PLoS ONE: probiotinių mišinys VSLPagreitina Skrandžio opos gydymas stimuliuoja kraujagyslių endotelio augimo Factor

Anotacija

Studijos vertinant poveikį ir mechanizmą probiotikais nuo ligų viršutinės virškinimo trakto (VT), įskaitant skrandžio opos yra ribotas, nepaisant plačiai darbą ir gerų rezultatų šio terapinio galimybe kitų virškinimo trakto ligų. Šiame tyrime mes ištirti būdus, kuriais probiotikais mišinys VSLgydo (aštuonių probiotinių bakterijų, įskaitant Laktobakterijos
Bifidobakterijos parsisiųsti ir Streptococcus
rūšių mišinys) acto rūgštis sukeltas skrandžio opa žiurkėms. VSLbuvo geriama ne mažas (6 × 10 ^{9 bakterijos) arba didelis (1,2 × 10 10 bakterijos) dozes nuo 3 dieną po opa indukcijos 14 dienų iš eilės. VSLprocedūros gerokai padidinti skrandžio opos gydymas nuo dozės priklausomu būdu. Siekiant įvertinti mechanizmo (-ų), kuriuo VSL, kuria savo apsauginį poveikį, mes kiekybiškai genų ekspresiją kelių PRO-uždegiminių citokinų, baltymų ir išraiškos skrandžio muciną-Muc5ac, reguliavimo citokinų IL-10, COX-2 ir įvairių augimo faktoriai. Iš visų komponentų tirtų tik išraiška ir baltymų gamybą VEGF buvo padidintas 332 kartų 7 dieną per Pūžņojošs audinių gydomiems VSLgyvūnų. Nuspėjamai, gydomiems VEGF neutralizuojančių antikūnų gyvūnai žymiai vėliau skrandžio opos gydymas VSLgydytų gyvūnų. Tai pirmoji ataskaita rodo didelę veiksmingumui probiotiko mišinys VSLdidinant skrandžio opos gydymas. Probiotinis veiksmingumas buvo veiksmingas esant didesnei koncentracijai apie VSLspecialiai didinti raišką ir gamyba angiogenezės skatinti augimo faktorių, pirmiausia VEGF}

nurodomoji dalis:. Dharmani P De Simone C Chadee K (2013) probiotinių mišinys VSLPagreitina Skrandžio opos gydymas stimuliuoja kraujagyslių endotelio augimo faktoriaus. PLoS ONE 8 (3): e58671. Doi: 10,1371 /journal.pone.0058671

Redaktorius: Jonas Wallace McMaster universitetas, Kanada

Įstojo: Spalio 29, 2012; Priėmė: Vasario 7, 2013 m Paskelbta: Kovo 6, 2013

Visos teisės saugomos: © 2013 Dharmani et al., Tai atviros prieigos straipsnis platinama pagal Creative Commons Attribution licencija, kuri leidžia nevaržomai naudotis, paskirstymo ir dauginimąsi bet kokioje laikmenoje sąlygomis, su sąlyga, kad pirmasis autorius ir šaltinis įskaitomos

Finansavimas:. Šis darbas parėmė dotacijos iš Kanados instituto sveikatos tyrimų (CIHR, KC). Apsaugos finansavo Kanados asociacijos Gastroenterologijos-Axcan Pharma-CIHR mokslinių tyrimų ir stipendijų skyrimo. Į finansuotojai neturėjo vaidmenį studijų dizainas, duomenų rinkimo ir analizės, sprendimų skelbti, ar ruošiant rankraštį

konkuruojančių interesų. Autoriai turi tokią interesų. Apsaugos finansavo Kanados asociacijos Gastroenterologijos-Axcan Pharma-CIHR mokslinių tyrimų ir stipendijų skyrimo. Tai nekeičia autorių laikytis visų PLoS ONE politikos dalijimosi duomenimis ir medžiagų.

Įvadas

Skrandžio opos gydymas yra spontaniškas, sudėtingas masyvo įvairių mechanizmų, kurie dirba kartu su informacija tarp agresyvus pusiausvyros (pvz rūgšties, pepsino, priešuždegiminiais citokinų ir Helicobacter pylori
) ir gynybiniai veiksniai (pvz, gleivės, bikarbonatas, kraujotaką ir augimo faktorių) skrandžio [1]. Procesas apima švelninimas agresyvių luminal veiksnių, pildymo gleivinės defektas su plinta ir migruoja epitelio ląstelių ir jungiamojo komponentą, kad būtų rekonstruoti gleivinės architektūros [2]. Mes ir kiti [3], [4], [5] parodė, veiksmingumą ir spėjamą mechanizmą įvairių vaistų ir žolelių stiprinant savaiminio opų gydymo procesą įvairiose in vivo
skrandžio opa modelių. Tačiau tyrimai vertinant probiotikų poveikį ligų viršutinės virškinimo trakto (VT), ypač skrandžio opa yra ribotos, nepaisant plačiai darbą ir gerų rezultatų šio terapinio galimybe kitų virškinimo trakto ligų, įskaitant uždegiminė žarnų liga [6], [ ,,,0],7], [8], [9].

Probiotikai yra gyvi mikroorganizmai, kartu su maistinė vertė dovanoti keletą naudos sveikatai, kai teikiama dideliam kiekiui. VSLyra probiotikas preparatas, turintis aštuonių bakterijų rūšių, keturių rūšių iš mišinį pieno bakterijos
( acidophilus
bulgaricus
casei
, plantarum
), trys rūšys, Bifidobakterijos
( lankeliu
infantis
longum
) ir vienas , Streptococcus
rūšys, kurios buvo įrodyta, kad būti kliniškai veiksmingai užkirsti kelią paūmėjimo atspariu divertikulito [8] ir sukelti atsisakyti išieškoti opiniu kolitu [9]. Mes jau anksčiau parodė, kad VSLarba jos išskiriami produktai yra stiprūs storosios mucino sekreciją in vitro
žmogaus storosios žarnos epitelio ląstelių ir storosios žarnos kilpa studijų gyvūnų modeliais [10]. Tačiau, Probiotinio gydymo poveikis ūmaus skrandžio žalą, susijusią su skrandžio opų nėra gerai ištirti. Pagrindinė priežastis yra ta, kad žarnyno suteikia neigiamų fiziologinių sąlygų, pavyzdžiui, rūgštus, virškinimo fermentų, tulžies rūgšties ir mechaniniam poveikiui, kad sumažina išlikimą ir augimą probiotinių mikroorganizmų kompiuterio. Tačiau gydymas esant dideliam kiekiui keliais probiotinių mikroorganizmų gali įveikti šį apribojimą. Yra keletas pranešimų apie individualių probiotinių bakterijų, įskaitant , Lactobacillus rhamnosus
[11], L. gasseri
[12] L. acidophilus
[13] ir , Bifidobacterium
[14] suteikti apsaugą nuo skrandžio opos skatinant opos gydymas įvairiais vivo
opos modelių. Tačiau tyrimai dėl probiotinių bakterijų poveikio didinimas H. pylori
likvidavimo buvo nenuoseklus savo išvadas [14], [15]. Neseniai atliktas tyrimas parodė, kad pakankamas papildai mišinio 8 probiotikų padermių gali išnaikinti H. pylori
[16]. Šiuo metu ji vis dar nėra žinoma, ar mišrios probiotinės bakterijos yra efektyvesnis nei pavienių padermių skatinant opos gydymas. Šioje studijoje, mes ištirti ląstelių mechanizmus, kuriais VSLprobiotinis mišinys sudedamas skrandžio opos gydymas žiurkių.

Medžiagos ir metodai

Gyvūnai

šešių savaičių amžiaus Sprague-Dawley žiurkių, kurių svoris nuo 150 ir 200 g (Charles River, St. pastovus, Kvebekas) buvo laikomi 2 varžas kiekvienoje grupėje esant pastoviam kambario temperatūroje, su 12-h šviesos ir tamsos ciklus, ir po valgio, Standartinis graužikų čiau ir vandens iki soties
. Po 7 dienų aklimatizacijos laikotarpiui, žiurkės buvo randomizuoti į eksperimentinių ir kontrolinių grupių indukcijai skrandžio opa. Gyvūnų Eksperimentuokite etikos komitetas Kalgario universiteto patvirtino šį tyrimą.

Eksperimentinis dizainas

Jei studijuoti VSLprobiotiko mišinio skrandžio opų gydymo ir sušvelninti įžeidžiantis luminal veiksnių poveikį (PRO -inflammatory citokinai) ir skatinimas apsaugančių gynybinės veiksnių (reguliavimo citokinų, mucino ir augimo faktorių), žiurkėms buvo suskirstyti į tris eksperimentines grupes. Kontrolinės grupės gyvūnai buvo gydomi transporto priemonės po opa indukcijos ir kitų dviejų grupių, kurios gavo arba žemas (6 × 109 bakterijų /gyvūnų /dieną) arba didelis (1,2 × 1010 bakterijos /gyvūnų /parą) dozės VSL 3 #. Gyvūnai buvo paaukotas ant 3 7 ir 14 transporto priemonės arba VSLgydymo dienos (už loginį žr skirsnį skrandžio opa indukcijos ir VSLgydymo). Iš 18 gyvūnų iš viso buvo panaudota kiekvienu laiko momentu ( N
= 6 kiekvieno bandymo /laiko momentu), o tyrimas buvo atliekamas tris kartus. Ištirti anti-kraujagyslių endotelio augimo faktoriaus (VEGF) poveikį skrandžio opų gijimui, neutralizuojančių antikūnų prieš VEGF buvo naudojami. Šio eksperimento metu, buvo naudojami keturi grupės. Po to, kai opa indukcijos, kontrolinė grupė buvo gydomi tik transporto priemonės. Gydymo grupių įtraukti žiurkių neutralizuoti vien VEGF antikūno, žiurkėms, kurios gavo didelių dozių VSL(1,2 × 1010 bakterijos /gyvūnų /diena) kartu su kontroline IgG antikūnų ir žiurkių, kurios gavo didelių dozių VSL(1,2 × 1010 bakterijas /gyvūnui /dieną) kartu su neutralizuojančių VEGF antikūnus. Antikūnų elgiamasi grupės (IgG ir neutralizuoti VEGF antikūnas) buvo suteikta antikūnus esant 10 mg /kg kūno svorio dozę (už loginį žr skirsnį apie VEGF neutralizuojančių antikūnų gydymo). Gyvūnai buvo paaukojo slankstelių dislokaciją ant 3 7 ir 14 dieną, po kovos su VEGF gydymą. 24 gyvūnų, iš viso buvo panaudota kiekvienu laiko momentu (n = 6 kiekvienos bandomojo /laiko momentu).

Skrandžio opa indukcija ir VSLgydymo

lėtinėmis skrandžio opos buvo sukeltos eksperimentiškai žiurkės kaip buvo aprašyta anksčiau [17]. Taikant anesteziją su pentobarbitono (35 mg /kg kūno svorio, i.p.), pilvo atidarė vidurinq pjūvį. Plastikinis vamzdelis 6 mm, atidaroma abiejų galų buvo taikomas sandariai į serosal paviršiaus priekinės sienelės skrandžio tiesiog proksimalinės į antralinių riebokšlio plotą. Ant skrandžio paviršiaus, 60 pL 40% acto rūgšties buvo pilamas per vamzdelį už 90 sekundžių. Tai gaminami nedelsiant nekrozę visą gleivinės ir sub-gleivinėje, zonoje, kur buvo taikomas acto rūgštis. Acto rūgšties, likusios ant paviršiaus tada buvo nušluota sterilia filtravimo popieriaus ir atidaryti pilvo buvo uždaryta. Mes jau anksčiau parodė, kad ši procedūra gamina histologiškai gerai būdinga opos per 3 dienas po acto rūgšties poveikio ir gydo visiškai per 3 savaites be perforacijos ar skverbtis į aplinkinius organus [3] - [4].

Gydymas VSLne mažas (6 × 10 ^{9 bakterijos) ir didelės dozės (1,2 × 10 10 bakterijos) buvo grindžiamos preliminariais tyrimų rezultatais, naudojant penkis skirtingus dozes VSL(1,5 × 10 9, 3 × 10 9, 6 × 10 9 1.2 × 10 10 ir 2,4 × 10 10 bakterijos /gyvūnų /dieną, atitinkamai). VSLdozes 1,5 × 10 9 ir 3 × 10 9 bakterijos /gyvūnų /dieną buvo nerastas veiksmingos skatinant skrandžio opos gydymas tuo tarpu 2,4 × 10 10, bakterijų dozę efektas /gyvūnų /diena skrandžio opų gydymo reikšmingai skiriasi nuo 1,2 × 10 10 bakterijos /gyvūnų /dieną (S1 paveiksle). Gydymas VSLbuvo pradėtas, kai opos buvo visiškai parengta remiantis 3 dieną po acto rūgšties administracijai; jis buvo laikomas gydymo 1 dieną per ateinančius 14 dienų. Atskleista, kad skirtingus koncentracijos VSL # pH nuo 3, buvo 7,0. Gyvūnai buvo paaukotas ant 3 7 ir 14 dieną po VSLgydymo. Pūžņojošs ir ne-Pūžņojošs plotas iš kiekvieno gyvūno buvo skalaujamas ledinio fosfatas-buferiniame valgomosios druskos tirpale patalpintas ant ledo ir trijų skerspjūvių buvo surinkti. Du skerspjūviai buvo greitai ir lengvai-užšaldomos skystame azoto ir saugomi -70 ° C temperatūroje RNR izoliacijos ir baltymų preparato. Trečia skerspjūvis iš karto buvo nustatytas 10% neutralus buferiniame formalino ir histologiniai analizė.}

vertinimas opa dydis, procentais gydymo ir histologinis ištyrimas

Bendras opa sritis ir procentinė opų gydymo skirtingu laiku rašyti gydymas buvo įvertintas žiurkėms skrandžio pjovimo palei didesnio kreivumo ir opa (mm ^{2) plotas, matuojamas. Du skirtingi asmenys matuojamas Opa plotas aklu metodu. Procentinė gijimas buvo apskaičiuota kaip:}

buvo atliekamas pagal anksčiau aprašytu būdu [18] histologiniai tyrimai. Trumpai tariant, opa krateris kiekvieno skrandžio buvo suskirstyta iš ir fiksuoto naktį 10% neutralus buferiniame formalino, tada dehidratuoto palaipsniui etanolyje ir įdėta į parafiną, naudojant neoclear kaip tarpinis tirpikliu. Profiliai yra 6 mm buvo gauti automatizuotą Mikrotoms. Pūžņojošs skyriai buvo tamsintas hematoksilinu ir eozinu (H & e) histologinio vertinimo gydymo metu. Mikroskopiškai H & E audiniai buvo pranešta, kaip rodo: normalus išvaizdą, švelnus infiltratai uždegiminių ląstelių į lamina propria gleivinės, su arba nėra arba yra tik sekliame erozijos, ar giliai erozijos ir opų

Kiekybiniai realiu laiku. PGR analizė

Kiekybiniai realaus laiko PGR analizė buvo atlikta siekiant įvertinti pokyčius genų koduojančių sekretuojančia muciną (Muc5ac), ciklooksigenazės-2 (COX-2) "," Pro-uždegiminių (TNF-alfa ir saviraiškos IL 1β) ir reguliavimo (IL-10 ir TGF-β) citokinai ir kraujagyslių endotelio augimo faktoriaus (VEGF), transformavimo augimo faktoriaus-beta (TGF-) ir epidermio augimo faktoriaus (EGF). Iš viso RNR buvo išskirta iš opą ir ne opą audinio su TriZol reagento (Invitrogen). Derlius ir grynumas, RNR buvo nustatomas pagal spektroskopijos analizės. 2 mikrogramų RNR buvo atvirkštinis perrašyti naudojant "M-MLV atvirkštinės transkriptazės (Invitrogen), kaip už gamintojo instrukcijas. Vienas pL kDNR buvo naudojamas realaus laiko PGR (Corbett Research). Realaus laiko pradmenys naudojami su konkrečiu atkaitinimo temperatūros yra pavaizduota 1 lentelė amplifikaoija, buvo atlikti su QIAGEN s Quantitect SYBR Green PGR rinkinio naudojant šiuos dviračiu sąlygas: 94 ° C palaikykite 15 min, po to 40 ciklų denatūruojant 94 ° C 20 S, atkaitinimo metu atitinkantis temperatūrą 30 S ir pratęsimo 72 ° C temperatūroje 30 s. Specifiškumas amplifikacija buvo patikrintas lydalo kreivės analizę. MRNR ekspresijos skirtingų genų normalizavosi prieš GAPDH ir kartų kaitą per kontrolė buvo nustatomas atsižvelgiant į ddCt metodas [19].

Baltymų lygiai VEGF, TGFβ ir EGF skrandžio audinių homogenate

Skrandžio audiniai homogenizuoti šaltas fosfatinio buferio druskų tirpalo (PBS, pH 7,4), naudojant Polytron homogenizatorių. tada audinių homogenato buvo centrifuguojamas 20.000 × g 20 min, esant 4 ° C iki gauti skaidrus supernatantas ir baltymų Koncentracijos, išmatuotos naudojant BCA (Bicinchoninic rūgštis) komplektas. Baltymų lygiai VEGF, TGF-beta ir EGF homogenizuotus skrandžio audinių iš tiek Pūžņojošs ir ne Pūžņojošs gleivinės buvo matuojamas naudojant ELISA rinkiniai pagal gamintojo protokolu (žiurkė VEGF IFA Kit Ray Biotech "; žiurkė TGF-beta komplektas, ebioscience ir žiurkė "EGF IFA komplektas, Uscn gyvenimas Mokslas Inc). VEGF, TGF-β ir "EGF lygis buvo išreikštas audinių pg /mg.

Apie neutralizuoti prieš VEGF antikūno skrandžio opų gydymo sukeltos VSL # Effect 3

Jei įvertinti poveikį neutralizuoti anti-VEGF antikūno skrandžio opų gydymo remiamą VSLmetu, keturios grupės gyvūnų buvo naudojami būtent kontrolė, neutralizuoti VEGF antikūnas (R & d sistemoms), VSLdidelių dozių + IgG (izoformos antikūnų, R & d sistemos), ir VSLdidelės dozės + neutralizuoti VEGF antikūnas (& D sistemoms). Išankstiniais eksperimentų, trys dozių neutralizuoti VEGF antikūnas (5, 10 ir 20 mikrogramų /Gyvūnų /parą; IP) buvo išbandytas su gyvūnais gaunančių aukštą dozę VSL14 dienas iš eilės ir iš 10 mikrogramų /Gyvūnų /dieną dozę buvo nustatyta, kad žymiai sumažinti gijimą ir buvo pasirinktas naudoti visų tolesnių eksperimentų. Gyvūnai buvo paaukota 3 dieną, 7 ir 14 dienų po VSL+ antikūnų gydymą. Skrandžio opa plotas buvo išmatuotas ir histologinis ištyrimas, kiekybinis realaus laiko PGR analizė ir IFA paremta baltymų analizė buvo atlikta, kaip aprašyta aukščiau.

Statistinė analizė

Rezultatai išreikštas reiškia ± SEM. Reikšmė skirtumai tarp kontrolės ir VSLpaveiktose grupėse buvo nustatomas taikant Kruskal-Wallis testą su Dunns po bandymo palyginti tikrų grupių. Atveju, ne-parametro bandymo (Kruskal-Wallis bandymo), o ne parametro bandymo (dispersinė analizė, ANOVA) pasirinkimas buvo pagrįstas tuo, kad bent vienas iš šių grupių iš viso, bet trys iš palyginimo buvo ne-Gauso. Siekiant išlaikyti nuoseklumą, Kruskal-Wallis testas buvo naudojamas visų palyginimų. Visi statistinės analizės buvo atliekamos naudojant Grafikas bloknotas Instat programinę įrangą. P
vertė > buvo laikoma reikšminga 0,05

Rezultatai

VSLprobiotinis mišinys pagreitina skrandžio opos gydymas

Po serosal taikymo acto. rūgštis 100% gyvūnų sukurta skrandžio opas po 3 dienų. Po to, skrandžio opos palaipsniui išgydė iki 14-tą dieną (1a pav.). Norint nustatyti, ar probiotinis mišinys VSLgali pagreitinti skrandžio opos gydymas, gyvūnai buvo gydomi maža, ar didelė dozes VSLpradedant nuo 3 dienos, kai opos buvo išvystyta per ateinančius 14 dienų iš eilės. Kaip parodyta 1 pav A /B, opos gydymas pirmąją gydymo 3 dieną nėra svarbus valdymo arba VSLgrupių, kurios veikiamos. Vėliau ten buvo Progresavo padidėjimas opų gydymo atspindi ir į opa ploto sumažėjimo apie 7 dieną gydant arba mažo gyvūnams (p = 0,07) arba aukštos (p = 0,003) dozes VSL, lyginant su negydytų kontrolės ( 1a pav.). Visų pirma, VSLdidelių dozių atveju 14 dienų atvedė į visišką opos gydymas ~50% gyvūnų (1 pav. A), be jokių opą gleivinės ženklas. Į likusias gyvūnų buvo padaryta reikšmingų restauravimas paviršiaus epitelio ir platus audinių regeneraciją (pav. 1b). Nors VSLsuteiktais gerokai padidinti opų gijimą, didelės dozės gydyti (% gijimas buvo 57% ir 84% 7 ir 14 dieną, atitinkamai) gerokai aplenkė mažos dozės gydymo (% gijimas buvo 30% ir 57% 7 ir 14 dieną , atitinkamai; 1a pav).. Kadangi gydymo 3 dieną neparodė reikšmingų skirtumų opų gydymo kontrolės ir VSLveikiamai grupei, visi rezultatai šiuose skyriuose bus rodomi 7 ir 14 gydymo dienų.

VSLgydymo skatina audinių remontas į opą skrandžio gleivinės

O & El dažymo atskleidžia skirtingus histologinius požymius gijimą tarp skirtingų grupių. 14 dieną, panašiai kaip ir mūsų bendrojo konstatavimo opa plotas matavimo, kontrolės žiurkė minimalus remontas. Buvo sumažintas nuo uždegimo eksudatas, minimali apimtis gleivinės regeneracijai riboto dydžio opa kraterio. Mes nesilaikė daug liaukinio organizaciją kontrolės žiurkėmis (2a pav.). Tačiau, gydomiems didelėmis dozėmis VSLgyvūnų, kurie parodė didžiausią gijimą mažinant dėl ​​opos ploto dydį, nebuvo atkūrimas gleivinės epitelio (pakartotinai epitelizaciją) ir keletą uždegiminių ląstelių. Kaip parodyta 2c pav, sekrecijos liaukos, taip pat buvo įrengtas. Vertinimas Pūžņojošs audinius VSLdoze gydytų pacientų grupėje parodė šiek tiek paviršutiniškai rekonstruoti Kuklus uždegimo eksudato ir užpildymas naujo epitelizaciją gleivinės. Tinkamas organizavimas liaukos taip pat buvo pastebėtas kai kuriose vietose (pav. 2b).

poveikis VSLrežimą Muc5ac, COX-1/2 ir pro uždegimo ir reguliavimo citokinų genų ekspresijos

gleivių sluoksnis yra pirmasis gynybinės sluoksnis skrandžio gleivinės [20], kad vaidina svarbų apsauginę funkciją nuo rūgšties ir pepsino, kad skrandžio. Nuo Muc5ac yra gausiai išreiškė mucino normaliai skrandžio gleivinę, mes nustatyti, ar VSLgydymo įtakos Muc5ac genų ekspresiją į Pūžņojošs ir /arba ne Pūžņojošs audiniuose. Kaip parodyta 2 lentelėje, nors Muc5ac išraiška buvo šiek tiek padidėjo VSLgydytų gyvūnų, tai buvo reikšmingai nesiskyrė tarp tiriamųjų grupėse. Prostaglandinai yra kita svarbi gynybinės veiksnys kritinis su skrandžio gleivinės vientisumą priežiūros, kurio sintezė yra reguliuojama greitį ribojantis fermento-ciklooksigenazę (COX), kuris egzistuoja dviejų izoformų-COX-1 ir COX-2 [21]. Constitutively išreiškė COG-1 taip pat buvo nustatyta, kad nepakitusio opą ir ne Pūžņojošs audinių kadangi COX-2 raiškos buvo reikšmingai didesnis VSLdidelės dozės elgiamasi grupė 7 dieną, bet ne dienos 14 (2 lentelė) .

PRO-uždegiminių citokinų TNF-α ir IL-1β buvo įrodyta, kad svarbų vaidmenį skrandžio opa patogenezės inicijuojant anksti uždegiminį procesą [22], o reguliavimo citokino IL-10 yra žinoma, kad sumažinti TNF-alfa gamybą [23]. buvo rastas išraiška tiek TNF-alfa ir IL-1β genų būti padidėjusi į opą audinių trijų grupių gyvūnų. Tačiau VSLgydymo neturėjo įtakos IL-1β ir IL-10 raišką ir nežymiai sumažino TNF-alfa į opą audinio išraiška, palyginti su transporto priemonės gydymą (2 lentelė).

VSLgydymo stimuliuoja augimo faktorių

augimo vaidmuo veiksnių VEGF, TGF-beta ir EGF angiogenezę ir epitelio ląstelių migracijos ir proliferacijos skrandžio opų gydymo gamybą yra gerai dokumentuota [24], [25]. Kaip parodyta 3 paveiksle, buvo gerokai padidinti VEGF (P < 0,001) genų išraišką Pūžņojošs audinių 7 dieną apdorotuose su mažomis ar didelėmis dozėmis VSLgyvūnų, palyginti su gydytų tik transporto priemonės gyvūnams (97 ir 332 kartus didesnis genų raiškos VLSmažos ir didelės dozės žiurkių, atitinkamai). Į VEGF genų ekspresijos padidėjimas taip pat buvo akivaizdu, 14 dieną ir buvo dauguma pastebimai mažos dozės VSLžiurkes (3 pav., Viršuje). VEGF išraiška nebuvo pakeista ne Pūžņojošs audinių visų grupių tirtų. VEGF baltymų kiekis skrandžio audinių homogenate patvirtinusių VEGF genų ekspresijos duomenų (4 pav., Viršaus) išvadas. Be to, TGF-β ir "EGF (3 pav. Vidurinį ir apatinį plokštės) genas ir baltymų kiekis (4 pav. Vidurinį ir apatinį plokštės) buvo žymiai padidėjo VSLgydomiems gyvuliams, nors pokytis buvo silpnesnis į nustatytas VEGF .

VEGF neutralizuojančių antikūnų sumažina VSLtarpininkaujant skrandžio opos gydymas

remiantis 3 paveiksle duomenis, jei VEGF buvo žymiai padidėjęs atsakas į VSLgydymo, kad būtų sustiprintas skrandžio opos gydymas ( 1 pav.), mes spėliojo, kad VSLapsauginis poveikis ir veikimo mechanizmas buvo priklausoma nuo VEGF. Norėdami tai išsiaiškinti, gyvūnai buvo gydomi didelėmis dozėmis VSL+ VEGF neutralizuojančių antikūnų. Kaip parodyta 5 paveiksle, gydomi VEGF neutralizuojančių antikūnų gyvūnai sumažėjo opos gydymas 34% ir 41% atitinkamai 7 ir 14 dienomis, palyginti su gydytų didelėmis dozėmis VSL+ IgG arba transporto priemonės valdymo (pav. 5a) gyvūnams. Pilna patologija (pav. 5b) parodė, kad gleivinės architektūra buvo mažiau nepažeistas į VSL+ VEGF neutralizuojančių antikūnų žiurkes nei VSL+ IgG žiurkes 7 ir 14 gydymo dienų. Vien gyvūnai gydomi VEGF neutralizuojančių antikūnų parodė sumažinti opų gijimą, palyginti su kontrolinės grupės gyvūnais, tačiau rezultatai nebuvo statistiškai reikšmingas (5a pav).

Diskusijos

Tai pirmasis išsamus tyrimas įrodyti, kad probiotikas mišinys VSLgali didinti gijimą acto rūgšties sukeltų skrandžio opų. Mūsų rezultatai parodė, kad VSLveikė nuo dozės priklausomu būdu, kad padidinti raiškos ir gamybos VEGF, augimo faktorius, žinoma, kad skatinti angiogenezę ir gijimą. VEGF buvo kritiškai svarbus skrandžio opoms, kaip gydymas VEGF neutralizuojančių antikūnų gerokai vėluoja gijimo procesą VSLgydytų gyvūnų.

prevencinė ir gydomoji vaidmuo probiotikų yra gerai pranešė ne tik tuo atveju, opinio kolito ir Krono liga [8] - [9], bet taip pat tokiomis sąlygomis, kaip antai sudegintų žaizdų ir Postrzałowy žaizdų [26] - [27]. Tačiau yra ribotas skaičius tyrimai, įvertinantys, kad probiotikų gydymo poveikį skrandžio opos pirmiausia dėl nepalankių fiziologinių sąlygų skrandžio, kad mažina išlikimą ir augimą mikroorganizmų. Įdomu, vienas tyrimas [28] parodė, kad bakterijų kolonizacija greitai įvyksta po opa indukcijos ir ypač, kolonizacija tam tikrų bakterijų, įskaitant , Lactobacillus
gali žymiai pagerina skrandžio opos gydymas. Kiti tyrimai parodė, kad probiotinės bakterijos Lactobacillus
rūšys Saccharomyces boulardii
Escherichia coli
kamieno Nissle 1917 yra veiksminga priemonė užkertant kelią ir gydyti ūmų skrandžio žalą, susijusią su acto rūgšties [ ,,,0],12], streso [13], aspirinas [29], etanolis [30], ibuprofenas [31] ir indometacino [32] sukeltos skrandžio opos. Žmonėms, netiesioginių įrodymų rodo, kad reguliariai geriant Lactobacillus
-Kurių sudėtyje produktą apsaugo skrandžio gleivinės barjerą nuo indometacino [32] vientisumą, tuo tarpu kiti [15], pranešė, kad naudojant probiotinių bakterijų kartu poveikis su trigubo gydymo nėra geriau, nei naudojant trigubą terapiją vien gydyti skrandžio opos. Neseniai paskelbtame pranešime [13] rodo, naujoviška simbiozę metodą gydymo kur probiotikas ( L. Acidophilus
) ir imbiero ekstraktas buvo vienu metu ir atskirai aplieti /sulaikytos alginatas plūduriuojančius karoliukai žymiai įtakos skrandžio opos gydymas žiurkėms. Alternatyvus požiūris yra naudoti kitą kiekį daugiabučių įtampos probiotikų skatinti opos gydymas kaip IBD tyrimai parodė, kad kelių deformacijų probiotikai yra efektyvesnis nei monostrain probiotikų [33]. Mūsų rezultatai patvirtina šias išvadas naudojant VSL, aštuonių rūšių bakterijų mišinys, kuris buvo labai veiksmingas stiprinant epitelio ląstelių migraciją ir proliferaciją, angiogenezę ir gamybos granuliavimo audinių pirmaujančių greitesnį gijimą skrandžio opos.

Jei spręsti mechanizmus, kuriais VSLpagreitinti skrandžio opos gydymas mes kiekybiškai įžeidžiantis luminal ir /ar skatinti gynybinės veiksnius. Ankstesni tyrimai parodė, kad probiotikai daryti įvairius mechanizmus, įskaitant stabilizavimo gleivinės putliųjų ląstelių degranuliacijos [29], indukcija siga gamybos [29], sumažinti ląstelių apoptozės į ląstelių proliferaciją santykis skrandyje [11], padidinti transepithelial atsparumą [34 ] ir skatinti angiogenezę [11] tarpininkauti skrandžio opos gydymas. Čia mes parodysime, kad VSLskatinama skrandžio opos gydymas didinant augimo faktorių ekspresiją, daugiausia VEGF kelių raukšlės. VEGF yra pagrindinė angiogeninis veiksnys, kuris skatina formavimąsi granuliavimo audinių ir naujų mikroįmonių laivų per angiogenezę [24], kuris savo ruožtu greitina skrandžio ir dvylikapirštės žarnos opos gydymas [35]. Iki šiol, yra tik vienas ataskaitoje [11], kad parodyti, L. rhamnosus GG
gali iki reguliuoti VEGF baltymų per opoms. Mūsų tyrimų, mes nustatėme, kad pirmąją gydymo su didelės dozės VSL7 dieną, VEGF išraiška buvo padidintas 332 kartų, palyginti su kontrolinių gyvūnų. Šis padidėjimas nebuvo vertinamas kaip gerai matomoje gydymo 14 dieną, daugiausia dėl to, kad opų dauguma jau buvo išgydytas iki to laiko į VSLgydytų žiurkių. Palyginimui, mažos dozės VSLgydytiems gyvūnams ir toliau rodo aukštą raišką VEGF ant ir 14 abi dienas 7 kaip opos vis dar buvo išgydytas. Nutraukiama VSLsukeltos skrandžio opos gydymas apdorojant gyvulius su anti-VEGF antikūno neutralizuoti patvirtino, kad VSLpapildyta skrandžio opos gydymas per VEGF tarpininkaujant mechanizmą. Dėl sumažėjusio opų gydymo stebėjimas gydomiems VEGF antikūno neutralizuoti vien, lyginant su kontrole, taip pat remti vaidmenį VEGF spontaniškai skrandžio opų gydymo [35] gyvūnų. Svarbu tai, kad, nors VEGF yra žinoma, kad iki reglamentuoja COX-2 kilęs PGE _{2 [36], mes nustatėme, ribinius pokyčius COX-2 ekspresija VSLžiurkes rodo, kad VSLsukeltas VEGF išraiška nėra, COX-2 tarpininkaujant.}

Mes taip pat nustatė, kad augimo faktorių bendras EGF ir TGF-β buvo žymiai daugiau reglamentuojamos Pūžņojošs audinių VSLžiurkes. TGF-β yra žinoma, kad įtakos ekstraląstelinę matricą, kuri paverčia epitelinės ląstelės ištirpinimo ir išjungti procesą, o EGF skatina abu epitelio grąžinimo ir proliferaciją skrandžio ir žarnų trakto [25]. Įdomu tai, kad VSLbuvo nustatyta, kad būti veiksmingos tik skatinant augimo faktorius, o ne gynybiniai veiksniai Muc5A ir COX2. Jis vis dar įmanoma, kad VSLgali turėti įtakos kitų gynybinių veiksnius, analizuojamos šiame tyrime. Mes jau anksčiau parodė, kad VSLgydymo padidina storosios Muc2 /MUC2 mucino sekreciją žiurkių dvitaškis ir žmogaus storosios žarnos epitelio ląstelėms. VSLgydymo gyvūnams taip pat nebuvo labai sumažinti PRO-uždegiminių citokinų IL-1β ir mažesniu mastu TNF-alfa išraiška. Abu šie citokinai vaidina svarbų vaidmenį skrandžio opos susidarymo inicijuojant anksti ūmus uždegiminis atsakas [22]. Šie rezultatai patvirtina neseniai ataskaitą, kurioje vertinama 13 probiotinių padermių ant aspirino sukelta skrandžio opų gydymo [29]. Šiuo metu mes nežinome, kokia bakterijų rūšį (-is) ar deriniai su VSLprobiotiko mišinio yra atsakingi už skrandžio opoms. Ankstesni tyrimai parodė, kad kelių deformacijų probiotikai (Tiksliau, multi genties štamai) yra efektyvesni nei mono įtampos probiotikų [33]. Ji yra taip pat įmanoma, kad VSLmišinys yra neutralus tirpalas (skirtingų koncentracijų VSLturi pH yra 7,0) gali turėti įtakos skrandžio rūgšties gijimą, veikiant skrandžio sulčių rūgštingumą skiedžiant. Tačiau pateikti šiame tyrime duomenų negalima daryti išvados, šį faktą, nes skrandžio sulčių rūgštingumas nebuvo matuojamas. Vis dėlto, VSLbūtų būti, turintys tik rūgšties skiedimą ir ne rūgšties neutralizuojantį poveikį skrandžio sulčių, jei toks yra. Panašu, rūgštis skiedžiant poveikis VSLtik prisidėtų antraeilį vaidmenį į savo stipriu apsaugančių funkcija parodė išsamiais iki reguliavimui VEGF. Kaip VSLbuvo vartojamas kaip gyva ląstelių suspensijos, ši formuluotė galėjo darė savo apsauginį poveikį kaip gyvų mikrobų, jų metabolitus, ląstelių sienelių sudedamųjų dalių ir /ar DNR turinį ar visi aukščiau. Mes neatlikome eksperimentą palyginti gyvų mikrobų ir šilumos jautę probiotikai mišinį įvertinti šį klausimą poveikį, nors ankstesni tyrimai parodė, kad šiluma-nužudyti ar radiacija inaktyvuotų probiotinių bakterijų (į dozę, panašią į gyvų mikrobų) nepavyko skatinti opa-healing [11], [12]. Be to, kadangi mes ne vertinti angiogenezę, teigti, kad VSLskatina skrandžio opos gydymas per angiogenezę tik spėliojama, remiantis VSLsugebėjimą sukelti tvirtą iki reguliavimą VEGF, kuri yra kritiškai svarbi angiogenezę [35].

Taigi, mūsų tyrimai rodo, kad VSLprobiotinis mišinys yra labai veiksminga plėsti skrandžio opos gydymas. Poveikis yra dominuojantis ne didelės koncentracijos VSLmišinio ir pasiekiamas mechaniškai stimuliuoja išraišką ir sekreciją angiogenezės skatinti augimo faktorių, pirmiausia VEGF. Šis tyrimas nustato naudojant VSLprobiotikai mišinį terapiškai plėsti skrandžio opos gydymas perspektyva.

Pagalbinė informacija
S1 paveiksle.
gydymo poveikis skirtingų koncentracijos VSLd acto rūgšties sukelta skrandžio opos gydymas žiurkėms. [A] Opa plotas (mm 2) brėžiamas gyvūnams su acto rūgšties sukelto skrandžio opa ant gydymo 3 7 ir 14 dieną, su transporto priemone (tamsiai mėlyna), VSL1,5 × 10 9 bakterijos /gyvūnų /dieną (šviesiai geltona), VSL3,0 × 10 9 bakterijos /gyvūnų /dieną (tamsiai geltonos), VSL6,0 × 10 9 bakterijos /gyvūnų /dieną (šviesiai žalia), VSL1.2 × 10 10 bakterijos /gyvūnų /dieną (tamsiai žalia), VSL2,4 × 10 10 bakterijos /gyvūnų /dieną (šviesiai mėlyna). Duomenys atstovavo reiškia ± SEM nuo 6 gyvūnų per dieną.

• PLoS ONE: in vivo antioksidantas ir priešopinius aktyvumui Parkia speciosa etanolio lapų ekstraktas prieš Etanolis sukeltos skrandžio opa žiurkėms
• PLoS ONE: Dvikryptis Crosstalk tarp streso sukeltos skrandžio opos ir depresijos pagal lėtinis stresas