Altered išraiška spėjamą kamieninių ląstelių persekiotoją DCAMKL1 žiurkės skrandžio gleivinės regeneracijai, metaplazijos ir dysplasia

pakeisti išraiška spėjamą kamieninių ląstelių persekiotoją DCAMKL1 žiurkės skrandžio gleivinės regeneracijai, metaplazijos ir displazija pervežimas tezės
Background
Doublecortin ir kalcio /kalmodulino-priklausomo baltymų kinazės-kaip-1 (DCAMKL1) yra kandidatas žymeklis kamieninių ląstelių virškinimo trakto dalies gleivinę. Lineage ląstelės skrandžio gleivinės yra kilęs iš kamieninių ląstelių, bet šis procesas gali būti pakeista po sužeidimo. Todėl mes ištirti DCAMKL1 išraiška pagal patologiniams.
Metodai
imunohistocheminis analizė buvo atlikta žiurkių skrandžio su ūmaus paviršutiniškai traumos, lėtinės opos, žarnyno metaplazijos ir displazija.
Rezultatai
DCAMKL1 buvo išreikštas tik nesubrendę inertiškos ląstelės įprastų fundic liaukų, kuriose spėjamas kamieninių ląstelių, manoma, gyvena sąsmauka. DCAMKL1 teigiami elementai ir proliferuotos ląstelės mesti į spindį po paviršutiniškas žalos ir vėl pasirodė regeneracijos proceso metu, daugiausia paviršutiniškai gleivinę. Be ribinio gleivinės aplink aktyvi opa, Parietal ir vyriausiasis ląstelių sumažėjo, foveolar hiperplazija buvo akivaizdu, ir trilapis veiksnys šeimos 2 (TFF2) /spazmolitiniu polipeptidas ekspresija metaplazija (SPEM) atsirado tuo liaukos bazę. DCAMKL1 ląstelės vėl atsirado gilios gleivinės greta su SPEM ir proliferuojančias ląsteles. Gijimo opa, The TFF2 ląstelių populiacijos išsiplėtė ir atrodė, kad redifferentiate vyriausiojo ląstelių, o proliferuotos ląstelės ir DCAMKL1 ląstelės atsirado aukščiau ir žemiau TFF2 ląstelių skatinti gijimą. SPEM perėmė PCNA ląstelės išaugo intestinalized gleivinę, ir DCAMKL1 buvo išreikštas atsižvelgiant į PCNA ląstelių arti giliai gleivinę. DCAMKL1, PCNA ir TFF2 buvo išreiškiami įvairiais displazijos ląstelės sienelės išsiplėtusias liaukos šalia SPEM.
Išvada
ULTRASTRUKTŪRINIAI išvaizdos DCAMKL1 teigiamų ląstelių ir raiškos modelius DCAMKL1 normaliomis ir patologinių būsenų rodo, kad ląstelės priklauso kamieninių ląstelių populiacija. DCAMKL1 išraiška yra glaudžiai susijęs su TFF2 /SPEM ląstelių po traumos. DCAMKL1 ląstelės repopulate arti proliferuojančias, hiperplazinių, metaplastic ir displazijos ląstelių ir kamieninių zona pamainomis pagal patologinių aplinkybių.
Faktai
pele ir žmogaus skrandžio vieneto rodo monokloninių konversiją, nurodant multipotent kamieninių ląstelių buvimą [ ,,,0],1, 2]. Elektronų mikroskopiniai autoradiografavimas pelių jau reiškė, kad granulių be ląsteles kyšulys veikia kaip multipotent kamieninių ląstelių [3]. Diferencijavimas ir migracijos procesai ląstelių linijų gali būti pakeista traumos. Kamieninių ląstelių zona sąsmauka yra lengvai pažeisti intraluminal etanolio, nesteroidiniais vaistais nuo uždegimo ar Helicobacter pylori pervežimas (H. pylori
). Lėtinis uždegimas, skrandžio, gali sukelti atrofija ir specializuotų ląstelių praradimo kaip materialaus poveikio audinių specifinių kamieninių ląstelių sužalojimo ar praradimo. Tačiau, kamienines ląsteles po ūmaus arba lėtinio gleivinės pažeidimas ir atkūrimo šių ląstelių per gleivinės atkūrimo mechanizmo elgesį dar nėra gerai suprantamos.
Kamieninių ląstelių populiaciją, yra svarbus priežiūros ir regeneruoti skrandžio epitelio, bet ilgai gyveno kamieninių ląstelių gresia kaupti mutacijas, kad sukelti vėžį [4]. Neoplazija galite sekti mobiliojo Metaplasia dėl lėtinio uždegimo ir remontas. Tačiau nebuvo atlikta tiksli analizė vaidmenį ir keičiant kamieninių ląstelių gastritas-Metaplasia-displazija-vėžio seka, daugiausia dėl to, kad atskirų kamieninių ląstelių žymenų trūkumo skrandžio.
Musashi-1, A žymuo kamieninių ląstelių pelės plonosiose žarnose, nėra išreikštas tariamų kamieninių ląstelių, bet randamas parietalinėse ląstelėse veikia žiurkių fundic sąsmauka [5]. Villin-1 rengėjas /stipriklis fragmentas yra galimas skrandžio kamieninių ląstelių žymeklį į prievarčio liaukų sąsmauka [6]. Lineage tyrimas parodė, kad žarnyno kamieninių ląstelių žymeklis Lgr5 išreiškiamas tuo potencialių fundic ir prievarčio liaukos naujagimių skrandžio bazę, tuo tarpu raiška suaugusiųjų buvo daugiausia tik į prievarčio liaukų bazę [7]. Taigi, nėra neabejotinas žymekliai protėvių suaugusių fundic liaukų.
DCAMKL1 yra vienas iš genų ontogeny-praturtintas nuorašai produktų rasti lyginant su pelės skrandžio ir plonojo žarnyno kamieninių rinkinių [8]. Imunohistocheminis analizė naudojant DCAMKL1 antikūno atskleidė vieną ląstelių dažymosi žarnyne kriptoje skyriuose arba netoli 4 pozicijoje ir skrandžio sąsmauka ląstelių [8]. Po pirmosios ataskaitos, konkrečios lokalizacijos DCAMKL1 ekspresija ląstelių kamieninių ląstelių nišą buvo parodyta plonojoje žarnoje pelių [9, 10] ir pelių ir žmonių [11, 12], o DCAMKL1 buvo persipynusių su Musashi dvitaškis -1 pakauškaulio ląstelių pelėms [13] skrandį.
pirmąjį šio tyrimo tikslas buvo nustatyti, ar DCAMKL1 yra už kamieninių ląstelių žiurkių skrandžio žymeklis. Antrasis tikslas buvo išsiaiškinti, laiko bei erdvės modelius išvaizdos ląstelių specialiai išreiškė DCAMKL1 pagal kelis skrandžio patologiją.
Metodai
Gyvūnų paruošimas
Visi Gyvūnų protokolai buvo patvirtintas Keio universiteto Gyvulininkystės mokslinių tyrimų komitetas. Wistar žiurkių patinėlių sveria apie 200 g nemaitinami, už 24 valandų su laisvos prieigos prie vandens. Norėdami pateikti ūmaus paviršutinišką sužalojimus fundic gleivinę, absoliutusis etanolis (1 ml) Užsakyta į skrandžio zondą skrandį. Gaminti lėtinių giliai opos, 20% acto rūgšties (50 pl) buvo švirkščiamas į fundic submucosa priešakinio sienos mikrošvirkštu. Žiurkėms buvo numarinti 3 dienas ir 1, 2 ir 3 savaites po to, acto rūgšties injekcijos.
, Skirto sukelti žarnyno metaplazijos žiurkių skrandžio gleivinės buvo aprašyta kitoje [14, 15] metodą. Trumpai tariant, žiurkės gavo du rentgeno dozes 10 Gy kiekvieną ir buvo numarinti praėjus 6 mėnesiams po švitinimo. Už skatinančius displazija žiurkių skrandžio gleivinės metodas taip pat buvo aprašyta kitoje [14]. Trumpai, N-metil-N'-nitro-N-nitrozoguanidinu (MNNG) (Aldrich Chemical Co, Milwaukee, WI) 50 mikrogramų /ml buvo suteiktas žiurkėms iki soties
4 mėnesius.
Antikūnai
Triušis prieš DCAMKL1 imunoglobulino (Ig) G (Abcam, Kembridžas, Jungtinė Karalystė; galutinis praskiedimas 1: 100), pelės anti-plinta ląstelių branduolių antigeną (PCNA) IgG (DaKo, CARPINTERIA, CA; paruoštas naudoti), triušių anti -PCNA IgG (Abcam; 1: 200), pelės anti-Š + /K + - adenozino triphosphatase (ATPazės) alfa dalinys IgG (tyrimų diagnostika Inc Flandrija NJ; 1: 200), avių kovos -pepsinogen II IgG (JAV Biologinis, Swampscott, MA; 1: 100), pelės anti-MUC6 IgM (Kanto Kagaku, Tokijas; 1: 100), pelės anti-MUC5AC IgG (Abcam; 1: 100), pelė kovos TFF2 IgM (Abcam; 1: 200), jūrų kiaulyčių anti-histidinas dekarboksilazės (HDC) IgG (ARP Belmont, MA; 1: 100), rytiniai kovos su ghrelin IgG (Santa Krusas biotechnologijos, Santa Cruz, CA; 1: 100 ) ir pelės anti-somatostatino IgG (Biomeda Foster City ĮA; 01:25) buvo naudojami kaip pirminių antikūnų
histologinis tyrimas
skrandžio audinių buvo nustatyta 10% neutralus buferinis formalino naktį, ir tada. įdėta į parafiną ir suskirstyta (4 mkm). Skyriai buvo tamsintas hematoksilinu ir eozinu (H & E) naudojant standartinius metodus. Periodinė rūgšties Schiff (PAS) -Alcian Mėlyna dažymo buvo atliktas siekiant nustatyti gleivinės ląstelių-os.
Imunohistochemiškai analizės, parafino-embedded skyriai buvo deparaffinized ir išvalytos su atitinkamu pakartotinio procedūrą kiekvienam antigenui. Dalys buvo inkubuotos į 0,3% H 2O 2 metanolyje 10 minučių, kad inaktyvuotumėte endogeninio peroksidaze ir perplaunami fosfato-buferio druskų tirpalo (PBS), kuriame 0,1% Tween 20 (PBST). Po inkubacijos su blokuojančiu tirpalu (blokas AKF, Dainippon Seiyaku, Tokijas, Japonija) 10 minučių, sekcijos buvo inkubuojamos su pirminiais antikūnais 1 valandą kambario temperatūroje. Po to, kiekvienas žingsnis buvo išplaunant 3 kartus su PBST 3 minutes. Skyriai buvo inkubuojamos su HP-konjuguota IgG arba IgM 40 minučių. Tokius ląstelės buvo spalvos ruda su 3,3'-diaminobenzidinas hidrochlorido (TBP), naudojant TBP reagento rinkinį (DaKo), ir tada counterstained su Mayer hematoksilinu.
Dėl dvigubos spalvų imunodažymu, netiesioginis immunoalkaline fosfatazės metodas buvo naudojamas po aprašyta pirmiau netiesioginis imunoperoksidaziniu procedūra. Po to, kai reakcijos su DAB, sekcijos buvo inkubuojamos su antruoju pirminiais antikūnais už 1 valandą, o po to inkubacijos su ALP-konjuguoto IgG arba IgM 40 minučių. Tokius ląstelės buvo tamsintas mėlyna su ALP substrato komplektas III (Vektorius Mėlyna, Vektorius Laboratorijos, Burlingame, Kalifornija).
Antigenų paėmimo iš pepsinogen II MUC6, proteinazės K (DAKO) buvo taikoma lokaliai į deparaffinized skyriuose, 6 minučių. Antigeno paėmimo iš PCNA (pelės IgG), sekcijos buvo kaitinamas distiliuotu vandeniu autoklave už 10 minučių. Antigeno paėmimo iš MUC5AC, sekcijos buvo kaitinamas citrato buferio autoklave už 10 minučių. Nėra antigenas paieška procedūra buvo naudojama DCAMKL1, H + /K + -. ATPazės, PCNA (triušis IgG), TFF2, hdc, ghrelin arba somatostatino dažymo
Balai iš DCAMKL1 elementų ir PCNA Cells
Sekcijos, kuriam buvo atliktas dvigubai spalvų imunodažymu naudojant DCAMKL1 ir PCNA buvo analizuojami, siekiant nustatyti immunostained ląstelių skaičių. Skyriai buvo naudojami nuo 5 žiurkių ir 10 gerai orientuotos skrandžio vienetai buvo analizuojami kiekviename skyriuje.
Elektroniniu mikroskopu
Pasirengimo įdėjimas imunoperoksidaziniu elektronų mikroskopija buvo atliekama taip. Maži šviežių pavyzdžių iš skrandžio korpuso neapdorotas žiurkių buvo fiksuoti 4% paraformaldehido už 24 valandas, po to fiksavimas 0,1% glutaraldehido ir 4% paraformaldehido už 1 valandą. Kriostatas sekcijos (6 mkm) buvo paruošti ir inkubuojami su anti-DCAMKL1 antikūno 48 valandas, po to inkubacijos su HP-konjuguoto anti-triušio IgG 24 valandas. Tuomet skyriai buvo fiksuotas 0,5% gliutaraldehidu 5 minutes, reaguoja su DAB, po nustatyto 2% Osmio Tetraoksidas, dehidratuoti per rūšiavo etanolio serijos ir įdėta į epoksidine derva. Plono skyriai buvo sumažinti su ultramicrotome ir tamsintas į uranilo acetato tirpalo ir švino citrato tirpale. Egzemplioriai buvo tiriama naudojant perdavimo elektroniniu mikroskopu (JEM-1200EX, JEOL, Tokijas, Japonija).
Rezultatai
Normalus Fundic liaukos
DCAMKL1-išreiškiantys ląstelės buvo platinamas viršutinio trečdalio įprastų fundic liaukų, į regionas vadinamos sąsmauka (1a pav.) Be elektroniniu mikroskopu, DCAMKL1 ląstelės taip pat buvo rasta sąsmauka (1b paveikslas, a). DCAMKL1 ląstelių buvo mažesnis nei parietalinėse ląstelėse, kuris buvo daug mitochondrijų, ir trūko sekrecijos granules vertinami endokrininės ląstelės (1b pav, b). DCAMKL1 reaktyvumas buvo nustatyta, difuziškai citoplazmoje, suteikiant aukštą nucleocytoplasmic santykis (1b paveiksle, c). DCAMKL1 ląstelės buvo pateikti epitelio ląstelių pamušalą, nes ląstelės turėjo desmosomes mazge su gretimų epitelinių ląstelių (1b paveikslas, d). Į DCAMKL1 ląstelės buvo nesubrendęs išvaizdą su keletą mitochondrijas, pūslelių ar sekrecijos granulių (1b paveikslas, c ir 1B, D). 1 pav platinimas ir ultrastruktūra iš DCAMKL1 ekspresija ląstelių normaliam žiurkių skrandžiui. (A) šviesos mikrografija, rodo vietą DCAMKL1 ląstelių fundic gleivinę. Mastelis: 100 mkm. Įdėtino rodo padidintą vaizdą, išdėstytos srityje A skalę: 10 mkm. (B) Pavarų elektronų mikrografijos. (A, c) plono atkarpose be counterstaining. (B, d) plono skyriai su counterstaining. (A) DCAMKL1 ląstelės fundic liaukos. Mastelis: 2 mkm, didinimas × 5600. (B) DCAMKL1 ląstelių (D) buvo mažesnis nei parietalinėse ląstelėse (P), kuris buvo daug mitochondrijų, ir trūko sekrecijos granules vertinami endokrininės ląstelės (E). Mastelis: 2 mkm, didinimas × 7000. (C) DCAMKL1 dažymo daugiausia buvo citoplazmos. Mastelis: 1 mkm, didinimas × 14400. (D) rodykles rodo desmosomes. Balta rodyklė rodo DCAMKL1 reaktyvumas. Mastelis:. 2 mkm, didinimas × 8400
Mes šalia palygino DCAMKL1 ląstelių pasiskirstymą su tais žinomų epitelinių ląstelių linijų. DCAMKL1 ląstelės buvo susimaišė su plinta ląsteles paženklinti iki PCNA į kyšulys (2a paveikslėlis), tačiau nėra DCAMKL1 ląstelių, kurių PCNA. DCAMKL1 ląstelės gyvenę toliau foveolar ląstelių (tamsintas su Alcian Blue, 2b pav) ir virš gleivinės kaklo ląstelių (tamsintas su MUC6 ir TFF2, 2c pav, D). Pakauškaulio ląstelės ir aukštieji ląstelės sąsmauka buvo greta DCAMKL1 ląsteles, bet DCAMKL1 ląstelės nebuvo coexpress H + /K + -ATPazė arba pepsinogen (2e pav f). DCAMKL1 ląstelės taip pat buvo diskretus nuo endokrininių ląstelių linijų. DCAMKL1 ląstelių populiacija buvo nutolęs nuo enterochromaffin-kaip ląstelių, kurios iš esmės buvo išdalintas fundic bazę (2G pav.) Nuo A-kaip ląstelių dauguma gyveno fundic bazę su kai platinamas sąsmauka, bet skiriasi nuo DCAMKL1 ląstelių (2h paveikslas), o D ląstelių aiškiai skyrėsi nuo DCAMKL1 ląstelių (2i pav). 2 pav Dukart spalva imunodažymu rodo lokalizacija DCAMKL1 ekspresija ląstelių ir epitelinių ląstelių linijų sudarančių plinta ląsteles PCNA žymėto branduolių (A), Alcian Mėlyna tamsintas foveolar ląstelės (B), MUC6 tamsintas gleivinių kaklo ląstelės (C), TFF2 -stained gleivinių kaklo ląstelės (d), H + /K + -ATPazės-nudažomi parietalinės ląstelės (e), pepsinogen II-nudažomi aukštieji ląstelės (f), HDC-nudažomi enterochromaffin-kaip ląstelės (g), ghrelin-nudažomi A- kaip ląstelių (h), ir somatostatino-nudažomi D (i) ląstelės. Svarstyklės: 100 mkm. Į (e) intarpas rodo padidintą vaizdą, išdėstytos srityje. Atkreipkite dėmesį, kad DCAMKL1 ląstelės buvo atskirtas nuo pakauškaulio ląstelių
Ūmus paviršinių gleivinės pažaidų ir greitas atnaujinimas
histologinis analizę gleivinės traumos ir remonto po etanolio administracijos naudojant H &procese;. El Dažymo ir dukart spalvų DCAMKL1 ir PCNA imunodažymu parodyta 3 paveiksle Iškart po etanolio gydymas, DCAMKL1 ląstelės ir PCNA ląstelės atsiskiria nuo liaukos ir numeta į spindį su foveolar ląstelių (3AA ir 3BA pav). DCAMKL1 ląstelės ir PCNA ląstelės buvo beveik dingo pažeisto gleivinė 1 valandą po etanolio gydymo (3AB ir 3bb pav.) DCAMKL1 ląstelės tada atgimsta po 6 valandų, o kai dalyvavo netoli gleivinės paviršiaus (3AC ir 3Bc pav.) PCNA ląstelės išaugo bent 24 valandas po etanolio (3AD ir 3BD pav), o keletas DCAMKL1 ląstelės ir PCNA ląstelės buvo dalyvauti gleivinės paviršiaus (3AE ir 3BE pav.) Iš DCAMKL1 ląstelių ir PCNA ląstelių pasiskirstymas turėjo morfologiškai išvaizdą neapdorotas fundic gleivinės po 96 h (3Af ir 3Bf pav). 3 pav Imunohistocheminis analizė paviršutiniškai gleivinės traumos po etanolio gydymą. (A), dukart spalva imunodažymu už DCAMKL1 ląstelių ir PCNA ląsteles. Skrandžio skyriai padarytas 5 minutes (a), 1 valandą (B), 6 valandos (C), 24 valandos (D, E) ir 96 valandų (f) po etanolio gydymui. (B), H & E-tamsintas sekcijos, rodantys laikui bėgant skrandžio gleivinės pažeidimų ir remonto po etanolio administracija. (AF) Serial skyriai atitinkamuose skyriuose A Svarstyklės. 100 mkm
Laiko kursai pokyčių į DCAMKL1 ir PCNA ląstelių skaičiaus sumažėjimas yra parodyta 4 paveiksle DCAMKL1 ląstelių skaičius pasikeitė beveik kartu su ta PCNA ląstelės, bet įdarbinimas DCAMKL1 ląstelių prasidėjo 6 valandas po etanolio gydymo, prieš įdarbinant PCNA ląsteles. 4 pav Laiko kursai nuo DCAMKL1 ląstelių (A) ir PCNA ląstelių (B) numerius liauka po etanolio administracija. Kiekviena juosta reiškia vidurkis ± SE rezultatų iš 5 žiurkių. Y ašis rodo ląstelių viename liaukos ir X ašies skaičių rodo laiką po etanolio administracija.
Lėtinis opa
Deep opos dalyvauja ištisas gleivinės sluoksnius ir patekti į muscularis gleivinę buvo gaminamas 3 dienas po gydymo acto rūgštis. Dauguma opas išgydyti po 2 gydymo savaičių, o kai atsinaujino po 3 savaičių. Histopatologinė analizė gleivinės regeneracijai buvo atliekama naudojant audinius, kurių buvo imtasi nuo 1 iki 3 savaičių po gydymo. Cystically išsiplėtę liaukos buvo ryškus regeneracinės gleivinės opos marža aplink opą kraterio (5a pav b). Šios liaukos buvo išklotos ląstelių išreiškė MUC5AC, iš foveolar ląstelių (5c pav) žymeklį. Be to, TFF2, iš gleivinių kaklo ląstelių neapdorotų žiurkių žymeklis, rodomas intensyvi dėmių ties regeneracinių fundic liaukų (5d paveikslas), panašus į, kad TFF2 dažymo gilių antralinių liaukų ląstelių ir atitinka tam SPEM ląstelių atsiradimo pagrindo fenotipas [16, 17]. Priešingai, išraiška MUC6, kita gleivinių kaklo ląstelių neapdorotų žiurkių, pablogėjo regeneracinės gleivinės žymeklį ir tik silpnas MUC6 dažymo buvo stebimas ląstelių tuo liaukos pagrindo (5e pav). Aukštieji ląstelės taip pat sumažėjo per opa marža ir ląstelių silpnai tamsintas su pepsinogen buvo ryškinamos tik liaukos pagrindo (5f pav). Tokiu būdu, buvo iš dalies sutampa išraiška TFF2, MUC6 ir pepsinogen ląstelėse ties pagrindu (5 pav, D-F). Parietalinės ląstelės buvo nėra kalbant apie ribinio gleivinę, pagal veikliosios opa (5g pav) audinio. PCNA ląstelės išaugo liaukų ir mezenchima iš opa marža ir labai padidėjo šių ląstelių pasižymėjo tuo liaukos bazę (5H pav). 5 paveikslas modelių epitelinių ląstelių ribinio gleivinę opą. (A) "H & E-tamsintas skyriuje priimami 1 savaitę po acto rūgštimi, kuriame rodomas granuliavimo audinių ir ribinio audinio aplink kraterį kraterį. Mastelis: 1000 mkm. (B) padidintas vaizdas opa maržos gleivinės nurodyta (A). Mastelis: 100 mkm. (C-h) eilės profiliai iš (b) nudažomi su MUC5AC (c), TFF2 (D), MUC6 (e), pepsinogen II (f), H + /K + -ATPazės (g), ir PCNA (h). (I-K) Dukart spalva imunodažymu už DCAMKL1 su MUC5AC (I) formulėje, DCAMKL1 su TFF2 (j), ir PCNA su TFF2 (k). Svarstyklės: 100 mkm. (L) Dukart spalva imunodažymu už DCAMKL1 su PCNA. Mastelis: 10 mkm. Į (H-K) intarpas rodo padidintą vaizdą, išdėstytos srityje.
Mes tada ištirti DCAMKL1 išraišką ribinio gleivinės veikliosios opa. Disperguoti DCAMKL1-išreiškiantys ląstelės dalyvavo arti MUC5AC ląstelių pamušalą (5I paveikslas), o greta su SPEM ląstelių (5j pav.) PCNA ląstelės taip pat buvo išplatinta SPEM ląstelių ir kai SPEM ląstelių persipynusių PCNA (5k paveikslas) kaimynystėje, o tai reiškia, kad SPEM Lineage yra dauginant ir proliferacijos. DCAMKL1 ląstelės buvo susimaišė su PCNA ląstelių Pasibaigus liaukos bazę, bet ne coexpress PCNA (5l pav.) Tai rodo, kad DCAMKL1 ląstelės bus išlaikyti į inertiškos būklę. Patogeninis zona PCNA ląstelių ir DCAMKL1 ląstelių buvo perkelta iš įprastinio liaukos į veikliosios opa marža bazę sąsmauka.
Gijimo stadijoje opa dydis sumažinti ir epitelio ląstelės buvo atkurta (6a pav) , Gijimo opa, iš epitelio regeneracijai gradientas buvo pateikti iš opa krašto regeneruotos liaukų toli nuo opos (6b pav.) Į regeneracinės gleivinės gijimo opa, gleivinių-kaip ląstelės žymiai padidėjo. Šios ląstelės buvo lokalizuota į opa skirtumo bazės ir išplėsta į liaukų kakleliais kaip gijimas pradėjo. MUC5AC ląstelių sumažėjo kaklo ir dalyvavo daugiausia foveolae (6c paveikslas), panaši į įprastą fundic gleivinės vietoje. Besiplečiančioje gleivinės panašios ląstelės gijimo opa buvo iš dalies susitepę MUC5AC, bet daugiausia tamsintas su TFF2 (6d pav). MUC6 buvo išreikštas ląstelių tuo liaukos bazę, bet ne tiems, kaklo (6e pav), o pepsinogen buvo išreikštas ląstelių kaklo (6f pav). Parietalinės ląstelių, kurios buvo išnykusios veikliosios opa, vėl pasirodė virš ir žemiau TFF2 ląstelių populiacijoje gijimo opos (6g pav) gleivinę. Normalioje gleivinę, parietalinės ląstelės gaunamos iš kamieninių ląstelių sąsmauka, brandus jame, o tada imtis keletą dienų migruoti žemyn prie pagrindo [18], o gijimo opa, parietalinės ląstelės atkurtos kaklo ir bazės liauka tuo pačiu metu. PCNA buvo išreikštas stipriai virš TFF2 ląstelių šalia opa, nurodant sustiprintą stiprinimas iš epitelio ląstelių šiame regione (6H paveikslą). Kai PCNA ląstelės taip pat buvo platinami žemiau TFF2 ląsteles. DCAMKL1 ląstelės aukščiau atgimsta ir greta su apatinėje TFF2 ląstelių populiacijos (6I pav.) Šis dvigubas paskirstymo profilis kamieninių zonoje gali prisidėti prie skatinimo greitai ir efektyviai gleivinės regeneraciją. 6 pav modelių epitelio ląstelių ir DCAMKL1 ląstelių regeneracijos gleivinę gijimo opa. (A) H & E-nudažomi skyrių padarytas 2 savaites po to, kai acto rūgštimi, rodo organizmo regeneraciją audinių gijimo opa. Mastelis: 1000 mkm. (B) padidintas vaizdas regeneracinės gleivinės aprašytą (A). buvo nustatyta keletas epitelio regeneracijai iš opa kraštas (dešinėje pusėje) iki regeneruotos gleivinės toli nuo opos (kairėje pusėje) gradientas. Mastelis: 100 mkm. (C-h) eilės profiliai iš (b), nudažomi su MUC5AC (c), TFF2 (d), MUC6 (e), pepsinogen II (f), H + /K + -ATPazės (g), ir PCNA (h). (I) Dukart spalva imunodažymu už DCAMKL1 ir TFF2 serijiniu skyriuje (B).
Žarnų Metaplasia ir displazija
apšvitinto žiurkių žarnyno metaplazija, kuriuose taurė ląsteles nustatytus Pa Alcian Blue dažymo suformuotas fundic liauka (7a pav.) Ląstelės, ekspresuojančios DCAMKL1 buvo rasti žemiau foveolar ląstelių luminal dėtuve gleivinės, taip pat ir giliai gleivinės (7b pav, c). PCNA ląstelės žymiai padidėjo intestinalized gleivinės ir DCAMKL1 ląstelių luminal skyriuje buvo distalinės į PCNA ląstelių (7c pav). TFF2 ekspresija ląstelės, atitinkantys SPEM, atsirado ne iš intestinalized gleivinės (7d pav) bazę. PCNA ląstelės buvo rasta proksimalinis DCAMKL1 ląstelių giliai į intestinalized epitelio gleivine, su panašiu pasiskirstymo modelio to mažame žarnyno kriptoje (7e pav f). 7 pav DCAMKL1 išraiška intestinalized gleivinę. (A) Pa Alcian Mėlyna dažymo rodo gleivinę su žarnyno metaplazijos, kuriuose taurė ląsteles. Mastelis: 100 mkm. (B-d) eilės profiliai iš (a), nudažomi su DCAMKL1 (b), DCAMKL1 ir PCNA (C), ir TFF2 (d). (E, F) padidintos vaizdas į srityse, nurodytose (b) ir (c), atitinkamai. Svarstyklės:. 10 mkm
Žiurkių, vartojusių MNNG, cistinė išsiplėtimas liaukos su displazija buvo sukeltas į gleivinės ir submucosa (8a pav.) SPEM išsivystė ir išplėtė šalia išsiplėtusių liaukų ir segmentinės išraiška TFF2 buvo rastas ląstelių pamušalas liaukos (8b pav). DCAMKL1 buvo retai išreiškiama šių liaukų (8c pav.) TFF2 ir DCAMKL1 buvo išreikšta įvairių ląstelių į išsiplėtusių liaukų (8d pav, 8e) ir PCNA taip pat buvo išreikštas išskyrus DCAMKL1 ląstelių ląstelių, nurodant dauginimosi pobūdį liaukų (8f pav). 8 pav DCAMKL1 išraiška išsiplėtusių liaukų su displazija. (A) "H & E-tamsintas skyrių, kuriame cistine išsiplėtimas liaukų. (B) plėtra SPEM. Rodyklės rodo segmentus išraišką TFF2 į išsiplėtusių liaukų. (C) išraiška DCAMKL1 išsiplėtusiuose liaukos. (D-f) Serial skyriai išsiplėtę liaukos už TFF2 (D), DCAMKL1 (E) ir DCAMKL1 su PCNA (F). Svarstyklės:. 100 mkm
Diskusijos
Tyrimas parodė, kad DCAMKL1-išreiškiantys ląstelės yra išskirtinai dalyvauja žiurkės fundic liaukos sąsmauka, kurioje multipotent kamieninių ląstelių yra manoma, kad gyventi [1, 3]. Mes parodė, kad DCAMKL1 ląstelės yra diskretus iš diferencijuotų epitelio ląstelių, įskaitant endokrininę ląstelių linijų. Be to, imunoelektronine mikroskopija parodė, kad DCAMKL1 buvo išreikštas nesubrendusių epitelio ląstelių su keliomis organoidus, kurie atitinka granulių be ląstelių anksčiau siūloma įtariamų kamieninių ląstelių skrandžio sąsmauka [3]. DCAMKL1 yra persipynusių su Musashi-1 pakauškaulio ląstelių pelės skrandžio [13], kadangi šis tyrimas parodė, kad DCAMKL1 ląstelės buvo atskirtas nuo pakauškaulio ląstelių, kurie išreiškia Musashi-1 žiurkių skrandžio [5].
Sequential pokyčius korinio praradimas ir atkūrimas skrandžio liaukos po paviršutiniškai gleivinės traumos etanoliu yra sutraukta 9 pav laiko kursai pokyčių į DCAMKL1 ir PCNA ląstelių skaičių nuo 6 iki 96 valandos po etanolio gydymo žiurkių sutampa su pelių [13 ]. Be to, mes analizuojami ankstesnius pakeitimus šiose ląstelių tipų. DCAMKL1 ląstelės ir PCNA ląstelės desquamated su foveolar ląstelių karto po etanolio gydymui. Nebeliko gleivinės paviršius po etanolio poveikio iš naujo epithelialized 1 iki 2 valandų sparčiai migruoja foveolar ląsteles nuo netoliese nesužesitą epitelio [19]. Kadangi tai anksti restitucija nėra pagrįstas ląstelių proliferacijos, bet dėl ​​migracijos, mobilizacija kamieninių ląstelių nereikia. Po latentinio periodo maždaug 8 valandų, iš proliferacinės veiklos trūkimo įvyko iki 24 valandų atkurti foveolae į jų pradinį ilgį [20]. Šį kartą kursas epitelio proliferacija po etanolio poveikio yra panašus į tą, kuris šiame tyrime. 9 paveikslas Nuosekliųjų pokyčiai ląstelių praradimo ir išieškojimo skrandžio liaukos po paviršutiniškai gleivinės traumos etanoliu.
Naujausioje ataskaitoje parodė, kad PCNA teigiami proliferuotos ląstelės yra prefoveolar ląsteles [21]. Padaugėjo plinta ląsteles tikriausiai kilęs iš kamieninių ląstelių, tačiau kamieninių ląstelių populiacija atsinaujina procesas po traumos yra neaiški. Šiame tyrime DCAMKL1 ląstelės buvo įdarbinti prieš restauravimo proliferuojančias ląstelių skaičių ir pasiskirstymą DCAMKL1 ląstelių pasikeitė beveik kartu su tų proliferuojančias ląstelių po 24 valandų. Ši išvada reiškia, kad DCAMKL1-išreiškiantys ląstelės kamieninių ląstelių, kad sukelti į proliferuojančias ląsteles. Keli DCAMKL1 ląstelės ir PCNA ląstelės per anksti regeneracinės laikotarpiu dalyvavo gleivinės paviršiaus. Praeinantis poslinkis kamieninių zonoje į paviršių gali padėti palengvinti greitą ir lengvatinio atkūrimą foveolar ląstelių, kurios yra Lineage kad labiausiai sugadinta ir prarasta paviršutiniškai gleivinės traumos. Kadangi įdarbinti DCAMKL1 ląstelės vėl pasirodė per dieną po vietinių ląstelės buvo prarandama, pakartotinos populiacijos DCAMKL1 ląstelės nukentėjusiajai gleivinės gali migruoti iš ne sužeisti liaukų arba įdarbinti iš palikuonių tam multipotent kamieninių ląstelių linijos, kad atliekami sveikatos nuolatinės arba išnykimas į nišą [9, 22].
gleivinės atstatymui ir kamieninių ląstelių populiacija atsinaujina procesus lėtinio giliai opa aiškiai skyrėsi nuo ūminio paviršutiniškai traumos (10 paveikslas). Diferencijuoti ląstelių linijas, yra palaikoma po ūminio paviršutiniškai traumos, o tvarkingai diferenciacija gleivinės ląstelių linijų aktyvios opos buvo pasipiktinimas ir būdingos ląstelių linijas pakeitė naujai sukurtų gleivinės ląstelių linijų. Išorinis ir aukštieji ląstelės buvo prarasta, foveolar hiperplazija buvo akivaizdu, ir SPEM atsirado regeneravimo epitelio aplink opą. Šios išvados imituoti patologinių pokyčių, įvairių, kurias sukelia ūmaus arba lėtinio oxyntic atrofija [16, 17, 23, 24] eksperimentinių modelių. Į opa marža, MUC6 ir pepsinogen atrodo, persipynusių su TFF2 prie liaukos bazę. Ši išvada patvirtina hipotezę, kad aukštieji ląstelės transdifferentiate į SPEM [17, 25], ir kad redifferentiation iš gleivinių kaklo ląstelių vyriausiojo ląstelių procesas yra modifikuotas opą. Alternatyva paaiškinimas, kuris yra labiau tikėtina, remiantis dabartinių rezultatų, yra tai, kad SPEM yra kilęs iš kamieninių ląstelių ir redifferentiates į aukštuosius ląstelių. Išvada, kad SPEM yra susijęs su padidėjusia platinimo remia šį pasiūlymą [16, 24]. 10 pav Pasikeitimai gleivinės ląstelių linijų aktyvaus ir gyjančioms opoms marža.
Lėtinis gleivinės opų virškinamajame trakte pradeda gijimo procesą nuo gleivinės bazės Opa krašto, ir gali sukelti naujų ląstelių-os atitinkančius SPEM [26 ]. Tai, atrodo, kilęs iš multipotent kamieninių ląstelių plonosios žarnos ir storosios žarnos kriptoje, o SPEM ir plinta ląsteles nuo skrandžio opos marža bazė yra nutolęs nuo įprasto kamieninių zonoje sąsmauka. Lėtinė opa modelis šiame tyrime sukūrė keletą savaičių po gydymo, todėl migracijos kaulų čiulpų kilmės kamieninėmis ląstelėmis vargu, nes prigijimas šių ląstelių kaip skrandžio epitelinių ląstelių įvyksta pelėms po patirtų H. felis
infekcija daugiau nei 1 metus , bet ne pelėms su skrandžio opa, sukeltos acto rūgšties [27]. Kai dėl antro kamieninių ląstelių populiacijos buvimas, Cryptic kamieninių ląstelių skrandžio, buvo prognozuojamas daugelį metų [16, 24], tačiau iki šiol būtų galima identifikuoti. Šiame tyrime, spėjamas kamieninių DCAMKL1 ląstelės buvo rasti dviejų gleivinės ląstelių linijų, foveolar ląstelių ir SPEM ląstelių kaimynystėje, į hiperplazija tuo opa skirtumu. DCAMKL1 ląstelės greta su SPEM yra suderinama su paslaptingais kamieninių ląstelių. Žarnyno kamieninių ląstelių gaudantis Lgr5 yra dalyvauti liaukų bazės, o ne sąsmauka [7], ir, kad kamieninių ląstelių populiacija uždegimas metu ženkliai išaugo [6]. Mes hipotezę, kad DCAMKL1 ekspresuojančių ląstelių priėmimas skrandžio liaukos bazės yra antra-linija kamieninių populiacija, kuri yra užmaskuotas esant fiziologinėms sąlygoms.

• Genas mažinimo poveikis chromosomų nuostolių aptiktų skrandžio vėžio
• Serologinis vertinimas skrandžio gleivinės atrofijos skrandžio vėžio