osservazioni microscopia elettronica a scansione del worm stomaco riccio, Physaloptera clausa (spirurida: Physalopteridae)

osservazioni microscopia elettronica a scansione del worm stomaco riccio, Physaloptera clausa
(spirurida: Physalopteridae)
Abstract
sfondo
Physaloptera clausa
(spirurida: Physalopteridae) nematodi parassitano lo stomaco del riccio europeo ( Erinaceus europaeus
) e causare perdita di peso, anoressia e lesioni gastriche. Il presente studio fornisce la prima descrizione morfologica degli adulti P. clausa
dallo stomaco dei ricci infetti, utilizzando la microscopia elettronica a scansione (SEM).
Metodi
Da giugno a ottobre 2011, 10 pag clausa
dal riccio europeo sono state fissate, essiccati, rivestiti e sottoposti ad esame SEM.
Risultati
maschi e femmine (22-30 mm e 28-47 mm, rispettivamente) erano robusta, con la cuticola che riflette sulle labbra a formare una grande collaretto cefalica e mostrando striature trasversali sottili in entrambi i sessi. La bocca è stato caratterizzato da due grandi, semplice pseudolabia laterali triangolari, ciascuno armato di denti esterni ed interni. All'interno della cavità orale, un cerchio di piccoli denti interni può essere osservato. Intorno alla bocca, sono stati osservati anche quattro papille cefalica sub-mediana e due grandi amphids. L'estremità anteriore sia maschile che femminile portava un poro escretore sul lato ventrale e un paio di laterali papille cervicale ciliato. Nel verme femminile, la vulva si trovava nel mezzo e le uova sono stati caratterizzati da superfici lisce. L'estremità posteriore del verme femminile era tozzo, con due grandi fasmidi in prossimità della sua estremità. L'estremità posteriore del maschio ha avuto grande alae laterali, unite anteriormente tutta la superficie ventrale, con spicole subeguali e dissimili, così come quattro paia di papille pedinato pre-cloaca, tre paia di papille post-cloaca, e due fasmidi. Tre papille sessili si è verificato anteriormente e posteriormente quattro alla cloaca.
Conclusioni
Lo studio attuale SEM fornisce la prima caratterizzazione morfologica approfondita degli adulti P. clausa
, e mette in evidenza somiglianze e differenze con P. bispiculata P . herthameyerae, Heliconema longissimum
e Turgida turgida
.
Parole
Hedgehog Nematode Physaloptera clausa
Morfologia microscopia elettronica a scansione Sfondo
nematodi adulti del genere Physaloptera
Rudolphi 1819, si verificano nello stomaco e raramente nel piccolo intestino di anfibi, rettili, uccelli e una vasta gamma di mammiferi insettivori e onnivori in tutto il mondo [1-6]. Il primo record di Physaloptera
da un marsupiale è stato quello di Ortlepp [1], che ha descritto una specie da un lungo naso bandicoot Perameles nasuta
Geoffroy, che è morto allo zoo di Londra. Ortlepp non ha nome della specie, perché l'asimmetria delle papille caudale ventrale sulla coda del maschio era anormale [1, 7]. Nel 1999, Norman e Beveridge riformulare la Physaloptera
specie (P. peramelis
, P. thalacomys,
e Physaloptera
sp. Da entrambi Perameles nasuta
e Isoodon macrourus
) in bandicoot (Marsupialia: Perameloidea) in Australia [7]. Le femmine adulte sono ovovivipari, e il ciclo di vita comporta insetti tra cui scarafaggi, scarafaggi, grilli e come ospiti intermedi e rettili come host paratenico [8-13]. Il parassita è di solito saldamente attaccata alla mucosa dell'ospite definitivo, da dove si nutrono di sangue. E 'stato riportato [14] che i parassiti possono occasionalmente cambiare il loro sito di attacco, causando quindi la formazione di numerose piccole ulcere edematose, e di conseguenza sanguinamento, infiammazione e maggiore produzione di muco. infezioni pesanti portare ad anemia, debolezza, anoressia, diarrea, cachessia, e perdita di peso. La diagnosi si basa spesso sulla osservazione dei segni clinici e uova di parassiti nelle feci dell'ospite vertebrato [14].
Physaloptera clausa
provoca gravi lesioni gastriche nel riccio europeo (Erinaceus europaeus
), ed è stato riportato da Israele, Italia, Germania, Turchia e Polonia [15-19]. Fino ad oggi, vi è una scarsità di informazioni della morfologia delle specie all'interno delle famiglie e Physalopteridae Spiruridae [6, 20-30]. Il presente studio affronta questa lacuna nella conoscenza riportando la prima descrizione SEM di adulti P. clausa
dallo stomaco dei ricci infetti.
Metodi
riccio europeo sono mammiferi spinosi che sono diventati popolari come animali domestici esotici in questo la zona. Questi animali svolgono un ruolo nella trasmissione di una grande varietà di virus, batteri, funghi e parassiti, alcuni dei quali hanno zoonosica importanza [31]. Ad esempio, si suggerisce che i ricci possono essere serie di Trichinella spp
in alcune parti del mondo [32]. Questi animali sono infettati da nematodi gastrointestinali. Uno dei parassiti a riccio è Physaloptera Clausa
una specie comune nella famiglia di Physalopteridae. Le femmine adulte sono ovovivipari e specie di artropodi agiscono come ospiti intermedi. Negli animali infestati infetti, un gran numero di parassiti possono portare a debolezza, cachessia, anemia, diarrea leggera, e perdita di peso. Inoltre, P. Clausa
può servire come un vettore di leptospirosi fornire una fonte di contaminazione per gli animali e gli esseri umani [15]. Quindi, sia riccio e P. Clausa
potrebbe essere importante da studiare.
Da giugno a ottobre 2011, dodici carcasse (alcuni sono stati trovati morti nelle aziende agricole e alcuni sono stati uccisi da veicoli a motore su strada) di ricci europee (6 femmine e 6 maschi) sono stati indirizzati al Dipartimento di Patobiologia, presso la Facoltà di Medicina veterinaria, Università di Urmia, Iran. esami parassitologici istopatologiche sono state effettuate appositamente per la raccolta di nematodi stomaco. All'autopsia, sono stati osservati congestione del sito di aggancio del nematodi ed edema, erosione e una parete dello stomaco addensato. Un totale di 10 vermi (5 femmine e 5 maschi) sono stati selezionati per l'esame SEM. I vermi sono state lavate in tampone cacodilato di sodio 2% (pH 7,2), e poi eliminati con la soluzione lattofenolo (25% di glicerina, acido lattico 25%, 25% fenolo, 25% di acqua distillata). I campioni sono stati identificati come
P. clausa in base a caratteristiche morfologiche quali la disposizione cefalica; distanza di vulva dalla estremità anteriore della femmina; numero, le dimensioni e la posizione del maschio papille caudale; ornamentazione cuticolare della parte ventrale della coda di posta; forma e dimensioni delle spicole [2, 3, 33-37]. I vermi sono stati successivamente messi in 4% glutaraldeide e il esaminati presso il Dipartimento di Patologia e Medicina Molecolare, McMaster University, in Canada. I nematodi sono stati messi in fresco 4% glutaraldeide per 2 h, alberino fissato in 1% tetrossido di osmio in tampone cacodilato (pH 7,2) a 4 ° C per 1 ora e disidratato attraverso una serie di concentrazioni di etanolo crescenti (50, 75, 96 e 100%). Worms sono stati poi asciugati con CO liquido 2 in un apparato punto critico più secco (Critical PointDrier, Modello n. 2800, Ladd ricerca Industries, Burlington, VT, USA). Ogni verme è stato posto su un mozzicone di alluminio numerata, che è stato rivestito con oro in un dispositivo di celle agli ioni di sputtering (Sputter Coater, Modello n. E5100, Polaron Instruments, USA) e ha esaminato con un microscopio JEOL JSM-840 Scanning Electron funzionare a 20 kV . Le fotografie sono state scattate con un sistema di acquisizione digitale per SEM analogici (GW Elettronica, Norcross, GA, USA).
Risultati
Tutti i vermi rimosso dallo stomaco dei ricci in esame sono stati identificati come P. clausa
. I vermi erano di colore bianco, corpulento e la cuticola si rifletteva sulle labbra per formare un grande collaretto cefalica (Figures1A-C). Intorno l'apertura buccale, quattro papille cefalica e due grandi amphids sono stati osservati (Figures1B, C). La cavità buccale, circondato da una parete di spessore, era cilindrica e caratterizzato da due grandi, semplice pseudolabia laterali triangolari, ciascuno armato con (Figures1C, D) denti esterni (Figura 1B) e interne. Figura 1 microscopio elettronico a scansione mostrano estremità anteriore del femminile clausa Physaloptera. A, papille cefalico (frecce sottili), collaretto cefalica (freccia spessa), e papilla cervicale ciliato (CP). Bar = 150 micron. B, triangolare pseudolabia laterale (LPL), i denti esterni (T), uno dei due amphids (A), due dei quattro papille cefalica (CP), e collaretto cefalica (stella). Bar = 42.9 micron. C, Due amphids (A), quattro cefalica papille (CP), collaretto cefalica (stella), e un cerchio di piccoli denti interni all'interno della bocca (punta di freccia). Bar = 100 micron. D, maggiore ingrandimento all'interno della bocca (stella), e piccoli denti interni (T). Bar = 5 micron.
Sono stati osservati un poro escretore e un paio di laterali papille cervicali ciliato con un gruppo di piccole papille sulla superficie ventrale della fine anteriore sia maschi che femmine (Figures2A, C). La cuticola è stata caratterizzata da striature trasversali sottili in entrambi i sessi (Figures2B-D). In un verme femmina, un'anomala ciliato papilla cervicale è stata osservata (Figura 2B). Tutti i vermi femmine portavano una singola papilla 589 micron dalla fine anteriore (Figura 2D). Figura 2 microscopio elettronico a scansione mostrano estremità anteriore del femminile clausa Physaloptera. A, maggiore ingrandimento di papilla cervicale ciliato (CP), e un gruppo di piccole papille (P). Bar = 10 micron. B, maggiore ingrandimento di un anormale papilla cervicale ciliato (punta di freccia), e striature trasversali cuticolari (TS). Bar = 20 micron. C, superiore di ingrandimento del poro escretore (EP), e striature trasversali cuticolari (TS). Bar = 20 micron. D, maggiore ingrandimento di una singola papilla (stella), e striature trasversali cuticolari (TS). Bar = 7.5 micron.
Le femmine erano lunghe 28-47 mm e largo 1.3-1.6 mm. La vulva femminile è situato di fronte al centro del corpo. Il modello della cuticola intorno alla vulva differiva dalle striature trasversali cuticolari (Figura 3A). Le uova erano ovali, con superfici lisce e misurati 38 × 52 micron (Figura 3B). Il poro anale era situato alla fine posteriore (Figura 3C). Alla fine posteriore arrotondata smussata, sono stati osservati due grandi fasmidi subterminali, a circa 222 micron dalla coda (Figura 3D). Figura 3 microscopio elettronico a scansione mostrano femminile Physaloptera clausa. A, Vulva (V), e la cuticola intorno alla vulva (stelle). Bar = 20 micron. B, Egg (uovo). Bar = 3 micron. C, poro anale (AP). Bar = 75 micron. D, maggiore ingrandimento di fasmidi (Ph). Bar = 85,7 micron.
I maschi erano lunghe 22-30 mm e largo 0.82-1.31 mm. La coda maschio portava grande alae laterale, incontro ventrale davanti cloaca; le spicole erano subeguali e dissimili (4A, B, D). Mentre la spicule destra è stato caratterizzato da una punta acuminata (figura 4B), il spicule sinistra aveva una estremità di spessore (Figures4A, D). Anteriormente e posteriormente alla cloaca, tre e quattro papille sessili, rispettivamente, sono stati osservati (Figura 4D). L'estremità posteriore del maschio è stata caratterizzata dalla presenza di quattro coppie di pedinato papille pre-cloacal (Figura 4B-D), tre coppie di papille post-cloacal (Figura 4D-F) e due fasmidi (Figura 4E, F). Figura microscopio elettronico di scansione 4 mostrano estremità posteriore del maschio clausa Physaloptera. A, alae caudale (CA), e spicule (S). Bar = 429 micron. B, Caudal alae (stella), quattro inseguito papille precloacal (PRCP), tre postoacal papille (POCP), e creste cuticolari (CR). Bar = 375 micron. C, maggiore ingrandimento di quattro delle papille precloacal pedinato (PRCP), e creste cuticolari (CR). Bar = 75 micron. D, Stalked papille precloacal (PRCP), papille postcloacal (POCP), tre (punta di freccia) e quattro (frecce) papille sessili direttamente al anteriore e posteriore a cloaca, rispettivamente spicule sinistro (LS), e creste cuticolari (CR). Bar = 100 micron. E, Stalked papille precloacal (PRCP), papille postcloacal (POCP), e fasmidi (Ph). Bar = 150 micron. F, maggiore ingrandimento di papille postcloacal (POCP), e phasmid (Ph). Bar = 60 micron
. Discussione
Lo studio attuale SEM offre caratterizzazioni morfologiche sia maschile che femminile P. clausa
, per la prima volta. La regione cefalica, sono stati mostrati vulva, uova, pori e fasmidi anale della femmina. Nel verme maschio, sono stati descritti i dettagli morfologici della fine posteriore compresa la pre-cloaca e post-cloaca papille, papille sessili, spicole, fasmidi, e creste cuticolari. Inoltre, le somiglianze e le differenze con P. bispiculata, P. herthameyerae, Heliconema longissimum
e Turgida
turgidi sono stati discussi.
Le strutture cefaliche di P. clausa
erano simili a quelle di P. bispiculata
[22]. La bocca di P. clausa
ha due grandi semplice pseudolabia laterale, di forma triangolare, ciascuno armato di denti esterni, con un cerchio di piccoli denti interni all'interno della cavità boccale; al contrario, l'estremità cefalica P. bispiculata
è a forma di cupola, composto da due labbri semicircolari lateralmente circondano l'apertura orale. Le labbra sono appiattite sulla faccia interna e indiviso. Ogni labbro porta una coppia di a forma di virgola papille cefalica simmetricamente situata sulla superficie di una cupola emi [22]. Analogamente a P.
bispiculata, oltre al grande dente tripartita, altri più piccoli sono presenti lungo il bordo interno di ciascun labbro di P. clausa
[22]. In un altro studio SEM di P. herthameyerae
n. sp., l'estremità cefalica era composto da due pseudolips semicircolari, lateralmente circonda l'apertura orale [27]. Ogni labbro portava un paio di papille cefalica, tre zone porose simili circoscritti, con un modello della cuticola diversa dalla superficie della porzione anteriore. I margini interni delle labbra è stato caratterizzato da una coppia di pieghe cuticolari, con un dente tripartita prevista tra loro, ciascuna recante un poro sulla superficie interna ed un quarto dente esterno [27]. Allo stesso modo, l'apertura orale di un altro nematode Physalopterid, Heliconema longissimum,
è circondato da due pseudolabia laterale. Ogni pseudolabium porta due grandi submedian papille cefalica e depressioni latero-terminale ovale con un piccolo amphid laterale situato alla base di ogni pseudolabium. Inoltre, la superficie interna di ciascun pseudolabium è caratterizzata da un dente triangolare semplice dente piatto a ciascuna estremità dorsoventrale [26]. I numerosi dentelli sul lato interno della cavità buccale di P. Clausa Quali sono simili a quelli osservati in Turgida turgida
, un nematode parassita del Virginia opossum Didelphis virginiana
, prima riportata da Matey et al
. [23]. La funzione di questi dentelli è ancora chiaro, anche se una funzione per il fissaggio alla parete stomaco è stato ipotizzato [38]. Nel presente studio, sono stati osservati due amphids laterali. amphids nematodi esistono in una varietà di forme e dimensioni, alcuni probabilmente puramente chemosensory e alcuni fotosensibile, con una ghiandola associata [39]. Il tipo funzionale dei amphids di P. clausa
è ancora sconosciuta. Inoltre, una coppia di laterali papille cervicali ciliato con un gruppo di piccole papille è stato osservato alla fine anteriore sia maschili che femminili P. clausa.
Le papille cervicale sono spesso molto piccoli e poco appariscente, che ha portato alla conclusione errata che sono assenti in alcune specie. I cospicui, papille cervicali più grandi variano per forma, dalle appendici sottili aghiformi di strutture complesse con bordi posteriori denticolati. La posizione, la dimensione e la forma delle papille cervicali sono utilizzati come caratteri tassonomici. Data la loro struttura e la posizione, è probabile che agiscano come meccano-recettori [40], essenziali per il loro passaggio attraverso un piccolo spazio [41].
La vulva di P. Clausa
si trovava davanti metà del corpo. L'apertura della vulva di P. bispiculata
si trova nella regione anteriore, posteriore per l'esofago [22], mentre l'apertura della vulva di P. herthameyerae
era 5,71-10,1 mm dall'estremità anteriore [27]. In H. longissimum
, la vulva è situato al 39-66% della lunghezza del corpo dall'estremità apicale, mentre si trova 1,14-1,36 mm dall'estremità posteriore del corpo di P. obtusus
[24, 26]. La presenza di uova nel sistema riproduttivo maschile di P. bispiculata
è stato descritto da Oliveira-Menezes et al.
Nel 2010 [42]. Per quanto a nostra conoscenza, questo è il primo rapporto di un nematode physalopterid maschio ospitare le uova nella regione cloacale, condotto eiaculatorio o dell'intestino. Sono stati osservati diversi uova incollato dal cemento per l'apertura della cloaca, utilizzando la microscopia elettronica a scansione [42]. La microscopia ottica ha rivelato che alcuni maschi avevano un numero incalcolabile di uova embrionate nel condotto eiaculatorio, cloaca e anche nella parte posteriore dell'intestino [42]. La spiegazione probabile è che le uova di sviluppo nell'utero femminile vengono pompati dalla femmina o aspirati dal maschio all'apertura cloacale e da questo punto al condotto intestino e eiaculatorio. Il worm maschio può non essere in grado di espellere le uova e un gran numero sono stati trovati in questi organi. Inoltre, questo potrebbe essere un adattamento importante per il parassita, ad esempio i maschi espulsi dal host può trasportare un gran numero di uova e diffonderli per ospiti intermedi quando ingeriti da questi host [42]. La vulva della T. turgida
si trova nella estremità anteriore del corpo, e come in P. clausa
, la coda conica portava un'apertura anale, con fasmidi situati posteriormente [23]. Fasmidi sono coinvolti nella valutazione dell'intensità di uno stimolo fornito e aiutano il verme di mantenersi e stabilizzare in un ambiente adatto [41].
Il numero di papille caudale maschio P. clausa
stato diverso da quello del maschio P. bispiculata, P. obtusus Comprare e H. longissimum
[22, 24, 26], ma simile a quella di P. herthameyerae
[27]. In questo studio, la coda maschio portava grande riunione alae laterale ventrale davanti cloaca, mentre tre e quattro papille sessili sono stati osservati anteriormente e posteriormente alla cloaca, rispettivamente. Inoltre, quattro paia di papille pedinato pre-cloaca, tre paia di papille post-cloaca, e due fasmidi erano presenti. L'estremità posteriore del maschio
P. herthameyerae era ventrale piegato e la cuticola è apparso sciolto, formando laterale alae caudale. Le striature trasversali del corpo interrotte, in corrispondenza con il alae ei ventrali righe regione foro di strutture tallone-come cuticolari, formando piccole creste che fiancheggiano la cloaca e tre papille precloacal. La zona posteriore centrale per la seconda coppia di papille post-cloaca era liscio verso la punta della coda. Le 21 papille pulsante-come erano. Tre erano situate anterior dell'apertura cloaca, mentre dei cinque paia di papille post-ventrale, due coppie erano situati su una protuberanza posteriormente alla cloaca e tre coppie tra la cloaca e l'estremità della coda. Quattro papille peduncolati sono state osservate ogni lato della cloaca, insieme a due fasmidi [27]. L'estremità posteriore del maschio H. longissimum
era spirale arrotolato, sostenuta da quattro coppie gemelle di peduncolata papille pre-anale e sei singole coppie di papille post-anale, di cui ciascuno dei primi quattro coppie erano grandi, mentre quelli della le ultime due coppie erano piccoli e sessili; una ulteriore coppia di piccole papille sessili post-anale erano situati ventralmente al livello della prima coppia post-anale. Ogni papilla caudale era circondato da un anello costituito da numerosi cuticolari, protuberanze della papilla simile [26]. Nel presente studio, le spicole di P. clausa
erano subeguali e dissimili; il spicule destra è stato caratterizzato da una punta acuminata, mentre il spicule sinistra da un fine addensato. Spicole di H. longissimum
erano disuguali e dissimili, la spicule sinistro con una forte punta Estremità distale e la metà distale alate ad eccezione di una punta conica; il spicule destra era, a forma di barca più ampio, e rastremato verso la punta distale [26]. La coda del maschio P. bispiculata
era ventrale piegato e la cuticola è apparso sciolto nella regione anteriore alla cloaca, con due pieghe. Tra queste strutture e la cloaca c'era una trasversale cuticolare piega profonda [22]. Le papille caudale 21 pulsante simile è stato osservato anche alla fine posteriore del maschio P. bispiculata
. I fasmidi, che sono stati ben delimitato strutture rotonde con i pori e urti sulla loro superficie, si trovavano tra il quarto e il quinto paia di papille posteroventral [22]. Nel 2001, Matey et al.
Ipotizzato che la disposizione generale del maschio papille caudale in T. turgida
è lo stesso che in P. praeputialis
, P. rara
, e P. bispiculata
[23]. La caratteristica unica di sesso maschile T. turgida
è la presenza del 22 nd ampia papilla caudale, che era già stato osservato da Gray e Anderson nel 1982 [11], che ha ritenuto una papilla sessili. L'ampia papilla può rappresentare un tipo distinto di struttura sensoriale [23]. Come P. rara
e P. bispiculata
, e in contrasto con P. praeputialis
, T. fasmidi turgida
ha appaiati [11, 22, 43]. Nel presente studio, il modello della cuticola di P. maschio clausa
alla regione cloacale era diverso e coperto con piccole creste cuticolari. La decorazione della superficie ventrale della coda di sesso maschile di T. turgida,
come P. bispiculata,
comprende tre diversi modelli che presentano alcune somiglianze e differenze con le caratteristiche cuticolari della coda maschile in altri physalopterids [22, . 23]
Conclusioni
I risultati degli studi precedenti e attuali indicano le caratteristiche che morfologiche; come la disposizione cefalica; il numero della cervice; distanza di vulva dalla estremità anteriore della femmina; numero, le dimensioni e la posizione del maschio papille caudale; ornamenti cuticolare della parte ventrale della coda maschile; forma e le dimensioni delle spicole sono caratteristiche importanti che devono essere considerati nella classificazione delle physalopterids. Le informazioni fornite nel presente documento contribuirà a chiarire la biologia di questo piccolo parassita conosciuto. Sebbene, la funzione dei denti esterni ed interni su pseudolabiae laterali triangolari, i numerosi dentelli sul lato interno della cavità boccale di P. clausa
, è ancora sconosciuto, ma possono avere un ruolo importante per l'alimentazione del nematode durante la sua attaccamento alla parete dello stomaco e causare gravi danni ai tessuti come sono stati osservati a necroscopia. Nel frattempo, strutture come amphids, fasmidi, papille cervicale ciliato con un gruppo di piccole papille, papille caudale, papille sessili, e spicole qui descritto utilizzando SEM, meritano ulteriori investgation utilizzando miscroscope elettronico a trasmissione (TEM) diretto verso la determinazione delle loro funzioni e per ( ?) fornire ulteriori dati sulla biologia del parassita.
Dichiarazioni
Ringraziamenti
Gli autori esprimono la loro gratitudine al professor Larry A. Arsenault, capo della struttura microscopio elettronico, Dipartimento di Patologia e Medicina molecolare, McMaster Università, Canada, per la sua assistenza nella fornitura di tutti i servizi nel corso dello studio. Inoltre l'aiuto prezioso di Mr. Ernie Spitzer, capo tecnico, e tutti i tecnici nella struttura microscopio elettronico è riconosciuto. Grazie sono dovuti al Sig Seyed Ali Hosseini, Scuola di Ingegneria Elettrica, Università di Teheran, l'Iran per la sua assistenza sincera nel prendere alcune microscopio. Gli autori sono particolarmente in debito con Robin S. Houston, M.S., Clinical Laboratory Services, Parassitologia Clinica, Facoltà di Medicina Veterinaria, Università della California-Davis, CA, Stati Uniti d'America per i suoi commenti costruttivi che hanno migliorato il manoscritto. Questo studio è stato parte di una tesi di dottorato dal Dr. Tahmine Gorgani, e finanziariamente sostenuto da Urmia Università, l'Iran.
Autori fascicoli presentati originali per
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Gli autori dichiarano di non non avere interessi in competizione contributi
autori
TG:. ha esaminato i ricci, rimosso i vermi ed eseguito processo parassitologici utilizzando microscopio ottico. SN: disegnato il progetto, trasferito i campioni da McMaster University, in Canada, e ha preparato i campioni per lo studio SEM, a cura micrografie SEM, e ha redatto il manoscritto. AAF: ha partecipato nella progettazione dello studio e la pianificazione del lavoro. DO: ha partecipato nella progettazione di studio, commentato micrografie SEM, redatto il manoscritto, e rivisto la carta. Tutti gli autori hanno esaminato e approvato il manoscritto.

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