Altered izraz domnevne matičnih celic marker DCAMKL1 v podganji želodčne sluznice v regeneracijo, metaplazijo in dysplasia

spremenila izraz domnevni matičnih celic marker DCAMKL1 v podganji želodčne sluznice v regeneracijo, metaplazijo in displazija
abstraktnih
Ozadje
Doublecortin in kalcij /kalmodulin odvisna od protein kinaze podobno-1 (DCAMKL1) je označevalec kandidat za predniških celic v sluznici prebavil. Rodovno celice želodčne sluznice izhajajo iz matičnih celic, vendar je ta proces se lahko spremeni po poškodbi. Zato smo raziskovali DCAMKL1 izražanje pod patoloških stanj.
Metode
imunohistokemični Analiza je bila izvedena v podganji želodcu z akutno površinskimi poškodbami, kronične razjede, intestinalno metaplazijo in displazija.
Rezultati
DCAMKL1 je bilo izraženo izključno v nezrele mirujočem celice v ožine običajnih fundic žlez, kjer so mislili domnevnih matičnih celic za bivanje. DCAMKL1-pozitivne celice in proliferirajoče celice odcepi v lumen po površno škode in ponovno pojavil med regenerativnim procesu, predvsem v površinskem sluznice. V mejnega sluznice okoli aktivno razjedo, parietalnih in glavnih celic zmanjšalo, je foveolar hiperplazija očitna, in triperesne deteljice faktor družina 2 (TFF2) /spazmolitično-polipeptid izražanje metaplazijo (SPEM) so se pojavile v bazi žleze. DCAMKL1 celice ponovno pojavila v globokem sluznico drugo ob drugem s SPEM in proliferirajoče celice. V zdravilni razjeda prebivalstvo TFF2 ekspandirani in je zdelo, da redifferentiate na glavnih celic, medtem ko proliferirajoče celice in DCAMKL1 celice pojavil nad in pod TFF2 celic za pospeševanje celjenja. SPEM pojavil in PCNA celic se je v intestinalized sluznici in DCAMKL1 je bilo izraženo v bližino PCNA celic v globoki sluznice. DCAMKL1 so PCNA in TFF2 izražene v različnih displasticnih celicah sluznice razširjene žleze pri SPEM.
Zaključek
The ultrastrukturni videz DCAMKL1-pozitivnih celic in izražanja vzorcev DCAMKL1 v normalnih in patoloških stanj kažejo, da so celice spadajo k matičnih celična populacija. DCAMKL1 izraz je tesno povezano s TFF2 /SPEM celic po poškodbi. DCAMKL1 celice repopulate blizu razraščajo, hiperplastičnih, metaplastic in displasticnih celic in matičnih cona premakne glede na patoloških okoliščinah.
Ozadje
miško in želodca enoto človeškega kaže monoklonsko konverzijo, kar kaže na prisotnost multipotentne matičnih celic [ ,,,0],1, 2]. Electron mikroskopsko avtoradiografija pri miših so pomenila, da zrnc brez celic v zakonu isthmus kot multipotentne matičnih celic [3]. Procesi diferenciacije in migracije celic linije se lahko spremeni s poškodbo. cona matičnih celic v ožine se hitro poškodujejo intraluminalno etanola, nesteroidnih protivnetnih zdravil ali Helicobacter pylori
(H. pylori
). Kronično vnetje želodca lahko povzroči atrofijo in specializiranih izgubo celic kot otipljive učinke tkivno specifičnih matičnih celic poškodbe ali izgube. Vendar pa je obnašanje matičnih celic po akutne ali kronične sluznico poškodbe in mehanizem za obnovo teh celic med regeneracijo sluznice niso dobro razumeli.
Populacija matičnih celic je pomembno za vzdrževanje in regeneracijo želodčnega epitela, vendar dolgoročne živele matičnih celic, so v nevarnosti, da se kopičijo mutacije, ki vodijo do raka [4]. Neoplazije lahko sledimo celično metaplazijo zaradi kroničnega vnetja in popravila. Vendar pa ni bila opravljena natančna analiza vloge in spreminjanja predniških celic v zaporedju gastritis-metaplazija-displazijo raku, predvsem zaradi pomanjkanja diskretnih označevalcev matičnih celic v želodcu.
Musashi-1, marker predniških celic v mišjem tankega črevesa, ni izražen v domnevno predniških celic, vendar se nahaja v parietalnih celicah v fundic ožine rat [5]. Villin-1 promotor /spodbujevalec fragment označevalec možnih želodčnih predniških celic v ožine na pilorusa žlez [6]. Študija rod je pokazala, da je črevesno matičnih celica dvojno podajo Lgr5 izražena na dnu potencialnim fundic in pilorusa žlez neonatalno želodcu, medtem ko je izraz pri odraslih pretežno omejena na dnu pilorusa žlez [7]. Tako ni nobenih dokončnih markerji za matičnih celic pri odraslih fundic žlez.
DCAMKL1 je eden od izdelkov Gene ontogeny obogatenih transkriptov najdemo v primerjavi z želodca miške in tankega črevesja matičnih podatkovnih bazah [8]. Imunohistokemični analizi z uporabo DCAMKL1 protitelesa pokazala enotno obarvanje celic v črevesni kripti odsekov pri ali blizu položaju 4 in v celicah želodčne ožine [8]. Po prvem poročilu je posebna lokalizacija DCAMKL1-ekspresirajočih celic iz matičnih celic niši je prikazano v tankem črevesu miši [9, 10] in v kolonu miši in človeka [11, 12], medtem DCAMKL1 bila hkrati izraženi z Musashi -1 v parietalnih celic želodca miši [13].
prvi cilj raziskave je bil ugotoviti, ali je DCAMKL1 marker za matičnih celic pri podganah želodcu. Drugi cilj je bil osvetliti časovne in prostorske vzorce pojavljanja celic posebej izražajo DCAMKL1 po več želodcu bolezenskih stanj.
Metode
Priprava živali
Vse živalske protokoli so bili potrjeni odbor živali raziskovalnega Keio University. Moški Wistar podgan, ki tehtajo približno 200 g postimo 24 ur s prostim dostopom do vode. Za izdelavo akutne površinske poškodbe na fundic sluznico, je absolutni etanol (1 ml) vzbudil v želodcu ga želodčno intubacijo. Za izdelavo kroničnih globoke razjede, je 20% ocetne kisline (50 ul) vbrizgamo v fundic submucosa sprednje stene z mikrobrizgalko. Podgane smo evtanazirali 3 dni in 1, 2 in 3 tedne po injekciji ocetne kisline.
Metoda za induciranje intestinalno metaplazijo na podganji želodčne sluznice je bila opisana drugje [14, 15]. Na kratko, podgane prejel dve rentgenske odmerek 10 Gy vsakega in so žrtvovati 6 mesecev po obsevanju. Metoda za induciranje displazije pri podganjih želodčne sluznice je opisana tudi drugje [14]. Na kratko, je 50 ug /ml N-metil-N'-nitro-N-nitrosoguanidine (MNNG) (Aldrich Chemical Co., Milwaukee, WI), ki ga podganam ad libitum
4 mesece.
Protitelesa
Rabbit anti-DCAMKL1 imunoglobulin (Ig) G (Abcam, Cambridge, Velika Britanija; končna razredčitev 1: 100), miška proti vse bolj razširjeni mobilni jedrske antigena (PCNA) IgG (Dako, CARPINTERIA, CA; pripravljen za uporabo), kunčjega anti -PCNA IgG (Abcam; 1: 200), miška anti-H + /K + - adenozin triphosphatase (ATPase) alfa podenota IgG (Research Diagnostics Inc. Flanders, NJ; 1: 200), ovce anti -pepsinogen II IgG (United States Biological, Swampscott, MA, 1: 100), miška anti-MUC6 IgM (Kanto Kagaku, Tokio; 1: 100), miška anti-MUC5AC IgG (Abcam; 1: 100), mouse anti- TFF2 IgM (Abcam; 1: 200), morski prašiček anti-histidin dekarboksilaza (HDC) IgG (ARP, Belmont, MA, 1: 100), kozji anti-grelina IgG (santa Cruz Biotechnology, santa Cruz, CA; 1: 100 ), in miško anti-somatostatina IgG (Biomeda, Foster City, CA, 01:25), so bili uporabljeni kot primarnih protiteles
histološko analizo
želodec tkivo je bil določen v 10% nevtralnem-buffered formalina čez noč, in potem. vgrajeni v parafin in prerezana (4 um). Oddelki smo obarvali s hematoksilinom in eozinom (H &E) z uporabo standardnih tehnik. Periodično kislino Schiff (PAS) -Alcian Blue obarvanje je bila izvedena za odkrivanje sluznico rodove celic.
Za imunohistokemičnim analize so-parafin vgrajeni odseki deparaffinized in obdelamo z ustreznim postopkom za pridobivanje podatkov za vsak antigen. Odseki inkubiramo pri 0,3% H 2O 2, metanola 10 minut, da inaktiviramo endogeni peroksidazo in nato speremo s fosfatnim pufrom (PBS), ki vsebuje 0,1% Tween 20 (PBST). Po inkubaciji z blokirno raztopino (Block Ace, DAINIPPON Seiyaku, Tokio, Japonska), 10 minut, so odseki inkubirali s primarnim protitelesom 1 uro pri sobni temperaturi. Nato smo vsak korak sledilo spiranje 3x s PBST 3 minute. Oddelki so inkubirali s HP-konjugirano IgG ali IgM 40 minut. Označene celice so bile rjave barve z 3,3'-diaminobenzidine klorida (DAB) z uporabo DAB reagenta niz (Dako), nato pa jih nasprotno s hematoksilinom Mayer.
Za dvojno barvno imunskim barvanjem, je bila metoda posrednega immunoalkaline fosfataze uporabljajo naslednja posredni postopek imunoperoksidazni opisano zgoraj. Po reakciji z DAB, so odseki inkubirali z drugim primarnim protitelesom 1 uro, čemur sledi inkubacija z ALP konjugiranih IgG ali IgM za 40 minut. Označene celice smo obarvali modro s kompletom za ALP substrata III (Vector modro, Vector Laboratories, Burlingame, CA).
Za pridobivanje antigena v pepsinogen II in MUC6, proteinaze K (DAKO) je bil uporabljen topično na deparaffinized oddelkov za 6 minut. Za pridobivanje antigena na PCNA (mišji IgG) so bili odseki segrevali v destilirani vodi v avtoklavu za 10 minut. Za pridobivanje antigenov iz MUC5AC, so odseki segrevali v citratnem pufru v avtoklavu za 10 minut. Noben postopek iskanje antigen smo uporabili za DCAMKL1, H + /K + -. -ATPaze, PCNA (zajec IgG), TFF2, HDC, grelina in somatostatina obarvanje
Točkovanje DCAMKL1 celice in PCNA celice
Oddelki, ki so šli skozi dvojno barvno imunskim barvanjem uporabo DCAMKL1 in PCNA so bili analizirani, da določi število imunoreaktivnosti celic. Oddelki so bili uporabljeni od 5 podgan in 10 dobro usmerjeni, želodca enote so analizirali na vsakem oddelku.
Bila elektronska mikroskopija
pred vključitvijo imunoperoksidazni elektronsko mikroskopijo izvede na naslednji način. Majhne koščke svežih vzorcev iz želodca korpusa neobdelanih podgan so bile določene v 4% paraformaldehida v 24 urah, čemur sledi pritrditev v 0,1% glutaraldehidom in 4% paraformaldehida 1 uro. Kriostat profili (6 um) smo pripravili in inkubiramo z anti-DCAMKL1 protitelesa za 48 ur, čemur sledi inkubacija s HP-konjugiranega anti-kunčjega IgG 24 ur. Odseki so nato pritrjeni z 0,5% glutaraldehidom za 5 minut, reagiramo z DAB, po fiksni z 2% osmijevim tetroksidom, dehidrirano skozi stopenjski etanola seriji, in vgrajeni v epoksi smolo. Tankih sekcije smo razrezali z ultramicrotome in obarvajo v raztopini uranilov acetata in svinca raztopini citrata. Osebki so bile pregledane s pomočjo prenosa elektronskega mikroskopa (JEM-1200EX, JEOL, Tokio, Japonska).
Rezultati
Normal Fundic Žleza
DCAMKL1-izražajo celice so bili razdeljeni v zgornji tretjini normalnih fundic žlez, v regija besedilu ožine (slika 1A). V elektronsko mikroskopijo, so našli tudi DCAMKL1 celic v ožine (slika 1B, a). DCAMKL1 celica je manjša od parietalnih celic, ki je bogata v mitohondrijih, in manjkalo sekretorni zrnca vidimo na endokrine celice (Slika 1B, b). DCAMKL1 radioinkorporacijo bilo ugotovljeno površinsko v citoplazmi, ki daje visok nucleocytoplasmic razmerje (slika 1B, c). DCAMKL1 celice so bile prisotne v epitelijskih oblog celic, saj je imel celice dezmosom v križišču s sosednjimi epitelnih celic (slika 1B, d). V DCAMKL1 celice imel nezreli videz z nekaj mitohondrije, mehurčkov ali sekretorni zrnc (slika 1B, c in 1B, d). Slika 1 Distribucija in ultrastruktura DCAMKL1 izražajo celic v normalnem rat želodcu. (A) lahka posnetek, ki prikazuje mesto DCAMKL1 celic v fundic sluznici. Lestvica: 100 mikrometrov. Vložek prikazuje povečan pogled na opisano območje v A. Merilo: 10 um. elektronsko mikroskopska (B) za menjalnike. (A, c) ultratankih odseki brez counterstaining. (B, d) tankih odseki z counterstaining. (A) DCAMKL1 celice v fundic žleze. Lestvica: 2 um, povečava × 5600. (B) DCAMKL1 celica (D) je bila manjša od parietalnih celic (P), ki je bogata v mitohondrijih in niso imeli sekretornih granule vidimo na endokrine celice (E). Lestvica: 2 um, povečava × 7000. (C) DCAMKL1 obarvanje je pretežno citoplazme. Merilo: 1 um, povečava × 14400. (D) Puščice kažejo dezmosom. Bela puščica kaže DCAMKL1 radioinkorporacijo. Lestvica:. 2 um, povečava × 8400
smo poleg primerjali porazdelitev DCAMKL1 celic s tistimi znanih epitelijskih linij celic. DCAMKL1 celice so pomešana z proliferirajočih jih PCNA označeni v isthmus (slika 2a), vendar ne DCAMKL1 celice vsebovale PCNA. DCAMKL1 celice prebivali pod foveolar celic (obarvamo z Alcian Blue, slika 2b) in zgoraj sluznice vratu celic (obarvanih z MUC6 in TFF2, slika 2c, d). Parietalnih celicah in glavni celice v ožine so bili sosednji DCAMKL1 celice, vendar DCAMKL1 celice niso coexpress H + /K + ATPazni ali pepsinogen (slika 2e, f). DCAMKL1 celice so tudi diskretna iz endokrinih celic linije. Celična populacija DCAMKL1 je oddaljena od enterokromafinu podobnih celic, ki so v glavnem razporejene v fundic osnove (slika 2g). Večina A-podobne celice prebival v fundic bazo z nekaterimi razdeljeni v ožine, vendar za razliko od DCAMKL1 celic (slika 2 uri), in D celice jasno razlikovali od DCAMKL1 celic (Slika 2i). Slika 2 Double-barvni imunskim barvanjem prikazuje lokalizacija DCAMKL1-izražajo celice in epitelnih celic linije, ki obsegajo vse bolj razširjeni celice-PCNA označeni jeder (a), Alcian Blue-obarvajo foveolar celice (b), MUC6 obarvanih sluzničnih vratu celice (c), TFF2 -stained sluzničnih vratu celice (d), H + /K + ATP-aze-obarvajo parietalnih celic (e), pepsinogen II-obarvajo glavni celice (f), HDC-obarvajo enterokromafinu kot celice (g), grelina obarvanih A- kot celice (h), in D celic somatostatinskih obarvanih (i). Tehtnice: 100 um. Vložek (e) prikazuje povečan pogled začrtane površine. Upoštevajte, da so DCAMKL1 celice razlikujejo od parietalnih celicah
Akutna Površinski sluznice Poškodbe in hitro obnovitev
histološko analizo procesa sluznice poškodb in popravil po etanola uprave s pomočjo H &. E obarvanje in dvojno barvno DCAMKL1 in PCNA imunskim barvanjem je prikazano na sliki 3. Takoj po etanol zdravljenja, DCAMKL1 celice in PCNA celice ločiti od žleze in odcepi v lumen s foveolar celic (slika 3aa in 3Ba). DCAMKL1 celice in PCNA celice so skoraj izginile v poškodovano sluznico 1 uro po etanola zdravljenja (Slika 3AB in 3Bb). DCAMKL1 Celice nato ponovi po 6 urah, in nekateri so bili prisotni v bližini površino sluznice (slika 3AC in 3Bc). PCNA celice poveča na 24 ur po etanola (Slika 3Ad in 3Bd), medtem ko so bili prisotni na površino sluznice (slika 3Ae in 3Be) več DCAMKL1 celice in PCNA celice. Porazdelitev DCAMKL1 celic in PCNA celicah videz morfoloških neobdelane fundic sluznice po 96 ur (slika 3Af in 3Bf). Slika 3 Imunohistokemično analiza površinske poškodbe sluznice po zdravljenju etanola. (A) Double-barvni imunskim barvanjem za DCAMKL1 celice in PCNA celic. Želodčne odseki delo v 5 minutah (a), 1 uro (b) 6 ur (c), 24 ur (d, e) in 96 urah (f) po zdravljenju etanola. (B) H &E-obarvajo odseki, ki prikazuje časovni potek želodčne poškodbe sluznice in popravilo po etanola dajanju. (Af) Serijski deli ustreznih razdelkih A. Scales:. 100 mikrometrov
Časovni potek sprememb v številu DCAMKL1 in PCNA celice so prikazani na sliki 4. Število DCAMKL1 celic spremenilo skoraj sočasno s tisto PCNA celice, ampak zaposlovanje DCAMKL1 celic se je začela po 6 urah po zdravljenju z etanolom, pred zaposlovanjem PCNA celic. Slika 4 Časovni potek števila DCAMKL1 celic (A) in PCNA celic (B) v žleze po etanola dajanju. Vsak stolpec predstavlja povprečje ± SE rezultatov iz 5 podgan. Y-os prikazuje število celic na žleze in X-osi prikazuje čas po etanola uprave.
Kronični razjeda
Deep razjede, ki vključujejo cele plasti sluznice in prodirajo v muscularis sluznico narejeno 3 dni po zdravljenju z ocetno kislina. Večina razjede zaceli po 2 tednih zdravljenja in nekateri so se ponovno pojavili po 3 tednih. Histopatološko analizo regeneracijo sluznice je bila izvedena s pomočjo tkiva, ki se na 1 do 3 tedne po zdravljenju. Cystically razširjene žleze je bilo vidno v regenerativno sluznici marže razjed okoli kraterja aktivne razjede (slika 5a, b). Te žleze so obloženi s celic, ki izražajo MUC5AC, označevalca foveolar celic (slika 5c). Poleg tega TFF2, ki je označevalec sluzničnih vratu celic v neobdelanih podganah, prikazana intenzivno madeže na dnu regenerativnih fundic žlez (Slika 5d), podobno tisti, ki za TFF2 obarvanje celic globokih antralnih žlez in skladni s pojavom SPEM celice fenotip [16, 17]. V nasprotju s tem, izraz MUC6, so opazili še eno dvojno podajo mukozne vratu celic v neobdelanih podganah, poslabšala v regenerativno sluznice in le šibko MUC6 obarvanje v celicah na bazi žleze (slika 5e). Chief celice zmanjšale tudi razlike razjed in celic šibko obarvanih z pepsinogen smo prikazali samo na bazi žleze (Slika 5f). Tako je bilo prekrivajo izražanja TFF2, MUC6 in pepsinogen v celicah na dnu (slika 5, d-f). Parietalnih celicah sta odsotna v tkivu mejnega sluznice aktivne razjede (slika 5 g). PCNA celice povečale v žlez in mesenchyma marže razjed in izrazito povečanje teh celic je bilo ugotovljeno v bazi žleze (Slika 5h). Slika 5 vzorcev epitelijskih celic v robnem sluznici aktivne razjede. (A) H &E-obarvajo prerez po 1 tednu po zdravljenju ocetne kisline, ki prikazuje kraterja granulacijskega tkiva in mejnega tkiva okoli kraterja. Lestvica: 1000 um. (B) povečan pogled sluznice v razjeda marže je navedeno v (a). Lestvica: 100 mikrometrov. (C-h) Serijske odseki (b) obarvali z MUC5AC (c), TFF2 (d), MUC6 (e), pepsinogen II (f), H + /K + -ATPaznega (g), in PCNA (h). (I-k) Dvojni barvni imunskim barvanjem za DCAMKL1 z MUC5AC (i), DCAMKL1 z TFF2 (j), in PCNA z TFF2 (k). Tehtnice: 100 um. (L) Double-barvni imunskim barvanjem za DCAMKL1 z PCNA. Lestvica: 10 mikrometrov. Vložek v (h-k) prikazuje povečan pogled na opisano območja.
Nato smo raziskali DCAMKL1 izraz na mejni sluznici aktivne razjede. Razpršeni DCAMKL1-izražajo celice so bili prisotni skoraj celic oblog MUC5AC (Slika 5i) in jih primerjamo z SPEM celic (slika 5j). PCNA celice so bili razdeljeni tudi v bližini SPEM celic in nekaterih SPEM celic hkrati izraženi PCNA (Slika 5k), kar pomeni, da je SPEM rod množenjem in proliferacije. DCAMKL1 celice so pomešana z PCNA celic na dnu žleze, vendar ni coexpress PCNA (slika 5L). To kaže, da so DCAMKL1 celice vzdržujejo v mirujočem stanju. Predniški območje PCNA celic in DCAMKL1 celic je bilo razseljenih iz ožine v normalne žleze na podlago marže aktivne razjede.
V fazi celjenja, velikost razjeda zmanjšala in so bili obnovljeni epitelnih celic (slika 6a) . V zdravilni razjede, je bila prisotna od razjede roba do regenerirane žlez oddaljenih od razjede (slika 6b) gradient epitelijske regeneracijo. V regenerativno sluznico celjenje razjede, sluzničnih podobne celice izrazito povečala. Te celice so bile lokalizirane v bazi marže razjed in razširili na vratu žlez, kot je zdravljenje nadaljevalo. MUC5AC celice zmanjšal na vratu in je bil prisoten predvsem v foveolae (slika 6c), podobno lokacijo v normalnem fundic sluznico. Razpiranje sluznice, kot so celice v celjenja razjed so delno obarvajo s MUC5AC, ampak predvsem obarvali s TFF2 (slika 6d). MUC6 bil izražen v celicah ob vznožju žleze ne pa v tistih, vratu (slika 6e), medtem ko je pepsinogen izražen v celicah v vratu (slika 6f). Parietalnih celicah, ki so izginil v aktivnem razjedo, nad in pod populacije TFF2 celic v sluznici celjenje razjede (slika 6g) ponovi. V normalni sluznici, so parietalnih celic izhaja iz matičnih celic v ožine, zrel v njem, in nato traja nekaj dni, da se selijo navzdol na dnu [18], medtem ko je v zdravilnem razjeda parietalnih celicah poseljeno vratu in osnove žleze istočasno. PCNA je izrazil močno tik nad TFF2 celic v bližini razjede, kar kaže na okrepljeno pomnoževanje epitelnih celic v tej regiji (slika 6h). Nekateri PCNA celice so razdeljeni tudi pod TFF2 celic. DCAMKL1 celice nad ponovi in ​​primerjamo s spodnjo polovico TFF2 celične populacije (slika 6i) v. Ta dvojna porazdelitev profil matičnih cone lahko prispeva k spodbujanju hitro in učinkovito regeneracijo sluznice. Slika 6 vzorcev epitelnih celic in DCAMKL1 celic v regenerativni sluznice celjenje razjede. (A) H &E-obarvajo prerez po 2 tednih zdravljenja ocetne kisline, ki prikazuje generatorsko tkivo celjenje razjede. Lestvica: 1000 um. (B) povečan pogled na regenerativne sluznice opisano v (a). je bilo identificiranih gradient epitelijske regeneracijo iz razjeda rob (desni strani) v regenerirano sluznice oddaljena od razjede (levi). Lestvica: 100 mikrometrov. (C-h) Serijske odseki (b), obarvane z MUC5AC (c), TFF2 (d), MUC6 (e), pepsinogen II (f), H + /K + -ATPaznega (g), in PCNA (h). (I) Double-barvni imunskim barvanjem za DCAMKL1 in TFF2 na serijski delu (b).
Intestinalno metaplazijo in displazija
in obsevanih podgan, črevesne metaplazija, ki vsebujejo čašo celice, ki jih PAS-Alcian Blue obarvane oblikovana v fundic žleze (slika 7a). Celice, ki izražajo DCAMKL1 bilo ugotovljeno spodaj foveolar celic v luminalne predelu sluznice, kot tudi v globokem sluznici (slika 7b, c). PCNA celice znatno povečale v intestinalized sluznice in DCAMKL1 celic v luminalno predelu so distalno na PCNA celic (slika 7c). -TFF2 izražanje celice, skladne s SPEM, pojavila na dnu intestinalized sluznice (slika 7d). PCNA celice niso bili najdeni proksimalno DCAMKL1 celic globoko v intestinalized epitelno obloge, s podobnim distribucije vzorec tistemu iz tankega črevesa kripti (slika 7e, f). Slika 7 DCAMKL1 izraz v intestinalized sluznice. (A) PAS-Alcian Blue obarvanje prikazuje sluznico z intestinalno metaplazijo vsebujejo čašo celice. Lestvica: 100 mikrometrov. (B-d) Serijske sekcije (a), obarvane z DCAMKL1 (b), DCAMKL1 in PCNA (c) in TFF2 (d). (E, f) povečana pogledi na območjih, navedenih v (b) in (c), v tem zaporedju. Lestvice:. 10 mikrometrov
Pri podganah, ki so se zdravili z MNNG, cistična razširjenje žlez z displazije je bil dosežen pri sluznice in submucosa (slika 8a). SPEM razvil in razširil v bližini dilatacionih žlez in segmentno izražanja TFF2 je bilo ugotovljeno v celicah oblog žleze (slika 8b). DCAMKL1 je redko izražena v teh žlez (Slika 8c). TFF2 in DCAMKL1 so bili izraženi v različnih celicah v dilatacionih žlez (slika 8d, 8e) in PCNA je bila izražena tudi v drugih DCAMKL1 celic celic, kar kaže na proliferativni naravo žlez (Slika 8f). Slika 8 DCAMKL1 izraz v dilatacionih žlez z displazijo. (A) H &E-obarvajo prerez, ki prikazuje cistično dilatacija žlez. (B) Širitev SPEM. Puščice kažejo segmentih izražanje TFF2 v dilatacionih žlez. (C) Izražanje DCAMKL1 v dilatacionih žleze. (D-f) Serijske odseki dilatativna žleze za TFF2 (d), DCAMKL1 (e) in DCAMKL1 z PCNA (f). Lestvice:. 100 um
Razprava
študija pokazala, da so samo prisotni v ožine na podganji fundic žleze, v kateri so mislili multipotentne predniške celice bivajo DCAMKL1-izražajo celic [1, 3]. Pokazali smo, da so DCAMKL1 celice diskretni iz diferenciranih epitelijskih celic, vključno endokrine celice linije. Poleg tega immunoelectron mikroskopija je pokazala, da je bila DCAMKL1 izražen v nezrelih epitelijskih celic z malo organele, ki ustrezajo celic granule brez predhodno predlagana kot domnevnih predniških celic v želodčnem ožine [3]. DCAMKL1 je hkrati izraženi z Musashi-1 v parietalnih celicah v želodcu miške [13], ker je ta študija je pokazala, da so bile celice DCAMKL1 razlikuje od parietalnih celicah, ki izražajo Musashi-1 v želodcu podganji [5].
Posledične spremembe v celični izguba in okrevanje želodčne žleze po površnem poškodbe sluznice z etanolom so povzeti na sliki 9. časovni potek sprememb v številu DCAMKL1 in PCNA celic od 6 do 96 ur po zdravljenju etanola pri podganah so skladne s tistimi v miško [13 ]. Poleg tega smo analizirali prejšnje spremembe v teh tipov celic. DCAMKL1 celice in PCNA celice desquamated z foveolar celice takoj po obdelavi etanola. Ogoljelog sluznice površina po izpostavljenosti etanolu je ponovno epithelialized v 1 do 2 urah hitro seli foveolar celice iz bližnjih nepoškodovano epitela [19]. Ker je ta predčasno vračilo ne temelji na celično proliferacijo, ampak o migracijah, ki je mobilizacijo matičnih celic ni potrebna. Po latentnem obdobju približno 8 ur, izbruh proliferacijske aktivnosti prišlo do 24 ur, da se ponovno vzpostavi foveolae njihove prvotne dolžine [20]. Ta časovni potek epitelnega proliferacije po izpostavljenosti etanola je podoben kot pri tej študiji. Slika 9 Zaporedne spremembe v celični izgube in obnovo želodčne žleze po površnem sluznice poškodbe z etanolom.
Nedavnem poročilu je pokazala, da PCNA pozitivni proliferirajoče celice vsebujejo prefoveolar celice [21]. Povečano število proliferirajočih verjetno izvirajo iz matičnih celic, vendar se proces matičnih celic doselitvi po poškodbi je nejasen. V tej študiji so DCAMKL1 celice zaposli pred obnovo proliferirajoče celice, število in razporeditev DCAMKL1 celic spremenila skoraj sočasno s tistimi proliferirajoče celice po 24 urah. Ta ugotovitev pomeni, da se DCAMKL1, ki izražajo celice matičnih celic, ki povzročajo, da proliferirajoče celice. Več DCAMKL1 celice in PCNA celice so bili prisotni na površino sluznice v zgodnjem regenerativno obdobje. Prehodna premik matičnih cone proti površini lahko pomaga olajšati hitro in prednostno obnovo foveolar celic, ki je rod, ki je najbolj poškodovana in izgubil v površinskimi poškodbami sluznice. Ker zaposleni DCAMKL1 celice ponovi v enem dnevu, ko so bili avtohtoni celice izgubljeno, lahko doseljevanja DCAMKL1 celice poškodovane sluznice selijo iz niso poškodovani žlez ali zaposliti iz potomcev za multipotentne izvornih celic rodu, ki je pod stalno širitev ali izumrtje v nišo [9, 22].
procese sluznice obnovo in matičnih celic doselitvijo v kronično globoke razjede jasno razlikuje od tistih v akutnem površno poškodbe (slika 10). Diferencirane rodbin celic se ohranijo po akutni površinskimi poškodbami, medtem ko je bilo urejeno diferenciacija sluznice linij celic v aktivno razjedo vznemirjen in neločljivo rodovi celic so bili nadomeščeni z novo razvite sluzničnih linij celic. Parietalnih in glavni celic je bilo izgubljenih, foveolar hiperplazija je bila očitna in SPEM pojavila v eliksir epitela obdaja aktivno razjedo. Te ugotovitve posnemajo patoloških sprememb v različnih eksperimentalnih modelih z akutno ali kronično oxyntic atrofijo [16, 17, 23, 24] induciranih. Na robu razjed, MUC6 in pepsinogen se zdi, da je treba hkrati izraženi z TFF2 na dnu žleze. Ta ugotovitev podpira hipotezo, da glavni celice transdifferentiate za SPEM [17, 25], in da se postopek MHC razreda ll + iz sluznice vratu celic glavnih celic spremeni v aktivno razjedo. Alternativna razlaga, ki je bolj verjetno na osnovi trenutnih rezultatov, je, da SPEM izvira iz matičnih celic in redifferentiates k višjim celice. Ugotovitev, da je SPEM povezana s povečano proliferacijo podpira ta predlog [16, 24]. Slika 10 Spremembe iz linije sluzničnih celic na robu aktivnih in zdravilnih razjede.
Kronična sluznice razjede v prebavnem traktu sproži proces zdravljenja od osnove sluznico na ulkusa rob, in lahko povzroči nove celice linij, ki ustrezajo SPEM [26 ]. Ti pojavi, ki izhaja iz multipotentne matične celice v kripti tankega in debelega črevesa, medtem SPEM in proliferirajoče celice na dnu robu želodca je oddaljena od običajnega matičnih coni v ožine. Kronično razjeda model v tej študiji razvili nekaj tednov po zdravljenju, ki omogoča selitev kostnih matičnih celic mozga izvira verjetno zato, ker se pojavi vsaditev teh celic so epitelijskih celic želodca pri miših, ko je utrpel
okužbo s H. felis več kot 1 leto , ne pa tudi pri miših z želodčno razjedo z ocetno kislino [27] inducirane. Prisotnost drugega matičnih populaciji kriptirni predniških celic v želodcu, je predvideno, da mnogo let [16, 24], vendar pa je treba še opredeliti. V tej študiji so domnevni predniške celice DCAMKL1 nahajajo v bližini dveh sluznice celičnih linij, foveolar celic in SPEM celic v hiperplazijo na robu ulkus. DCAMKL1 celice razporejeni drug ob drugem z SPEM so združljivi z Grobni matičnih celic. Predniški celica dvojno podajo črevesno Lgr5 prisoten na dnu žlez in ne v ožine [7], in da je populacija predniške celice med vnetjem znatno povečala [6]. Smo hipotezo, da so DCAMKL1-izražajo celic na dnu želodca žleze druga linija matičnih populacije, ki je prikriti pod fiziološkimi pogoji.

• Učinek gen zmanjšanje izgub kromosomskih odkritih v želodčnih rakov
• Serološka ocena želodčne sluznice atrofije pri raku želodca