PLoS ONE: probiotik mješavina VSLUbrzava čira na želucu Iscjeljivanje Poticanje rasta endotela krvnih žila Factor

Sažetak pregled

Studije procjene učinka i mehanizam probiotika na bolesti gornjeg gastrointestinalnog trakta (GI), uključujući želučanog ulkusa ograničeni usprkos intenzivnom radu i obećavajućim rezultatima ovog terapijska opcija za druge GI bolesti. U ovoj studiji istraživali smo mehanizme kojima se probiotik mješavina VSL(mješavina osam probiotičkih bakterija, uključujući actohacilli
, bifidobakterija
i Streptococcus pregled vrsta) liječi octena kiselina induciranog želučanog čira u štakora. VSLoralno pri niskom (6 × 10 ^{9 bakterije) ili visokom (1,2 × 10 10 bakterije) dozama od dana 3 nakon čira indukcije tijekom 14 uzastopnih dana. VSLtretmana znatno poboljšana želučanog čira rana na način ovisan o dozi. Za procjenu mehanizma (e) pri čemu VSLizvršile svoje zaštitne učinke, kvantificirati smo ekspresiju gena od nekoliko pro-upalnih citokina, proteina i izražavanja želudac mucin-MUC5AC, regulatorni citokina IL-10, COX-2 i razne rasta čimbenici. Svih komponenti ispitivanih samo ekspresija proteina i produkcija VEGF povećana 332 puta na dan 7 u čirevima tkivima životinja koje su tretirane s VSL. Predvidljivo, životinje tretirane s VEGF neutralizacije protutijela značajno kasni čira na želucu rana u VSLtretiranih životinja. Ovo je prvo izvješće pokazati visoku učinkovitost probiotičke smjesu VSLu povećanju čira na želucu ozdravljenje. Probiotik djelotvornost bila je učinkovita pri višim koncentracijama VSLspecifičnim povećanjem ekspresije i proizvodnju angiogeneze promicanje faktora rasta, prvenstveno VEGF pregled}

Izvor:. Dharmani P, De Simone C, Chadee K (2013) probiotik mješavina VSLubrzava čira na želucu Iscjeljivanje Poticanje vaskularnog endotelnog faktora rasta. PLoS ONE 8 (3): e58671. doi: 10,1371 /journal.pone.0058671 pregled

Urednik: John Wallace, McMaster University, Kanada pregled

Primljeno: 29. listopada 2012. godine; Prihvaćeno: 7. veljača 2013; Objavljeno: ožujak 6, 2013 pregled

Copyright: © 2013 Dharmani et al. Ovo je otvorenog pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan

financiranja. Ovo djelo je podržan od strane grant od kanadskog zavoda za zdravstveno istraživanje (CIHR, KC). PD je financiran od strane kanadskog udruženja Gastroenterology-Axcan Pharma-CIHR istraživanje i Fellowship Award. U financijeri nisu imali ulogu u studiju dizajna, prikupljanja i analize podataka, Odluka o objavi, ili pripremu rukopisa

suprotstavljenih interesa. Autori imaju sljedeću interes. PD je financiran od strane kanadskog udruženja Gastroenterology-Axcan Pharma-CIHR istraživanje i Fellowship Award. To ništa ne mijenja pridržavanje autorovih svim PLoS ONE politika na razmjenu podataka i materijala. Pregled

Uvod pregled

želuca iscjeljivanje je spontana, komplicirano niz različitih mehanizama koji rade u tandemu s ispraviti neravnoteže između agresivni (npr kiselina, pepsin, proupalnih citokina i Helicobacter pylori pregled) i obrambeni faktori (npr, sluz, bikarbonat, protok krvi i faktori rasta) u želucu [1]. Proces uključuje ublažavanje agresivnih luminalnih faktora, punjenje sluznice defekt s proliferirani i migraciju epitelne stanice i vezivno komponentu kako bi se rekonstruirati sluznice arhitekturu [2]. Mi i drugi [3], [4], [5] pokazali su djelotvornost i navodni mehanizam različitih lijekova i ljekovitog bilja u povećanju proces spontanog zarastanja čira na raznim in vivo
modela želuca. Međutim, studije koje su procjenjivale učinak probiotika na bolesti gornjeg probavnog sustava (GI), te posebno na želučani ulkusa ograničeni usprkos opsežnom radu i obećavajućim rezultatima ove terapijska opcija za druge GI bolesti uključujući upalnu bolest crijeva [6], [ ,,,0],7], [8], [9]. pregled

Probiotici su živi mikroorganizmi koji pored hranjivih vrijednosti podariti nekoliko zdravstvenih koristi kada je predviđeno dovoljno količine. VSLprobiotik preparat koji sadrži mješavinu osam bakterijskih vrsta, četiri vrste actohacilli pregled ( acidophilus pregled, bulgaricus pregled, casei pregled, plantarum pregled), tri vrste bifidobakterija pregled ( brevisom pregled, infantis pregled, longum pregled) i jedan Streptococcus pregled vrsta, koja je pokazala da se klinički učinkovite u sprječavanju flare-up od vatrostalnog džepovi [8] i dovesti do remisije ulceroznog kolitisa [9]. Mi smo ranije pokazali da je VSLili njegovi luče proizvodi su jaki Kolonski mucina sckrctagogi In vitro
na ljudskim stanicama epitela kolona i kolona studija petlja u životinjskim modelima [10]. Međutim, utjecaj probiotika tretmana na akutnog oštećenja želuca povezane s želučanog ulkusa nije dobro istraženo. Glavni razlog je da je crijevo pruža niz nepovoljnih fiziološkim uvjetima kao što su kiseli pH, probavni enzimi, žučne kiseline i mehanička naprezanja koja prigušuje opstanak i rast probiotičkih mikroorganizama. Međutim, tretman s dovoljno količine više probiotičkih mikroorganizama može prevladati ovo ograničenje. Postoji nekoliko izvješća pojedinih probiotičkih bakterija, uključujući Lactobacillus rhamnosus pregled [11], L. gasseri pregled [12], L. acidophilus pregled [13] i Bifidobacterium pregled, [14] dodjelu zaštita od želučanog ulkusa u promociji zarastanja čira na različitim in vivo
modela ulkus. Međutim, studije o utjecaju probiotičkih bakterija na povećanje H. pylori pregled iskorjenjivanje su nedosljedni u svojim nalazima [14], [15]. Nedavna studija pokazala je da adekvatna nosa s mješavinom 8 probiotika sojeva može iskorijeniti H. pylori pregled [16]. Trenutačno, to još uvijek nije poznato hoće li mješovite probiotičke bakterije su učinkovitiji od pojedinačnih sojeva u promociji zarastanja čira. U ovom istraživanju, istražuju se stanične mehanizme kojim VSLprobiotik mješavina nadopunjeni čira na želucu rana u štakora. Pregled

Materijali i metode pregled

Životinje pregled

Šest tjedana stari mužjaci Sprague-Dawley štakora težine između 150 i 200 g (Charles River, St. Constant, Quebec) su smješteni u kavezima 2 po skupini na konstantnoj sobnoj temperaturi od 12 sati svjetla i tamnih cikluse i hranjeni standardnom rodent hrani i vodi ad libitum pregled. Nakon perioda prilagođavanja od 7 dana, štakori su nasumično raspoređeni u eksperimentalnih i kontrolnih grupa za indukciju čira na želucu. Pokusima na životinjama, Etičko povjerenstvo Sveučilišta u Calgaryju odobrio ovu studiju. Pregled

Eksperimentalni dizajn pregled

Da bi se odredio utjecaj VSLprobiotik smjesu na želučanog ulkusa rana i ublažavanje uvredljivih luminalnih faktora (pro -inflammatory citokini) i promicanje zaštite stanice obrambenih čimbenika (regulatornih citokina, mucin i faktora rasta), štakori su bili podijeljeni u tri eksperimentalne skupine. Kontrole su životinje tretirane su nosačem nakon indukcije čira i druge dvije skupine koje su primile bilo nisko (6 × 109 bakterija /životinji /dnevno) ili visoku (1.2 × 1010 bakterija /životinji /dan) doza VSL 3 #. Životinje su žrtvovane na dan 3, 7 i 14 vozila ili VSLtretmana (za obrazloženje, vidi poglavlje o želučanog ulkusa indukcije i VSLtretmana). Korišteni su je ukupno 18 životinja za svaku vremensku točku ( N pregled = 6 za svako ispitivanje /vremenskoj točki), a istraživanje je učinjeno u tri primjerka. Da se istraži djelovanje protiv vaskularnog endotelnog faktora rasta (VEGF) na želučane zarastanja čira, neutralizirajuća protutijela protiv VEGF su korišteni. U ovom eksperimentu, korištene su četiri skupine. Nakon indukcije ulkusa, kontrolna skupina je primila samo vehikl. Liječenih grupa uključuju štakora s neutralizirajućim VEGF protutijelo, štakori koji su primili visoku dozu VSL(1.2 × 1010 bakterija /životinji /dnevno) se zajedno s kontrolnom IgG antitijela i štakora koji su dobili visoku dozu VSL(1.2 × 1010 bakterije /životinji /dnevno), zajedno s neutralizirajućim VEGF antitijela. Grupe antitijela tretirani (IgG i neutralizira VEGF antitijela) su dobili antitijela u dozi od 10 mg /kg tjelesne težine (za opravdanja, vidi dio o liječenju antitijela VEGF neutralizirajuće). Životinje su žrtvovane cervikalnom dislokacijom nakon 3 dana, 7 i 14 nakon anti-VEGF terapije. Korišteni su ukupno 24 životinja za svaku vremensku točku (n = 6 za svako ispitivanje /vremenskom intervalu). pregled

Želučani ulkus Indukcija i VSLtretmana pregled

kronične želučanog ulkusa su potaknuti eksperimentalno štakora kao što je opisano [17]. Pod anestezijom s pentobarbitonom (35 mg /kg tjelesne težine, i.p.), trbuh je otvorio reza. Plastična cijev od 6 mm, otvorena na oba kraja primijenjen je čvrsto seroznog površinu prednjeg zida želuca neposredno blizu sekundarnom žlijezda područje. Na površinu želuca, 60 ul 40% -tne octene kiseline izlije kroz cijev 90 sekundi. To je proizvelo hitnu nekrozu cijele sluznice i pod-sluznica unutar područja na kojem se primjenjuje octene kiseline. ostaje na površini octena kiselina se zatim obrisati sterilnom filtar papir i otvorene abdomen zatvoren. Prethodno smo pokazali da taj postupak proizvodi histološki dobro karakterizirani čireva unutar 3 dana nakon izlaganja octene kiseline i liječi potpuno tijekom 3 tjedna bez perforacije ili penetracije do okolne organe [3] -. [4] pregled

liječenje VSLna niskim (6 × 10 ^{9 bakterija) i visoke doze (1,2 × 10 10 bakterija) se temelje na rezultatima prethodnih studija pomoću pet različitih doza VSL(1,5 × 10 9, 3 × 10 9, 6 × 10 9, 1,2 × 10 10 i 2,4 × 10 10 bakterija /životinji /dan, pojedinačno). VSLdoze 1,5 × 10 9 i 3 × 10 9 bakterija /životinji /dan nisu pronađeni učinkoviti u poticanju čira na želucu ozdravljenje, dok je učinak doze od 2,4 × 10 10, bakterija /životinji /dan na želučani ulkus ozdravljenja nije se značajno razlikuje od 1,2 × 10 10 bakterija /životinji /dan (Slika S1). Liječenje s VSLje počelo kada ulkusi su potpuno razvijen na 3 dana nakon primjene octene kiseline; to se smatra kao dan 1 tretman za narednih 14 dana. PH različitih koncentracija VSLje bio 7,0. Životinje su žrtvovane na dan 3, 7 i 14 nakon VSLliječenja. Čirevima i ne-čirevima površine svake životinje je isprana s ledeno hladnim fosfatnim puferom i stavljena na led tri poprečnih presjeka su skupljene. Dva Presjeci su smrznuti u tekućem dušiku i pohranjeni na -70 ° C za izolaciju RNA i pripremu proteina. Treći presjek odmah fiksirani u 10% neutralni puferirani formalin za histološku analizu. Pregled}

Procjena veličine čira, postotak ozdravljenja i histološki pregled Netlogu

ukupne čir površine i postotak zarastanja čira u različito vrijeme objaviti tretmani su određene u štakora želucu rezanjem duž veće zakrivljenosti i ulkusa (mm ^{2) područje mjerene. Dvije različite osobe izmjeri ulkus područje na slijep način. Postotak liječenje izračunat je kao:}

histološka istraživanja provedena su u skladu s prethodno opisanim postupkom [18]. Ukratko, ulkus krater svakog želuca secira i fiksirana preko noći u 10% neutralno puferirani formalin, a zatim postupno dehidriran u etanolu i uklopljene u parafin, koristeći neoclear kao intermedijer otapala. Dijelovi 6 um dobiveni su u automatizirani mikrotomu. Čirevima sekcije su obojene s hematoksilinom i eozinom (H &E) za histološki pregled za vrijeme liječenja. Mikroskopski H &E Tkiva su prijavili kako pokazuje: normalan izgled, blage infiltrati upalnih stanica u lamina propria sluznice, sa ili bez ili samo plitke erozije, odnosno dubinske erozije i ulceracije pregled

Kvantitativna u realnom vremenu. PCR pregled

kvantitativni PCR u realnom vremenu provedena je za procjenu promjena u ekspresiji gena koji kodiraju za sekretornu mucina (MUC5AC), ciklooksigenaza-2 (COX-2), upalnih (TNF-a i IL 1β) i regulacijski (IL-10 i TGF-β), citokini i faktor rasta vaskularnog endotela (VEGF), transformirajući čimbenik rasta-beta (TGF-P) i epidermalni faktor rasta (EGF). Ukupna RNA je ekstrahirana iz čirevima i ne-čirevima tkiva sa TRIZOL reagensom (Invitrogen). Prinos i čistoća RNA određena je spektroskopske analize. 2 ug RNA je reverzno prepisana korištenjem M-MLV reverzne transkriptaze (Invitrogen) prema uputama proizvođača. Jedan ul cDNA se koristiti za real-time PCR (Corbett Research). Realnom vremenu početnici korišteni sa specifičnom temperaturom žarenja su prikazani u Tablici 1. povećavanje provedeno s Qiagen-a Quantitect SYBR Green PCR korištenjem slijedećih uvjeta vožnje: 94 ° C održati 15 min, nakon čega slijedi 40 ciklusa denaturacije na 94 ° C ° C 20 sekundi, zagrijavanje na odgovarajući temperature za 30 sekundi i proširenje na 72 ° C tijekom 30 s. Specifičnost pojačanja provjerena je analizom taline krivulje. Izraz mRNA različitih gena normalizirana protiv GAPDH i preklopite promjene preko kontrola je određena u skladu s ddCt metode [19]. Pregled

Proteini razine VEGF, TGF-beta i EGF u homogenatu želučanog tkiva pregled

Želučani tkiva su homogenizirani u hladnog fosfatnog pufera (PBS, pH 7,4) upotrebom Polytron homogenizatora. Homogenat se potom tkiva centrifugirani na 20.000 × g tijekom 20 minuta na 4 ° C da se dobije bistri supernatant i koncentracije proteina mjerene pomoću BCA (bicinkroniničnoj kiselina) kit. Razine proteina VEGF, TGF-P i EGF u homogeniziranim želučanog tkiva iz oba čirevima i ne-čirevima sluznicu su mjereni s ELISA korištenjem kitova prema protokolu proizvođača (štakor VEGF ELISA Kit, Ray Biotech; štakora TGF-P kit, eBioscience i rat EGF ELISA kit, Uscn Life Science Inc.). VEGF, TGF-β i EGF razina izražava se kao pg /mg tkiva. Pregled

Učinak neutraliziranje anti-VEGF protutijela na želučani ulkus ozdravljenja izazvana VSLpregled

Da bi se procijenila učinak neutralizirajućih anti-VEGF protutijelo na želučanu zarastanja čira promiče VSL, četiri skupine životinja su se naime, kontrolu neutraliziranja VEGF antitijela (R &D Systems), VSLvisokim dozama + IgG (izoforma antitijelo, R & D sustavi) i VSLvisoka doza + neutraliziranja VEGF antitijelo (R &D systems). U preliminarnim pokusima, tri doze za neutralizaciju VEGF antitijela (5, 10 i 20 ug /životinji /dan; ip) su testirani na životinje koje su primile visoku dozu VSLza 14 uzastopnih dana i doze od 10 ug /životinji /dnevno Utvrđeno je da se značajno smanjuje liječenje i odabran je za korištenje na svim slijedećim eksperimentima. Životinje su žrtvovane na dan 3, 7 i 14 dana nakon VSL+ antitijela liječenja. Želučani čir područje mjerena je histološko ispitivanje, kvantitativni PCR u realnom vremenu, a ELISA temelju analiza proteina je provedena kako je gore opisano. Pregled

Statistička analiza pregled

Rezultati su izraženi kao prosjek ± SEM. Značajnost razlike između kontrole i VSLliječene skupine bile su određene pomoću Kruskal-Wallis test s Dunns post-testa za usporedbu određene grupe. Izbor neparametrijskog testa (Kruskal-Wallisov test, a) umjesto parametarskog testa (analiza varijance, ANOVA) temelji se na činjenici da je barem jedna od skupina u svima, osim tri usporedbe je ne-Gaussian. Za održavanje dosljednosti, Kruskal-Wallis test je korišten za sve usporedbe. Sve statističke analize provedene su pomoću Graph Pad INSTAT softver. P pregled vrijednost > 0.05 je smatrana značajnom pregled

Rezultati

VSLprobiotik mješavina ubrzava želuca ozdravljenje pregled

Nakon seroznog aplikacije octene. kiselina 100% životinja razvila želučanog ulkusa nakon 3 dana. Nakon toga, želučanih čireva postupno ozdravi do 14. dana (sl. 1a). Kako bi se utvrdilo da li je probiotsko smjesa VSLmože ubrzati želučanog čira rana, životinje se tretira s bilo visokim ili niskim dozama VSL, počevši na dan 3, kada čirevi u cijelosti razvijen za sljedećih 14 uzastopnih dana. Kao što je prikazano na slici 1 /B, zarastanja čira na dan 3 obrade nije bila statistički značajna u bilo tretiranim skupinama kontrolu ili VSL. Nakon toga, bilo je napredovala povećanje zarastanja čira odražava smanjenjem području čir na dan 7, životinje koje su liječene ili niža (P = 0,07) ili visoko (p = 0,003) doze VSLu usporedbi s netretiranim kontrolama ( Sl. 1a). Konkretno, VSLna visokim dozama za 14 dana dovelo do potpunog zarastanja čira na -50% od životinja (sl. 1 a), bez znakova s ​​čirevima sluznice. U preostalih životinja došlo je do značajnog obnova površine epitela i opsežnim regeneracije tkiva (Sl. 1b). A VSLpruža značajnu povećanje zarastanja čira, liječenju visokih doza (% liječenje bio 57% i 84% na dan 7 i 14, redom) značajno nadmašuju nizak tretmana doze (% rana bila 30% i 57% na dan 7 i 14 redoslijedu, Sl. 1a). Budući da je, dan 3 tretmana ne pokazuju značajne razlike u zarastanja čira za kontrolu i VSLtretiranim skupinama, svi rezultati u narednim poglavljima prikazane su za 7 i 14 tretmana dana. Pregled

VSLtretmana potiče popravak tkiva u čirevima želučane sluznice pregled

H &E bojenje otkriva različite histološke znakove ozdravljenja među različitim skupinama. Na dan 14, slična našoj bruto nalaza u mjerenju čir područja, kontrola štakori pokazali minimalnu popravak. Tu su smanjene upalne izlučevine, minimalni opseg regeneraciju sluznice sa smanjenom veličinom čir kratera. Nismo promatrati mnogo žljezdani organizaciju kontrolnih štakora (Sl. 2a). Međutim, kod životinja koje su tretirane s visokom dozom VSLkoje su pokazale najveću rana kod redukcije na veličini površine ulkusa, bilo je obnova epitel sluznice (re-epitelizaciju) i nekoliko upalnih stanica. Kao što je prikazano na slici 2c, sekretorni žlijezde također je dogovoreno. Procjena ulcerisana tkiva u VSLniske doze tretirane skupine pokazao površinski remodeliranje sa skromnim upalnih eksudata i dovršavanje re-epitelizacije sluznice. Pravilna organizacija žlijezde također je viđen na nekim mjestima (Sl. 2b). Pregled

Utjecaj VSLtretmana MUC5AC, COX-1/2 i pro-upalni i regulatornog gena citokina izraz pregled

sloj sluzi prvi obrambeni sloj sluznice želuca [20] koje igra važnu zaštitnu ulogu protiv kiseline i pepsina u želucu. Budući MUC5AC je najviše u izobilju izrazio sluzi u normalnom želučane sluznice, što se utvrdilo da li VSLtretmana utječe na ekspresiju MUC5AC gena u čirevima i /ili ne-ulcerated tkiva. Kao što je prikazano u tablici 2, iako ekspresija MUC5AC umjereno je povećana u VSLliječenih životinja, nije bila značajno različita između ispitivanih skupina. Prostaglandini su druga važna obrambena faktor presudan za održavanje želučane sluznice integriteta, čija sinteza je regulirano je enzim koji ograničava brzinu-ciklooksigenaze (COX), koji postoji u dvije izoforme COX-1 i COX-2 [21]. Konstitutivno izrazio COX-1 također je utvrđeno da je nepromijenjena u čirevima i ne-ulcerated tkiva dok se ekspresija COX-2 bila je značajno viša u VSLvisoka doza tretira grupe na dan 7, ali ne i na dan 14 (Tablica 2) . pregled

proupalnih citokina TNF-α i IL-1β su pokazali da imaju važnu ulogu u patogenezi želučanog čira pokretanjem rani upalni proces [22], a regulatornim citokinom IL-10 poznato je da bi se prigušilo stvaranje TNF-a [23]. Ekspresija oba TNF-a i IL-1 gena pronađen je povišen u čirevima tkiva u tri skupine životinja. Međutim, VSLtretmana ne utječu na ekspresiju IL-1 i IL-10, a neznatno smanjio ekspresiju TNF-a u čirevima tkiva u usporedbi s liječenjem vozila (tablica 2). Pregled

VSLliječenje stimulira produkciju faktora rasta

uloga faktora rasta VEGF, TGF-p i EGF u angiogenezu i migracije epitelnih stanica i proliferacije u želučanom zarastanja čira je dobro dokumentirana [24], [25]. Kao što je prikazano na slici 3, došlo je do značajnog porasta VEGF (P < 0.001) ekspresije gena u čirevima tkivima na dan 7 u životinja tretiranih s visokim ili niskim dozama VSLu usporedbi sa životinjama koje su tretirane samo nosačem (97 i 332 struko povećanje ekspresije gena u Visniske i visoke doze tretiranih štakora, respektivno). Porast ekspresije VEGF gena također je vidljivo na dan 14 i bio je istaknut u niskim dozama VSLtretiranih štakora (sl. 3, vrh). VEGF ekspresija nije promijenjena kod ne-ulceriran tkivima svih ispitivanih skupina. VEGF sadržaj proteina u homogenatu želučanog tkiva potvrdila rezultate podataka o ekspresiji gena VEGF (sl. 4, top). Slično tome, TGF-β i EGF (Sl. 3 srednje i donje slike) gena i proteinskih razina (sl. 4 srednji i donji paneli) su bile značajno povišene u VSLliječenih životinja, mada je promjena manje izražen s onom zabilježenom za VEGF . pregled

VEGF neutraliziranje antitijela slabi VSL-posredovane čira na želucu ozdravljenje pregled

na temelju podataka u slici 3, gdje VEGF značajno je porastao u odgovoru na VSLtretmana koji poboljšane čira na želucu ozdravljenje ( Sl. 1), nagađa se da je VSLzaštitni učinak i mehanizam djelovanja bio je ovisan o VEGF. Da tu životinje se tretira s velikom dozom VSL+ VEGF neutralizirajuća antitijela. Kao što je prikazano na slici 5, životinje tretirane s VEGF neutralizirajuće antitijelo smanjen zarastanja čira do 34% i 41%, odnosno, od 7 do 14 dana u usporedbi sa životinjama liječenih visokom dozom VSL+ IgG ili nosačem kao kontrolom (Sl. 5a). Patologija (Sl. 5b) pokazala je da je mukozni arhitektura manja netaknuta u VSL+ VEGF neutralizirajuće antitijelo tretirani štakori od VSL+ IgG tretiranih štakora od 7 do 14 dana liječenja. Životinje tretirane s VEGF neutralizacije protutijela sama pokazala smanjenje zarastanja čira u usporedbi s kontrolnim životinjama, međutim, rezultati nisu bile statistički značajne (Slika 5a). Pregled

Rasprava pregled

Ovo je prva sveobuhvatna studija koji pokazuju da je probiotik mješavina VSLmogu povećati zacjeljivanje induciranog želučanog ulkusa octene kiseline. Naši rezultati pokazuju da VSLdjelovao na način ovisan o dozi, da se poveća na ekspresiju i proizvodnju VEGF, što je faktor rasta je poznato da potiče angiogenezu i ozdravljenja. VEGF je od ključne važnosti u čira na želucu ozdravljenje kao tretman sa VEGF neutralizacije protutijela značajno kasni u procesu ozdravljenja u VSLtretiraju životinje. Pregled

preventivna i terapijska uloga probiotika dobro je izvijestio, ne samo u slučaju ulceroznog kolitisa i Crohnova bolest [8] - [9], ali iu uvjetima različite poput spaljenih rana i rane od metka [26] - [27]. Međutim, postoji ograničen broj studija procjenjuje utjecaj probiotika liječenje na želučanog ulkusa prvenstveno zbog nepovoljnih fiziološkim uvjetima želuca koji umanjuje opstanak i rast mikroorganizama. Zanimljivo, jedna studija [28] pokazalo je da bakterijska kolonizacija javlja brzo nakon indukcije ulkusa, a posebno, kolonizacija određenih bakterija uključujući Lactobacillus pregled mogao značajno poboljšava čira na želucu ozdravljenje. Druge studije su pokazale da probiotičke bakterije Lactobacillus
vrste, Saccharomyces boulardii pregled, Escherichia coli soja pregled Nissle 1917 su učinkoviti u sprečavanju i liječenju akutne želučane oštećenja povezanih s octenom kiselinom [ ,,,0],12], stres [13], aspirin [29], etanol [30], ibuprofen [31] i indometacin [32] inducirana želučanih čireva. Kod ljudi, dokazi pokazuju da je redovito konzumiranje Lactobacillus pregled -containing proizvod štiti integritet želučane sluznice barijera protiv indometacin [32], dok su drugi [15] su izvijestili da je učinak korištenja probiotičkih bakterija zajedno s trostrukom terapijom nema bolje nego koristeći trostruka terapija sama za liječenje želučanih čireva. U nedavnom izvješću [13] predlaže novi simbiotske pristup za liječenje gdje probiotik ( L. Acidophilus pregled) i ekstrakt đumbir su istovremeno i pojedinačno upakiranog /imobiliziran alginata plutajuće kuglice značajnim utjecajem želučanog čira rana u štakora. Alternativni pristup je da koristite drugu količinu multi soj probiotika za promicanje ulkusa ozdravljenje kao što IBD istraživanja pokazala da je multi strain probiotici su učinkovitiji od monostrain probiotika [33]. Naši rezultati potvrđuju ove nalaze pomoću VSL, mješavina osam bakterijskih vrsta koje je vrlo učinkovit u povećanju epitela migraciju stanica i proliferacije, angiogenezu i proizvodnju granulacije tkiva što dovodi do brže liječenje želučanih čireva. Pregled

Da rješavanje mehanizme kojim VSLubrzanog čira na želucu liječenje koje kvantificiranja uvredljivog lumena i /ili promicanja obrambene faktore. Prethodne studije su pokazale da probiotici pokazuju različite mehanizme uključujući stabilizaciju mukozni degranulacije mastocita [29], indukcija Siga proizvodnje [29], smanjenje stanične apoptoze omjeru stanične proliferacije prema u želucu [11], povećati transepitelne otpornost [34 ] i promoviranje angiogeneze [11] posredovati čira na želucu ozdravljenje. Ovdje ćemo pokazati da VSLpromovira čira na želucu ozdravljenje povećanjem ekspresije faktora rasta, uglavnom VEGF s nekoliko nabora. VEGF je temeljno angiogenski faktor koji stimulira stvaranje granulacijskog tkiva i novih mikro posuda preko angiogeneze [24], koji je zatim ubrzava želučani i duodenalni ulkus rana [35]. Do danas, postoji samo jedan izvještaj [11] koji pokazuju L. rhamnosus GG pregled može regulirati proteina VEGF tijekom zarastanja čira. U našim istraživanjima, otkrili smo da su na dan 7 liječenja visoke doze VSL, VEGF ekspresija je povećana 332 puta u usporedbi s kontrolnim životinjama. Ovo povećanje nije bio viđen kao vidljivo na dan 14 tretmana, prije svega zato što je većina ulkusa već ozdravljali su u to vrijeme u VSLtretiranih štakora. Za usporedbu, niska doza VSLtretirane životinje i dalje pokazuju jaku ekspresiju VEGF na obje 7 do 14 dana kao čir i dalje se izliječi. Završava VSL-induciranog želučanog čira rana tretiranjem životinja s anti-VEGF neutralizirajuće antitijelo je potvrdila da VSLproširen želučani čir zarastanje preko VEGF-om posredovane mehanizmom. Promatranje sniženim zarastanja čira kod životinja tretiranih VEGF neutralizirajuće protutijelo u usporedbi s kontrolama i podrška uloge VEGF spontano želučanom zarastanja čira [35]. Važno je, iako VEGF je poznato da se gore regulirana COX-2 izvedena PGE _{2 [36], pronašli smo do manjih promjena u ekspresiji COX-2 u VSLtretiranih štakora sugerirajući da VSLinduciranu ekspresiju VEGF nisu COX-2 posredovanog. pregled}

također smo otkrili da je čimbenike rasta EGF i TGF-β značajno su se regulirati u čirevima tkivima VSLtretiranih štakora. TGF-β je poznato da utječu izvanstanični matriks koji pretvara proces epitelnih stanica rekonstituciju i gasi, a EGF pospješuje se i epitela povrata i proliferaciju u GI sustavu [25]. Zanimljivo, VSLje utvrđeno da je na snazi ​​samo u promociji faktora rasta, a ne na obrambeni faktora Muc5A i COX-2. To je još uvijek moguće da VSLmože utjecati na druge obrambene faktore nisu analizirani u ovom istraživanju. Prethodno smo pokazali da VSLliječenje poboljšava kolona Muc2 /MUC2 lučenje mucina u debelom crijevu štakora i na humanim stanicama epitela kolona. VSLtretmana kod životinja također nije značajno smanjio ekspresiju proupalnih citokina, IL-1 i, u manjoj mjeri TNF-a. Oba od tih citokina, igraju kritičnu ulogu u formiranju gastričnih ulkusa pokretanjem ranoakutnog upalni odgovor [22]. Ovi rezultati potvrđuju nedavni izvještaj koji procijenjenu 13 probiotičkih sojeva na aspirin inducirani želučani ulkus ozdravljenja [29]. Trenutno, ne znamo koja bakterija specie (e) ili kombinacije u VSLprobiotik mješavina su odgovorni za čira na želucu ozdravljenje. Prethodne su studije pokazale da je multi soj probiotika (točnije, multi rod deformacija) su učinkovitiji od mono-istezanja probiotika [33]. Također je moguće da VSLsmjesa bude neutralna otopina (različite koncentracije VSLimaju pH vrijednost od 7,0) može utjecati na ozdravljenje želučane kiseline razrjeđivanjem kiselost želučanog soka. Međutim, podaci izneseni u ovom radu ne može zaključiti tu činjenicu, kao želučani sok kiselost nije bio mjeren. Ipak, VSLće imati samo kiselu razrjeđivanje i nije za neutralizaciju kiseline utjecaj na želučani sok, ako ih ima. U svim vjerojatnost, kiselina razrjeđivanje učinak VSLsamo bi pridonijeti sekundarnu ulogu u snažnoj citozaštitnu funkciji pokazao velikim regulaciji VEGF. Kao VSLse daju kao suspenzije stanica uživo, ova formulacija bi mogao upotrijebiti svoje zaštitne učinke kao živih mikroba, od strane njihovih metabolita, stanične stjenke komponenti i /ili sadržaja DNA ili sve od navedenog. Nismo izvodi eksperiment usporediti učinak živih mikroba i toplinom inaktiviranog probiotik mješavina za procjenu ovo pitanje, iako su prijašnja istraživanja pokazala da je toplina-ubijeno ili zračenja deaktivirane probiotičkih bakterija (u dozi slična onoj od živih mikroorganizama) nije uspio promicanje ulceracije rana [11], [12]. Nadalje, budući da nismo procjenjuje angiogenezu, na zaključak da VSLse promovira čira na želucu iscjeljenje angiogeneze se samo nagađa se temelji na VSLsposobnost da inducira robustan do regulaciju VEGF, što je od ključne važnosti u angiogenezu [35]. pregled

na kraju, naša istraživanja pokazuju da VSLprobiotik mješavina je vrlo učinkovit u poboljšanju čira na želucu ozdravljenje. Učinak je dominantno u visokim koncentracijama VSLmješavine te se postiže poticanjem mehanički ekspresiju i izlučivanje angiogeneze promicanja faktora rasta, prvenstveno VEGF. Ova studija utvrđuje mogućnost korištenja VSLprobiotik mješavina terapeutski povećati čira na želucu ozdravljenje. Pregled

popratne podatke
Slika S1. pregled Učinak liječenja različitih koncentracija VSLoctenom kiselinom induciranog želučanog čira rana kod štakora. [A] Područje ulkus (mm ^{2) nacrtane za životinje s octenom kiselinom induciranog želučanog čira na dan 3, 7 i 14 tretmana s vozilom (tamno plava), VSL1,5 × 10 9 bakterija /životinja /dan (svijetlo žuta), VSL3,0 × 10 9 bakterija /životinja /dan (tamno žuta), VSL6,0 × 10 9 bakterija /životinji /dan (svijetlo zelena), VSL1,2 × 10 10 bakterija /životinja /dan (tamno zelena), VSL2,4 × 10 10 bakterija /životinji /dan (svijetlo plava). Podaci su prikazani kao prosjek ± SEM od 6 životinja po danu.}