkers ermëttelen kapabel Äntwert ze irinotecan-baséiert Behandlung an gastric Kriibs virausgesot. VerfÜgung Method VerfÜgung Mir Gentherapie iwwerpréift Ausdrock vun APTX, BRCA1, ERCC1, ISG15, Topo1 an methylation vun SULF2 zu formalin-fix paraffin- gastric Kriibs Stoffer aus 175 Patienten Ënnerbewosstsinn a bewäert d'Associatioun tëscht der Gentherapie Ausdrock Niveau oder methylation Status an kënschtlech VerfÜgung Empfindlechkeet op irinotecan. Mir benotzt Multiple Analyse linear Réckgang engem Gene-Ausdrock Modell ze entwéckelen irinotecan Empfindlechkeet vun gastric Kriibs a validéiert ze soe dësem Modell kënschtlech VerfÜgung an VIVO VerfÜgung. VerfÜgung Resultater VerfÜgung Gene Ausdrock Niveau vun APTX, BRCA1 an ERCC1 sech wesentlech méi an irinotecan-senisitive gastric Kriibs Echantillon wéi déi irinotecan-resistent Echantillon (P VerfÜgung &si besteet; 0,001 fir all Genen), während ISG15 (P VerfÜgung = 0.047) an Topo1 (P VerfÜgung = 0.002) sech vill méi héich. Baséierend op déi Genen, eng dräi-Gentherapie Ënnerschrëft sech etabléiert, déi berechent huet wéi follegt: Index = 0,488 - 0,020 × Ausdrock Niveau vun APTX + 0.015 × Ausdrock Niveau vun Topo1 - 0,011 × Ausdrock Niveau vun BRCA1. Déi dräi-Gentherapie Ënnerschrëft war vill mat irinotecan Empfindlechkeet verbonne (Rho = 0,71, P VerfÜgung &Si besteet; 0.001). Der Empfindlechkeet a Spezifizitéit vun der Cepheid vun irinotecan Empfindlechkeet baséiert op den dräi-Gentherapie Ënnerschrëft erreecht 73% an 86%, respektiv. An anere onofhängeg Testen virbereet, huet d'irinotecan inhibition Tauxe gastric Echantillon mat sensiblen-Ënnerschrëft vill méi héich wéi déi, mat méi resistent-Ënnerschrëft (65% vs. 22%, P VerfÜgung &Si besteet; 0.001). Irinotecan Therapie mat 20 mg /kg pro Woch zu immunodeficient Mais xenografts mat sensiblen-Ënnerschrëft dramatesch verhaft de Wuesstem vun erhéijen (P VerfÜgung &Si besteet; 0.001) Droen, mä hat keen Effekt op Mais xenografts mat resistent-Ënnerschrëft Droen VerfÜgung. Konklusiounen VerfÜgung d'Ënnerschrëft dräi-Gentherapie etabléiert ass ëmzestoussen e Potential predictive uweist fir irinotecan Empfindlechkeet vun gastric Kriibs. VerfÜgung Schlësselwieder VerfÜgung Privatauto Chimiotherapie irinotecan gastric Kriibs HDRA Immunodeficient Mais Erschléisse VerfÜgung gastric Kriibs bleift eng vun den Haaptfiguren Ursaachen vum Kriibs Doud weltwäit [1, 2]. Et ass keen "Gold Standard" Chimiotherapie fir fortgeschratt gastric Kriibs bis elo. An de leschte Joer, nei Generatioun Chimiotherapie Agenten, wéi docetaxel, oxaliplatin, irinotecan, capecitabine an S-1 hunn zu Phase III Studien [3] studéiert ginn. Allerdéngs, d'Steiren Iwwerliewe ënnendrënner ee Joer bliwwen [2], an der Äntwert Taux huet nëmmen ongeféier 30% -50% [4]. Irinotecan (CPT-11) ass eng semisynthetic ADR vun camptothecin (CPT), déi mat der Aktivitéit topoisomerase ech (Topo1) mat DNA Gedächtnis a Zell Divisioun duerch seng mächtegst Interaktioun interferes. Béid irinotecan an CPT gehéieren zu Topo1 inhibitors. Irinotecan ass haaptsächlech am colorectal Kriibs benotzt an och oft an der Behandlung vun gastric Kriibs benotzt, Äntwert Tariffer weist aus 14% verännerlech zu 23% als eenzeg Agent an ongeféier 50% vun geschéckt [5]. VerfÜgung Eng Zuel vun molekulare biomarkers ausgebilten d'Wahrscheinlechkeet vun Äntwert ze chemotherapeutic Agenten vun virausgesot goufen an de leschte Joerzéngten [6] propagéieren. Eis virdrun Studien hunn Broscht Kriibs waat identifizéiert Gentherapie 1 (BRCA1) als potentiell predictive uweist fir cisplatin an docetaxel Empfindlechkeet [7, 8], thymidylate synthase (TS) fir 5-FU an raltitrexed [9, 10], an excision Reparatur cross- ergänzen 1 (ERCC1) fir Platin [11]. Mä et huet am gastric Kriibs vun en Äntwert ze-irinotecan baséiert Behandlung limitéiert Fortschrëtt an d'Identifikatioun vun dichtege biomarkers ginn. Topo1 reguléieren DNA supercoiling während Gedächtnis duerch d'Aart a Weis vun dauernd Single-staarkt ugesprach religation [12]. Irinotecan an hir aktiv metabolite SN-38 DNA Schued induce duerch eng flüchteg covalent komplex tëscht DNA an Topo1 stabilizing, wat dann zu DNA staarkt Break Resultater, Gedächtnis verhaft, a apoptosis [13]. Héich entholl Niveau vun Topo1 FAQ hunn kuerzem eng Ënnergrupp vu metastatic colorectal Kriibs Patienten ze identifizéieren mat gutt Äntwert op irinotecan [14] gemellt ginn. Reparatur vun irinotecan-assoziéiert an Topo1-mediated DNA Schued verlaangt Entfernung vun de Fransousen Topo1 an Opléisung vun der verbonne DNA Paus. An dësem Prozess, eng Varietéit vun Reparatur Proteinen, dorënner aprataxin (APTX), BRCA1 an ERCC1, implizéiert, e puer vun deenen Medeziner Potential wéi predictive biomarkers hu vläicht [15]. VerfÜgung Nieft vun de Kandidat biomarkers verwisen, rezent Studien ugeholl, datt d'methylation vun der heparan sulfate 6-O-endosulfatase (SULF2) Promoteur mat Sensibilitéit fir Topo1 inhibitors an non-Small-Zell Lung Cancer (NSCLC) [16] verbonne war. INF-inducible regulator vun ubiquitination (ISG15) kéint blockéieren ubiquitin /26S proteasomal Passerelle fir Heefung vun CPT-entschlof DNA Schued Virwaat déi an eng fräi apoptosis schéinen [17]. SULF2 methylation (SULF2M) an héich ISG15 ausdrécken NSCLC Zell Linnen zougedréckt 134-fantastesch Empfindlechkeet op CPT wéi SULF2 unmethylation (SULF2U) an niddreg ISG15 ausdrécken Zell Linnen [16]. VerfÜgung Baséierend op der uewen dofir, mir Hypothes, datt APTX, BRCA1 , ERCC1, ISG15, SULF2, an Topo1 oder hir Formatioun kënnen an en irinotecan Empfindlechkeet vun gastric Kriibs wichteg Roll spillen. An der aktueller studéieren, ze propagéieren mir all Gentherapie als predictive uweist vum selwen, an dann etabléiert sind déi Genen zesummen zu méi korrekt viraus irinotecan Empfindlechkeet kombinéiert. Mir validéiert och de Modell vun aneren onofhängege Formatioun vun gastric Kriibs Echantillonen an zwee cohorts vun immunodeficient Mais Modeller. D'Zil vun dëser Etude war e klinesch nëtzlech Klassifikatioun Ënnerschrëft ze identifizéieren déi irinotecan Empfindlechkeet vun gastric Kriibs soe konnt. VerfÜgung spontan a Methoden VerfÜgung Patienten- Echantillon VerfÜgung All uplanzen an relevant Medeziner Date goufen vun den Departementer vun der Zukunft kritt an allgemeng gesin, opzebréngen Tower Hospital laizistesch zu Medical School vun Nanjing University während der Period vum August 2010 bis Juni 2012. d'uplanzen gehéiert 175 frësch-geläscht gastric erhéijen, deen zoufälleg als entweder Training Formatioun séiert goufen (n = 100) oder klickt Formatioun (n = 75) vun Computer-generéiert zoufälleg Zuelen benotzt. All entholl Otemschwieregkeeten war an zwee Deeler opgedeelt eemol et an der Chirurgie geläscht: (1) een Deel gouf zu 4 ° C Hanks "ausgeglachen Salz Léisung mat 1% penicillin /streptomycin a Réckstänn chemosensitivity kënschtlech VerfÜgung vun histoculture Drogenofhängeger Äntwert assay gehaalen (HDRA); (2) de Rescht Deel war zu formalin lénks an huet an formalin-fix paraffin-Ënnerbewosstsinn (FFPE) entholl Bleck fir agebousst Observatioun an der Gentherapie erkennen. Diagnos vun Patienten mat gastric entholl war vun histopathology confirméiert. Séminairen a histopathological Daten, dorënner Alter, Geschlecht, Histologie, entholl Site, Bühn, huet histological Schouljoer an lymph Node Metastasen all gesammelt. Séminairen Charakteristiken vun de Patienten goufen an Table 1. Awëllegung zesummegefaasst huet aus all Patienten kritt an der Ëmwelt- fir dës Etude goufen déi d'Mënscherechter Research Schutzpatrounin Comité vun opzebréngen Tower Hospital laizistesch zu Medical School vun Nanjing University guttgeheescht. All Déier Experiment am Aklang mat der chinesescher Koordinatioun Comité op Cancer Research Spillconditiounen fir d'Wuel vun Déieren an d'Déieren Protection Law.Table 1 Patienten- Charakteristiken VerfÜgung charakteristesche
Training Formatioun (N = 100) standing
zu Onofhängeg Testen Formatioun (N = 75)
Am Ganzen (N = 175)
Age, y Steiren (Gamme) VerfÜgung 63 (29-83) VerfÜgung 63 (29-83) VerfÜgung 63 (29-83) VerfÜgung ≥ 63 zu 51 (51%) zu 40 (53%) zu 91 (52%) VerfÜgung &Si besteet; 63 zu 49 (49%) zu 35 (47%) zu 84 (48%) VerfÜgung Sex VerfÜgung Männlech VerfÜgung 74 (74%) 57 (76%) VerfÜgung
131 (75%) VerfÜgung Weiblech VerfÜgung 26 (26%) zu 18 (24%) 44 (25%)
entholl Site
Distal Mo. 34 ( 34%) VerfÜgung 28 (37%) zu 62 (35%) VerfÜgung Proximal Mo. VerfÜgung 41 (41%) zu 29 (39%) zu 70 (40%)
Lait Mo. VerfÜgung 25 (25%) zu 18 (24%) zu 43 (25%) VerfÜgung Etapp VerfÜgung Artikel 13 (13%)
7 (9% ) VerfÜgung 20 (11%) VerfÜgung II VerfÜgung 20 (20%) zu 21 (28%) zu 41 (23%) VerfÜgung III VerfÜgung 65 (65%)
45 (60%) VerfÜgung 110 (63%) VerfÜgung IV VerfÜgung 2 (2%) VerfÜgung 2 (3%) VerfÜgung 4 (3%) VerfÜgung Histological Schouljoer
2 VerfÜgung 20 (20%) zu 16 (21%) 36 (21%)
3 VerfÜgung 47 (47%) zu 34 (46%) VerfÜgung 81. (46%) zu Bréissel 1-2 VerfÜgung 3 (3%) VerfÜgung 3 (4%) VerfÜgung 6 (3%) zu Bréissel 2-3 VerfÜgung 30 (30%) VerfÜgung 22 (29%) zu 52 (30%) VerfÜgung Lymph Node Metastasen VerfÜgung Nee VerfÜgung 21 (21%) zu 19 (25%) zu 40 (23%) VerfÜgung Jo VerfÜgung 79 (79%) zu 56 (75%) VerfÜgung 135 (77%) VerfÜgung HDRA VerfÜgung HDRA Prozeduren virdrun ëmschriwwen standing sech [18]. Kuerz, goufen d'frësch entholl Stoffer an kleng Stécker bis ongeféier 0,5 mm Duerchmiesser gewäsch a Schwéngs-, deen dann op déi bereet collagen gesat huet (Gesondheet Design, Rochester, NY) Fläch vun 24-gutt microplates. Et goufen 8 parallel Kultur Wells fir irinotecan Empfindlechkeet Testen an 8 parallel Kultur Wells fir Kontroll. No incubation fir 7 Deeg op 37 ° C (zu engem humidified Atmosphär wouvun 95% Loft -5% CO 2) an der Präsenz vun Drogen opgeléist mat RPMI 1640 mëttelfristeg 20% ​​An et Kallef serum wouvun, 100 μl Typ ech collagenase ( 0,1 mg /ml, Fläch) an MTT (5 mg /ml, Fläch) sech un all Kultur derbäi gutt a fir aner 16 Stonnen incubated. Konzentratioun vun irinotecan war 20 μg /ml no sengem Héichpunkt Plasma Konzentratioun (jonke Mënsch soll orientéiert) an Patienten [19]. No Reduktioun mat Police sulfoxide (DMSO, Fläch), absorbance vun der Léisung vun all gutt war um 540 nm liesen. Absorbance pro Gramm cultured entholl Otemschwieregkeeten war vun der heeschen absorbance vun Otemschwieregkeeten aus 8 parallel Kultur Wells, an der entholl-Otemschwieregkeeten Gewiicht war virun Kultur sech berechent. D'inhibition Taux war andeems folgend Formule berechent: Inhibition VerfÜgung Taux VerfÜgung % VerfÜgung = VerfÜgung 1 VerfÜgung - VerfÜgung T VerfÜgung /VerfÜgung C VerfÜgung × VerfÜgung 100 VerfÜgung % VerfÜgung T ass d'mengen absorbance vun behandelt entholl /Gewiicht VerfÜgung C ass de heeschen absorbance vun Kontroll entholl /Gewiicht VerfÜgung mRNA Ausdrock Total RNS erauszéien aus FFPE Otemschwieregkeeten VerfÜgung Niveau erkennen VerfÜgung Six 7-μm Sektiounen aus FFPE entholl Bleck bereet waren, datt op d'mannst 80% entholl Zellen aus. No hematoxylin-eosin staining, waren der kriibserreegend Deeler microdissected an an engem microcentrifuge Rouer transferéiert. RNS war am Aklang mat enger propriétaire Prozedur (europäesche Brevet Zuel EP1945764-B1) isoléiert. Kuerz, paraffin vun xylene geläscht huet, an microdissected kriibserreegend Deeler goufen an engem proteinase lysed fir 16 h gefiermt bei 60 ° C-K mat. RNS war vun phenol an chloroform extractions vun Nidderschlag mat isopropanol an der Präsenz vun Natrium acetate bei -20 ° C duerno sidd. D'RNS PELLET war zu 70% Ethanol gewäsch an zu 53 μl vun RNase-gratis Waasser gefollegt vun Behandlung mat DNase ech (Life Technologies). VerfÜgung QPCR Beurteelung vun der Gentherapie Ausdrock VerfÜgung M-MLV Réckproduktioun Transcriptase Kit (Invitrogen) resuspended applizéiert cDNA fir Chemeschen polymerase Kette Reaktioun (qPCR) ze generéieren der β-actin (ACTB), APTX, BRCA1, ERCC1, ISG15 an Topo1 z'entdecken. All Kéier vun Reaktioun och eng positiv Kontroll vun kommerziell Mënsch haett an Liewer RNS (Stratagene, La Jolla, CA, USA) als calibrators an negativ Kontrollen ouni RNS an ëmgedréint transcriptase. Total RNS 1 μg war fir all RT Reaktioun benotzt. Schabloun cDNA war mat spezifesche primers an Ämter Implikatioune fir ACTB, APTX, BRCA1, ERCC1, ISG15 an Topo1 benotzt Taqman Universal Master Mix (Obwuel Biosystems, Foster City, CA). D'Assay IDen (Obwuel Biosystems, Foster City, CA) fir d'primers an Ämter sech wéi follegt zesummen: Hs99999903_m1 (ACTB), Hs00214452_m1 (APTX), Hs00157415_m1 (ERCC1), Hs00192713_m1 (ISG15), Hs00243257_m1 (Topo1), BRCA1 (NM_007294) : no 5 'GGCTATCCTCTCAGAGTGACATTTTA 3', ëmgedréint 5 'GCTTTATCAGGTTATGTTGCATGGT 3', a bis ewell 6FAM -5 'CCACTCAGCAGAGGG 3' MGB. QPCR war standing Gentherapie Ausdrock benotzen d'Abi Prism 7900HT liichtkraaftarm Detektioun System (Obwuel Biosystems) zu ofgedonkelt. D'Hinnen alleguer ware 50 ° C fir 2 min, 95 ° C fir 15 min, gefollegt vun 40 Zykle bei 95 ° C fir 15 s an 60 ° C fir 1 min. Relativer Gentherapie Ausdrock quantifications sech no der Komparativ CT Method berechent ACTB als endogenous Kontroll benotzt, baséiert op eiser leschter Erfahrung vergläichen verschiddene housekeeping Genen [7, 20], a kommerziell Mënsch haett an Liewer RNAs (Stratagene, La Jolla, CA, USA wéi calibrators), déi eis Gene Ausdrock Niveauen tëschent verschidden Patienten ze vergläichen erméiglecht. Finale Resultater goufen vun der Formel mRNA Ausdrock sech Niveau = 2 - (dCt Prouf-dCt calibrator) (dCt = CT gene- CT ACTB) [7, 21] an huet sech mat der Stratagene Analyse analyséiert Software. VerfÜgung DNA methylation erkennen VerfÜgung DNA erauszéien a Modifikatioun VerfÜgung Dräi 7-μm Sektiounen aus der Primärschoul entholl Bleck bereet waren, datt op d'mannst 80% entholl Zellen aus. No hematoxylin-eosin staining, waren der kriibserreegend Deeler microdissected an an engem microcentrifuge Rouer transferéiert. DNA war Zäitche isoléiert a war duerno chemesch vun Natrium bisulphite geännert all unmethylated cytosines zu uracils ze konvertéieren iwwerdeems methylcytosines onverännert [16] geklappt. Dunn huet si bei -20 ° C fir weider Analyse gespäichert. VerfÜgung Methylation-spezifesch polymerase Kette Reaktioun (MSP) VerfÜgung MSP war standing der methylation vun SULF2 mat der Abi Prism 7300HT liichtkraaftarm Detektioun System (Obwuel Biosystems) ze bestëmmen. All Hinnen alleguer Reaktioun aus Frankräich DNA 2 μl, SYBR Green Hinnen alleguer Mix (TaKaRa, Japan) 10 μl, Waasser 7,7 μl, an primers 0,15 μl (10 μmol /l). D'Hinnen alleguer ware 95 ° C fir 10 min, gefollegt vun 45 Zykle bei 59 ° C fir 30 ass, 72 ° C fir 30 s an 95 ° C fir 30 ass. Primers fir SULF2 methylated Hinnen alleguer (TaKaRa, Japan) sech wéi follegt zesummen: no 5 'TAAGTGTTTTTTTTATAGCGGC 3', ëmgedréint 5'TACCGTAATTTCCGCTATC 3 '. Primers fir SULF2 unmethylated Hinnen alleguer (TaKaRa, Japan) sech wéi follegt zesummen: no 5 'GTTTATAAGTGTTTTTTTATAGTGGT3 ", ëmgedréint 5'TACCATAATTTCCACTATCCCT 3'. All Kéier vun Reaktioun och eng positiv Kontroll vun Methyltransferase (M.SssI) Mënsch Frankräich DNA (voll methylated) -treated, eng negativ Kontroll vun DNA Echantillon déi ouni DNA unmethylated an aner negativ Kontroll bestätegt gouf. All Tester goufen am zweete gesuergt. VerfÜgung D'Opstelle an Confirmatioun vun der Gentherapie-Ausdrock Modell fir irinotecan Empfindlechkeet Cepheid VerfÜgung Mir Multiple linear Réckgang Analyse adoptéiert der optimiséiert Gentherapie-Ausdrock Modell op de Formatiounen Formatioun vun 100 gastric Cancers Basis ze etabléieren [22]. Laut de Resultater vun stepwise Réckgang (Entrée: α = 0.10, ewechzehuelen: α = 0,15), Modell bestoung vun APTX, Topo1 an BRCA1 ass d'optimiséiert eent. Mir unerkannten all Patient eng Index no der linear Kombinatioun vun den Ausdrock Niveau vun der mRNA vun de Réckgang ass souguer gemaach ginn vun de Formatiounen Echantillon déifgräifender Kris. Den Index vun der Gentherapie-Ausdrock Modell berechent huet wéi follegt: Index = 0,488 - 0,020 × Ausdrock Niveau vun APTX + 0.015 × Ausdrock Niveau vun Topo1 - 0,011 × Ausdrock Niveau vun BRCA1. Dëse Modell gouf duerno mat gastric Kriibs an aneren onofhängege Testen Set vun 75 Patiente validéiert. An der Fahrt virbereet, goufen Patienten klasséiert no hir Gene Ënnerschrëft Index an agedeelt sensibel-Ënnerschrëft an resistent-Ënnerschrëft Gruppe vun der Steiren Index wéi de cutoff Punkt benotzt. D'irinotecan Empfindlechkeet vun dësen zwou Gruppe sech duerch HDRA an am Verglach mat all aner getest. VerfÜgung An viv VerfÜgung o Confirmatioun vun der Gentherapie-Ausdrock Modell fir irinotecan Empfindlechkeet Cepheid VerfÜgung Fir immunodeficient Mais Modeller mat Patient-ofgeleet gastric etabléieren Kriibs xenografts, all frësch-geläscht chirurgesch entholl Otemschwieregkeeten nees Stécker vun 3 × 3 × 3 mm geschnidde gouf 3, dee bannent 30 min bis 12 athymic immunodeficient Mais transplantéiert goufen, als eng "Kohort" [23]. An all Kohort, wann der entholl zu enger Gréisst vun 50-100 mm gewuess 3, Mais mat xenografts sech ze behandelen zoufälleg mat irinotecan 20 mg /kg /w, IP (n = 6) oder keng Behandlung wéi d'Kontroll ( n = 6). Individuell entholl Bänn (V) sech duerch d'Formel "V = (Längt × Breed × Breed) /2" berechent an am Verglach zu de Wäerter um Ufank vun Behandlung der famill entholl Volumen ze kréien. Mais goufen all aneren Dag fir entholl Wuesstem observéiert. VerfÜgung Fir d'konsequent inhibition vun irinotecan an der sensibel-Ënnerschrëft Mais, dräi Wochen no éischt Verwaltung, all d'erhéijen sech aus der éischter Generatioun Mais getrennt ze diskutéieren an ze zweeter Generatioun passaged Mais. An der zweeter Generatioun, war kee Drogenofhängeger installéiert. Mais sech all Dag fir aner zwou Wochen observéiert. VerfÜgung statistique Analyse VerfÜgung De Mann-Whitney U-Test an der Kruskal-Wallis Test benotzt goufen d'Associatioun tëscht mRNA Ausdrock Niveauen a Krankheete Eegenschaften ze testen, an de Veräin tëscht irinotecan Empfindlechkeet a clinicopathological Parameteren 'Patienten. D'Spearman d'Geleeënheet Method benotzt gouf de Korrelatioun vun der mRNA Ausdrock Niveauen tëschent verschiddene Genen souwéi d'Korrelatioun tëscht mRNA Niveauen an an eng kënschtlech VerfÜgung irinotecan Sensibilitéit ze bewäerten. De Mann-Whitney U-Test gouf benotzt fir irinotecan Empfindlechkeet tëscht SULF2M an SULF2U Gruppen, irinotecan-senisitive an irinotecan-resistent Patienten an tëscht sensibel-Ënnerschrëft an resistent-Ënnerschrëft Gruppen vergläichen. Receiver Fonctionnementskäschten charakteristesche (ROC) Kéieren waren entsteet d'Sensibilitéit an Spezifizitéit vun Cepheid op verschiddene Genen an der Gentherapie-Ausdrock Modell vun Conditioune vun irinotecan Empfindlechkeet Basis ze berechnen. Vläit Student d't Test war fréier d'Differenzen tëscht der entholl Gréisste vun sensibel-Ënnerschrëft Mais oder méi resistent-Ënnerschrëft Mais a Kontrollen ze diskutéieren. A P VerfÜgung &Si besteet; 0,05 war statistesch relevant (two-eesäitegen) considéréiert. Statistesch Analyse huet d'SPSS standing benotzt, Versioun 16,0. VerfÜgung Resultater Patienten- Charakteristiken VerfÜgung Charakteristiken vun all Patienten VerfÜgung sinn an Table 1. An der 175 Patienten gewisen, huet d'Majoritéit vun de Patienten Männercher (75%), an der Histologie vun all Prouf war adenocarcinoma. An 62 (35%) Patienten, war d'entholl am distal Mo läit, an 70 (40%) vun der proximal Mo, an 43 (25%) vun der ganzer Moo. Honnert an zéng (63%) Patienten hu Etapp III Krankheet. Lymph Node Metastasen war präsent an 135 (77%) Patienten. VerfÜgung Gene Ausdrock Niveauen VerfÜgung D'mRNA Ausdrock Niveau vun APTX, BRCA1, ERCC1, ISG15 an Topo1 sech zu all erhéijen, mat Steiren Gentherapie Ausdrock Niveau relativ zu housekeeping fonnt ACTB vun 4,32 fir APTX (Rei 0.26-17.99, 95% Vertraue nolauschterer (CI): 3.78-5.19), 7,91 fir BRCA1 (Rei 0.37-29.04, 95% CI: 7.07-9.51), 14,03 fir ERCC1 (Rei 0.33-46.30 , 95% CI: 13.01-17.07), 5,07 fir ISG15 (Rei 0.04-34.24, 95% CI: 3.94-6.21), an 7,51 fir Topo1 (Rei 1.07-37.81, 95% CI: 6.38-9.17) (Dorënner 1) . Eng bedeitend Veräin huet tëscht APTX mRNA Ausdrock Niveauen a histological Schouljoër (P VerfÜgung = 0,03), an ISG15 mRNA a Geschlecht (P VerfÜgung = 0.017) observéiert. Keng aner Associatioun tëscht Medeziner Beméien an entholl mRNA Niveauen fonnt gouf (Table 2). Allerdéngs war eng staark Korrelatioun tëschent dem mRNA Ausdrock Niveau vun APTX an BRCA1 observéiert (Rho = 0,53, P VerfÜgung &Si besteet; 0.001), APTX an ERCC1 (Rho = 0,73, P VerfÜgung &Si besteet; 0.001), BRCA1 an ERCC1 (Rho = 0,48, P VerfÜgung &Si besteet; 0.001) zu entholl. Figur 1 Gene Ausdrock Niveau vun APTX, BRCA1, ERCC1, ISG15 an Topo1 zu 175 Patienten analyséieren grouss RT-Hinnen alleguer. Wäerter vun der Gentherapie Ausdrock sech no der Komparativ CT Method berechent ACTB als endogenous Kontroll benotzt. Déi blo Linn stoungen fir menge mat 95% CI. VerfÜgung Table 2 D'Associatioun vun der Gentherapie Ausstralung an agebousst Charakteristiken VerfÜgung charakteristesche
Nr vun kennen
APTX mRNA
BRCA1 mRNA
ERCC1 mRNA
ISG15 mRNA
Topo1 mRNA

zu menge ± Fils
mengen ± Fils
mengen ± Fils
mengen ± Fils
mengen ± Fils
Alter , y VerfÜgung ≥ 63 zu 91 (52%) 4.81 ± 3,78 VerfÜgung 8,61 ± 5,73 VerfÜgung 15,28 ± 10,01 VerfÜgung 4,48 ± 3,69 VerfÜgung 8,03 ± 7.30 VerfÜgung &Si besteet VerfÜgung; 63 zu 84 (48%) VerfÜgung 4,09 ± 3.76 VerfÜgung 7,90 ± 5,95 VerfÜgung 14,75 ± 9,28 VerfÜgung 5,79 ± 6,90 VerfÜgung 7,47 ± 5,81 VerfÜgung Sex VerfÜgung Männlech VerfÜgung 131 (75%) VerfÜgung 4,77 ± 3,33 VerfÜgung 8,41 ± 5,57 VerfÜgung 15,74 ± 10,19 VerfÜgung 5,54 ± 5,62 VerfÜgung 7,95 ± 7,17 VerfÜgung Weiblech VerfÜgung 44 (25%) VerfÜgung 3,58 ± 3,29 VerfÜgung 7,92 ± 6,67 VerfÜgung 12,77 ± 7.30 VerfÜgung 3,53 ± 4,27 * VerfÜgung 7,21 ± 4.62 VerfÜgung entholl Site VerfÜgung Distal Mo. VerfÜgung 62 (35%) VerfÜgung 4,79 ± 2,87 VerfÜgung 8,97 ± 6,52 VerfÜgung 16,12 ± 10,36 VerfÜgung 7,05 ± 7,75 VerfÜgung 8,09 ± 5,93 VerfÜgung Proximal Mo. VerfÜgung 70 (40%) VerfÜgung 4,16 ± 3,10 VerfÜgung 8,33 ± 5,72 VerfÜgung 13,97 ± 9,09 VerfÜgung 3,61 ± 2,64 VerfÜgung 7,40 ± 6,63 VerfÜgung Lait Mo. VerfÜgung 43 (25%) VerfÜgung 4,60 ± 4,44 VerfÜgung 7,12 ± 4,74 VerfÜgung 15,31 ± 9,70 VerfÜgung 4,61 ± 3,43 VerfÜgung 7,06 ± 7,94 VerfÜgung Etapp VerfÜgung ech VerfÜgung 20 (11%) VerfÜgung 4,25 ± 4,47 VerfÜgung 5,91 ± 3,40 VerfÜgung 13,40 ± 7,07 VerfÜgung 1,89 ± 0,83 VerfÜgung 5,89 ± 4,03 VerfÜgung II VerfÜgung 41 (23%) VerfÜgung 4,19 ± 3,01 VerfÜgung 8,58 ± 5,09 VerfÜgung 14,70 ± 9,56 VerfÜgung 6,76 ± 7,96 VerfÜgung 8,91 ± 6,35 VerfÜgung III VerfÜgung 110 (63%) VerfÜgung 4,66 ± 3,38 VerfÜgung 8,19 ± 5,75 VerfÜgung 15,56 ± 10,16 VerfÜgung 4,67 ± 4,01 VerfÜgung 7,70 ± 7,07 VerfÜgung IV VerfÜgung 4 (3%) VerfÜgung 4,20 ± 4,61 VerfÜgung 15,88 ± 17,90 VerfÜgung 11,01 ± 5,00 VerfÜgung 7,25 ± 6,33 VerfÜgung 4,03 ± 1,63 VerfÜgung Histological Schouljoer VerfÜgung 2 VerfÜgung 36 (21% VerfÜgung) 5.05 ± 3,54 * VerfÜgung 10,97 ± 7,33 VerfÜgung 15,78 ± 9,52 VerfÜgung 4,86 ​​± 4,75 VerfÜgung 8,08 ± 6,61 VerfÜgung 3 VerfÜgung 81 (46%) VerfÜgung 3,92 ± 3,55 VerfÜgung 7,81 ± 5,16 VerfÜgung 14.30 ± 9,64 VerfÜgung 3,68 ± 2.75 VerfÜgung 7,18 ± 6,08 VerfÜgung Bréissel 1-2 VerfÜgung 6 (3%) VerfÜgung 3,63 ± 4,51 VerfÜgung 7,17 ± 2,13 VerfÜgung 15,17 ± 12,40 VerfÜgung 8.00 ± 8,94 VerfÜgung 8,42 ± 6,02 VerfÜgung Bréissel 2-3 VerfÜgung 52 (30%) VerfÜgung 4,55 ± 2,53 VerfÜgung 7,06 ± 5,27 VerfÜgung 15,65 ± 9,96 VerfÜgung 7,16 ± 7,74 VerfÜgung 8,44 ± 7,18 VerfÜgung Lymph Node Metastasen VerfÜgung Nee VerfÜgung 40 (23%) VerfÜgung 4,58 ± 3,39 VerfÜgung 8,70 ± 5,08 VerfÜgung 14,68 ± 7,31 VerfÜgung 5,97 ± 8,17 VerfÜgung 7,48 ± 4,47 VerfÜgung Jo VerfÜgung 135 (77%) VerfÜgung 4,46 ± 3,35 VerfÜgung 8,16 ± 6,05 VerfÜgung 15,16 ± 10,33 VerfÜgung 4,78 ± 4,12
7,87 ± 7,23 VerfÜgung * P VerfÜgung &Si besteet; . 0,05 VerfÜgung D'Relatioun tëscht der Gentherapie Ausdrock an chemosensitivity zu irinotecan VerfÜgung Am Training virbereet, war d'irinotecan Empfindlechkeet erfollegräich zu all erhéijen getest, mat Steiren inhibition Taux vun 43,3% (Rei 2% -89%, CI: 39 % -47%). Et war kee groussen Veräin tëscht irinotecan Empfindlechkeet a Krankheete Charakteristiken (Table 3), dorënner Alter (P = VerfÜgung 0.51), Geschlecht (P = VerfÜgung 0.77), entholl Site (P = VerfÜgung 0.64), Etapp ( P = VerfÜgung 0.41), histological Schouljoër (P = VerfÜgung 0.48) an lymph Node Metastasen (P = VerfÜgung 0.47). Allerdéngs, mRNA Niveau vun APTX (Rho = -0,48, P VerfÜgung &Si besteet; 0.001), BRCA1 (Rho = -0,49, P VerfÜgung &Si besteet; 0.001), ERCC1 (Rho = -0,42, P VerfÜgung &Si besteet; 0.001), ISG15 (Rho = 0,34, P VerfÜgung = 0.001), an Topo1 (Rho = 0,43, P VerfÜgung &Si besteet; 0.001) huet eng Korrelatioun zu irinotecan Empfindlechkeet. Patienten goufen no hiren irinotecan inhibition Tariffer klasséiert an agedeelt irinotecan-senisitive an irinotecan-resistent Gruppe vun der Steiren inhibition Taux wéi de cutoff Punkt benotzt [19]. Gene Ausdrock Niveau vun APTX (P VerfÜgung &Si besteet; 0.001), BRCA1 (P VerfÜgung &Si besteet; 0.001) an ERCC1 (P VerfÜgung &Si besteet; 0.001) sech wesentlech méi an irinotecan-senisitive Patiente wéi zu irinotecan-resistent Patienten , iwwerdeems ISG15 (P VerfÜgung = 0.047) an Topo1 (P VerfÜgung = 0.002) sech vill méi héich (Dorënner 2A-E). ROC Kéieren waren entsteet d'Sensibilitéit an Spezifizitéit vun der all Gentherapie an en irinotecan Empfindlechkeet (Dorënner 2G-J) ze berechnen. D'Gebidder ënner ROC rop (AUC), Empfindlechkeet a Spezifizitéit vun der Cepheid vun irinotecan Empfindlechkeet baséiert op APTX, BRCA1, ERCC1, ISG15 an Topo1 mRNA Niveau waren an Table 4.Table 3 Association tëscht irinotecan Empfindlechkeet a Krankheete Charakteristiken opgezielt VerfÜgung charakteristesche
Irinotecan inhibition Taux
Irinotecan inhibition Taux
mengen (95% CI)
mengen (95% CI) VerfÜgung
Training Formatioun (N = 100)
Onofhängeg Testen Formatioun (N = 75)
Age, y Steiren (Gamme) VerfÜgung ≥ 63 zu 42% ( 36-47%) zu 44% (31-57%) VerfÜgung &Si besteet; 63 zu 45% (39-51%) zu 44% (34-54%) VerfÜgung Sex VerfÜgung Männlech zu 43% (38-47%) 42% VerfÜgung (33- 51%) VerfÜgung Fra zu 45% (36-55%) zu 50% (31-68%) VerfÜgung entholl Site VerfÜgung Distal Mo. zu 42% (35-49%) zu 44% (28-60%) VerfÜgung Proximal Mo. zu 44% (38-51%) zu 47% (35-58%) VerfÜgung 43% VerfÜgung Lait Mo. (35. -51%) zu 37% (16-59%) VerfÜgung Etapp VerfÜgung ech 34% (21-47%) VerfÜgung 36% VerfÜgung (3-70%) VerfÜgung II
49% (40-57%) zu 50% (31-68%) VerfÜgung III zu 43% (38-48%) zu 44% (34-54%) VerfÜgung IV zu 33% zu 34% VerfÜgung Histological Schouljoer VerfÜgung 2 zu 41% (33-49%) 44% VerfÜgung (21-68%) VerfÜgung 3 VerfÜgung 42 % (36-48%) zu 39% (27-51%) zu Bréissel 1-2 zu 54% zu 58% zu Bréissel 2-3 zu 46% (38- 54%) zu 49% (35-62%) VerfÜgung Lymph Node Metastasen VerfÜgung Nee zu 42% (33-51%) zu 46% (27-65%) VerfÜgung Jo zu 44% (39-48%) zu 44% (34-53%) VerfÜgung ënnerschriwwe Index VerfÜgung > 0,43 VerfÜgung 57% (52-63%) ** zu 65% (61-70%) ** VerfÜgung ≤ 0,43 VerfÜgung 31% (27-36%) zu 22% (17 VerfÜgung -28%) ** P VerfÜgung &Si besteet; . 0,001 VerfÜgung 2 Gene Ausdrock Niveau vun APTX (P &Si besteet; 0,001) Well, BRCA1 (P &Si besteet; 0,001) an ERCC1 (P &Si besteet; 0,001) sech wesentlech méi an irinotecan-senisitive Patiente wéi zu irinotecan-resistent Patienten, iwwerdeems ISG15 (P = 0.047) an Topo1 (P = 0.002) sech vill méi héich. Box Diagrammer weisen der mRNA Ausdrock Niveau vun APTX (A), BRCA1 (B), ERCC1 (C), ISG15 (D) an Topo1 (E) an irinotecan-senisitive an irinotecan-resistent Gruppen, bzw. (n = 100). D'Linnen mat an de Këschte mat de medians. D'Schnurres vun Këscht Diagrammen: Min zu Max. Grafiken vun ROC Bou weist de AUCs vun APTX (F), BRCA1 (G), ERCC1 (H), ISG15 (ech) an Topo1 (J) fir irinotecan Empfindlechkeet virausgesot. Empfindlechkeet (Y-Achs) ass d'Spektraltypen géint falschen-positiv Ëmwandlung. (1 - Spezifizitéit) VerfÜgung Table 4 D'Empfindlechkeet a Spezifizitéit vun fënnef Gentherapie Ausdrock Niveau fir d'Cepheid vun irinotecan Empfindlechkeet VerfÜgung Genen VerfÜgung Chemotheraputic VerfÜgung Agenten
Empfindlechkeet
Spezifizitéit
AUC (95% CI)
P
APTX VerfÜgung Irinotecan zu 73% zu 74% zu 0.758 (0.669-0.847) VerfÜgung &Si besteet; 0,001 VerfÜgung BRCA1 VerfÜgung Irinotecan zu 91% zu 58% VerfÜgung 0.760 (0.673-0.846) VerfÜgung &Si besteet; 0,001 VerfÜgung ERCC1 VerfÜgung Irinotecan zu 64% zu 79% VerfÜgung 0.726 (0.632-0.821) VerfÜgung &Si besteet; 0,001 VerfÜgung ISG15 VerfÜgung Irinotecan VerfÜgung 59% VerfÜgung 73% VerfÜgung 0.617 (0.494-0.740) VerfÜgung 0,047 VerfÜgung Topo1 VerfÜgung Irinotecan zu 48% zu 94% VerfÜgung 0.664 (0.563-0.765) VerfÜgung 0,002 VerfÜgung D' Relatioun tëscht SULF2 methylation an Empfindlechkeet op irinotecan VerfÜgung am Training virbereet, war d'methylation Status vun SULF2 erfollegräich zu all Patienten fonnt, mat drësseg-dräi (28%) Droen SULF2M an uechtzeg-véier (72%) Droen SULF2U. Et war kee groussen Veräin tëscht SULF2 methylation Status a Krankheete Charakteristiken. D'irinotecan inhibition Tariffer sech 49,8% (Rei 2% -89%, 95% CI: 41% -59%) fir SULF2M Grupp, an 40,2% fir SULF2U Grupp (Rei 2% -84%, 95% CI: 34% - 46%, P VerfÜgung = 0.08). VerfÜgung d'Opstelle vun der Gentherapie-Ausdrock Modell a sengem Veräin mat Sensibilitéit fir irinotecan VerfÜgung Baséierend op den Ausdrock Niveau vu fënnef Genen an Status vun SULF2 methylation, gebaut mer eng Ënnerschrëft duerch verschidde Analyse linear Réckgang wéi an der Methode ernimmt. Den Index vun der dräi-Gentherapie Ënnerschrëft gounge vun 0,08 bis 0,99 mat menge Wäert vun 0,43 ± 0,16. Et war e wesentleche Korrelatioun tëschent den index a irinotecan Empfindlechkeet (Rho = 0,71, P VerfÜgung &Si besteet; 0.001) (Dorënner 3A). ROC Kéier war entsteet d'Sensibilitéit an Spezifizitéit vun der dräi-Gentherapie Ënnerschrëft an en irinotecan Empfindlechkeet (Dorënner 3B) ze berechnen. D'AUC war 0.828 (95% CI: 0.755-0.901, P VerfÜgung &Si besteet; 0.001). Mat der loung Wäert vun 0,43, d'Sensibilitéit an Spezifizitéit vun der Cepheid vun irinotecan Empfindlechkeet baséiert op den dräi-Gentherapie Ënnerschrëft erreecht 73% an 86%, respektiv. Figur 3 D'Evaluatioun an Confirmatioun vun der dräi-Gentherapie Ënnerschrëft fir irinotecan Empfindlechkeet Cepheid. A, war et e groussen Veräin tëscht den dräi-Gentherapie Ënnerschrëft index a irinotecan Empfindlechkeet (Rho = 0,71, P VerfÜgung &Si besteet; 0.001). Index (Y-Achs) ass géint irinotecan inhibition Taux opgezeechent. "0.00" stoungen fir keen inhibition, während "1.00" fir 100% inhibition stoungen. All Auteuren liesen an guttgeheescht der Finale mëttelalterlech Handschrëft. VerfÜgung

• Mechanismen hannert der direkt Auswierkungen vun Roux-en-Y gastric Contournement Agrëff op Typ 2 Diabetis
• Détailléiert gastric Kriibs langfristeg komplett Koma an Äntwert ze S-1 monotherapy weist: zwee Fall Reportagen