Muuttunut ilmentyminen oletetun esisolujen markkeri DCAMKL1 rotalla mahalaukun limakalvon uudistumista, metaplasiaa ja dysplasia

muuttunut ilmentyminen oletetun esisolujen markkeri DCAMKL1 rotalla mahalaukun limakalvon uudistumista, metaplasiaa ja dysplasia
tiivistelmä
tausta
Doublecortin ja kalsium /kalmoduliini-riippuvaisen proteiinikinaasin-like-1 (DCAMKL1) on ehdokas markkeri kantasolujen ruoansulatuskanavan limakalvolla. Lineage solujen mahalaukun limakalvon ovat peräisin progenitorisoluista, mutta tämä prosessi voidaan muuttaa vaurion jälkeen. Siksi tutkimme DCAMKL1 ilmentymistä patologisissa olosuhteissa. Tool Menetelmät
immunohistokemiallinen analyysi suoritettiin rotan vatsaan akuutti pinnallinen vamma, krooninen haavauma, suoliston metaplasiaa ja dysplasia.
Tulokset
DCAMKL1 oli yksinomaan ilmaistu epäkypsiä lepotilassa solujen kannaksella normaalin fundic rauhaset, jossa otaksuttu esisolut uskotaan oleskella. DCAMKL1-positiivisten solujen ja jakautuviin soluihin irtoa onteloon jälkeen pinnallinen vamma ja uudelleen ilmestyi aikana regeneratiivisen prosessin, lähinnä pinnallinen limakalvolla. Vuonna marginaalinen limakalvon ympärillä aktiivinen haavauma, parietal ja päätoimittaja solujen vähentynyt, foveolar liikakasvu oli ilmeinen, ja apilatekijän perhe 2 (TFF2) /spasmolyyttisiä polypeptidiä ilmentävien metaplasiaa (SPEM) ilmeni rauhanen perusta. DCAMKL1 solut uudelleen syntynyt syvä limakalvon rinnastuvat SPEM ja jakautuvat solut. Parantavaa haavauma, The TFF2 solupopulaatio laajennettu ja näytti redifferentiate johtaville soluihin, kun taas jakautuvat solut ja DCAMKL1 solut näyttivät ylä- ja alapuolella TFF2 solujen edistää paranemista. SPEM ilmestyi ja PCNA-solujen lisääntynyt intestinalized limakalvon ja DCAMKL1 ilmaistiin läheisyydessä PCNA solujen syvä limakalvolla. DCAMKL1, PCNA ja TFF2 ilmaistiin eri dysplastic epiteelisoluihin laajentuneet rauhaset lähellä SPEM.
Päätelmä
Mikroskooppitutkimus ulkonäkö DCAMKL1-positiivisten solujen ja ilmaisun malleja DCAMKL1 normaaleissa ja patologisissa tiloissa osoittavat, että solut kuuluvat progenitorisolupopulaatioon. DCAMKL1 ilmentyminen liittyy läheisesti TFF2 /SPEM soluja loukkaantumisen jälkeen. DCAMKL1 solut asuttaa lähellä Lisääntyvät hyperplastic, metaplastiset ja Dysplasiasoluissa, ja kantaisä vyöhyke siirtyy mukaan patologisia olosuhteita.
Tausta
hiiren ja ihmisen mahalaukun yksikkö näyttää monoklonaalinen muuntaminen, että niissä on multipotentteihin kantasolujen [ ,,,0],1, 2]. Elektronimikroskoopilla autoradiografia hiiren ovat ymmärtää, että rae-vapaa solujen kannaksella toimivat multipotentteihin kantasolujen [3]. Erilaistumista ja muuttoliike prosesseja solulinjojen voidaan muuttaa vammoja. Esisolulla vyöhykkeen kannaksella vahingoittaa helposti intraluminaaliset etanoli, steroideihin kuulumattomien tulehduskipulääkkeiden tai Helicobacter pylori
(H. pylori
). Krooninen tulehdus vatsassa voi johtaa surkastumista ja erikoistuneiden solujen menetyksen konkreettisia vaikutuksia kudosspesifisiä kantasolujen loukkaantumisen. Kuitenkin käyttäytymistä progenitorisolujen akuutin tai kroonisen limakalvon vaurioita ja mekanismi palauttaminen näiden solujen aikana limakalvon uudistumista ei ymmärretä hyvin.
Progenitorisolupopulaatioon on tärkeää, kunnossapito- ja regenerointi mahalaukun epiteelin, mutta pitkällä elivät esisolut ovat vaarassa kertymiselle mutaatioita, jotka johtavat syöpään [4]. Neoplasia voi seurata solujen metaplasiaa johtuen kroonisen tulehduksen ja korjaus. Kuitenkin tarkka aseman analyysi ja muuttaminen esisolujen sekvenssin gastriitti-metaplasiaa-dysplasia-syöpä ei ole tehty, lähinnä puutteen vuoksi erillisten esisolujen markkereita vatsassa.
Musashi-1, joka on markkeri esisolujen hiiren ohutsuolessa, ei ole ilmaistu oletetun progenitorisolujen, mutta on löydetty parietaalisoluissa rotan fundic kannaksen [5]. Villiiniä-1 promoottori /tehostaja fragmentti on merkki mahdollisista mahan esisolujen kannaksen mahanportin rauhaset [6]. Lineage tutkimus osoitti, että suoliston esisolujen markkeri Lgr5 ilmentyy juuressa mahdollisille fundic ja mahanportin rauhaset vastasyntyneiden mahassa, kun taas ilmentyminen aikuis- oli pääasiallisesti rajattu pohjaan mahaportin rauhaset [7]. Täten ei ole olemassa varmaa markkereita esisolujen aikuisten fundic rauhaset.
DCAMKL1 on yksi tuotteista Gene ontogeny rikastetun transkriptien löytyi verrattuna hiiren mahalaukun ja ohutsuolen kantaisä aineistot [8]. Immunohistokemiallista analyysiä käyttäen DCAMKL1 vasta-ainetta paljasti yhden solun värjäytymisen suolen krypta osissa tai lähellä asemassa 4 ja mahalaukun kannaksella soluissa [8]. Kun ensimmäinen raportti, erityisiä lokalisaatio DCAMKL1 ilmentävien solujen kantasolujen markkinarako osoitettiin ohutsuolessa hiirien [9, 10] ja paksusuolessa hiirillä ja ihmisillä [11, 12], kun taas DCAMKL1 oli koekspressoidaan kanssa Musashi -1 parietaalisoluissa vatsassa hiirien [13].
ensimmäinen tämän tutkimuksen tarkoituksena oli selvittää, onko DCAMKL1 on merkkiaine kantasolujen rotan mahassa. Toisena tavoitteena oli valottaa ajallinen ja paikallinen malleja ulkonäkö soluja spesifisesti ilmentävät DCAMKL1 useita mahalaukun sairauksiin. Tool Menetelmät
Eläinten valmistelu
Kaikki eläimen pöytäkirjat hyväksynyt Keio yliopiston Animal tutkimuskomitea. Wistar rottia, jotka painoivat noin 200 g, pidettiin paastolla 24 tuntia vapaasti vettä. Tuottaa akuutti pinnallisia vammoja fundic limakalvolla, absoluuttista etanolia (1 ml) tiputettiin mahalaukku intubaation. Tuottaa kroonisia syvä haava, 20% etikkahappoa (50 ui) injektoitiin fundic submukoosassa etuseinämän käyttäen mikroruiskulla. Rotat lopetettiin 3 päivää ja 1, 2 ja 3 viikkoa sen jälkeen, kun etikkahapon injektio.
Menetelmä indusoimiseksi suoliston metaplasia rotan mahalaukun limakalvon on kuvattu muualla [14, 15]. Lyhyesti, rotat saivat kaksi X-ray annoksilla 10 Gy kukin ja tapettiin 6 kuukautta säteilytyksen jälkeen. Menetelmä indusoimiseksi dysplasia rotan mahalaukun limakalvon on myös kuvattu muualla [14]. Lyhyesti, 50 ug /ml: aan N-metyyli-N'-nitro-N-nitrosoguanidiini (MNNG) (Aldrich Chemical Co., Milwaukee, WI), annettiin rotille ad libitum
ja 4 kuukautta.
Vasta-aineet
kanin anti-DCAMKL1 immunoglobuliini (Ig) G (Abcam, Cambridge, UK; loppulaimennos 1: 100), hiiren anti-lisääntyvien solun tuma-antigeenin (PCNA) IgG (DAKO, Carpinteria, CA, käyttövalmis), jäniksen anti -PCNA IgG (Abcam; 1: 200), hiiren anti-H + /K + - adenosiinitrifosfataasiaktiivisuus (ATPaasi) α-alayksikköä IgG (Research Diagnostics Inc. Flanders, NJ, 1: 200), lampaan anti -pepsinogen II IgG: tä (United States Bio-, Swampscott, MA, 1: 100), hiiren anti-MUC6 IgM (Kanto Kagaku, Tokio, 1: 100), hiiren anti-MUC5AC-IgG (Abcam; 1: 100), hiiren anti- TFF2 IgM (Abcam; 1: 200), marsun anti-histidiini dekarboksylaasin (HDC) IgG (ARP, Belmont, MA, 1: 100), vuohen anti-greliini IgG (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, 1: 100 ), ja hiiren anti-somatostatiini IgG (Biomeda, Foster City, CA, 01:25) käytettiin ensisijaisena vasta-aineita.
Histologinen analyysi
vatsa kudos kiinnitettiin 10% neutraaliksi puskuroituun formaliiniin yön yli, ja sitten upotettiin parafiiniin ja leikattiin (4 pm). Leikkeet värjättiin hematoksyliinillä ja eosiinilla (H &E) käyttäen standarditekniikoita. Perjodihappo-Schiff (PAS) -Alcian Blue värjäys suoritettiin havaitsemiseksi limakalvojen solulinjojen.
Immunohistokemiallista analyysia varten, parafiiniin upotetut leikkeet poistettiin parafiini ja esikäsiteltiin sopivan hakuproseduuri kullekin antigeenille. Leikkeitä inkuboitiin 0,3% H 2O 2 metanolissa 10 minuutin inaktivoimiseksi endogeenisen peroksidaasin ja pestiin sitten fosfaatilla puskuroidulla suolaliuoksella (PBS), joka sisälsi 0,1% Tween 20: tä (PBST). Inkuboinnin jälkeen blokkausliuoksella (Block Ace, Dainippon Seiyaku, Tokio, Japani) 10 minuutin ajan, leikkeitä inkuboitiin primäärisellä vasta-aineella 1 tunnin ajan huoneenlämpötilassa. Sen jälkeen kunkin vaiheen seurasi pesu 3 kertaa PBST: llä 3 minuutin ajan. Leikkeitä inkuboitiin HP-konjugoitu IgG- tai IgM: ssa 40 minuuttia. Leimatut solut ruskeita kanssa 3,3'-diaminobentsidiinihydrokloridia (DAB) käyttäen DAB-reagenssia setti (DAKO), ja sitten vastavärjättiin Mayerin hematoksyliinillä.
Kaksikantaisten väri Immuunivärjäystä epäsuora immunoalkaline fosfataasin menetelmää käytettiin seuraavien epäsuoran immunoperoksidaasitesti edellä kuvattu menettely. Sen jälkeen kun reaktio DAB, leikkeitä inkuboitiin toisen primäärisen vasta-aineen 1 tunnin ajan, jonka jälkeen inkuboitiin ALP-konjugoidulla IgG tai IgM: ssa 40 minuuttia. Leimatut solut värjättiin sininen kanssa ALP substraattipakkausta III (Vector Blue, Vector Laboratories, Burlingame, CA).
Antigeenin haku pepsinogeeni II ja MUC6, proteinaasi K (DAKO) levitettiin paikallisesti parafiini osiot 6 minuutit. Antigeenin hakuun PCNA (hiiren IgG), osat kuumennettiin tislatussa vedessä autoklaavissa 10 minuuttia. Antigeenin hakuun MUC5AC-osastot, kuumennettiin sitraattipuskurissa autoklaavissa 10 minuuttia. Ei-antigeeni haku menettelyä käytettiin DCAMKL1, H + /K + - ATPaasi, PCNA (kani IgG), TFF2, HDC, greliinin tai somatostatiinin värjäys.
Pisteytys DCAMKL1 Solut ja PCNA solut
Osiot että koki kaksinkertainen väri immunovärjäyksellä käyttäen DCAMKL1 ja PCNA analysoitiin määrittämään lukumäärän immuno- soluja. Leikkeitä käytettiin 5 rotilla ja 10 hyvin suuntautunut mahalaukun yksiköitä analysoitiin kussakin osassa.
Electron Microscopy
Pre-upottamisen immunoperoksidaasitesti elektronimikroskopia suoritettiin seuraavasti. Pieniä paloja tuoretta yksilöitä mahalaukun corpus käsittelemättömän rottia kiinnitettiin 4% paraformaldehydi 24 tuntia, jonka jälkeen kiinnitys 0,1% glutaraldehydiä ja 4% paraformaldehydi 1 tunnin ajan. Kryostaattileikkeitä (6 pm) valmistettiin ja inkuboitiin anti-DCAMKL1 vasta-ainetta 48 tuntia, jonka jälkeen inkuboitiin HP-konjugoidulla anti-kani-IgG: tä 24 tunnin ajan. Sitten leikkeitä kiinnitettiin 0,5% glutaraldehydillä 5 minuuttia, reagoimaan DAB, määrätään jälkikäteen 2% osmiumtetroksidilla, kuivattu kautta porrastettu etanolia sarja, ja upotettiin epoksihartsiin. Ultrathin leikkeet leikattiin kanssa ultramikrotomilla ja värjättiin uranyyliasetaatilla liuokseen ja lyijyä sitraattiliuosta. Näytteet tutkittiin käyttämällä transmissioelektronimikroskooppia (JEM-1200EX, JEOL, Tokio, Japani).
Tulokset
Normaali Fundic Gland
DCAMKL1 ilmentäviä soluja jaettiin ylimmästä kolmanneksesta normaalin fundic rauhaset, vuonna alue kutsutaan kannas (kuvio 1A). Elektronimikroskoopilla, DCAMKL1-soluja havaittiin myös kannas (kuvio 1 B, a). DCAMKL1 solu oli pienempi kuin perietaalisolun, joka oli runsaasti mitokondrioita, ja puuttui eritysjyvästen nähty hormonitoiminnan solujen (kuvio 1 B, b). DCAMKL1 immunoreaktiivisuus havaittiin diffuusisti sytoplasmassa, jolloin korkea nucleocytoplasmic suhde (kuvio 1 B, C). DCAMKL1 soluja oli läsnä epiteelisolu vuoraukset, koska solut oli desmosomeihin risteykseen viereisten epiteelisolujen (kuvio 1 B, d). DCAMKL1 solut oli epäkypsä ulkonäkö muutaman mitokondrioita, rakkulat tai sekretorisen rakeita (kuvio 1 B, C ja 1B, d). Kuvio 1 jakautuminen ja äärirakenteessa DCAMKL1 ilmentävien solujen normaalissa rotan mahassa. (A) valomikroskooppikuvan, joka esittää sijainnin DCAMKL1 solujen fundic limakalvolla. Mittakaava: 100 pm. Insertti esittää suurennettuna hahmotellut alueen A. Mittakaava: 10 um. (B) Transmission nimikroskooppikuvia. (A, c) ultraohuet leikkeet ilman counterstaining. (B, d) ultraohuet leikkeet kanssa counterstaining. (A) DCAMKL1 soluja fundic rauhanen. Mittakaava: 2 um, suurennus × 5600. (B) DCAMKL1 solu (D) oli pienempi kuin perietaalisolun (P), joka oli runsaasti mitokondrioita, ja puuttui eritysjyvästen nähdään hormonitoimintaa solussa (E). Mittakaava: 2 um, suurennus × 7000. (C) DCAMKL1 värjäys oli pääasiassa sytoplasmista. Mittakaava: 1 um, suurennus × 14400. (D) Nuolenkärjet osoittavat desmosomeja. Valkoiset Nuoli osoittaa DCAMKL1 immunoreaktiivisuus. Mittakaava: 2 um, suurennus × 8400.
Seuraavaksi me verrattuna jakelusta DCAMKL1 solujen kanssa tunnettujen epiteelisolujen suvusta. DCAMKL1 solut sekoittunut jakautuvat solut leimattiin PCNA kannaksella (kuva 2a), mutta ei DCAMKL1 solut sisälsivät PCNA. DCAMKL1 solut asuivat alle foveolar soluja (värjättiin Alcian Blue, kuvio 2b) ja edellä limakalvojen kaula-soluja (värjättiin MUC6 ja TFF2, kuvio 2c, d). Parietaalisoluihin ja päätoimittaja solujen kannaksella olivat vieressä DCAMKL1 soluihin, mutta DCAMKL1 solut eivät koekspressoimaan H + /K + -ATPaasi tai pepsinogeeni (kuvio 2e, f). DCAMKL1 solut olivat myös irrallaan hormonitoimintaa solulinjoja. DCAMKL1 solupopulaatio oli kaukana enterochromaffin kaltaisia ​​soluja, jotka oli pääasiassa jaetaan fundic pohja (kuvio 2g). Suurin osa A-kaltaisia ​​soluja oleskellut fundic pohja joidenkin jaetaan kannaksella, mutta eroaa DCAMKL1 soluista (kuvio 2h), ja D solut erosi selvästi DCAMKL1 soluista (kuvio 2i). Kuvio 2 Kahden värin immunovärjäys esittää lokalisaatio DCAMKL1-ilmentävien solujen ja epiteelisolujen suvusta, joka käsittää lisääntyvien solujen PCNA-leimatun ytimet (a), Alcian Blue-värjätty foveolar solut (b), MUC6-värjättiin limakalvon kaula-soluja (c), TFF2 -stained limakalvojen kaula-soluja (d), H + /K + -ATPaasi-värjättyjen parietaalisolujen (e), pepsinogeeni II-värjätty pääsoluissa (f), HDC-värjätty enterochromaffin kaltaisia ​​soluja (g), greliini-värjättiin A- kuten solujen (h), ja somatostatiini-värjätään D solujen (i). Scales: 100 pm. Insertti in (e) esittää suurennettuna hahmoteltu alueelle. Huomaa, että DCAMKL1 solut erosivat parietaalisolujen.
Akuutti pinnallinen limakalvon vauriota ja Rapid Renewal
histologinen analyysi prosessin limakalvon vauriota ja korjaus jälkeen etanolin annon käyttämällä H &E-värjäystä ja kaksinkertainen väri DCAMKL1 ja PCNA immunovärjäys on esitetty kuviossa 3. kun etanolia hoidon, DCAMKL1 solut ja PCNA-solut irrotettiin rauhanen ja irtoa onteloon kanssa foveolar soluja (kuvio 3 aa ja 3Ba). DCAMKL1 solut ja PCNA solut olivat lähes kadonneet vahingoittuneen limakalvon 1 tunnin kuluttua etanolin hoidon (kuvio 3ab ja 3BB). DCAMKL1 solut sitten ilmestyi 6 tunnin kuluttua, ja jotkut olivat läsnä lähellä limakalvon pintaa (kuvio 3AC ja 3Bc). PCNA-solujen määrä nousi 24 tunnin kuluttua etanolin (kuvio 3AD ja 3bd), kun taas useat DCAMKL1 solut ja PCNA solut olivat läsnä limakalvon pinnalla (kuvio 3AE ja 3Be). Jakauma DCAMKL1 solujen ja PCNA solut oli morfologisia ulkonäkö käsittelemättömän fundic limakalvon kuluttua 96 h (kuvio 3AF ja 3BF). Kuva 3 immunohistokemiallinen analyysi pinnallinen limakalvon vauriota jälkeen etanolia hoidon. (A) Double-väri immuunivärjäykseen DCAMKL1 soluja ja PCNA soluja. Mahalaukun kohdat otettu 5 minuuttia (a), 1 tunti (b), 6 tuntia (c), 24 tuntia (d, e) ja 96 tuntia (f) sen jälkeen, kun etanoli hoidon. (B) H &E-leikkeitä, joka näyttää ajan kuluessa mahalaukun limakalvon vaurio ja korjaus jälkeen etanolin annon. (Af) Serial osiin muissa osioissa A. Scales: 100 pm.
Time kurssien muutosten lukumäärän DCAMKL1 ja PCNA solut on esitetty kuvassa 4. lukumäärä DCAMKL1 solujen muuttunut lähes samanaikaisesti kuin PCNA soluja, mutta rekrytointi DCAMKL1 solujen alkoi 6 tunnin kuluttua etanolin hoidon, ennen rekrytointia PCNA soluja. Kuva 4 Time kurssia numerot DCAMKL1 soluja (A) ja PCNA-solut (B) on rauhanen jälkeen etanolin annon. Kukin pylväs edustaa keskiarvoa ± SE tulosten 5 rottaa. Y-akselilla näkyy määrä kennoja rauhanen ja X-akselilla näkyy ajan kuluttua etanolin annon.
Krooninen haavauma
Deep haavaumat liittyy koko limakalvojen kerroksia ja tunkeutumaan muscularis limakalvon tuotettiin 3 vuorokauden kuluttua hoidon etikka- happo. Useimmat haavat paranivat 2 viikon kuluttua hoidon ja jotkut uusiutunut 3 viikon kuluttua. Histopatologinen analyysi limakalvon uudistumista suoritettiin käyttäen kudoksia otettu 1-3 viikkoa hoidon jälkeen. Cystically laajentuneet rauhaset oli näkyvämpi regeneratiivista limakalvon haavauma marginaali ympäri kraatteri aktiivisen haavauma (kuva 5a, b). Nämä rauhaset oli vuorattu soluja, jotka ilmentävät MUC5AC, markkeri foveolar soluja (kuvio 5c). Lisäksi TFF2, markkeri limakalvojen kaulan solujen hoitamattomien rottien, näkyy voimakas värjäytyminen juuressa regeneratiivisen fundic rauhaset (kuvio 5d), samanlainen kuin TFF2 värjäystä syvän antral rauhasen soluihin ja sopusoinnussa syntymistä SPEM solun fenotyyppi [16, 17]. Sitä vastoin ilmaus MUC6, toinen markkeri limakalvojen kaulan solujen hoitamattomien rottien, heikentynyt regeneratiivista limakalvolla ja vain heikko MUC6 värjäytyminen havaittiin solujen rauhanen pohja (kuvio 5e). Chief solut myös pienentynyt haavauma marginaali ja solujen heikosti värjättiin pepsinogeeni tehtiin näkyviksi vasta rauhanen pohja (kuvio 5f). On siis olemassa päällekkäisyys ilmentymä TFF2, MUC6 ja pepsinogeeni soluissa juuressa (kuva 5, d-f). Parietaalisoluissa olivat poissa kudoksessa marginaalinen limakalvon vuotava (kuvio 5g). PCNA-solujen määrä nousi rauhaset ja mesenchyma haavauman marginaalin ja selvästi kohonneita näissä soluissa oli huomattava, rauhanen pohja (kuvio 5h). Kuva 5 kuviot epiteelisolujen marginaalinen limakalvon aktiivisen haavauma. (A) H &E-värjättyjen jakso otettu 1 viikon kuluttua etikkahappoa hoidon, osoittaa kraatteri granulaatiokudoksen ja marginaalinen ympäröivään kudokseen kraatteri. Mittakaava: 1000 um. (B) suurennettuna haava marginaalin limakalvon esitetty (a). Mittakaava: 100 pm. (C-h) Serial osien (b) värjättiin MUC5AC (c), TFF2 (d), MUC6 (e), pepsinogeeni II (f), H + /K + -ATPaasi (g), ja PCNA (h). (I-k) Double-väri immuunivärjäykseen DCAMKL1 kanssa MUC5AC (i), DCAMKL1 kanssa TFF2 (j), ja PCNA kanssa TFF2 (k). Scales: 100 pm. (L) Double-väri immuunivärjäykseen DCAMKL1 kanssa PCNA. Mittakaava: 10 um. Insertti in (h-k) esittää suurennettuna hahmoteltu alueelle.
Sitten tutkitaan DCAMKL1 ilmaisun marginaalinen limakalvon aktiivisen haavauma. Hajallaan DCAMKL1 ilmentäviä soluja oli läsnä lähes MUC5AC solun vuoria (kuva 5 i) ja rinnastuvat SPEM soluja (kuvio 5 j). PCNA solut jaettiin myös läheisyydessä SPEM solujen ja joidenkin SPEM soluista ilmensi PCNA (kuvio 5k), mikä tarkoittaa, että SPEM perimyslinjaa kertomalla sekä proliferatiivista. DCAMKL1 solut sekoittunut PCNA solujen juuressa rauhanen, mutta ei koekspressoimaan PCNA (kuvio 5l). Tämä osoittaa, että DCAMKL1 solut pidetään lepotilassa. Kantaisä vyöhyke PCNA solujen ja DCAMKL1 solujen syrjäytetään kannaksen normaalin rauhanen alustaan ​​marginaaliin aktiivisen haavauma.
Parantavaa vaiheessa haava koko pienenee ja epiteelisolujen palautettiin (kuva 6a) . Parantavaa haavauma, kaltevuus epiteelin palautuminen oli läsnä haavan reunasta regeneroitua rauhaset etäällä haava (kuvio 6b). Vuonna regeneratiivisen limakalvon paranemista haava, limakalvojen kaltaisten solujen merkittävästi lisääntynyt. Nämä solut paikallistaa tukikohtaan haava marginaali ja laajentunut kaulaa rauhasten kuin paranemista eteni. MUC5AC-solut vähenivät kaulan ja oli läsnä pääasiassa foveolae (kuvio 6c), joka on samanlainen sijainti normaalin fundic limakalvo. Laajeneva limakalvojen kaltaisia ​​soluja parantavaa haavauma olivat osittain värjättiin MUC5AC, mutta pääasiassa värjättiin TFF2 (kuva 6d). MUC6 ilmentyi solujen rauhanen perusta, mutta ei niissä niskaan (kuva 6e), kun taas pepsinogeeni ilmennettiin soluissa niskaan (kuva 6f). Parietaalisoluissa, joka oli hävinnyt aktiivisessa haavauma, ilmestyi ylä- ja alapuolella TFF2 solupopulaation limakalvon paranemista haava (kuvio 6 g). Normaalissa limakalvon parietaalisolujen ovat peräisin kantasolujen kannaksella, kypsä siihen, ja sitten kestää useita päiviä siirtyä alas pohjaan [18], kun taas parantavaa haavauma, parietaalisoluihin uusitun kaulan ja pohjan rauhanen samanaikaisesti. PCNA ilmentyi voimakkaasti yläpuolella TFF2 soluja lähellä haava, joka osoittaa parannettu vahvistus epiteelisolujen tällä alueella (kuvio 6h). Jotkut PCNA solut jaettiin myös alle TFF2 soluja. DCAMKL1 solujen ilmestyi yläpuolella ja rinnakkain alemman puoliskon TFF2 solupopulaation (kuva 6i). Tämä kaksoisjakelun profiilin kantaisä vyöhykkeen voi edistää edistämiseen nopeasti ja tehokkaasti limakalvon uudistumista. Kuva 6 Patterns epiteelisolujen ja DCAMKL1 solujen regeneratiivisen limakalvon parantava haava. (A) H &E-värjättyjen osassa otettu 2 viikkoa sen jälkeen, kun etikkahappoa hoidon, joka esittää regeneratiivisen kudoksen paranemista haava. Mittakaava: 1000 um. (B) suurennettuna regeneratiivisen limakalvon esitetty (a). Gradientti epiteelisolujen uudistumista päässä haava reuna (oikealla puolella) Regeneroituun limakalvolle etäällä haava (vasen puoli) tunnistettiin. Mittakaava: 100 pm. (C-h) Serial osat (b), värjättiin MUC5AC (c), TFF2 (d), MUC6 (e), pepsinogeeni II (f), H + /K + -ATPaasi (g), ja PCNA (h). (I) Double-väri immuunivärjäykseen DCAMKL1 ja TFF2 sarjaleikkeessä osassa (b).
Suoliston Metaplasia ja dysplasia
säteilytetty Rotilla suoliston metaplasiaa sisältävä pikarisoluille tunnistetaan PAS-Alcian Blue värjäys muodostettu fundic rauhanen (kuva 7a). Solut, jotka ilmentävät DCAMKL1 havaittiin alla foveolar solujen luminaalisessa osastoon limakalvon, sekä syvä limakalvon (kuvio 7b, c). PCNA-solujen määrä nousi selvästi vuoden intestinalized limakalvon ja DCAMKL1 solujen luminal osastossa olivat distaalisesti PCNA soluihin (kuvio 7c). TFF2 ilmentäviä soluja, sopusoinnussa SPEM, tuli esiin pohjan intestinalized limakalvon (kuvio 7d). PCNA solujen havaittiin proksimaalisesti DCAMKL1 soluihin syvällä intestinalized epiteelipäällysteen, jossa jakautuivat samalla tavalla kuin ohutsuolen krypta (kuvio 7e, f). Kuvio 7 DCAMKL1 ilmentymistä intestinalized limakalvolla. (A) PAS-Alcian Blue värjäys osoittaa limakalvon kanssa suoliston metaplasiaa sisältävien pikari soluja. Mittakaava: 100 pm. (B-d) Sarja osia (a), värjättiin DCAMKL1 (b), DCAMKL1 ja PCNA (c), ja TFF2 (d). (E, f) Suurennettu näkymät alueiden esitetty (b) ja (c), vastaavasti. Scales: 10 pm.
Rottia altistettiin MNNG, kystinen laajentuma rauhasten kanssa dysplasia oli herätetty limakalvojen ja submukoosan (kuva 8a). SPEM kehittynyt ja laajentunut lähellä laajentuneet rauhaset ja segmentaalisen ilmentymistä TFF2 havaittiin epiteelisoluihin rauhaset (kuvio 8b). DCAMKL1 oli harvaan ilmaistu nämä rauhaset (kuvio 8c). TFF2 ja DCAMKL1 ilmennettiin eri solujen laajentuneet rauhaset (kuvio 8d, 8e), ja PCNA ilmennettiin myös muissa soluissa kuin DCAMKL1 soluihin, mikä osoittaa, proliferatiivinen luonne rauhaset (kuvio 8f). Kuva 8 DCAMKL1 ilmaisun laajentuneet rauhaset kanssa dysplasia. (A) H &E-värjätty osiossa, joka esittää kystinen laajentuma rauhaset. (B) laajentaminen SPEM. Nuolet osoittavat segmentaalisen ilmentymistä TFF2 että laajentuneet rauhaset. (C) ilmentäminen DCAMKL1 että laajentuneet rauhanen. (D-f) Serial osien laajentuneet holkkia TFF2 (d), DCAMKL1 (e) ja DCAMKL1 kanssa PCNA (f). Scales: 100 pm.
Keskustelu
Tutkimus osoitti, että DCAMKL1 ilmentävien solujen yksinomaan läsnä kannaksella rotan fundic rauhanen, jossa multi- progenitorisolujen ajatellaan oleskella [1, 3]. Olemme osoittaneet, että DCAMKL1 solut ovat irrallaan eriytetty epiteelisolujen lukien hormonaaliset solu suvusta. Lisäksi immunoelektronimikroskopiassa osoitti, että DCAMKL1 ilmennettiin epäkypsiä epiteelisolujen muutaman organelleja, jotka vastaavat rakeen-free-solujen on aiemmin ehdotettu oletettujen kantasolujen mahalaukun kannaksella [3]. DCAMKL1 on ekspressoidaan kanssa Musashi-1 in parietaalisoluissa hiiren vatsassa [13], kun taas tämä tutkimus osoitti, että DCAMKL1 solut olivat erillisiä parietaalisoluissa, jotka ilmentävät Musashi-1 rotan mahassa [5].
Juokseva muutokset solu menetys ja talteenotto maharauhanen jälkeen pinnallinen limakalvon vauriota etanolilla on koottu kuvioon 9. ajanjaksoista muutosten lukumäärän DCAMKL1 ja PCNA soluja 6-96 tunnin kuluttua etanolin hoidon rotalla ovat yhdenmukaisia ​​hiiren [13 ]. Lisäksi olemme analysoineet aiemmin muutokset näissä solutyypeissä. DCAMKL1 solut ja PCNA-solujen desquamated kanssa foveolar solujen heti etanolia hoidon. Denuded limakalvon pintaan kun etanolia altistumisen uudelleen epiteeli in 1-2 tuntia nopeasti vaeltavien foveolar soluja lähellä uninjured epiteelin [19]. Koska tämä varhainen palauttamista ei perustu solujen lisääntymistä, vaan maahanmuutosta, mobilisointi progenitorisolujen ei tarvita. Jälkeen latenssiaika on noin 8 tuntia, puhkeamisen lisääntymisaktiivisuus tapahtui vasta 24 tuntia palauttaa foveolae alkuperäiseen pituuteen [20]. Tällä kertaa aikana epiteeliproliferaation jälkeen etanoli altistus on samanlainen kuin tässä tutkimuksessa. Kuva 9 Juokseva muutoksia solujen menetys ja talteenotto maharauhanen jälkeen pinnallinen limakalvon vauriot etanolilla.
Äskettäinen raportti on osoittanut, että PCNA-positiivisten jakautuvat solut sisältävät prefoveolar soluihin [21]. Lisääntymisen lisääntyvien solujen todennäköisesti peräisin progenitorisolujen mutta prosessi kantasolujen kannan lisäämis- loukkaantumisen jälkeen on epäselvä. Tässä tutkimuksessa DCAMKL1 solut palvelukseen ennen palauttamista lisääntyvien solujen, ja määrä ja jakauma DCAMKL1 solujen muuttunut lähes samanaikaisesti kuin lisääntyvien solujen 24 tunnin kuluttua. Tämä havainto merkitsee sitä, että DCAMKL1-ilmentäviä soluja esisoluja, jotka aiheuttavat lisääntyviä soluja. Useita DCAMKL1 solut ja PCNA solut olivat läsnä limakalvon pinnalla alkupuolella regeneratiivisen aikana. Ohimenevä siirtymä kantaisä vyöhykkeen kohti pintaa voi auttaa helpottamaan nopeaa ja suosivaa palauttaminen foveolar soluja, jotka on linjaa, joka on eniten vaurioitunut ja menetetty pinnallinen limakalvon vauriot. Koska palvelukseen DCAMKL1 solujen ilmestyi yhden päivän kuluttua alkuperäiskansojen solut menetetään, uudelleensijoittamis DCAMKL1 solut loukkaantunut limakalvon voi siirtyä ei-loukkaantunut rauhaset tai rekrytoivat jälkeläistä, joka multipotentteina kantasolujen linjaa, joka käy läpi jatkuva laajentuminen tai sukupuuttoon kapealla [9, 22].
prosessit limakalvon jälleenrakennuksen ja esisolujen uusimisohjelma pitkäaikaisessa syvä haava erosivat selvästi niistä akuutissa pinnallinen vamma (kuva 10). Erilaistunut solu suvusta säilyvät akuutin pinnallinen vamma, kun taas hallittu erilaistuminen limakalvon solulinjojen aktiivisessa haavauma oli levoton ja luontainen soluesivanhemman korvattiin äskettäin kehitetty limakalvojen solulinjoja. Päälaen ja päätoimittaja solut menetetty, foveolar liikakasvu oli ilmeinen, ja SPEM syntyi regenerointiliuoksen epiteelin ympäröivä aktiivinen haavauma. Nämä havainnot matkivat patologisia muutoksia erilaisissa kokeellisissa malleissa aiheuttama akuutti tai krooninen oxyntic surkastumista [16, 17, 23, 24]. Vuonna haava marginaali, MUC6 ja pepsinogeeni näyttävät koekspressoidaan kanssa TFF2 klo rauhanen perusta. Tämä havainto tukee oletusta, että pääsoluissa transdifferentiate on SPEM [17, 25], ja että prosessi redifferentiaatiota peräisin limakalvojen kaula solujen pääsoluissa muutetaan toimivilla haavauma. Vaihtoehtoinen selitys, joka on todennäköisesti perustuu nykyisiin tuloksiin, että SPEM on peräisin progenitorisolujen ja redifferentiates sen pääsoluissa. Havainto, että SPEM liittyy lisääntynyt leviämisen tukee tätä ehdotusta [16, 24]. Kuva 10 Muutokset limakalvon solulinjojen marginaalissa aktiivisten ja parantavaa haavaumat.
Krooninen limakalvon haavaumat ruoansulatuskanavassa aloittaa paranemista päässä limakalvon tukikohdan haava reuna, ja voi aiheuttaa uusia solulinjoja, jotka vastaavat Spem [26 ]. Nämä näyttävät olevan peräisin multipotenteista kantasoluista kryptassa ohutsuolen ja paksusuolen, kun taas SPEM ja jakautuviin soluihin juuressa marginaali mahahaava on kaukana normaalista kantaisä vyöhykkeen kannaksella. Krooninen haavauma malli Tässä tutkimuksessa kehitetty useita viikkoja hoidon jälkeen, mikä tekee migraation luuytimestä peräisin kantasoluja todennäköisiä, koska siirteen näiden solujen mahalaukun epiteelisolujen esiintyy hiirillä jatkuva H. felis
infektion aikana enemmän kuin 1 vuosi , mutta ei hiirillä, joilla on mahahaava indusoidaan etikkahappoa [27]. Kun läsnä on toisen progenitoripopulaation, kryptisen kantasolujen vatsassa, on ennustettu useita vuosia [16, 24], mutta ei ole vielä tunnistettu. Tässä tutkimuksessa, oletetun progenitor DCAMKL1 solujen havaittiin läheisyydessä kaksi limakalvojen solulinjojen, foveolar solut ja SPEM soluja, on liikakasvu on haava marginaali. DCAMKL1 solut rinnastuvat SPEM ovat yhteensopivia arvoituksellinen progenitorisolujen. Suoliston esisolujen markkeri Lgr5 on läsnä juuressa rauhaset eikä kannas [7], ja että progenitorisolupopulaatioon lisääntyi selvästi tulehduksen [6]. Oletamme, että DCAMKL1-ilmentävien solujen juuressa maharauhanen ovat toisen linjan progenitoripopulaation, joka on naamioitu fysiologisissa olosuhteissa.

• Geeni-vähentävä vaikutus kromosomaalisten havaittujen vahinkojen mahasyövistä
• Serologinen arviointi mahalaukun limakalvon surkastumisen mahasyövän