Ploche ONE: probiotické zmesi VSLUrýchľuje hojenie žalúdočného vredu tým, že stimuluje vaskulárny endoteliálny rastový faktor

abstraktné

Štúdie zisťovali účinok a mechanizmus probiotík na chorôb horných gastrointestinálneho traktu (GI), vrátane žalúdočných vredov sú obmedzené aj napriek rozsiahle práce a sľubné výsledky tohto liečebného opcie na ďalších chorôb GI. V tejto štúdii sme skúmali mechanizmy, ktorými probiotiká zmes VSL(zmes ôsmich probiotických baktérií vrátane Lactobacilli
bifidobaktérie stroje a Streptococcus
druhov) lieči kyselina octová vyvolané žalúdočný vred u potkanov. VSLbol podaný orálne pri nízkych (6 x 10 ^{9 baktérie) alebo vysoká (1,2 x 10 10 baktérie) dávkovanie od 3. dňa po indukcii vredov počas 14 po sebe idúcich dní. VSLliečby významne zvýšená žalúdočného vredu rán spôsobom závislým od dávky. Posúdiť mechanizmus (y), pričom VSLvyvíjaný svoje ochranné účinky, ktoré sme kvantifikovať génovej expresie niekoľkých pre-zápalové cytokíny, bielkovín a expresie žalúdka mucínu-Muc5ac, regulačné cytokíny IL-10, COX-2 a rôzne rastové faktory. Všetkých zložiek skúmaných iba expresie a produkcie proteínu VEGF sa zvýšila 332-násobne v deň 7 v ulcerácie tkanív zvierat liečených VSL. Ako sa dalo očakávať, zvieratá ošetrená VEGF neutralizačné protilátky významne oneskorený žalúdočného vredu rán VSLošetrených zvierat. Toto je prvá správa, ktorá preukazuje vysokú účinnosť probiotické zmesi VSLpri podpore hojenia žalúdočného vredu. Probiotické účinnosť bol účinný pri vyšších koncentráciách VSLšpecificky zvýšenie expresie a produkcie angiogenézy propagáciu rastových faktorov, hlavne VEGF}

Citácia :. Dharmani P, De Simone C, Chadee K (2013) probiotická zmes VSLUrýchľuje hojenie žalúdočného vredu tým, že stimuluje vaskulárny endoteliálny rastový faktor. PLoS ONE 8 (3): e58671. doi: 10,1371 /journal.pone.0058671

Strih: John Wallace, McMaster University, Kanada

Prijaté: 29. októbra 2012; Prijaté: 07.02.2013; Uverejnené: 06.03.2013

Copyright: © 2013 Dharmani et al. Toto je článok o otvorený prístup distribuovaný pod podmienkami Creative Commons Attribution licencie, ktorá umožňuje neobmedzené použitie, distribúciu a reprodukciu v nejakom médiu, za predpokladu, že pôvodný autor a zdroj sú pripísané

Financovanie :. Toto dielo bol podporený grantom z kanadského inštitútu pre výskum zdravia (CIHR, KC). PD bola financovaná z kanadského Asociácie gastroenterologická-Axcan Pharma-CIHR výskum a Fellowship Award. Platcovia mal žiadnu úlohu v dizajne štúdie, zber a analýzu dát, rozhodnutie publikovať, alebo prípravu rukopisu

konkurenčnými záujmami :. Autori majú nasledujúce záujem. PD bola financovaná z kanadského Asociácie gastroenterologická-Axcan Pharma-CIHR výskum a Fellowship Award. To však nič nemení priľnavosť jednotlivých autorov do všetkých politík ploche jeden na zdieľanie dát a materiálov.

Úvod

Žalúdočné vredy hojenie je spontánna, komplikovaná rad rôznych mechanizmov, ktoré pracujú v tandeme napraviť nerovnováhu medzi agresívne (napríklad kyselina, pepsín, prozápalových cytokínov a Helicobacter pylori
) a obranné faktory (napr hlien, bikarbonát, prietok krvi a rastových faktorov) v žalúdku [1]. Tento proces zahŕňa zmiernenie agresívnych luminální faktory, plnenie slizničnej defekt proliferovať a migrácie epitelové bunky a spojivovú zložku, tak, aby sa rekonštruovať slizničnej architektúry [2]. My a ďalší [3], [4], [5], preukázali účinnosť a predpokladaný mechanizmus rôznych liekov a bylín pre posilnenie procesu spontánneho hojenia vredov v rôznych vivo modeloch
žalúdočný vred v. Avšak štúdie posudzujúce vplyv probiotík na ochorenia horného gastrointestinálneho traktu (GI) a najmä na žalúdočné vredy sú obmedzené a to napriek rozsiahle práce a sľubným výsledkom tejto terapeutické možnosti pre ďalšie GI ochorenia vrátane zápalového ochorenia čriev [6], [ ,,,0],7], [8], [9].

Probiotiká sú živé mikroorganizmy, ktoré navyše k výživnej hodnote prepožičať niekoľko zdravotných výhod, ak je poskytovaná v dostatočným množstvom. VSLje probiotický prípravok obsahujúci zmes ôsmich bakteriálnych druhov, štyri druhy Lactobacilli
( acidophilus
bulgaricus
casei
plantarum
), tri druhy bifidobaktérie
( breve
infantis
longum
) a jeden Streptococcus
druhy, u ktorého bolo preukázané, že je klinicky účinný pri prevencii vzplanutia žiaruvzdorného pouchitidy [8], a vedie k remisii ulceróznej kolitídy [9]. Už skôr sme ukázali, že VSLalebo jej sekretované produkty sú účinnými hrubého mucín sekretagogy in vitro na ľudských
hrubého epitelových bunkách a hrubého čreva štúdiách slučky na zvieracích modeloch [10]. Avšak vplyv probiotiká liečby o akútne žalúdočné poškodení spojené s žalúdočných vredov nie je dobre preskúmaná. Primárnym dôvodom je to, že črevná poskytuje celý rad nepriaznivých fyziologických podmienok, ako je kyslé pH, tráviace enzýmy, žlčové kyseliny a mechanickému namáhaniu, ktorá zoslabuje prežitie a rast probiotických mikroorganizmov. Avšak liečba s dostatočným množstvom rôznych probiotických mikroorganizmov môže prekonať toto obmedzenie. Existuje niekoľko správ o jednotlivých probiotických baktérií vrátane Lactobacillus rhamnosus
[11], L. Gasser
[12], L. acidophilus
[13] a Bifidobacterium
[14] udeľovaní ochrany proti žalúdočných vredov pri podpore hojenia vredu v rôznych vivo
vredových modelov. Avšak, štúdie o vplyve probiotických baktérií o posilnení H. pylori
vykorenenie neboli konzistentné vo svojich zisteniach [14], [15]. Nedávna štúdia ukázala, že primeraná suplementácia zmesou 8 kmeňov probiotických mohlo vykoreniť H. pylori
[16]. V súčasnej dobe sa stále ešte nie je známe, či zmiešané probiotické baktérie sú účinnejšie ako jednotlivé kmene pri podpore hojenia vredu. V tejto štúdii sme skúmali bunkové mechanizmy, podľa ktorých VSLprobiotické zmesi rozšírený žalúdočného vredu hojenie u potkanov.

Materiály a metódy

Zvieratá

Šesť týždňov staré samce potkanov Sprague-Dawley s hmotnosťou 150 až 200 g (Charles River, St. Constant, Quebec) boli umiestnení do klietok 2 na skupinu v miestnosti s konštantnou teplotou, s 12-h svetlých a tmavých cyklov, a po jedle štandardnej hlodavce a vodu ad libitum
. Po 7-dňový aklimatizácii boli krysy náhodne rozdelená do testovaných skupín pre indukciu žalúdočného vredu. Etická komisia Zviera Experiment z University of Calgary schválila túto štúdiu.

experimentálny dizajn

Na štúdium vplyvu VSLprobiotické zmesi na žalúdočné vredy hojenie a zmiernenie útočných priesvitu faktorov (pre -inflammatory cytokíny) a propagácia cytoprotektívnych obranných faktorov (regulačné cytokíny, mucínu a rastových faktorov), krysy boli rozdelené do troch experimentálnych skupín. Ovládanie zvieratá bola ošetrená s vozidlom po vredu indukcie a dvoma ďalšími skupinami, ktoré dostávali buď nízky (6 × 109 baktérií /zviera /deň) alebo vysoká (1,2 x 1010 baktérií /zviera /deň) Dávka VSL. Zvieratá boli zabité v deň 3, 7 a 14 vozidla alebo VSLliečbu (pre zdôvodnenie, vidieť sekciu na žalúdočné indukciu vredov a VSLošetreniach). Celkom 18 zvierat boli použité pre každý časový bod ( N
= 6 pre každú skúšobnú /časový bod) a štúdia bola vykonaná trikrát. Na skúmanie účinku anti-rastový faktor cievneho endotelu (VEGF) na žalúdočné hojenie vredov, neutralizačné protilátky proti VEGF boli používané. V tomto pokuse boli použité štyri skupiny. Po indukcii vredov, kontrolnej skupine bolo podané samotným nosičom. Liečenej skupiny súčasťou krýs ošetrených neutralizačné VEGF protilátku sám, krysy, ktoré získali vysoké dávky VSL(1,2 x 1010 baktérií /zviera /deň) spolu s IgG protilátkou kontrolného a potkanov, ktorí dostávali vysoké dávky VSL(1,2 x 1010 baktérií /zviera /deň) spolu s neutralizačné VEGF protilátky. skupiny protilátok ošetrené (IgG a neutralizačné protilátky VEGF) dostali protilátky v dávke 10 mg /kg telesnej hmotnosti (pre zdôvodnenie, pozri kapitolu ošetrenie protilátkou VEGF neutralizačné). Zvieratá bola usmrtená cervikálny dislokáciou v deň 3, 7 a 14 po liečbe anti-VEGF. Celkom 24 zvierat boli použité pre každý časový bod (n = 6 pre každú skúšobnú /časový bod).

žalúdočný vred Indukcia a VSLošetrení

chronickou žalúdočné vredy boli indukované experimentálne krysy, ako bolo opísané skôr [17]. V anestézii pentobarbitalom (35 mg /kg telesnej hmotnosti, i.p.), brušná dutina bola otvorená v strednej línii rezu. Plastová rúrka 6 mm, otvorené na oboch koncoch bol aplikovaný tesne na serózna povrch prednej steny žalúdka proximálne antrálnej žľazy oblasť. Na povrch žalúdka, 60 ul 40% kyseliny octovej sa preleje cez trubicu po dobu 90 sekúnd. Toto produkovalo okamžitej nekrózu celej sliznice a sub-sliznice v oblasti, kde bola použitá kyselina octová. kyselina octová, ktoré zostávajú na povrchu sa otrú so sterilným filtračným papierom a otvorené brucho bolo uzavreté. Už skôr sme ukázali, že tento postup vytvára histologicky dobre charakterizovaných vredov v priebehu 3 dní po expozícii kyseliny octovej a hojí úplne počas 3 týždňov bez perforácie alebo prenikanie do okolitých orgánov [3] - [4].

Čistenie VSLpri nízkych (6 x 10 ^{9 baktérie) a vysoké dávky (1,2 x 10 10 baktérií) bol na základe výsledkov predbežných štúdií s použitím piatich rôznych dávok VSL(1,5 x 10 9, 3 x 10 9, 6 × 10 9, 1,2 × 10 10 a 2,4 x 10 10 baktérií /zviera /deň, v tomto poradí). VSLdávky 1,5 x 10 9 a 3 x 10 9 baktérií /zviera /deň neboli nájdené účinné pri podpore žalúdočnej hojenia vredu, zatiaľ čo účinok dávky 2,4 × 10 10, baktérií /zviera /deň žalúdočné hojenie vredov nebol významne odlišný od 1,2 x 10 10 baktérií /zviera /deň (obrázok S1). Liečba VSLsa začalo, keď boli vredy plne vyvinuté v 3. deň po podaní kyseliny octovej; toto bolo považované za 1. deň liečby po dobu ďalších 14 dní. Hodnota pH rôznych koncentrácií VSLbolo 7,0. Zvieratá boli zabité v deň 3, 7 a 14 po VSLliečby. Ulcerovaného a non-vredy oblasť z každého zvieraťa sa prepláchne ľadovo chladného fosfátom pufrovaný fyziologický roztok umiestni na ľad a tri rezy boli zhromaždené. Dva prierezy boli snap-zmrazí v kvapalnom dusíku a skladované pri -70 ° C pre izoláciu RNA a prípravu proteínov. Tretí prierez bol okamžite fixované v 10% neutrálne pufrovaného formalínu na histologické analýze.}

Posúdenie veľkosti vredu, percentuálne hojenie a histologické vyšetrenie

Celková plocha vredu a percentuálny vredov v rôznych časoch príspevok liečba bola hodnotená u potkanov žalúdka rezaním pozdĺž veľkého zakrivenia a vredu (mm ^{2) oblasť merať. Dva rôzni jedinci meria oblasť vredov u zaslepenej fáze. Percento hojenie bola vypočítaná ako:}

histologické štúdie boli vykonané v súlade s predtým popísaným spôsobom [18]. Stručne povedané, vred kráter každého žalúdka bol rozrezané von a pevne cez noc v 10% neutrálnom formalínu pufrovaného, ​​potom sa zbaví vody sa postupne v etanole a vložené do parafínu za použitia neoclear ako prechodového rozpúšťadlá. Úseky 6 um boli získané v automatizovanom mikrotómy. Vredy rezy boli zafarbené hematoxylínom a eosínu (H &E) pre histologické vyhodnotenie v priebehu hojenia. Mikroskopicky, H &E tkanivá boli hlásené ako zobrazené: normálny vzhľad, mierne infiltrátmi zápalových buniek do lamina propria sliznice, buď žiadny, alebo len plytké erózie alebo hlboké erózie a vredy

kvantitatívnej real-time. PCR analýza

Kvantitatívne PCR v reálnom čase bola vykonaná analýza pre hodnotenie zmien v expresiu génov, ktoré kódujú pre sekrečnú mucínu (Muc5ac), cyklooxygenázy-2 (COX-2), pre-zápalové (TNF-a a IL- 1β) a regulačné (IL-10 a TGF-β), cytokíny a vaskulárny endoteliálny rastový faktor (VEGF), transformujúci rastový faktor beta (TGF-beta) a epidermálny rastový faktor (EGF). Celková RNA bola extrahovaná z vredy a non-vredy tkaniva s činidlom TRIzolu (Invitrogen). Výťažok a čistota RNA bola stanovená spektroskopickou analýzou. 2 ug RNA bola reverzne transkribovaných za použitie M-MLV reverznej transkriptázy (Invitrogen) podľa pokynov výrobcu. Jeden ul cDNA bola použitá pre PCR v reálnom čase (Corbett Research). Real-time priméry sa špecifickou žíhacie teploty sú uvedené v tabuľke 1. Amplifikácia boli vykonávané s Quantitect SYBR Green PCR kitu Qiagen tým, že za týchto podmienok cyklovanie: 94 ° C držať po dobu 15 minút, nasledovalo 40 cyklov denaturácie pri 94 ° C ° C počas 20 s, zapálení pri zodpovedajúcej teploty po dobu 30 sekúnd a predĺženie pri 72 ° C počas 30 s. Špecifickosť amplifikácia bola kontrolovaná taveniny analýzou krivky. Expresia mRNA rôznych génu bola normalizovaná na GAPDH a zložiť zmeny v priebehu konania bola stanovená podľa metódy ddCt [19].

Proteínové Hladiny VEGF, TGF a EGF v žalúdočnej tkanive homogenátu

žalúdočné tkaniva boli homogenizované v studenom fosfátovom pufri (PBS, pH 7,4) za použitia homogenizátora Polytron. Tkanivo homogenát sa potom odstredí pri 20000 x g počas 20 minút pri teplote 4 ° C za účelom získania jasné koncentrácia supernatantu a bielkovín, zmerané pomocou BCA (kyselina Bicinchoninic) kit. Úrovne proteínovej VEGF, TGF-p a EGF v homogenizovaných žalúdočné tkaniva z oboch vredy a non-vredy sliznice sa meria za použitia súpravy ELISA podľa protokolu výrobcu (rat VEGF ELISA Kit, Ray Biotech; krysa TGF-p kit, ebioscience a krysa EGF ELISA kit, Uscn Life Science Inc.). VEGF, TGF-β a EGF úroveň bola vyjadrená ako pg /mg tkaniva.

účinku neutralizujúcich anti-VEGF protilátky na žalúdočné hojenie vredov vyvolanej VSL

Pre vyhodnotenie účinku neutralizačné protilátka anti-VEGF na žalúdočné hojenie vredov podporované VSL, štyri skupiny zvierat boli použité a to, ovládanie, neutralizačné VEGF protilátky (R &D systems), VSLvysoké dávky + IgG (izoforma protilátky, R &D systémy), a VSLs vysokou dávkou + neutralizačné VEGF protilátok (R &D systems). V predbežných pokusoch, tri dávky neutralizačných VEGF protilátky (5, 10 a 20 ug /zviera /deň, ip) boli testované v zvierat, ktorá dostávala vysoké dávky VSLpočas 14 po sebe idúcich dní a dávka 10 ug /zvierat /deň bolo zistené, že významne znižuje hojenie a bol vybraný pre použitie u všetkých nasledujúcich pokusoch. Zvieratá boli zabité v deň 3, 7 a 14 dní po VSL+ protilátkovej liečby. Žalúdočný vred oblasť bola meraná a histologické vyšetrenie, kvantitatívne PCR v reálnom čase analýzy a analýzy proteín ELISA na báze bola vykonaná, ako je popísané vyššie.

Štatistická analýza

Výsledky sú vyjadrené ako priemer ± SEM. Význam rozdiely medzi kontrolou a VSLliečenej skupiny boli stanovené pomocou testu Kruskal-Wallis s Dunns post-testu pre porovnanie špecifických skupín. Voľba neparametrického testu (Kruskal-Wallis test) namiesto parametrického testu (analýza rozptylu, ANOVA) bola založená na tom, že aspoň jedna zo skupín vo všetkých ale tri porovnania bola non-Gaussian. Aby bola zachovaná konzistencia, Kruskal-Wallis test bol použitý pre všetky porovnania. Všetky štatistické analýzy boli vykonávané s použitím programu Graph Pad Instat. A P
hodnota > 0,05 bola považovaná za významnú

Výsledky

VSLprobiotické zmesi urýchľuje hojenie žalúdočného vredu

V nadväznosti na serózna použitie kyseliny octovej. kyselina 100% zvierat vyvinula žalúdočné vredy po 3 dňoch. Potom, žalúdočné vredy postupne vyliečiť až do 14. dňa (obr. 1a). Na určenie, či probiotická zmes VSLby bolo možné urýchliť hojenie žalúdočného vredu, zvieratá boli ošetrené buď nízkych alebo vysokých dávok VSL, počínajúc v deň 3, kedy boli vredy plne vyvinuté pre najbližších 14 po sebe idúcich dní. Ako je znázornené na obrázku 1 a /b, hojenie vredov v deň 3 liečby nebol významný buď v liečených skupinách ovládanie alebo VSL. Potom došlo k postupoval zvýšenie hojenie vredov prejavuje poklesom vredu oblasti na deň 7 u zvierat ošetrených buď nízkou (p = 0,07) alebo vysokej (p = 0,003) dávky VSLje v porovnaní s neošetrenou kontrolou ( obr. 1a). Najmä VSLpri vysokých dávkach počas 14 dní viedlo k úplnej hojenie vredov v ~ 50% zvierat (obr. 1 a), bez náznaku vredy sliznice. Vo zvyšných zvierat tam bola významná obnova povrchu epitelu a rozsiahlu regeneráciu tkanív (obr. 1b). Kým VSLtitul významné zvýšenie hojenie vredov, liečba vysokými dávkami (% liečenie bola 57% a 84% v deň 7 a 14, v uvedenom poradí) výrazne prekonala ošetrenie nízkych dávok (% liečenie bola 30% a 57% v deň 7 a 14 , v uvedenom poradí; obr. 1a). Vzhľadom k tomu, deň 3 liečby neukázali významné rozdiely v hojení vredov na kontrolu a VSLliečených skupín, všetky výsledky v nasledujúcich častiach sú uvedené na 7 a 14 dní liečby.

VSLošetrení propaguje opravu tkaniva v vredy žalúdočnej sliznice

H &E farbenie ukázalo, rôzne histologické známky hojenia medzi jednotlivými skupinami. 14. deň, podobne ako hrubú zistenia pri meraní vred plochy, kontrolné krysy vykazovali minimálnu opravu. Tam boli znížené zápalové výpotky, minimálny rozsah regenerácia slizničnej s obmedzenou veľkosťou vredu krátera. My sme nespozorovali mnoho žliaz organizáciu v kontrolných potkanov (obr. 2a). Avšak, u zvierat liečených vysokými dávkami VSL, ktoré vykazovali najvyššie hojenie zníženie o veľkosti vredu oblasti, bolo obnovenie slizničnej epitel (re-epitelizáciu) a niekoľko zápalových buniek. Ako je znázornené na obrázku 2c, sekrečnú žľazy boli usporiadané. Posúdenie ulcerovaného tkanív v VSLnízkou dávkou liečenej skupiny vykázali určitý povrchné prestavbu sa skromnými zápalových exudátov a in-kompletné re-epitelizáciu sliznice. Správne usporiadanie žliaz bola pozorovaná aj v niektorých miestach (obr. 2b).

Vplyv VSLzaobchádzanie na Muc5ac, COX-1/2 a pre-zápalové a regulačné génovej expresie cytokínov

vrstvy slizu je prvá obranná vrstva žalúdočnej sliznice [20], ktorá hrá dôležitú ochrannú úlohu proti kyseline a pepsínu v žalúdku. Vzhľadom k tomu, Muc5ac je najviac hojne vyjadrené mucín v normálnej žalúdočnej sliznice, určíme ak VSLošetrenie postihnutých génovej expresie Muc5ac v vredy a /alebo non-vredy tkanív. Ako je uvedené v tabuľke 2, a to aj keď Muc5ac expresie bola mierne vyššia u VSLošetrených zvierat, že nebol významný rozdiel medzi testovanými skupinami. Prostaglandíny sú ďalší dôležitý obranný faktor rozhodujúci pre udržanie integrity žalúdočnej sliznice, ktorého syntéza je regulovaná rýchlosťou limitujúci enzým cyklooxygenázu (COX), ktorá existuje v dvoch izoforiem-COX-1 a COX-2 [21]. Konštitutívne exprimovaný sa tiež zistilo, COX-1, aby sa v nezmenenej forme v ulcerácie a non-vredy tkanivách, zatiaľ čo expresia COX-2 bola významne vyššia v VSL # skupine liečenej 3 s vysokou dávkou 7. deň, ale nie v deň 14 (tabuľka 2) .

zápalové cytokíny TNF-α a IL-1β bolo preukázané, že hrajú dôležitú úlohu v patogenéze žalúdočných vredov tým, že začala čoskoro zápalový proces [22], zatiaľ čo regulačného cytokínu IL-10 je známe, že zoslabenie TNF-a produkciu [23]. Bolo zistené, expresie ako TNF-a a IL-1 génov, ktoré majú byť zvýšené v ulcerácia tkaniva v troch skupinách zvierat. Avšak, VSLliečba nemala vplyv na expresiu IL-1 a IL-10 a mierne poklesla expresiu TNF-a v vredy tkanive v porovnaní s ošetrením vehikulom (tabuľka 2).

VSLošetrenie stimuluje produkciu rastových faktorov

role rastových faktorov VEGF, TGF-beta a EGF angiogenézy a epitelu migráciu a proliferáciu buniek v žalúdočných vredov je dobre zdokumentovaná [24] [25]. Ako je znázornené na obrázku 3, došlo k výraznému zvýšeniu VEGF (P &0,001) génovej expresie v ulcerácie tkanív, v deň 7 u zvierat liečených nízkymi alebo vysokými dávkami VSLv porovnaní so zvieratami liečenými iba vozidlá (97 a 332 násobné zvýšenie génovej expresie u VLSnízke a vysoké dávky liečených potkanov, v tomto poradí). Zvýšenie génovej expresie VEGF sa prejavilo v deň 14 a bol najviac prominentnú v nízkej dávke VSLliečených potkanov (obr. 3 hore). Expresia VEGF sa nezmenila v non-ulcerated tkanivách všetkých skupín vyšetrovaných. Obsah VEGF proteínu v tkanivovom homogenátu žalúdku potvrdili zistenia údajov o VEGF expresie génu (obr. 4, top). Podobne, TGF-β a EGF (obr. 3 strednej a spodnej panely) génu a proteínové hladiny (obr. 4 je stredné a dolné panely) sa významne zvýšila v VSLošetrených zvierat, ale táto zmena bola menej výrazný, ktoré bolo zistené na VEGF .

VEGF neutralizačné protilátky tlmí VSLsprostredkovanú žalúdočného vredu hojenie

na základe údajov na obrázku 3, kde VEGF bola významne zvýšená v reakcii na VSLliečbu, ktorá zvýšenú žalúdočný vred hojenie základe ( obr. 1), sme sa špekulovalo, že VSLochranný účinok a mechanizmus účinku je závislé na VEGF. Ak chcete to preskúmať, zvieratá boli ošetrené s vysokou dávkou VSL+ VEGF neutralizačné protilátky. Ako je znázornené na obrázku 5, zvieratá ošetrená VEGF neutralizujúcich protilátok sa znížila hojenie vredu o 34% a 41% v uvedenom poradí, v dňoch 7 a 14 v porovnaní so zvieratami liečenými vysokými dávkami VSL+ IgG alebo riadenie vozidla (obr. 5a). Hrubé patológie (viď obr. 5b), ukázala, že mukóznej architektúra bola menej neporušené v VSL+ VEGF neutralizujúcich protilátok liečených potkanov než VSL+ IgG potkany v dňoch 7 a 14 liečby. Zvieratá ošetrená VEGF neutralizačných protilátok samotná, ukázala zníženie hojenie vredov v porovnaní s kontrolnými zvieratami, ale výsledky neboli štatisticky významné (Obr 5a).

Diskusia

Ide o prvý komplexný štúdie preukázať, že probiotické zmesi VSLmožno rozšíriť hojenie vredov vyvolaných žalúdočnej kyseliny octovej. Naše výsledky ukazujú, že VSLjednali spôsobom závislým od dávky k zvýšeniu v expresiu a produkciu VEGF, rastového faktora je známe, že podporujú angiogenézu a hojenie. VEGF bol kriticky dôležitá pri žalúdočných vredov ako liečba VEGF neutralizujúcich protilátok výrazne oddialil proces hojenia v VSLliečených zvierat.

Preventívne a terapeutický role probiotík je dobre označená nielen v prípade ulceróznej kolitídy a Crohnova choroba [8] - [9], ale aj v podmienkach, ako sa menil ako vypálených rán a strelných rán [26] - [27]. Avšak, existuje obmedzený počet štúdií hodnotiacich vplyv liečby probiotík na žalúdočné vredy predovšetkým v dôsledku nepriaznivých fyziologických podmienok žalúdka, ktoré znižuje prežitie a rast mikroorganizmov. Je zvláštne, jedna štúdia [28] preukázali, že bakteriálne kolonizácia nastáva rýchlo po indukcii vredov, a to najmä, kolonizácia niektorých baktérií, vrátane Lactobacillus
môže významne zlepšuje hojenie žalúdočný vred. Iné štúdie ukázali, že probiotické baktérie Lactobacillus
druhov, Saccharomyces boulardii
, Escherichia coli Nissle
kmeňa 1917 sú účinné v prevencii a liečbe akútnej žalúdočnej poškodenia spojeného s kyselinou octovou [ ,,,0],12], stres [13], aspirín [29], etanol [30], ibuprofén [31] a indometacín [32] indukovanej žalúdočných vredov. U ľudí, nepriame dôkazy naznačujú, že pravidelná požití a Lactobacillus
-obsahujúce produkt chráni integritu žalúdočnej sliznice bariéry proti indometacín [32], zatiaľ čo iní [15] uvádzajú, že účinok použitie probiotické baktérie spolu s trojitým terapia nie je o nič lepší ako trojkombináciou sám na liečbu žalúdočných vredov. Nedávna správa [13] navrhne nový symbiotický prístup k liečbe, kde probiotiká ( l. Acidophilus
) a zázvoru extrakt boli súčasne a jednotlivo zapuzdrené /znehybnený v alginátových plávajúcich guličiek výrazne ovplyvnili žalúdočného vredu hojenie u potkanov. Alternatívnym prístupom je použitie iné množstvo multi kmeňov probiotík pre podporu hojenia vredu ako IBD štúdie ukázali, že multi deformačné probiotiká sú účinnejšie ako probiotiká monostrain [33]. Naše výsledky potvrdzujú tieto výsledky s použitím VSL, zmes ôsmich bakteriálnych druhov, ktoré je vysoko účinná pri podpore epiteliálne bunkovú migráciu a proliferáciu, angiogenézy a tvorbu granulačného tkaniva, ktoré vedú k rýchlejšiemu hojeniu žalúdočných vredov.

zaoberať mechanizmy, podľa ktorých VSLzrýchlené hojenie žalúdočného vredu sme kvantifikáciu útočnú luminální a /alebo podporovať obranné faktory. Predchádzajúce štúdie ukázali, že probiotiká vykonávať rôzne mechanizmy, vrátane stabilizácie mucosal mastocytov degranulácia [29], indukcia produkcie Siga [29], zníženie bunkovej apoptózy pomer proliferácie buniek v žalúdku [11], zvýšenie transepithelial odpor [34 ] a podporu angiogenézy [11] sprostredkovať žalúdočný vred hojenie. Tu ukazujeme, že VSLpodporované žalúdočné hojenie vredu tým, že zvyšuje expresiu rastových faktorov, hlavne VEGF niekoľko záhybov. VEGF je základným angiogénny faktor, ktorý stimuluje tvorbu granulačného tkaniva a nových ciev cez mikro angiogenézy [24], ktorá zase urýchľuje žalúdočné a dvanástnikové vredy hojenie [35]. K dnešnému dňu, je tam len jedna správa [11], ktoré ukazujú L. rhamnosus GG
môžu up-regulovať VEGF proteín pri hojení vredov. V našich štúdiách sme zistili, že v deň 7 liečby vysokými dávkami VSL, VEGF expresia bola zvýšená 332-krát v porovnaní s kontrolnými zvieratami. Toto zvýšenie sa nepovažujú za výrazne 14. deň liečby, a to predovšetkým preto, že väčšina vredov bol už vyliečiť do tej doby v VSL-liečených potkanov. V porovnaní s nízkou dávkou VSLliečených zvierat naďalej vykazuje silnú expresiu VEGF v oboch dňoch 7 a 14, pretože vredy boli ešte uzdravenie. Zastavenie VSL-indukovanej žalúdočnej hojenie vredu tým, ošetrenie zvierat s anti-VEGF neutralizačných protilátok bolo potvrdené, že VSLrozšírený žalúdočné hojenie vredu pomocou mechanizmu, VEGF-sprostredkované. Pozorovanie zníženého vredov u zvierat liečených VEGF neutralizujúcich protilátok samotný v porovnaní s kontrolami tiež podporujú úlohu VEGF spontánny žalúdočných vredov [35]. Dôležité je, že aj keď VEGF je známe, že sa reguluje COX-2 odvodené PGE _{2 [36], sme zistili, okrajové zmeny v expresiu COX-2 v VSLpotkanov čo naznačuje, že VSLindukovanú expresiu VEGF nie sú sprostredkovaných COX-2.}

tiež sme zistili, že rastové faktory EGF a TGF-β sa významne do upravené v ulcerácie tkanív VSLliečených potkanov. TGF-β je známe, že ovplyvňuje extracelulárnej matrix, ktorá premení proces epitelových buniek rozpustenie zapnutie a vypnutie, zatiaľ čo EGF podporuje ako epiteliálne reštitúcie a proliferáciu v GI trakte [25]. Je zaujímavé, že sa zistilo, VSLje účinná iba pri podpore rastové faktory a nie obranné faktory Muc5A a COX2. Je možné, že VSLby mohli mať vplyv na ďalšie obranné faktory nie sú analyzované v tejto štúdii. Už skôr sme ukázali, že VSLúprava zlepšuje črevnú Muc2 /MUC2 mucínu sekrécie v potkaním hrubom čreve a v ľudských črevných epiteliálnych buniek. VSLzaobchádzanie so zvieratami tiež nijako výrazne znížiť expresiu prozápalových cytokínov, IL-1 a v menšej miere TNF-alfa. Oba tieto cytokíny hrajú rozhodujúcu úlohu pri tvorbe žalúdočných vredov tým, že začala včasné akútne zápalovú reakciu [22]. Tieto nálezy potvrdzujú nedávna správa, ktorá hodnotila 13 probiotických kmeňov na vyvolaným aspirínom žalúdočných vredov [29]. V súčasnej dobe neviem, ktorý bakteriálne specie (y) alebo kombináciou v VSLprobiotické zmesi sú zodpovedné za žalúdočných vredov. Predchádzajúce štúdie ukázali, že multi kmeňa probiotiká (Presnejšie povedané, multi rod kmene) sú účinnejšie ako mono-kmeňov probiotík [33]. Je tiež možné, že VSLzmes sa neutrálny roztok (rôzne koncentrácie VSLmajú pH 7,0) môže mať vplyv na liečenie žalúdočnej kyseliny zriedením kyslosť žalúdočnej šťavy. Však, že údaje uvedené v tejto štúdii nemožno odvodiť túto skutočnosť, ako je kyslosť žalúdočnej šťavy nebola meraná. Avšak, VSLbude mať iba kyslú riedenie a nie neutralizačné účinok kyseliny na žalúdočné šťavy, ak existuje. So všetkou pravdepodobnosťou, účinok kyseliny zriedením VSLby prispelo len vedľajšiu úlohu pre jeho silnú cytoprotektivním funkciu preukázaná rozsiahlym up-regulácia VEGF. Ako VSLbol podávaný ako suspenzia živých buniek, táto formulácia by vyvíjal svoje ochranné účinky ako živé mikroorganizmy, ich metabolity, bunkovej steny súčasti a /alebo obsahu DNA, alebo všetky vyššie uvedené. Nie je sme vykonali experiment porovnať účinok živých mikróbov a teplom inaktivovaným probiotické zmesi, aby túto otázku, aj keď predchádzajúce štúdie ukázali, že teplom usmrtených alebo žiarenia inaktivovaných probiotické baktérie (v dávke podobným tomu, ktorý živých mikróbov) sa nepodarilo propagovať vredy hojenie [11] [12]. Ďalej, pretože sme nemali hodnotiť angiogenézy sa domnievať, že VSLpodporuje žalúdočnú hojenie vredu pomocou angiogenézy Špekuluje sa vychádza len z VSLschopnosť indukovať robustnú až regulácia VEGF, čo je kriticky dôležité v angiogenézu [35].

na záver, naše štúdie ukazujú, že VSLprobiotické zmes je vysoko účinná pri rozširovaní žalúdočný vred hojenie. Účinok je dominantný pri vysokých koncentráciách VSLzmesi a je dosiahnuté mechanicky tým, že stimuluje expresiu a sekréciu angiogenézy propagáciu rastových faktorov, hlavne VEGF. Táto štúdia stanovuje perspektívu pomocou VSLprobiotickú zmes terapeuticky rozšíriť žalúdočný vred hojenie.

Podporné informácie
Obrázok S1.
účinok liečby rôznych koncentrácií VSLna kyselinu octovú vyvolané žalúdočné hojenie vredu u potkanov. [A] Vred plocha (mm 2), vynesie u zvierat s kyselinou octovou indukovaného žalúdočného vredu v deň 3, 7 a 14 liečby vozidla (tmavo modrá), VSL1,5 × 10 9 baktérie /zviera /deň (svetlo žltá), VSL3,0 × 10 9 baktérie /zviera /deň (tmavo žltá), VSL6,0 × 10 9 baktérie /zviera /deň (svetlozelená), VSL1.2 × 10 10 baktérií /zviera /deň (tmavo zelená), VSL2,4 × 10 10 baktérií /zviera /deň (svetlo modrá). Údaje sú znázornené ako priemer ± SEM zo 6 zvierat na deň.

• Ploche ONE: In vivo antioxidant a antiulceróznych Činnosť parkii speciosa etanolového extraktu z listov proti Etanol vyvolané žalúdočné vredy u potkanov
• Ploche ONE: Obojsmerná Presluch medzi stresom žalúdočných vredov a depresie pod chronické Stress