Observações por microscopia eletrônica de varredura do worm estômago ouriço, Physaloptera clausa (Spirurida: Physalopteridae) observações de microscopia eletrônica de varredura

do worm estômago ouriço, Physaloptera clausa
(Spirurida: Physalopteridae)
Abstract
Fundo
Physaloptera clausa
(Spirurida: Physalopteridae) nematóides parasitas do estômago do ouriço Europeia (Erinaceus europaeus
) e causar a perda de peso, anorexia e lesões gástricas. O presente estudo fornece a primeira descrição morfológica do adulto P. clausa
dos estômagos dos ouriços infectados, usando microscopia eletrônica de varredura (MEV).
Métodos
De junho a outubro de 2011, 10 p clausa
de ouriços europeus foram fixados, secos, revestidos e submetidos a exame SEM.
resultados
machos e fêmeas (22-30 mm e 28-47 mm, respectivamente) foram stout, com a cutícula refletindo sobre os lábios para formar uma grande collarette cefálica e mostrando estrias transversais finas em ambos os sexos. A boca foi caracterizado por dois grandes pseudolabia lateral, simples triangular, cada um munido com dentes externos e internos. No interior da cavidade bucal, um círculo de pequenos dentes internos pode ser observada. Ao redor da boca, também foram observados quatro sub-médio papilas cefálica e dois grandes amphids. A extremidade anterior de ambos os sexos masculino e feminino deu um poro excretor no lado ventral e um par de papilas cervical ciliada lateral. No verme fêmea, da vulva foi localizado no meio e os ovos foram caracterizados por superfícies lisas. A extremidade posterior do sem-fim fêmea foi stumpy com dois grandes phasmids na proximidade da sua extremidade. A extremidade posterior do macho teve grande asa lateral, juntaram-se anteriormente em toda a superfície ventral, com espículas subequal e diferentes, bem como quatro pares de perseguido papilas pré-cloacais, três pares de papilas pós-cloacal, e dois phasmids. Três papilas sessile ocorridas anteriormente e quatro posterior à cloaca.
Conclusões
O presente estudo SEM fornece a primeira caracterização morfológica em profundidade do adulto P. clausa
, e destaca semelhanças e diferenças com P. bispiculata P . herthameyerae, Heliconema longissimum Comprar e turgida turgida
.
Palavras-chave
Hedgehog nemátodo Physaloptera clausa
Morfologia microscopia eletrônica de varredura fundo
nematóides adultos do género Physaloptera
Rudolphi 1819, ocorrem no estômago e raramente no intestino delgado de anfíbios, répteis, pássaros e uma ampla variedade de mamíferos insetívoros e omnívoros em todo o mundo [1-6]. O primeiro registro de Physaloptera
de um marsupial era a de Ortlepp [1], que descreveu uma espécie de um perameles nasuta Perameles nasuta
Geoffroy, que morreu no zoológico de Londres. Ortlepp não o nome da espécie, devido à assimetria das papilas ventral caudal na cauda do macho era anormal [1, 7]. Em 1999, Norman e Beveridge redescrito o Physaloptera
espécies (P. peramelis
, P. thalacomys,
e Physaloptera
sp., Tanto Perameles nasuta Comprar e Isoodon macrourus
) em bandicoots (Marsupiais: Perameloidea) na Austrália [7]. As fêmeas adultas são ovoviviparous, eo ciclo de vida envolve insetos incluindo besouros, baratas e grilos como hospedeiros intermediários e répteis como hospedeiros paratênicos [8-13]. O parasita é geralmente firmemente ligado à mucosa do hospedeiro definitivo, a partir de onde se alimentam de sangue. Tem sido relatada [14] que os parasitas podem, ocasionalmente, alterar o seu local de ligação, portanto, provocando a formação de numerosas pequenas úlceras edematosos, e, consequentemente, a hemorragia, inflamação e aumento da produção de muco. infecções pesados ​​levar à anemia, fraqueza, anorexia, diarreia, caquexia e perda de peso. Diagnóstico assenta na observação de sinais clínicos e ovos do parasita nas fezes do hospedeiro vertebrado [14].
Physaloptera clausa
provoca lesões gástricas graves na hedgehog Europeia (Erinaceus europaeus
), e tem sido relatados de Israel, Itália, Alemanha, Turquia e Polónia [15-19]. Até o momento, há uma escassez de informações da morfologia das espécies dentro das famílias Physalopteridae e spiruridae [6, 20-30]. O presente estudo aborda esta lacuna no conhecimento, relatando a primeira descrição SEM de adulto P. clausa
dos estômagos dos ouriços infectados.
Métodos
ouriços europeus são mamíferos spiny que se tornaram populares como animais de estimação exóticos neste área. Estes animais desempenham um papel na transmissão de uma grande variedade de vírus, bactérias, fungos e parasitas, alguns dos quais têm importância zoonótica [31]. Por exemplo, sugere-se que pode ser ouriços série de Trichinella spp
em algumas partes do mundo [32]. Estes animais estão infectados por nematóides gastrintestinais. Um dos parasitas em ouriços é Physaloptera clausa
uma espécie comum na família de Physalopteridae. As fêmeas adultas são ovoviviparous e espécies de artrópodes agir como hospedeiros intermediários. Nos animais infestados infectados, grandes números de parasitas pode levar a fraqueza, caquexia, anemia, diarreia luz, e perda de peso. Além disso, P. clausa
pode servir como um vector de leptospirose fornecendo uma fonte de contaminação para animais e seres humanos [15]. Por isso, tanto hedgehog e P. clausa
pode ser importante para ser estudado.
De junho a outubro de 2011, doze carcaças (alguns foram encontrados mortos em fazendas e alguns foram mortos por veículos a motor na estrada) de ouriços europeus (6 mulheres e 6 homens) foram encaminhados para o Departamento de Patobiologia, na Faculdade de Medicina Veterinária da Universidade Urmia, Iran. exames parasitológicos e histopatológicos foram realizados especificamente para a coleção de nematóides do estômago. Na autópsia, foram observados congestionamento do sítio de fixação de nemátodos e edema, erosão e uma parede espessada estômago. Um total de 10 vermes (5 fêmeas e 5 machos) foram selecionados para o exame SEM. Os vermes foram lavadas em tampão de cacodilato de sódio a 2% (pH 7,2), e, em seguida, limpo com solução lactofenol (25% de glicerina, 25% de ácido láctico, 25% de fenol, 25% de água destilada). Os espécimes foram identificados como P. clausa
com base em características morfológicas, tais como arranjo cefálica; distância da vulva a partir da extremidade anterior da fêmea; número, tamanho e posição das papilas caudais do sexo masculino; ornamentação cuticular da parte ventral da cauda correio; forma e tamanho das espículas [2, 3, 33-37]. Os vermes foram posteriormente colocadas em 4% glutaraldeído e o examinou no Departamento de Patologia e Medicina Molecular, Universidade McMaster, no Canadá. Os nemátodos foram postos em fresco de glutaraldeido a 4% durante 2 h, pós-fixados em 1% de tetróxido de ósmio em tampão de cacodilato (pH 7.2) a 4 ° C durante 1 h e desidratadas através de uma série de concentrações de etanol crescentes (50, 75, 96 e 100%). Vermes foram, em seguida, secou-se com CO líquido 2 num aparelho de ponto crítico secador (Critical PointDrier, modelo no. 2800, Ladd Research Industries, Burlington, VT, EUA). Cada verme foi colocada sobre um topo de alumínio numeradas, o qual foi revestido com ouro em um dispositivo de pulverização catódica de revestimento de iões (Sputter Coater, modelo no. E5100, Polaron Instruments, EUA) e examinadas com um microscópio JEOL JSM-840 Scanning Electron operado a 20 kV . As fotografias foram tiradas com um sistema de aquisição digital para SEMs analógicos (GW Eletrônica, Norcross, GA, EUA).
Resultados
Todos os vermes removidos do estômago dos ouriços examinadas foram identificados como P. clausa
. Os vermes eram de cor branca, forte e a cutícula se refletiu sobre os lábios para formar uma grande collarette cefálica (Figures1A-C). Em torno da abertura bucal, quatro papilas cefálica e dois grandes amphids foram observados (Figures1B, C). A cavidade bucal, rodeado por uma parede de espessura, era cilíndrica e caracterizado por dois grandes pseudolabia lateral, simples triangular, cada um munido com dentes externos (Figura 1B) e internos (Figures1C, d). Figura 1 microscopia eletrônica de varredura mostrando extremidade anterior clausa Physaloptera feminino. A, papilas cefálica (setas finas), collarette cefálica (seta grossa) e papila cervical ciliados (CP). Barra = 150 um. B, pseudolabia Triangular lateral (LPL), dentes externos (T), um dos dois amphids (A), dois dos quatro papilas cefálica (CP) e collarette cefálica (estrela). Barra = 42,9 uM. C, Dois amphids (A), quatro papilas cefálica (CP), collarette cefálica (estrela), e um círculo de pequenos dentes internos dentro da boca (seta). Barra = 100 um. D, Maior ampliação do interior da boca (estrela), e pequenos dentes interiores (T). Bar = 5 mm.
Uma poro excretor e um par de papilas cervical ciliada lateral com um aglomerado de pequenas papilas foram observadas na superfície ventral da extremidade anterior de ambos os sexos masculino e feminino (Figures2A, C). A cutícula foi caracterizado por estrias transversais finas em ambos os sexos (Figures2B-D). Em um sem-fim fêmea, uma papila cervical ciliar anormal foi observado (Figura 2B). Todos os vermes fêmeas deu um único papila 589 uM a partir da extremidade anterior (Figura 2D). Figura 2 microscopia eletrônica de varredura mostrando extremidade anterior clausa Physaloptera feminino. A, ampliação Superior de papila cervical ciliados (CP), e um conjunto de pequenas papilas (P). Barra = 10 uM. B, Maior ampliação de uma papila cervical ciliar anormal (seta), e estrias transversais cuticulares (TS). Barra = 20 uM. C, ampliação Superior do poro excretor (PE), e estrias transversais cuticulares (TS). Barra = 20 uM. D, Maior ampliação de uma única papila (estrela), e estrias transversais cuticulares (TS). Bar = 7,5 mm.
As fêmeas foram 28-47 mm de comprimento e 1,3-1,6 mm de largura. A vulva da mulher foi localizado em frente do meio do corpo. O padrão da cutícula em torno da vulva diferiu das estrias transversais cuticulares (Figura 3A). Os ovos foram oval, com superfícies lisas e medido 38 × 52 uM (Figura 3B). A poro anal foi localizado na extremidade posterior (Figura 3C). Na extremidade posterior arredondada embotada, foram observados dois grandes phasmids subterminal, cerca de 222 uM a partir da extremidade da cauda (Figura 3D). Figura 3 microscopia eletrônica de varredura que mostra a fêmea clausa Physaloptera. Um, vulva (V), e a cutícula ao redor da vulva (estrelas). Barra = 20 uM. B, Egg (ovo). Barra = 3 um. C, pore Anal (AP). Barra = 75 uM. D, ampliação Superior de phasmids (Ph). Bar = 85,7 mm.
Os machos foram 22-30 mm de comprimento e 0.82-1.31 mm de largura. A cauda do sexo masculino trazia grande asa lateral, encontrando ventrally na frente da cloaca; as espículas foram subequal e diferente (Figura 4A, B, D). Enquanto a espícula direito foi caracterizado por uma ponta afiada (Figura 4B), o espícula esquerda tinha uma extremidade de espessura (Figures4A, D). Anteriormente e posteriormente para a cloaca, três e quatro papilas sésseis, respectivamente, foram observados (Figura 4D). A extremidade posterior do macho foi caracterizada pela presença de quatro pares de perseguido papilas pré-cloaca (Figura 4B-D), três pares de papilas pós-cloaca (Figura 4D-F) e dois fasmídeos (Figura 4E, F). Figura micrografias eletrônicas 4 de digitalização mostrando extremidade posterior clausa Physaloptera masculino. Um, asa caudal (CA) e espícula (S). Barra = 429 um. B, Caudal alae (estrela), quatro perseguido papilas precloacal (PRCP), três papilas postoacal (POCP) e cumes cuticulares (CR). Barra = 375 um. C, Maior ampliação de quatro das papilas precloacal perseguido (PRCP) e cumes cuticulares (CR). Barra = 75 uM. D, papilas Stalked precloacal (PRCP), papilas postcloacal (POCP), três (ponta de seta) e quatro (setas) papilas sessile diretamente ao anterior e posterior à cloaca, respectivamente, espícula esquerda (LS) e cumes cuticulares (CR). Barra = 100 um. E, Stalked papilas precloacal (PRCP), papilas postcloacal (POCP) e phasmids (Ph). Barra = 150 um. F, ampliação Superior de papilas postcloacal (POCP) e phasmid (Ph). Bar = 60 mm.
Discussão
O presente estudo SEM fornece caracterizações morfológicas de ambos os sexos masculino e feminino P. clausa
, pela primeira vez. A região cefálica, foram mostrados vulva, ovo, poro e phasmids anal da fêmea. No verme do sexo masculino, foram descritos detalhes morfológicos da extremidade posterior incluindo papilas pré-cloacais e pós-cloacal, papilas sessile, espículas, phasmids e cumes cuticulares. Além disso, foram discutidas semelhanças e diferenças com P. bispiculata, P. herthameyerae, Heliconema longissimum Comprar e turgida túrgidas
.
As estruturas cefálica de P. clausa
eram semelhantes aos de P. bispiculata
[22]. A boca do P. clausa
tem duas grandes pseudolabia lateral, simples triangular, cada um armado com dentes externos, com um círculo de pequenos dentes internos dentro da cavidade bucal; Em contraste, a extremidade cefálica de P. bispiculata
é em forma de cúpula, composto por dois lábios semicirculares lateralmente em torno da abertura da boca. Os lábios são achatadas na face interna e indivisível. Cada lábio carrega um par de papilas cefálica em forma de vírgula simetricamente localizado na superfície de uma cúpula hemi [22]. Da mesma forma a P. bispiculata
, para além da grande dente tripartida, vários pequenos estão presentes ao longo da borda interna de cada lábio de P. clausa
[22]. Em outro estudo SEM de P. herthameyerae
n. sp., a extremidade cefálica foi composta de duas pseudolips semicirculares, lateralmente em torno da abertura oral [27]. Cada lábio deu um par de papilas cefálica, três regiões porosas como circunscritas, com um padrão diferente da cutícula da superfície da porção anterior. As margens internas dos bordos foi caracterizado por um par de dobras cuticulares, com um dente tripartida prevista entre eles, cada um tendo um poro na superfície interna e um quarto dente externa [27]. Do mesmo modo, a abertura oral de um outro nemátodo Physalopterid, Heliconema longissimum,
está rodeado por dois pseudolabia lateral. Cada pseudolabium carrega dois grandes submediana papilas cefálica e depressões latero-terminais oval com uma pequena amphid lateral, situado na base de cada pseudolabium. Além disso, a superfície interna de cada pseudolabium é caracterizada por um dente triangular, e dente plana simples em cada extremidade dorsoventral [26]. As numerosas denticles sobre o lado interior da cavidade bucal de P. clausa
são semelhantes aos observados em turgida turgida
, um nemátodo parasita da Virgínia Didelphis virginiana
, relatada pela primeira vez por Matey et ai
. [23]. A função destas denticles é ainda pouco claro, se bem que uma função para a fixação à parede do estômago foi levantada a hipótese [38]. No presente estudo, foram observados dois amphids laterais. existem anfídios em uma variedade de formas e tamanhos, alguns provavelmente puramente quimio e alguns fotorreceptora, com uma glândula associada [39]. O tipo funcional dos amphids de P. clausa
ainda é desconhecido. Além disso, um par de papilas cervical ciliada lateral com um aglomerado de pequenas papilas foi observada na extremidade anterior de ambos P. clausa masculino e feminino.
As papilas cervical são frequentemente muito pequenos e discretos, o que levou à conclusão errônea que eles estão ausentes em algumas espécies. As papilas, cervicais conspícuos maiores variam em forma, dos apêndices finas, em forma de agulha a estruturas complexas com bordas posteriores denticulados. A posição, o tamanho e a forma das papilas do colo do útero são usados ​​como caracteres taxonómicos. Dada a sua estrutura e posição, é provável que eles agem como mecano-receptores [40], essenciais para a sua passagem através de um pequeno espaço [41].
A vulva de P. clausa
foi localizado em frente da meio do corpo. A abertura vulvar de P. bispiculata
está localizado na região anterior, posterior ao esófago [22], enquanto que a abertura da vulva de P. herthameyerae
foi 5,71-10,1 mm a partir da extremidade anterior [27]. Em H. longissimum
, da vulva está situado em 39-66% do comprimento do corpo a partir da extremidade apical, ao mesmo tempo que está localizado 1,14-1,36 mm a partir da extremidade posterior do corpo de P. obtusus
[24, 26]. A presença de ovos no sistema reprodutor masculino de P. bispiculata
foi descrito por Oliveira-Menezes et al.
Em 2010 [42]. Para o melhor de nosso conhecimento, este é o primeiro relatório de um nematóide physalopterid masculino abrigar ovos na região cloacal, ducto ejaculatório ou intestino. Foram observados vários ovos coladas com cimento para a abertura cloacal, usando microscopia eletrônica de varredura [42]. A microscopia de luz revelou que alguns machos tinham um número incontável de ovos embrionados no ducto ejaculatório, cloaca e também na parte posterior do intestino [42]. A provável explicação é que os ovos em desenvolvimento no útero feminino são bombeados pela fêmea ou sugado pelo macho à abertura cloacal e deste ponto para o ducto intestino e ejaculatório. O worm do sexo masculino podem ser incapazes de expulsar os ovos e um grande número foram encontrados nesses órgãos. Além disso, esta poderia ser uma adaptação importante para o parasita, por exemplo, os machos expulsos pelo hospedeiro pode transportar um grande número de ovos e espalhá-los para hospedeiros intermediários, quando ingerida por estes hospedeiros [42]. A vulva de T. turgida
está localizado na extremidade anterior do corpo, e como em P. clausa
, a cauda furo cónico uma abertura anal, com fasmídeos localizado posteriormente [23]. Phasmids estão envolvidos na avaliação da intensidade de um dado estímulo e ajudar o sem-fim de manter-se e estabilizar num ambiente adequado [41].
O número de papilas caudal do macho P. clausa
foi diferente daquela macho de P. bispiculata, P. e H. obtusus
longissimum
[22, 24, 26], mas semelhante à da p herthameyerae
[27]. Neste estudo, a cauda macho grande furo reunião asa lateral, ventralmente na frente da cloaca, enquanto três e quatro papilas sésseis foram observados anteriormente e posteriormente para a cloaca, respectivamente. Além disso, quatro pares de perseguido papilas pré-cloacais, três pares de papilas pós-cloacal, e dois phasmids estavam presentes. A extremidade posterior do macho P. herthameyerae
foi ventrally dobrados e a cutícula apareceu solto, formando asa caudal lateral. As estrias transversais do corpo encerrado em correspondência com a asa e as linhas de furo região ventral de estruturas de contas-like cuticulares, formando pequenas saliências que ladeiam a cloaca e os três papilas precloacal. O posterior área central para o segundo par de papilas pós-cloacal foi suave em direção à ponta da cauda. Os 21 papilas foram tipo botão. Três foram situado anterior da abertura de cloaca, enquanto um dos cinco pares de papilas pós-ventral, dois pares foram localizados em um posterior protuberância para a cloaca e três pares entre a cloaca e a extremidade da cauda. Quatro papilas pedunculadas foram observadas cada lado da cloaca, em conjunto com dois phasmids [27]. A extremidade posterior do macho H. longissimum
era espiral enrolada, suportado por quatro pares de gêmeos de pedunculate papilas pré-anal e seis pares individuais de papilas pós-anal, dos quais cada um dos quatro primeiros pares eram grandes, enquanto as de os dois últimos pares eram pequenos e sessile; um par adicional de menor papilas sessile pós-anal foram situado ventralmente ao nível do primeiro par de pós-anal. Cada papila caudal foi cercado por um anel constituído por numerosos cuticular, protuberâncias da papila-like [26]. No presente estudo, as espículas de P. clausa
foram subequal e desiguais; a espícula direito foi caracterizado por uma ponta afiada, enquanto a espícula esquerda por um fim engrossar. Espículas de H. longissimum
eram desiguais e desiguais, a espícula esquerda com uma extremidade pontiaguda distal ea metade distal alate exceto por uma ponta cónica; a espícula direita era mais amplo, em forma de barco, e afilado em direção à ponta distal [26]. A cauda do macho P. bispiculata
foi ventrally dobrados e a cutícula apareceu solto na região anterior para a cloaca, com duas dobras. Entre estas estruturas e a cloaca houve uma profunda transversal cuticular vezes [22]. As papilas caudal 21 botão-like também foram observados na extremidade posterior do P. masculino bispiculata
. Os phasmids, que foram bem delimitadas estruturas redondas com poros e saliências na sua superfície, foram localizados entre o quarto e quinto pares de papilas posteroventral [22]. Em 2001, Matey et al.
Especulado que o regime geral de papilas caudais masculino em T. turgida
é o mesmo que em P. praeputialis
, P. rara
, e P. bispiculata
[23]. A única característica do sexo masculino T. turgida
é a presença do nd ampla papila 22 caudal, que já havia sido observado por Gray e Anderson em 1982 [11], que o considerou uma papila sessile. A ampla papila pode representar um tipo distinto de estrutura sensorial [23]. Como P. rara
e P. bispiculata
, e em contraste com P. praeputialis
, T. phasmids turgida
tem emparelhados [11, 22, 43]. No presente estudo, o padrão da cutícula de P. masculino clausa
na região cloacal era diferente e coberta com pequenas cristas cuticulares. A ornamentação da superfície ventral da cauda do sexo masculino de T. turgida,
como P. bispiculata,
inclui três padrões diferentes que apresentam algumas semelhanças e diferenças com as características cuticulares da cauda do sexo masculino em outros physalopterids [22, . 23]
Conclusões
Os resultados de estudos anteriores e atuais indicam características que morfológicas; tais como arranjo cefálico; número de úteros; distância da vulva a partir da extremidade anterior da fêmea; número, tamanho e posição das papilas caudais do sexo masculino; ornamentação cuticular da parte ventral da cauda do sexo masculino; forma e tamanho das espículas são características importantes que devem ser considerados na classificação de physalopterids. As informações aqui fornecidas irá contribuir para a elucidação da biologia deste pequeno parasita conhecido. Embora, a função dos dentes externos e internos no pseudolabiae laterais triangulares, os numerosos denticles sobre o lado interior da cavidade bucal de P. clausa
, ainda é desconhecido, mas podem ter um papel importante na alimentação do nemátodo durante a sua fixação à parede do estômago, e causar dano tecidual grave como foi observado no momento da necropsia. Enquanto isso, estruturas como amphids, phasmids, papilas cervical ciliar, com um aglomerado de pequenas papilas, papilas caudais, papilas sessile e espículas aqui descrita, utilizando SEM, merecem mais investgation usando miscroscope eletrônica de transmissão (TEM) direcionado para determinar suas funções e ( ?) fornecem mais dados sobre a biologia do parasita.
Declarações
Agradecimentos
os autores expressam sua gratidão ao Professor Larry A. Arsenault, chefe da unidade microscópio eletrônico, Departamento de Patologia e Medicina Molecular, McMaster University, Canadá, por sua assistência no fornecimento de todas as instalações durante o estudo. Além disso, a ajuda preciosa do Sr. Ernie Spitzer, técnico chefe, e todos os técnicos na instalação microscópio eletrônico é reconhecido. Graças ao Sr. Seyed Ali Hosseini, Faculdade de Engenharia Elétrica da Universidade de Teerã, no Irã por sua ajuda sincera em tomar algumas micrografias. Os autores são particularmente em débito com Robin S. Houston, M.S., serviços de laboratório clínico, Parasitologia Clínica da Faculdade de Medicina Veterinária da Universidade da Califórnia-Davis, CA, EUA por seus comentários construtivos que melhoraram o manuscrito. Este estudo foi parte de uma tese de doutoramento do Dr. Tahmine Gorgani, e apoiado financeiramente pela Universidade de Urmia, Iran.
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Os autores declaram que têm interesses conflitantes contribuições
dos autores
TG:. examinaram os ouriços, removidos os vermes e executou processo parasitológico usando microscópio de luz. SN: concebido o projeto, transferiu as amostras para a Universidade de McMaster, no Canadá, e preparadas as amostras para estudo SEM, editado micrografias, e elaborou o manuscrito. AAF: participou na concepção do estudo e planeamento do trabalho. FAZER: participou na concepção do estudo, comentou em micrografias, elaborou o manuscrito, e revisou o papel. Todos os autores revisou e aprovou o manuscrito.

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