Diferencialinės poveikis intragastrinį rūgšties ir kapsaicino skrandžio išsituštinimą ir jutimo indėlio į žiurkių nugaros smegenų ir smegenų kamieno

Diferencialinės poveikis intragastrinį rūgšties ir kapsaicino skrandžio išsituštinimą ir jutimo indėlio į žiurkių nugaros smegenų ir smegenų pervežimas tezės
Background pervežimas vandenilio chlorido rūgštis (HCl) yra potenciali grėsmė skrandžio gleivinės vientisumą ir yra žinomas prisidėti prie viršutinės pilvo dalies skausmas. Mes jau anksčiau nustatė, kad skrandžio gleivinės iššūkis su perteklinio HCl pranešė, kad žiurkių smegenų, bet ne stuburo smegenis, kaip regimos išraiškos C-fos pasiuntinys ribonukleino rūgštis (RNR), surogatinis žymeklis neuronų sužadinimo. Šis tyrimas nagrinėjo, ar skrandžio gleivinės poveikio kapsaicino, iš nociceptinėse aferentų stimuliatorius, kuris negadina skrandžio gleivinę, bus signalizuojama tiek smegenų ir stuburo smegenų ir ar skirtumų įcentriniai signalizacijos skrandžio HCl ir kapsaicinas iššūkis yra susijęs su skirtingais poveikio skrandžio ištuštinimą.
rezultatai
Žiurkės buvo gydomi intragastrically automobiliui, HCl arba kapsaicino, aktyvavimo neuronų smegenų ir stuburo smegenų buvo ryškinamos in situ hibridizacijos autoradiografiją c-fos mRNR, ir skrandžio ištuštinimą išskaičiuojamos iš saugojimo iš intragastrically administruoja skystį. Transporto priemonės atžvilgiu, HCl (0.5 m) ir kapsaicino (3,2 mm) padidėjo, C-fos transkripciją branduolio Tractus solitarii veiksniai 7.0 ir 2.1, atitinkamai. Kapsaicino taip pat sukėlė 5,2-kartus augimas c-fos mRNR ekspresijai plonų sluoksnių I uodegos krūtinės ląstos stuburo smegenų, nors iš c-fos mRNR-teigiamas ląstelių skaičius šiame plokšteles buvo labai mažas. Taigi, vidutiniškai tik 0,13 ir 0,68 c-fos iRNR teigiamas ląstelės buvo skaičiuojami 0,01 mm skyriuose vienašališkai lamina aš po intragastrinį administravimą transporto priemonės ir kapsaicino, atitinkamai. Priešingai, intragastrinį HCl nepavyko sukelti C-Fosfatinių mRNR į stuburo smegenų. Matavimo skrandžio skysčių susilaikymo atskleidė, kad HCl, slopino skrandžio ištuštinimą, o kapsaicinas nebuvo.
Išvada Viesbutis The šio tyrimo rezultatai rodo, išvadas, kad skrandžio gleivinės poveikio HCl ir kapsaicinas yra skirtingai plintančių su smegenų ir stuburo smegenų. Kadangi tik HCl blokai skrandžio ištuštinimo, jis iškėlė hipotezę, kad du stimulai yra transdukuojamos įvairių jutimo būdų. Mes manome, kad HCl yra signalizuojama tik skrandžio pasireikšti klajoklio nervo dirginimo aferentų o kapsaicinas yra tvarkomi tiek skrandžio pasireikšti klajoklio nervo dirginimo ir žarnyno stuburo aferentų.
Faktai
skrandžio rūgšties susijusių ligų yra viena iš labiausiai paplitusių gleivinės sutrikimų viršutinės virškinimo trakto. Yra taip pat įrodymas, kad vandenilio chlorido rūgšties (HCl) prisideda prie skausmo, susijusios su gastroezofaginio refliukso ir opaligės, taip pat ne-širdies krūtinės skausmas ir funkcinės dispepsijos [1-3]. Skrandžio chemonociception sukeliami poveikio žiurkių skrandžio į perteklių HCl tarpininkaujant pasireikšti klajoklio nervo dirginimo jutimo neuronų, turint omenyje, kad visceromotor skausmas atsakas į intragastrinį (IG) administravimo HCl panaikintas dvišalis vagotomy, o visceromotor atsakas į išsiplėtimas lieka nepakitęs [4] , Ši išvada atitinka mūsų pastebėjimu, kad I. administravimas HCl signalizuoti branduolys Tractus solitarii (NTS) žiurkės smegenų, centrinę nutraukimo srityje pasireikšti klajoklio nervo dirginimo aferentų, kaip regimos išraiškos pasiuntinys ribonukleino rūgštis (RNR) nedelsiant anksti genų c-fos, o ne c-fos mRNR indukcija yra vertinamas stuburo smegenų [5, 6]. Panašiai, skrandžio iššūkis amonio hidroksido skatina C-fos mRNR ir baltymų tik smegenų, bet ne stuburo smegenis, žiurkės [7]. Nors abu HCl ir amonio hidroksidas sužeisti skrandžio gleivinę koncentracija, kurios sukelia beveik maksimalią vertimą c-fos geno į NBA [7], kapsaicinas yra cheminė medžiaga, kuri jaudina virškinimo jutimo neuronų [8-10] nedarant žalos į žiurkė skrandžio [11]. Tai yra todėl, kad kapsaicinas skatina jutimo neuronų iki strobavimo trumpalaikis receptorių potencialas jonų kanalus 1 (TRPV1) vaniloido tipą, kuris yra išreiškiamas abiejų pasireikšti klajoklio nervo dirginimo ir stuburo jutimo neuronų innervating žiurkių skrandžiui ir žarnynui [12-16].
Bendras tikslas šio tiriamojo darbo buvo patikrinti, ar skrandžio gleivinės uždavinys su kapsaicino ir perteklinio HCl atskirtinai perduodami į žiurkių smegenų ir stuburo smegenų ir ar skirtumas apdorojimas iš dviejų dirgiklių vyksta viršutinio virškinimo trakto lygiu. buvo atliekami dvi eksperimentų spręsti šiuos klausimus. Pirmajame tyrime, I. administruoja kapsaicino ir HCl, buvo palyginti jų poveikį c-fos mRNR į NBA išraiškos ir uodegos krūtinės stuburo smegenis, kuris gauna tankiausias įcentriniai įvestį iš žiurkių skrandžio [17, 18]. Tai buvo ypač ištirti, ar I. administravimas HCl ir kapsaicinas turi išskirtinį poveikį neuronų konkretaus plokšteles ir branduoliai nugaros stuburo smegenis. HCl (0,5 M) ir kapsaicino (0,64 ir 3,2 M) testuojami pagal šias eksperimentų koncentracija buvo atrinkti iš ankstesnių eksperimentų. Poveikis žiurkių skrandžio gleivinės į HCl (0.5 M) sukelia savitą bet submaximal indukciją c-fos mRNR į smegenų [5], o I. administravimas 0,64 mM kapsaicino yra maksimaliai efektyvus padidėjusio skrandžio gleivinės kraujotaką jutimo neuronų -dependent būdu [19].
Kadangi buvo nustatyta, kad įcentrinis signalizacijos HCl ir kapsaicinas į NTS ir stuburo smegenis yra skirtingas, antrojo tyrimo tikslas buvo ištirti, ar HCl ir kapsaicinas įtakos skrandžio motorikai ir ištuštinti į diferencinė būdu. Ji buvo pagrįstas, kad c-fos reaguoti į NTS ir stuburo smegenų dydis priklauso tiek nuo cheminių medžiagų, koncentraciją ir jų buvimo skrandžio trukmę. Prieš tai buvo nustatyta, kad IG vartojimo pertekliaus HCl slopina skrandžio ištuštinimo ir keičia intragastrinį slėgis [5, 20]. Šio tyrimo išvados rodo, kad, skirtingai nuo perteklinio HCl, kapsaicinas neslopina skrandžio ištuštinimą. Jis iškėlė hipotezę, todėl, kad skrandžio HCl, uždavinys yra tik signalizuoti per pasireikšti klajoklio nervo dirginimo aferentų smegenų, nes jis išlieka skrandyje ilgesnį laiką, kadangi tiek skrandžio pasireikšti klajoklio nervo dirginimo ir dvylikapirštės žarnos stuburo aferentų reaguoti į IG administravimo kapsaicino, The ištuštinti iš kurių į dvylikapirštę žarną nėra atsilikusi.
rezultatai
poveikis HCl ir kapsaicino sukelti c-fos iRNR į NBA ir stuburo smegenų (1 tyrimas)
Kaip parodyta anksčiau [5, 21], I. administravimas 0,5 M HCl sukėlė daug neuronų NBA išreikšti c-fos iRNR, palyginti su IG administravimo fiziologinio tirpalo. C-fos mRNR teigiamas ląstelių viename skyriuje pastebimas po IG administravimo HCl skaičius buvo 7,0 karto didesnis negu po IG administravimo fiziologinio tirpalo (1 paveikslas). C-fos mRNR teigiamas neuronų per NTS skyriuje skaičiuojami po IG administracijos transporto priemonės numeris linkę būti didesnis nei pavartojus fiziologinio tirpalo, nors šis poveikis buvo statistiškai nereikšmingas (1 paveikslas). Transporto priemonės atžvilgiu, kapsaicino (0,64 ir 3,2 mm) sustiprintas C-fos mRNR teigiamas neuronų per NTS skyriuje skaičių, šis efektas priklausomai nuo vaisto koncentracijos. Kaip galima matyti 1 paveiksle, tik 3,2 mm kapsaicino koncentracija galėjo žymiai padidinti c-fos mRNR indukcijos 2,1 karto. C-fos mRNR teigiamas ląstelių pasiskirstymas NBA po IG poveikio HCl (0.5 m) ir kapsaicino (3,2 mm) buvo nelygios, didžiausias skaičius aktyvuotų ląstelių pasitaikančių ventromedial dalis NBA [22]. 1 pav Taškų C-fos mRNR teigiamas ląstelių viename skyriuje (0,01 mm), vienašališkai NBA nustatomas 45 min po IG administravimo NaCl (0,15 m), HCl (0.5 m), transporto priemonės (gabenimui) ir kapsaicino (Cap 0,64 ir 3,2 mm). Reiškia + SEM, N, kaip nurodyta. * P < 0,05, palyginti su t-KA ** "P < 0,01, lyginant su NaCl.
Sutikus ankstesnių tyrimų išvadas [5], IG poveikio 0,5 M HCl nepavyko sukelti bet kokį c-fos mRNR išraišką nugaros pusėje uodegos krūtinės stuburo smegenis. Tokiu būdu, bendras skaičius C-Fosfatinių mRNR-teigiamomis ląstelėmis per nugaros stuburo smegenų skyriuje skaičiuojami po IG poveikio fiziologinio tirpalo buvo 1,30 ± 0,29 (n = 4) ir po to, kai IG poveikio HCl 1,33 ± 0,18 (n = 4). Šis poveikis HCl trūkumas taip pat buvo pastebėtas, kai C-fos mRNR teigiamas ląstelių Li, LII, liii, LIV, LV, AX ir IMLN po IG administravimo HCl pasiskirstymas buvo lyginamas su po IG administravimo fiziologinio tirpalo ( 2A pav.) I. administravimas kapsaicino (3,2 mm) taip pat nepavyko reikšmingai padidinti C-Fos mRNR išraišką nugaros stuburo smegenis, nes iš viso C-fos mRNR teigiamas ląstelių viename skyriuje skaičiuojami po IG poveikio transporto priemonės buvo 2,19 ± 0,32 (n = 6) ir po to, kai IG poveikis kapsaicino buvo 1.94 ± 0.23 (n = 7). Analizė, C-fos mRNR teigiamas ląstelių Li, LII, liii, LIV, LV paskirstymo, AX ir IMLN atskleidė, kad vis dėlto kapsaicinas sukelia didelį 5,2 kartus padidėjo c-fos iRNR raiška Li, kuris išvyko lygiagrečiai su labai sumažėjo nuo c-fos mRNR liii ir LIV (2b pav) formavimas. Reikėtų pažymėti, kad c-fos transkripcijos lygis buvo labai žemas, nes paprastai yra mažiau nei 0,7 c-fos iRNR teigiamas ląsteles per lamina buvo skaičiuojami per 0,01 mm skyriuose vienašališkas nugaros stuburo smegenis (2 paveikslas). Dėl šios priežasties, eksperimentai, susiję su HCl ir kapsaicino buvo griežtai lygiagrečiai su dalyvaujant atitinkamam kontroliniam /Transportas sprendimą (2 paveikslas). 2 pav skaičius C-Fosfatinių mRNR-teigiamomis ląstelėmis kiekvienoje sekcijoje (0,01 mm) įvairiose lakštas ir sričių vienašališkai nugaros pusėje uodegos krūtinės ląstos stuburo smegenų nustatomas 45 min po IG vartojimo (A) NaCl (0,15 M), HCl (0,5 M), (B) transporto priemonės (Veh) ir kapsaicinas (dangtelis, 3,2 mM). Grafikai rodo, kad būtina lakštas I-V (Li-LT), plotas X "(AX) ir intermediolateral branduolio (IMLN) skaičius. Reiškia + SEM, N, kaip nurodyta. * P < 0,05, ** p < 0,01, lyginant su gabenimui.
Poveikio HCl ir kapsaicinas ant intragastrinį slėgio ir skrandžio skysčio atsigavimo (2 tyrimas)
pradinis SGN matuojamas prieš vartojant bet kokioje laikmenoje buvo tarp 400 ir 500 Pa [20]. IG injekcija 2 ml skysčio boliuso padidėjo IGP iki tokio lygio, kurio dydis buvo nepriklausomai nuo to, injekcija skystis buvo fiziologinio tirpalo, HCl (0,35 M), transporto priemonė arba kapsaicinas (3,2 mM), kaip nustatyta 2-3 min po injekcijos (3A pav ). Priešingai, laikas Žinoma vėlesnio nuosmukio IGP priklauso nuo suvartotos vidutinio pobūdžio. Po injekcijos fiziologiniu tirpalu ar transporto priemonės, SGN mažėjo žymiai sparčiau nei po injekcijos HCl arba kapsaicino, atitinkamai (3b pav.) Taigi, HCl ir kapsaicino veikiami skrandžiai SGN nebuvo reikšmingai nukrito 30 min stebėjimo laikotarpis po injekcijos metu, o NaCl- ir transporto priemonių veikiami skrandžiai IGP žymiai sumažėjo iki tokio lygio, maždaug 65% SGN matuojamas 2-3 minutės po injekcijos (3B pav.) Kitas HCl poveikis buvo padidinti skrandžio skysčių susilaikymą kaip nustatyti iš 100% išieškojimo suleistos skysčio tūrį iš skrandžio 30 min po injekcijos (3C pav.) Priešingai, 30 minutės po administracijos druskos, transporto priemonės arba kapsaicino tik 30-60% suleistos skysčio tūrį buvo atgavo (3C pav.) 3 pav poveikis intragastrinį injekcijos NaCl (0,15 M), HCl (0,35 M), transporto priemonė (Veh) ir kapsaicinas (dangtelis, 3,2 mM) dėl (A) pradinė iškilimas intragastrinį slėgio (IGP), (B) lygi laikas kursas IGP ir (C) skysčio išieškojimo iš skrandžio. NaCl HCl Veh ir dangtelis buvo suleistas kaip 2 ml boliuso. Pavaizduoti skydelyje vertės atstovauti IGP pasiekė 2-3 min po injekcijos. IGP išmatuotos vertės laikotarpiais 9-10 min 29-30 min po injekcijos (panelė B), yra išreikštas pradinio IGP augimas užfiksuotas 2-3 minutės po injekcijos procentais, ir skrandžio tūrio atkūrimo (skydelio C ), išmatuotas 30 min po boliuso injekcijos yra išreikštas injekcijos tūrio (2 ml) procentiniu dydžiu. Reiškia + SEM, n = 6-13. ** P < 0,01, lyginant su IGP matuojamas 2-3 min po injekcijos; ++ P < 0,01, lyginant su NaCl.
Diskusija Viesbutis The dabartinės studijų rodo, kad I. administravimas HCl ir kapsaicinas žiurkėms generuoja diferencialinės patekimą į NBA ir krūtinės stuburo smegenis, kuris yra susijęs su diferencialinių poveikį skrandžio ištuštinimo rezultatus. Kaip aprašyta anksčiau [5, 7], skrandžio signalizacijos prie smegenų ir stuburo smegenų buvo regimos išraiškos sužadinamoji genų c-fos tuo iRNR lygį, tokiu būdu, kuris buvo nustatytas kaip standartinis įrankis funkcinės neuroanatomija į apibrėžiamos stimulą -evoked aktyvavimo neuronų [23, 24]. Transkripcija c-fos geno prasideda per kelias minutes po neuronų sužadinimo [23, 24] ir NBA atrodo maksimalus 45 minutės po skrandžio HCl iššūkis [5]. Nors poveikis HCl (0,35-0,7 M) skatina skrandžio gleivinės pažaidų, kurio koncentracija yra susijusios taip, yra įrodymų, kad įcentrinis signalizacijos skrandžio HCl iššūkis nėra tiesiogiai susijęs su gleivinės traumos formavimo, nes iš C- išraiškos FOS genas į NBA gali būti skatinamas IG koncentracijos HCl, sukeliančiais tiek, jei toks yra, epitelio pažeidimų [5, 7]. Ji, todėl hipotezę [5, 7], kad smarkiai auga H + jonų gradientas per skrandžio gleivinės barjero yra savaime pakankamas vairuoti H + jonus į plonų sluoksnių Propria kur jie gali sužadinti klaidžiojantys įcentriniai nervų skaidulos tiesiogiai [25, 26] arba netiesiogiai per neuroactive veiksnių išleistas audinio.
topografinės paskirstymą c-fos mRNR teigiamas ląstelių NBA buvo netolygi, bet panašus po IG administravimo HCl ir kapsaicino. Kaip jau parodyta imunohistocheminiu [22], aukščiausia skaičius HCl aktyvuotų neuronų buvo pastebėtas ventromedial dalis NBA. Be nervo klajoklio skrandžio įvesties [27], šis NBA plotas taip pat gauna informacijos iš nugaros lamina I neuronai per spinosolitary trakto [28-30]. Lieka nustatyti santykinį indėlį klaidžiojantys ir stuburo įėjimai į šią NBA dalį šių cheminių stimuliacija skrandį.
ši studija patvirtina, kad perteklius skrandžio HCl nepavyksta sukelti c-fos mRNR ir C-Fos baltymų užpakalinio rago užpakalinės krūtinės stuburo smegenis [5, 7], kuris gauna tankiausias įėjimas iš jutimo neuronų innervating žiurkių skrandžio [17, 18]. Panašūs rezultatai buvo padaryta šių pozicijų, kad žiurkių skrandžio gleivinės amonio hidroksido [7]. Taigi pasirodė tarsi skrandžio iššūkis su nuodingais chemikalais signalizuojama pasireikšti klajoklio nervo dirginimo aferentų tik hipotezė, kad atmetė dabartinio išvada, kad jutimo įvestį iš kapsaicino veikiami skrandžio siunčiama tiek nugaros smegenų ir smegenų. Šis rezultatas yra Laikantis TRPV1, kad kapsaicinas receptorių ekspresijos, tiek pasireikšti klajoklio nervo dirginimo ir stuburo jutimo neuronų innervating žiurkių virškinimo trakto [12-16]. Atgal sekimas parodė, kad 80 ir 71% iš mazginio ir nugarinio kamieno ganglijų neuronų tiekia žiurkių skrandžio, atitinkamai, išreikšti TRPV1 [16]. Kai tiesiogiai liečiasi su somata, kapsaicinas sužadina 90% dorsalinės šaknelės ganglijaus neuronų ir 59% iš mazginio ganglijaus neuronų išsikišančių į žiurkių skrandžio [31]. O su TRPV1 yra lengva aptikti į mazginio ganglijaus, kad TRPV1 išraiškos lygmuo daugumoje pasireikšti klajoklio nervo dirginimo jutimo nervinių skaidulų per skrandį yra mažesnis už imunohistocheminio aptikimo ribą [12]. Tai atvejis galėtų paaiškinti, kodėl I. administravimas kapsaicino skatina palyginti mažai išraiška c-fos mRNR į NBA. Mes nemanome, kad mažas poveikis kapsaicino yra dėl nepakankamos dozės, nes jis anksčiau buvo nustatyta, kad I. administravimas 0,64 mM kapsaicino yra maksimaliai efektyvus padidėjusio skrandžio gleivinės kraujotaką jutimo neuronų priklausomu būdu [19].
kaip pelenai, kapsaicinas vartojamas į žiurkių skrandžio nepavyko reikšmingai padidinti bendrą išraišką c-fos mRNR nugaros pusėje užpakalinės krūtinės stuburo smegenis. Tačiau regioninė analizė parodė, kad kapsaicinas sukelia neuronų paviršutiniškai plonų sluoksnių I užpakalinio rago išreikšti c-fos iRNR, poveikį, kuris nebuvo matęs po IG administravimo HCl. Ši išvada gauti su kapsaicino yra suderinamas su vidaus organų jutimo neuronų projekcijos į plonų sluoksnių I ir paviršinių dalis plono sluoksnio II taip pat plonų sluoksnių V ir X rajone žiurkių ir kačių nugaros smegenų [17, 32]. Mūsų duomenys rodo, kad administracija kapsaicino į skrandžio spindį aktyvuoja jutiminius neuronus, kad projekto pirmiausia plonų sluoksnių I stuburo smegenis. Atsižvelgiant į šią išvadą ji gali būti atmesta galimybė, kad C-fos išraiška yra netinkamas būdas vizualizuoti chemoreceptor signalizacijos nuo skrandžio spindį į stuburo smegenis, ir kad skrandžio HCl iššūkį nesėkmės indukuoti C-fos iRNR į stuburo smegenų atstovauja klaidingas neigiamas rezultatas. Nors nervų jutiklių, kuriais perteklius HCl aptikta skrandžio spindį nėra žinomas, tai suprantama, kad tiek TRPV1 ir rūgščių-sensing jonų kanalus (ASIC), pavyzdžiui, ASIC3 dalyvauja [33]. Nuo tiek TRPV1 ir ASIC3 yra išreiškiamas iš nugarinio kamieno ganglijų neuronų tiekia žiurkių skrandžio [16] dauguma, atrodo neįtikėtina, kad I. HCl nepavyksta sukelti C-fos iRNR į stuburo smegenis, nes atitinkami aferentai nepažymėti atitinkamą rūgštį jutikliai.
Palyginti su neuronų išreiškė c-fos iRNR į NBA skaičių, c-fos mRNR teigiamas neuronų skaičius 0,01 mm skyriuose stuburo smegenis buvo labai mažas. Tai gali parodyti, kad įcentrinis įėjimas iš žiurkių skrandžio į stuburo smegenis yra nedidelis, palyginti su stuburo indėliu somatinių audinių ir kad electrophysiologically būdingas stuburo aferentai vargu Unerwiać virškinimo trakto [34, 35] gleivinę. Žemo lygio c-fos transkripcijos į nugaros stuburo lakštas tapo privaloma paleisti eksperimentus su HCl ir kapsaicinas griežtai lygiagrečiai su susijusius su atitinkamomis kontrolės /Transportas sprendimą. Mes iškėlė hipotezę, kad, matyt, kitoks platinimas C-fos mRNR teigiamas ląsteles per nugaros stuburo smegenis kontrolės žiurkėmis, kaip parodyta dviejų panelių 2 paveiksle, gali ne tik atspindi tarp eksperimento kintamumas, bet ir kitokį pobūdį kontrolės /automobilis sprendimas: o HCl automobilis buvo fiziologinio tirpalo, už kapsaicino transporto priemonė buvo fiziologinio tirpalo, kuriame yra etanolio ir Tween 80. Viesbutis The IG kapsaicino poveikį padidinti c-fos iRNR indukcijos plonų sluoksnių I stuburo smegenis buvo susijęs su reikšmingas sumažėjimas c-fos iRNR išraiškos III plokšteles ir IV. Mes Neturime tiesus paaiškinimo šią pastabą. Nuo III ir IV plokšteles neatrodo gauti tiesioginę įtaką nuo vidaus organų [17, 32], mes iškėlė hipotezę, kad c-fos iRNR formavimo mažinimo šiose lakštas yra netiesioginis poveikis kapsaicino. Conceivably, visceralinių įcentrinis įėjimas per I LAMINA neuronų aktyvuoja slopinamąjį kelius, kad bloginančių IV LAMINA III ir neuronų jaudrumą.
Jutimo signalus skrandžio gleivinės poveikio kapsaicino ir perteklius HCl, lemia ne tik dėl kenksmingų cheminių koncentracija, bet taip pat jo buvimo skrandžio spindžio trukmę. Jis jau anksčiau buvo nustatyta, kad, lyginant su fiziologiniu tirpalu, I. administravimas HCl į anestezuotose žiurkių prailgina skysčių susilaikymą skrandyje ir vėlavimų pritaikymo IGP [7, 20]. HCl sukelta skrandžio skysčių susilaikymas rezultatus slopindamas skrandžio ištuštinimo ir glaudesnio skrandžio skysčio, hidrokarbonato ir gleivių sekrecija [20, 36], tačiau analizė skrandžio turinio buvo už šio tyrimo taikymo sritį. HCl sukėlė slopinimas skrandžio ištuštinimą, tarpininkaujant nervų refleksai, kurie inicijuotų tiek skrandžio ir dvylikapirštės žarnos [20, 37-40]. Iš HCl koncentracija išbandyti savo gastropyloric motorinių poveikio anestezuotose žiurkėmis buvo sumažintas iki 0,35 m, nes anestezijos silpnina skrandžio gleivinės barjerą HCl ir IG koncentracijos HCl (0.5 M) išbandytos jos poveikį centrinei c-fos išraiška skatinantis platus žalos anestezuotose žiurkių, bet sukelia nedidelę skrandžio žalą sąmonę turinčių gyvūnų [5]. Kaip eksperimentai atskleista, skrandžio poveikis HCl ir kapsaicino modifikuotas gastropyloric peristaltikos diferencinės būdu. Nors skrandžio ištuštinimą buvo užblokuotas HCl bet paliko nesikeičia kapsaicino, kad IGP pritaikymas sutrukdė tiek HCl ir kapsaicino. Kapsaicino poveikis uždelsti IGP pritaikymą gali būti susijęs su jos gebėjimu indukuoti sutrumpėja arba atpalaidavimą žiurkių skrandžio raumenimis, atsakymų tipą, priklausomai nuo kapsaicino dozės ir skrandžio regionas ir raumenų sluoksnis po tyrimo [19, 41-43 ].
atsižvelgiant į skirtingą poveikį IG HCl ir kapsaicino apie stuburo c-fos išraiška tai buvo ypač svarbu pažymėti, kad, priešingai nei HCl, kapsaicinas nepavyko pagerinti skrandžio skysčio atsigavimą, o tai reiškia, kad skrandžio ištuštinimą įvyko netrukdomai ir I. vartojamas kapsaicinas buvo greitai pernešamas į viršutinio plonosiose žarnose. Todėl galima teigti, kad kapsaicinas-prisiminė C-fos atsakas į NBA, kuris buvo mažesnis nei, kad HCl, ir stuburo smegenis yra dėl kapsaicino-prisiminė sužadinimo abiejų skrandžio ir žarnyno aferentų, o stimuliuojantis poveikis HCl yra daugiausia apsiribojo skrandžio aferentų. Skrandžio HCl iššūkį nesugebėjimas sukelti C-fos išraišką stuburo negali būti paaiškinamas pranešė gebėjimas pasireikšti klajoklio nervo dirginimo aferentų aktyvuoti mažėjančia kelius ir tokiu būdu slopina įcentriniai indėlį į stuburo smegenis [44, 45], nes dvišalis lėtinis vagotomy nepavyksta atskleisti jokios stuburo c-fos iRNR indukcijos padidėjimas dėl skrandžio HCl iššūkis [5]. Yra ir kitų būdų paaiškinti diferencialo gebėjimas IG HCl ir kapsaicinas sukelti C-fos iRNR į NBA ir stuburo smegenis, tačiau šių veiksnių analizė buvo už šio tyrimo taikymo sritį. Pavyzdžiui, yra įrodymų, kad kapsaicinas yra tiek pasinėręs į skrandžio sieną [19], kuri taip pat paaiškina, kodėl I. administruoja kapsaicinas yra palyginti silpnas skatinti skrandžio nervo klajoklio aferentinius išsikišusius į NBA, o kapsaicino vežami į viršutinės plonosios žarnos gali daugiau lengvai pasiekti ir stimuliuoti stuburo įcentrinis nervų terminalus žarnyno plonų sluoksnių Propria.
dėl savo Pažintinė pobūdžio, dabartinis tyrimas turi savo ribas. Taigi, skirtumas poveikis IG vartojamas kapsaicino ir HCl pasireikšti klajoklio nervo dirginimo ir stuburo jutimo būdų yra tikėtina, kad priklauso ne tik nuo skrandžio sulčių ištuštinimo norma, ir absorbcijos kinetiką HCl ir kapsaicino bet taip pat ir į gleivinės traumos mastą ir gleivinės kraujo dydžio tekėti. Nors skrandžio gleivinės vientisumas sutrikdyta tik HCl [5, 7, 46], tačiau ne kapsaicinui [11], skrandžio gleivinės kraujotaka yra padidėjusi tiek kapsaicino [19] ir backdiffusing HCl [46].
Išvada
Skrandžio iššūkis su HCl ir kapsaicinas yra skirtingai signalizuoja į NBA ir stuburo smegenis, o tai rodo, kad du stimulai yra tvarkomi skirtingų nociceptinėse jutimo būdų. Nuo HCl, slopina skrandžio ištuštinimą, kadangi kapsaicinas nėra, tai daryti išvadą, kad HCl sukėlė įcentrinis indėlis į NBA perduodama pasireikšti klajoklio nervo dirginimo aferentų skrandyje, o NBA aktyvinimas ir stuburo LAMINA I neuronų kapsaicino tarpininkaujant tiek nervo klajoklio aferentinius į skrandį ir stuburo aferentinėse viršutiniame plonosiose žarnose. Daugiau eksperimentų, siekiant nustatyti, kaip šie duomenys yra susiję su skrandžio chemonociception. Susitarus su mūsų C-fos duomenimis, nocicepsijai sukėlė perteklius skrandžio HCl tarpininkaujant pasireikšti klajoklio nervo dirginimo jutimo neuronų [4], ir ji laukia būti išnagrinėta, kuri įcentriniai keliai relės nocicepsijai sužadintą skrandžio kapsaicino. Mechanonociception sukeliami pūtimas, skrandžio yra atsiradusių dėl stuburo aferentų [4], nors išraiška C-fos matyti tiek nugaros smegenų ir, platesniu mastu, o smegenų [47].
Metodai
Gyvūnai Viesbutis The tyrimas buvo patvirtintas etikos komisijos prie ministerijos švietimo, mokslo ir kultūros Austrijos Respublikos ir atliekami pagal 1986 lapkričio Europos Bendrijų Tarybos 24 direktyvos (86/609 /EEB) , Eksperimentai buvo sukonstruotas taip, kad buvo sumažintas iki minimumo naudojamų gyvūnų skaičių ir jų kančias. buvo naudojami Moteriška Amžius atitikimo Sprague-Dawley žiurkės (Abteilung für Labortierkunde und -genetik, Vienos medicinos universitetas, Himberg, Austrija) sveria 180-220 g. Jie buvo laikomi grupėmis kaip keturios plastikiniai permatomos narveliuose standartinėmis sąlygomis; žibintai buvo nuo 6:00 iki 6:00 val.
Eksperimentiniai protokolai
Visi eksperimentai vykę šviesos fazėje tarp 8:00 ir 12:00 AM metu. Dvidešimt valandas prieš pradedant eksperimentų žiurkės buvo atimta maisto užtikrinti, kad skrandis buvo tuščias iki eksperimentų metu, o vanduo buvo galima iki soties visoje Šiame parengiamajame etape. Be to, žiurkės buvo dedamas į grupėmis po du ant grindų tinklelį, kad būtų išvengta Koprofagija. Du tyrimai su įvairių eksperimentinių protokolų buvo atliktas.
Studijų 1 buvo atliktas su ne anestezuojama gyvūnams. Fiziologinio druskos tirpalo (0,15 M NaCl), HCl (0,5 M), kapsaicinas (0,64 ir 3,2 mm), arba jo transporto priemonė buvo skiriami IG esant 10 ml tūrio /kg per minkšta kūdikių maitinimo vamzdis (išorinis skersmuo 2.2 mm; PORTEX, Hythe , Jungtinė Karalystė). Po 45 min žiurkės buvo numarinti iki injekciją į pilvą pasikeičiant pentobarbitalio perdozavimo (200 mg /kg; Intervet, Viena, Austrija) ir jų smegenų kamieno ir nugaros smegenų pašalinti greitai. Kapsaicino (Sigma, Viena, Austrija) buvo ištirpinta terpėje, turinčioje 10% Tween 80, 10% etanolio ir 80% fiziologinio druskos tirpalo suteikti pradinius tirpalus 2 ir 10 mg /ml (6,4 ir 32 mM) kapsaicino. tada šie pradiniai tirpalai buvo praskiestas su fiziologiniu tirpalu iki suteikti bandymo tirpalus 0.64 ir 3,2 mM kapsaicino, atitinkamai. Už kapsaicino transporto priemonės sudarė 1% Tween 80, 1% etanolio ir 98% fiziologinio tirpalo
Tyrimas 2 buvo atlikta su gyvūnų, kurie buvo anestezuotose su fenobarbitalio (230 mg /kg kūno svorio į pilvo ertmę; Sigma). Ir tiekiamos termostatinę stalo išlaikyti savo tiesiosios žarnos temperatūrą 37 laipsnių Celsijaus [20]. tada žiurkėms buvo įrengtas su trachėjos kaniulės, kad būtų lengviau spontaniškai kvėpavimą. Kaniulę kairėje jungo veną buvo naudojamas nepertraukiamos infuzijos fiziologinio tirpalo (1,5 ml /h), kad būtų išvengta dehidratacijos. Po vidurinės linijos Laparotomija Ig kateterį (išorinis diametras: 2,2 mm), buvo įdėta į per stemplę skrandžio ir skrandžio išplauti [20]. Su jos galiukas turi būti išdėstyti corpus regione, kateteris buvo naudojamas įrašyti intragastrinį spaudimą (IGP), prijungtą per slėgio rele taip pat įleisti skystį į ir ištuštinsi iš skrandžio [20]. Šis IGP matavimo metodas buvo aprašytas ir patvirtintas ankstesnės tyrimo [20]. Po nusistovėjimo trumpiau nei 30 minučių, 2 ml skysčio boliusas buvo lėtai suleidžiamas į per 5 s laikotarpį skrandžio ir į kairę į skrandį dėl 30 min po to, kai kurių skrandžio buvo išdžiovintos laikotarpį ir regeneruotos skysčio svoriui, nustatytam , Skysčio iš skrandžio išsaugojimas (netiesioginis skrandžio ištuštinimo) buvo išreikšta kaip skysčio masės procentais suvartotos į skrandį [20]. Kiekvienas žiurkė buvo atliktas 4 įpurškimas /atkūrimo tyrimų tarpais 15 min, per kurį skrandžio buvo paliekamas tuščias. Pirma, dviejų pirminės bandymai su fiziologiniu tirpalu buvo atlikti, po kurio pateikiama bandymo tyrimo su fiziologiniu tirpalu ir bandymo tyrimo su HCl (0,35 M) arba bandymo tyrimo su transporto priemonės ir bandymo tyrimo su kapsaicino (3,2 mM). SGN buvo vidutiniškai už 2-3 min, 9-10 min ir 29-30 min po injekcijos laiką. Nes, kaip aprašyta anksčiau [20] smailės kilimas IGP po injekcijos įvairus, nes skirtumų injekcijos greitis, IGP vidutiniškai per 2-3 min po injekcijos laikotarpį buvo imtasi kaip 100% ir užregistruoti per tolesnio stebėjimo IGP laikotarpiai išreikštas tos pamatinės vertės procentais.
situ hibridizacijos autoradiografiją
smegenų ir stuburo smegenų greitai buvo pašalintas ir įšaldyti miltelių sauso ledo. Koronarinės skyriai (0,01 mm) buvo sumažinti serijiniu iš smegenų tuo rostrocaudal pratęsti zonos postrema ir uodegos krūtinės ląstos stuburo smegenų su kriostatas [5, 6, 22]. Kiekvienas šeštojo skyriaus buvo neparuoštų in situ hibridizacijos su oligodezoksiribonukleotido zondo žyme 3 'galo su [ 35S] deoksiadenozin 5' (α-tio) trifosfato, kaip aprašyta anksčiau [6]. Skyriai buvo artimųjų Ilford K5 fotoemulsija, o po 18-25 dienų poveikio užklijuotuose dėžės bent 4 laipsnių Celsijaus, buvo parengti autoradiograms ir skyriai counterstained hematoksilinu ir coverslipped [6]. Procedūros specifiškumas buvo įrodyta būdu pagal bet kurį hibridizacijos signalo nesant, kai kontroliniai dalys buvo hibridizuoti su žymėto zondo mišinyje su 100 kartų viršija nežymėtojo ( "šaltą") zondo.
Autoradiograms buvo nagrinėjami per kodą būdas su šviesos mikroskopu (Axiophot, Carl Zeiss, Oberkochen, Vokietija), sujungtas su kompiuterine vaizdo analizės sistema (Imaging, Šv Catharines, Ontarijas, Kanada). Ląstelės buvo laikomas c-fos mRNR-teigiamas, kai jų grūdų tankis buvo bent 10 kartų didesnis nei [6] fone. Siekiant padidinti kiekybinius rezultatų patikimumą, buvo vertinami 5 smegenų skyriai ir 7-10 nugaros smegenų atkarpas iš kiekvieno gyvūno. Šios sekcijos buvo parinkti taip, kad jie buvo 0,05 mm vienas nuo kito taip, kad būtų išvengta, kad tos pačios ląstelės buvo skaičiuojamas du kartus. C-fos iRNR teigiamas ląsteles per skyriuje buvo skaičiuojami vienašališkai, NBA ties plotas postrema lygiu ir nugaros pusėje stuburo ties uodegos krūtinės lygyje (T8-T12). Šios struktūros buvo nustatytos pagal Molander ir dotacijų [48] ir Paxinos ir Watson [49]. Be nugaros pusėje stuburo smegenų, C-fos mRNR teigiamas ląstelių pasiskirstymas IV lakštas (Li-LT), plotas X (AX) aplink centrinę kanalą ir intermediolateral branduolio (IMLN) buvo vertinami pagal žiurkėmis stuburo cytoarchitecture aprašyta Molander et al.

• Virškinimo trakto stromos naviko skrandyje mėgdžiodami kepenų naviką: byla report
• Nauji technika tulžies rekonstrukcijos naudojant izoliuotą skrandžio vamzdelį su vascularized stiebelis: gyvas gyvūnas eksperimentinį tyrimą ir pirmąjį klinikinį case