Diferencijalni učinci unutaržclučanom kiseline i kapsaicina na pražnjenja želuca i aferentne ulaz do leđne moždine i brainstem

različite učinke štakorskim unutaržclučanom kiseline i kapsaicina na pražnjenja želuca i aferentne ulaz u leđnu moždinu štakora i moždanog debla
apstraktne pregled pozadine
klorovodična kiselina (HCl) je potencijalna opasnost za integritet sluznice želuca, a poznato je da doprinese gornji bolovi u trbuhu. Smo prethodno pronašli da želučane sluznice izazov sa suviškom HCl signalizira na korijenu mozga štakora, ali ne i leđne moždine, što se prikazuje putem ekspresije c-fos glasnik ribonukleinske kiseline (mRNA), surogat marker neuronskog pobude. Ova studija ispituje da li želučane sluznice izlaganje kapsaicin, stimulansa od bolnih podražaja koji ne oštećuje sluznicu želuca, javlja u oba mozga i leđne moždine i da li razlika u aferentnih signalizaciju želučane solne kiseline i kapsaicina povezane s različitim učincima na pražnjenja želuca. | Rezultati
Štakori su intragastrično obrađena sa vozila, HCl ili kapsaicina, aktivacije neurona u korijenu mozga i kičmenoj moždini je vizualiziran pomoću in situ hibridizacije autoradiografije na c-fos mRNA i pražnjenja želuca, izveden iz retencije od intragastrično davati tekućinu. U odnosu na vozilo, HCl (0.5 M) i kapsaicin (3,2 mM) povećala c-fos transkripciju u nucleus tractus solitarii faktorom 7,0 i 2,1, respektivno. Kapsaicin također uzrokovalo porast 5,2 puta od c-fos ekspresije mRNA u listovima I. kaudalnu prsne leđne moždine, iako je broj c-fos mRNA-pozitivne stanice u ovom lamelom bio vrlo malen. Dakle, u prosjeku samo 0,13 i 0,68 c-fos mRNA-pozitivne stanice su broje u 0,01 mm dijelovima jednostranog lamine sam nakon intragastričnu administraciju vozila i kapsaicina, respektivno. Nasuprot tome, intragastičnog HCl nije inducirala c-fos mRNA u kičmenoj moždini. Mjerenje želučane zadržavanja tekućine otkrila da HCl potisnuti pražnjenje želuca, a kapsaicin nije. Pregled Zaključak
nalazima ove studije pokazuju da želučane sluznice izloženost HCl i kapsaicin različito prenosi do mozga i leđne moždine. Jer samo HCl blokova pražnjenja želuca, pretpostavlja se da su dva podražaja transducirane različitim aferentnih putova. Zaključili smo da HCl isključivo naznačava želučanog izlučivanja podražaja, dok je kapsaicin je procesirana i od strane želučane izlučivanja i crijevnih kralješnice podražaja. Pregled Pozadina pregled, želučane bolesti povezane s kiselinom su među najviše rasprostranjen poremećaje sluznice gornjeg gastrointestinalnog trakta. Također postoje dokazi da je klorovodična kiselina (HCl) pridonosi bol povezanu s gastroezofagealnog refluksa i peptički ulkus, kao i ne-srčanom boli u prsima i funkcionalnu dispepsiju [1-3]. Želučana chemonociception priziva izlaganja trbuha štakora na višak HCl je posredovana izlučivanja aferentnih neurona, s obzirom da je odgovor visceromotor bol unutaržclučanom (IG) primjena HCl je ukinut bilateralnim vagotomije, dok je visceromotor odgovor na razvlačenje ostaje nepromijenjen [4] , Ovaj nalaz je u skladu s našim opažanjem da IG davanje HCl se signalizira na nucleus tractus solitarii (NT) u moždanom deblu štakora, središnje terminacije području izlučivanja podražaja, što se prikazuje putem izražavanja glasnik ribonukleinske kiseline (mRNA) za izravni rani gen c-fos, dok ne indukciju c-fos mRNA se vidi u kičmenoj moždini [5, 6]. Slično, želuca izazov s amonijevim hidroksidom inducira c-fos mRNA i proteina je samo u moždanom deblu, ali ne i leđne moždine, štakora [7]. Iako su obje HCl i amonijev hidroksid ozlijediti sluznicu želuca u koncentracijama koje izazivaju gotovo maksimalnu prijevod c-fos gen u NTS [7], kapsaicin je kemikalija koja izaziva gastrointestinalne aferentnih neurona [8-10] bez nanošenja štete na rat želuca [11]. To je zato što je kapsaicin potiče aferentnih neurona po vratarenje prolazne receptora potencijal ionske kanale vaniloidnog tipa 1 (TRPV1), koji se izražava oba izlučivanja i spinalnih aferentnih neurona koji inerviraju želuca štakora i crijeva [12-16].
Sveukupni cilj ovog eksploratorni studije bio je ispitati da li želučane sluznice podražaj kapsaicin i suviškom HCl različito se prenosi moždanom deblu i kralježničnoj moždini štakora, te da li diferencijalne obrada dva podražaja odvija na razini gornjeg gastrointestinalnog trakta. Dva seta pokusa provedena su za rješavanje tih pitanja. U prvoj studiji, IG primjenjuje, kapsaicin i HCl se usporediti u njihov utjecaj na ekspresiju c-fos mRNA u NTS i u kaudalnom torakalne leđne moždine koji prima najgušći ulaz aferentne iz želuca štakora [17, 18]. Bilo je posebno istražuju da li IG uprava HCl i kapsaicin ima različit učinak na neurone u određenom lamina i jezgre dorzalne kralježnične moždine. Koncentracije HCl (0,5 M) i kapsaicin (0,64 i 3,2 M) testiran u ovim pokusima su odabrani iz predhodnih eksperimenata. Izlaganje sluznice želuca štakora u HCl (0.5 M), izaziva izraženu nego submaksimalna indukciju c-fos mRNA u moždanom deblu [5], a IG davanje 0,64 mM kapsaicin maksimalno efikasno povećava želučane protoka za sluznicu u krvi na senzornih neurona ovisna način [19].
Budući da je utvrdio da je aferentnih signalizacije HCl i kapsaicin do točnih prognoza i leđnoj moždini je drugačiji, cilj drugog istraživanja bio je ispitati da li HCl i kapsaicin utjecaj želučane pokretljivosti i pražnjenja u diferencijalni način. To je zaključio da veličina c-fos odgovora u točnih prognoza i leđne moždine ovisi io koncentraciji kemikalija i vrijeme njihova prisutnost u želucu. Prethodno je nađeno da IG primjena suviška HCl inhibira želučano pražnjenje i mijenja intragastričkog tlaka [5, 20]. Rezultati ovog istraživanja pokazuju da, za razliku od viška HCl, kapsaicin ne inhibira pražnjenje želuca. Pretpostavlja se, stoga, da želučana HCl izazov isključivo signalizira moždanog debla preko vagusnih aferentnih jer se zadržava u želucu tijekom duljeg vremenskog perioda, a oba želučanog izlučivanja i dvanaesnika kralješnice aferentnih reagiraju na IG primjene kapsaicina je pražnjenje koji u duodenum nije usporen. | Rezultati
Učinci HCl i kapsaicin za indukciju c-fos mRNA u NTS i kralježnicu (studija 1) Kao što je prethodno pregled je prikazano [5, 21] IG primjena 0.5 M HCl, uzrok mnogih neurona u NTS izraziti c-fos mRNA u usporedbi s davanjem IG fiziološkom otopinom. Broj c-fos mRNA-pozitivne stanice po dijelu vidi nakon IG primjene HCl je 7.0 puta veća nego nakon IG primjene fiziološke otopine (slika 1). Broj c-fos mRNA pozitivne neurona po točnih prognoza dijelu broje nakon IG davanja vozila obično biti veća nego nakon primjene fiziološke otopine, iako je taj utjecaj je statistički značajna (slika 1). U odnosu na vozilo, kapsaicin (0,64 i 3,2 mM) povećala je broj c-fos mRNA pozitivne neurona po odjeljku i točnih prognoza, ovaj efekt ovisno o koncentraciji lijeka. Kao što se može vidjeti na slici 1, samo što je koncentracija 3,2 mM kapsaicina bio u stanju značajno povećati indukciju c-fos mRNA za faktor 2.1. Distribucija c-fos mRNA-pozitivne stanice u NTS nakon IG izlaganja HCl (0,5 M) i kapsaicin (3.2 mM) se neravno, najveći broj aktiviranih stanica koji se pojavljuju u ventromedial dijelu NTS [22]. Slika 1 Broj c-fos mRNA-pozitivne stanice po dijelu (0,01 mm) na jednostranom NTS određen 45 minuta, nakon IG davanja NaCl (0.15 M), HCl (0.5 M), nosača (veh) i kapsaicin (Cap 0.64 i 3.2 mM). Znači + SEM, n kao što je navedeno. * P < 0,05 nasuprot veh, ** P < 0.01 u usporedbi s otopinom NaCl.
U skladu s prethodnim nalazima [5], IG izlaganja 0,5 M HCl nije inducirala bilo ekspresiju c-fos mRNA u leđnom polovici repne torakalnog leđne moždine. Prema tome, ukupni broj c-fos mRNA-pozitivne stanice po leđnom dijelu leđne moždine brojani nakon IG izlaganja fiziološke otopine bio je 1.30 ± 0.29 (n = 4), a nakon izlaganja IG HCl 1.33 ± 0.18 (n = 4). Ovaj nedostatak učinka HCl je također opažen kad se distribucija c-fos mRNA-pozitivne stanice na LI, LII, LIII, LIV, LV, AX i IMLN nakon IG davanja HCl je uspoređen s onim nakon IG primjene fiziološke otopine ( slika 2A). IG primjena kapsaicina (3.2 mM) na isti način nije značajno povećati ekspresiju c-fos mRNA u dorzalni leđne moždine, s obzirom da je ukupni broj c-fos mRNA-pozitivne stanice po dijelu brojani nakon IG izlaganja vozila bila 2,19 ± 0.32 (n = 6), a nakon izlaganja IG kapsaicin bila 1,94 ± 0,23 (n = 7). Analiza raspodjele c-fos mRNA-pozitivne stanice na LI, LII, LIII, LIV, LV, AX i IMLN pokazala, međutim, da kapsaicin uzrokuje značajno 5,2-struko povećanje c-fos ekspresije mRNA u LI, koja je u paralelno s značajnim smanjenjem formiranju c-fos mRNA LIII i LIV (Slika 2B). Treba primijetiti da je razina c-fos transkripcije je vrlo niska, kao i obično manje od 0.7 ili c-fos mRNA-pozitivne stanice po lamela se mjeri u mm odjeljcima jednostrano dorzalnoj leđne moždine 0.01 (Slika 2). Iz tog razloga, eksperimenti koji uključuju HCl i kapsaicin strogo su paralelno s onima koji uključuju odgovarajuća kontrolna /rješenje vozila (slika 2). Slika 2 Broj c-fos mRNA-pozitivne stanice po dijelu (0,01 mm) na različitim lamina i područja jednostranog dorzalnoj polovice repne torakalnog leđne moždine određen 45 minuta, nakon IG davanja (A) NaCl (0.15 M), HCl (0.5 M), (B) vozila (veh) i kapsaicin (kapa, 3.2 mM). Grafikoni prikazuju broji za lamina I-V (LI-LV), površina X (AX) i intermediolateral jezgre (IMLN). Znači + SEM, n kao što je navedeno. * P < 0,05, ** P < 0.01 u usporedbi veh. Pregled Efekti HCl i kapsaicin na unutaržclučanom tlaka i želuca oporavka tekućine (studija 2)
Temeljni IGP izmjerena prije davanja bilo kojem mediju bila je između 400 i 500 Pa [20]. IG injekcijom 2 ml bolus tekuće povećan IGP do razine čija veličina je neovisan o tome je li ubrizgava tekućina bila fiziološka otopina, HCl (0,35 M), vehikulum ili kapsaicina (3.2 mM), kako je određeno 2-3 min nakon injekcije (slika 3A ). Nasuprot tome, vremenski tijek naknadno pada IGP ovisio o prirodi primijenjene medija. Nakon injektiranja slane otopine ili vozila, IGP smanjen na znatno brže nego nakon injekcije kapsaicina, HCl ili pojedinačno (Slika 3B). Dakle, u HCl-a kapsaicin izložena želuci IGP nije značajno pasti tijekom 30 minuta promatranja poslije injekcije, dok je u NaCl- i želuci vozila izložena IGP značajno je smanjen na razinu od oko 65% od IGP izmjerena 2-3 min nakon injekcije (slika 3B). Drugi učinak HCl bilo je povećanje želuca zadržavanje tekućine kako izvesti iz oporavka od 100% od injektirane volumena tekućine iz želuca 30 min nakon injekcije (slika 3C). Nasuprot tome, 30 minuta nakon primjene fiziološke, vozila ili kapsaicina samo 30-60% injektirane volumena tekućine se ponovno (Slika 3C). Slika 3. Utjecaj unutarželučanom injekcijom NaCl (0.15 M), HCl (0,35 M), nosač (veh) i kapsaicin (kapa, 3.2 mM) u (A) početnog povećanja unutarželučanom tlaku (IGP), (B) nakon toga vremena tijek IGP i (c) ponovno prikupljanje fluida iz želuca. NaCl, HCl, veh i kapa se injicira u 2 ml bolusa. Vrijednosti prikazane u prikazu A predstavljaju IGP dosegao 2-3 minuta nakon injekcije. U IGP vrijednosti izmjerene tijekom razdoblja 9-10 min i 29-30 min nakon injekcije (ploča) su izražene kao postotak početne IGP porast zabilježen 2-3 min nakon injekcije i oporavku želučani volumen (ploča C ) izmjerena 30 minuta nakon injekcije u bolusu izražava se kao postotak volumenu injekcije (2 ml). Sredstva + SEM, n = 6-13. ** P < 0.01 u usporedbi s IGP mjeriti 2-3 min nakon injekcije; ++ P < 0.01 u usporedbi s NaCl. Pregled Rasprava
rezultatima trenutnog istraživanja pokazuju da IG uprava HCl i kapsaicin štakorima generira diferencijalne ulazi na NTS i prsne leđne moždine, koja je povezana s različitih učinaka na pražnjenja želuca. Kao što je prethodno opisano [5, 7], želučani signalizacija na moždanom deblu i leđnoj moždini je vizualizirana ekspresija može inducirati gena c-fos na razini mRNA, metodom koja je osnovana kao standardni alat u funkcionalnom neuroanatomije bi ocrtao poticaj -evoked aktivacije neurona [23, 24]. Transkripciju gena c-fos počinje unutar nekoliko minuta nakon ekscitacije neurona [23, 24] i u NTS se čini maksimalno 45 min nakon želudac HCl izazivanja [5]. Iako je izlaganje HCl (0,35 do 0,7 M) inducira želučane ozljede sluznice u koncentraciji u svezi, postoje dokazi da je dovodni signaliziranje želučanog HCl izazov nije izravno povezana s pojavom ozljede sluznice zbog ekspresije C- fos gen u NTS može se potaknuti koncentracija HCl IG koji potiču malo, ako ih ima, epitela štetu [5, 7]. To je, dakle, postoji hipoteza [5, 7] da masivni porast od H + ion gradijent preko želučane sluznice barijera je sama po sebi dovoljna za pogon H iona + u lamina propria gdje mogu nadražiti vagusa aferentnih vlakana, bilo izravno [25, 26], ili posredno preko neuroaktivnih čimbenika koji se otpuštaju u tkivu.
topografski distribuciju c-fos mRNA-pozitivne stanice u NTS bilo neravno ali slična je nakon primjene IG HCl i kapsaicina. Kao što je ranije pokazano imunohistokemijski [22], što je najveći broj od HCl-aktiviranih neurona je viđen u ventromedial dijelu NTS. Osim vagusa želuca ulaz [27], to područje NTS prima ulaz iz leđne lamine I neuroni preko spinosolitary trakta [28-30]. Relativni doprinos vagusa i kralješnice ulaze na ovom dijelu NTS slijedeće kemijske stimulacije želucu ostaje da treba utvrditi.
Ova studija potvrđuje da je višak želučane HCl ne inducira c-fos mRNA i c-fos proteina u dorzalni rog stražnjeg prsne kralježnične moždine [5, 7] koja prima najgušći ulaz s aferentnih neurona koji inerviraju želuca štakora [17, 18]. Slični rezultati dobiveni su napravljene nakon izlaganja sluznice želuca štakora u amonijev hidroksid [7]. Tako se, kao da želučana izazov sa štetnim kemikalijama naznačava izlučivanja podražaja samo nagađanje da je odbijen od strane trenutnog nalaz da aferentnih ulaz iz kapsaicin-izložena trbuh je poslan i na leđnu moždinu i moždanog debla. Ovaj rezultat je u skladu s izrazom TRPV1, na kapsaicin receptor, obje izlučivanja i spinalnih aferentnih neurona koji inerviraju gastrointestinalnog trakta štakora [12-16]. Retrogradna traganje je pokazalo da je 80 i 71% od nodose i neuronima dorzalnog korijenskog ganglija opskrbljuju želudac rat, odnosno, izraziti TRPV1 [16]. Kada izravno primijeniti na somata, kapsaicin izaziva 90% neuronima dorzalnog korijenskog ganglija i 59% od nodose ganglijskim neuronima strše na želucu štakora [31]. A TRPV1 je lako detektirati na nodose ganglija, razina ekspresije u većini TRPV1 vagusnih aferentnih živčanih vlakana u želucu ispod imunohistokemijske praga detekcije [12]. Ovaj primjer bi moglo objasniti zašto IG primjena kapsaicina izaziva relativno slabu ekspresiju c-fos mRNA u NTS. Ne mislimo da je mali učinak kapsaicina je zbog neodgovarajuće doziranje, jer je prethodno utvrđeno je da IG primjena 0,64 mM kapsaicin maksimalno učinkovit u povećanju želučane protok za sluznicu krvi u osjetilnog neurona ovisan način [19].
Kao HCl, kapsaicin primjenjuje u želucu štakora nije značajno poboljšava ukupnu ekspresiju c-fos mRNA u leđnom polovici stražnjeg torakalnog leđne moždine. Međutim, regionalni analiza je pokazala da kapsaicin izazvao neurona u površinskom sloju lamina I dorzalni rog za eksprimiraju c-fos mRNA, učinak koji nije opaženo nakon primjene IG HCl. Ovaj nalaz dobiven s kapsaicin u skladu s projekcijom visceralnih aferentnih neurona u lamina I. i površnom dijelu lamine II, kao i lamina V i područje X štakora i mačaka leđne moždine [17, 32]. Naši podaci pokazuju da primjena kapsaicina u lumenu želuca aktivira neurone koji primarno s lamina I leđne moždine. S obzirom na ovaj nalaz može se isključiti mogućnost da c-fos izraz je neadekvatna metoda za vizualizaciju hemoreceptora signalizacija od lumenu želuca do leđne moždine, te da neuspjeh želučane HCl izazov da izazove c-fos mRNA u leđnoj moždini predstavlja lažno negativan rezultat. Iako neuralne senzora pri čemu višak HCl je otkriven u lumenu želuca nisu poznati, moguće je da su i TRPV1 i kisele osjetljivom na ionske kanale (Asics), kao što ASIC3 su uključeni [33]. Budući da i TRPV1 i ASIC3 izraženi većinom neuronima dorzalnog korijenskog ganglija opskrbljuju želudac rat [16], čini se malo vjerojatno da IG HCl ne inducira c-fos mRNA u leđnoj moždini, jer su dotične aferenti ne nose odgovarajuću kiselinu senzori.
odnosu na broj neurona koji eksprimiraju c-fos mRNA u NTS, broj c-fos mRNA-pozitivne neurona 0,01 mm dijelovima leđne moždine bio je vrlo malen. To je vjerojatno da bi odražavala da je ulaz aferentnih iz želuca štakora do leđne moždine je manja u odnosu na leđne ulaz iz somatskih tkiva i da elektrofiziološki karakterizira kralježnicom aferenti jedva inervira sluznicu probavnog trakta [34, 35]. Niska razina c-fos transkripcije u lamina leđnog leđne moždine napravio to obvezno izvoditi pokuse koji uključuju HCl i kapsaicin strogo paralelno s onima koji uključuje odgovarajuće rješenje za kontrolu /vozila. Pretpostavljamo da je očito različita distribucija c-fos mRNA-pozitivne stanice u dorzalni leđne moždine kontrolnih štakora, kao što je prikazano na dvije ploče na slici 2, ne samo da može odražavati između eksperimenta varijabilnost, ali također različite prirode kontrole /otopina vozila: a vozilo za HCl fiziološku otopinu, vozilo za kapsaicina je fiziološka otopina koja sadrži etanol i Tween 80.
učinak IG kapsaicina povećati indukciju mRNA c-fos lamine i kralježnične moždine bio povezan s značajno smanjenje u c-fos ekspresije mRNA u lamina III i IV. Nemamo nikakvu ravno naprijed objašnjenje za ovo zapažanje. Od lamina III i IV ne čini primiti izravni ulaz iz utrobe [17, 32], mi pretpostavljamo da je smanjenja stvaranja c-fos mRNA u ovim lamina je neizravan učinak kapsaicina. Ubjedljivo, visceralne aferentnih ulaz preko lamina neurona I aktivira inhibiciju kaskada koje pritisnite razdražljivost lamina III i IV neurona.
Aferentnih signalizaciju želučane sluznice izloženosti kapsaicin i višak HCl određuje ne samo koncentracije štetnih kemijskih ali također sve vrijeme njegove prisutnosti u lumenu želuca. Prethodno je nađeno da, u odnosu na fiziološku otopinu, IG davanje HCl na anesteziranim štakorima produžuje zadržavanja tekućine u želucu i kašnjenja prilagodbu IGP [7, 20]. HCl-induciranog želučanog fluida rezultate zadržavanja od inhibicije želučanog pražnjenja i poboljšane želučanom soku, bikarbonat i lučenjem sluzi [20, 36], no analiza želučanog sadržaja je izvan opsega ove studije. HCl-evocirani inhibicija pražnjenja želuca je posredovana živčanih refleksa koje su pokrenute kako u želucu i dvanaesniku [20, 37-40]. Koncentracija HCl ispitana gastropyloric motornih učincima u anesteziranih štakora smanjena je na 0,35 M, jer anestezija slabi želučane sluznice barijeru HCl i koncentraciju IG HCl (0.5 M), ispituje na svoj učinak na središnji c-fos ekspresiju inducira opsežna ozljede u anesteziranih štakora, ali uzrokuje manje oštećenja želuca u svjesnih životinja [5]. Kako su eksperimenti otkrili, želučani izloženost HCl i kapsaicin modificirani gastropyloric pokretljivost u diferencijalnoj način. Dok pražnjenje želuca bio blokiran HCl, ali ne dira po kapsaicina, prilagodba IGP je spriječen od strane HCl i kapsaicina. Učinak kapsaicina odgoditi IGP adaptaciju može biti povezano s njegove sposobnosti da pobudi kontrakcije ili opuštanje želučane muskulature štakora, tip odgovora, ovisno o dozi kapsaicina i regije i mišićnog sloja želuca pod studiji [19, 41-43 ].
s obzirom na različitu učinak IG HCl i kapsaicina na leđne c-fos ekspresiju bilo je osobito važno imati na umu da, za razliku od HCl, kapsaicin uspjeli poboljšati želučane oporavak tekućine, što znači da je pražnjenje želuca dogodila netaknut i IG davati kapsaicin brzo prevezen u gornjem tankom crijevu. Moglo bi se stoga tvrditi da je kapsaicin-evocirani c-fos odgovor u NTS, što je manje od toga da se HCl i leđne moždine su zbog kapsaicin-evociranih uzbude oba želučanih i crijevnih podražaja, dok je podražaj ni učinak HCl je uglavnom usmjerene na želučanih podražaja. Neuspjeh želučane HCl izazov za indukciju c-fos ekspresiju u leđnoj moždini ne može se objasniti prijavljen sposobnost izlučivanja podražaja bi aktivirali silazno putove i tako inhibira aferentne ulaz do leđne moždine [44, 45], jer bilateralna kronična vagotomija uspije da bi se otkrilo svako povećanje indukcije mRNA leđne c-fos zbog želučane HCl izazov [5]. Postoje i drugi načini za objašnjenje razlika sposobnost IG HCl i kapsaicin da se potakne c-fos mRNA u NTS i leđne moždine, a analiza tih čimbenika je izvan dosega ove studije. Na primjer, postoje dokazi da je kapsaicin malo apsorbira u stijenku želuca [19], što bi također objasnilo zašto IG davati kapsaicin je relativno slaba u poticanju želučanog vagalne podražaja strše na NTS, dok kapsaicina prebačen u gornjem tankom crijevu mogu više lako doći i potaknuti kralježnice aferentnih živčanih završetaka u probavnom lamina propria.
Zbog svoje istraživački prirodi, struja studija ima svoja ograničenja. Tako, diferencijalni učinak IG primjenjuje kapsaicin i HCl na izlučivanja i spinalnih aferentnih puteva je vjerojatno da će ovisiti ne samo o Brzina pražnjenja želuca i apsorpcijske kinetike HCl i kapsaicin, ali i o opsegu oštećenja sluznice i magnitude mukozne krvi teći. Dok je cjelovitost sluznice želuca poremećena samo HCl [5, 7, 46], ali ne i kapsaicina [11], želučane sluznice protok krvi je povišen i od strane kapsaicina [19] i backdiffusing HCl [46].
Zaključak pregled želuca izazov s HCl i kapsaicina različito je signaliziran na NTS i leđne moždine, što ukazuje da su ta dva podražaja obrađuje različitih bolnih aferentnih putova. Od HCl inhibira pražnjenje želuca, dok kapsaicin ne, to se zaključiti da je HCl-evocirani aferentnih ulaz za NTS se prenosi izlučivanja podražaja u želucu, dok aktivacija NTS i leđne lamina I neurona kapsaicina posredovan i po vagalna podražaja u želucu i spinalnim podražaja u gornjem tankom crijevu. Daljnji pokusi je potreban da bi se utvrdilo kako se ovi nalazi odnose na želučanu chemonociception. U dogovoru s našim c-fos podataka, osjećaja ozljede izazvane viškom želučane HCl je posredovana izlučivanja aferentnih neurona [4], a to čeka na pregled koji aferentnih putova relej mučnine potaknutog želuca kapsaicina. Mechanonociception priziva nadimanje želuca se nameću podražaja kralješnice [4], iako je izraz c-fos se vidi kako u leđnoj moždini i, u većoj mjeri, u moždanom deblu [47]. Pregled Metode
Životinje pregled studija je odobren od strane etičkog povjerenstva pri Federalnom ministarstvu obrazovanja, znanosti i kulture Republike Austrije i provode u skladu s Direktivom Vijeća europskih zajednica od 24. studenoga 1986. (86/609 /EEC) , Eksperimenti su dizajnirani na takav način da se minimizira broj životinja koje se koriste i njihove patnje. Korišteni su Ženski dobi-odgovarajuće Sprague-Dawley (Abteilung für Labortierkunde und -genetik, Medicinski fakultet Sveučilišta u Beču, himberg, Austrija) težine 180-220 g. Su uzgajani u grupama po četiri u plastične prozirne kaveze pod standardnim uvjetima; Svjetla su bila upaljena od 6:00 do 6:00 sati. pregled Eksperimentalni protokoli pregled Svi pokusi su se dogodili za vrijeme svijetle faze između 8:00 i 12:00 sati. Dvadeset sati prije početka pokusa štakori su lišeni hrane kako bi se osiguralo da je želudac bio prazan u vrijeme pokusa, dok je voda bila dostupna ad libitum tijekom ove pripremne faze. Osim toga, štakori su bili smješteni u skupinama od dva na rešetki kat kako bi se spriječilo coprophagy. Dvije studije s različitim eksperimentalnim protokolima su provedena. Pregled Studija 1 provedena je s ne-anesteziraju životinja. Fiziološku otopinu (0,15 M NaCl), HCl (0.5 M), kapsaicin (0,64 i 3,2 mM) ili njegova vozila su primijenjene IG u volumenu od 10 ml /kg putem meke ishranu dojenčeta cijev (vanjski promjer 2.2 mm, Portex, Hythe , Velika Britanija). Nakon 45 minuta, štakori su eutanazirani intraperitonealnom injekcijom prekomjerne doze pentobarbitala (200 mg /kg; Intervet, Beč, Austrija) i njihove mozga i leđne moždine brzo ukloniti. Kapsaicin (Sigma, Beč, Austrija) otopi se u mediju koji sadrži 10% Tween 80, 10% etanola i 80% fiziološke otopine da se dobije osnovnu otopinu 2 i 10 mg /ml (6.4 i 32 mM) kapsaicina. Te osnovne otopine se tada razrijede s fiziološkom otopinom da se dobije ispitnih otopina 0,64 i 3,2 mM kapsaicina, respektivno. Vozilo za kapsaicina se sastoji od 1% Tween 80, 1% etanola i 98% fiziološke otopine soli pregled Studija 2 izveden je sa životinjama koje su anestezirani fenobarbitalom (230 mg /kg, intraperitonalno, Sigma), te se stavljaju na termostatiranom stol za održavanje njihove rektalne temperature na 37 stupnjeva Celzijusa [20]. Štakori su opremljeni trahealne kanile olakšavaju spontanu disanje. Kamila u lijevu vratnu venu se koristi za kontinuiranu infuziju fiziološke otopine (1.5 ml /h) kako bi se izbjeglo isušivanje. Nakon laparotomije je srednja Ig kateter (vanjski promjer: 2.2 mm) se insertira u želucu preko jednjaka i želuca ispran [20]. Sa svom vrhu koja je smještena u corpus regiji, kateter se koristi za snimanje intragastričnu tlak (IGP) preko pretvornika tlaka, kao i kako bi se uvelo tekućine u i ocijedi iz želuca [20]. Ova metoda mjerenja IGP je opisan i potvrđeni u prethodnoj studiji [20]. Nakon perioda ekvilibracije od 30 minuta, 2 ml bolus tekućina polako se injektira u želudac kroz razdoblje od 5 s a ostaje u želucu u trajanju od 30 minuta, nakon čega se ocijedi želuca i težini obnovljene tekućine utvrđen , Oporavak tekućine iz želuca (neizravna mjera pražnjenja želuca) izražena je kao postotak težine tekućine daju u želudac [20]. Svaki štakor je bio podvrgnut 4 injekcijom /obnavljanja pokusima u razmaku od 15 minuta, tijekom kojeg je trbuh neobrađena. Prva dva priming pokusi s fiziološkom otopinom provedena su, nakon čega slijedi, bilo sa probnim s fiziološkom otopinom i probnim s HCl (0,35 M) ili ispitivanog pokusu s vozilom i probnim s kapsaicinom (3,2 mM). IGP je prosjek za razdoblje od 2-3 min, 9-10 minuta i 29-30 minuta nakon injekcije. Od kako je prije objašnjeno [20] vrhunac uspon IGP postubrizgavanje raznovrstan zbog razlika u brzini ubrizgavanja je IGP u prosjeku u razdoblju od 2-3 minuta nakon injekcije je uzeta kao 100%, a IGP zabilježene tijekom naknadnog praćenja razdoblja izražena kao postotak te referentne vrijednosti.
in situ hibridizacija autoradiografijom pregled korijenu mozga i leđne moždine su brzo uklonjena i zamrznute na prahu suhim ledom. Koronalne sekcije (0,01 mm) su izrezani serijski iz moždanog debla na rostrokaudalnih produženja područja postrema i repne prsne kralježnične moždine u kriostatu [5, 6, 22]. Svaki šesti dio je obrađen za in situ hibridizaciju s oligodeoksiribonukleotidni probom koja je označena na 3 'kraju s [ 35S] deoksiadenozin 5' (α-tio) trifosfatnih kao što je prethodno opisano [6]. Sekcije su umočen u Ilford K5 fotografske emulzije, a nakon 18-25 dana od izloženosti u zatvorenim kutijama na 4 stupnjeva Celzija, su se razvili autoradiogrami i dijelovi negativno hematoksilinom i pokriju [6]. Specifičnost postupka je dokazano odsutnosti bilo hibridizacijskog signala kada kontrolne sekcije su hibridizirani sa smjesom obilježenog sondom sa 100-strukim suviškom neoznačenog ( "hladnim") sondu.
Autoradiogrami su ispitani u kodirani način sa svjetlosnim mikroskopom (Axiophot, Zeiss, Oberkochen, Njemačka) povezuje se s računalna analiza slike sustava (Imaging, St. Catharines, Ontario, Kanada). Stanice su smatrani c-fos mRNA-pozitivnim ako je njihov gustoća čestica iznosi najmanje 10 puta veći od [6] pozadini. Kako bi se poboljšala pouzdanost kvantitativne rezultate, ocjenjuje se 5 moždanog debla dijelovi i 7-10 dijelovi leđne moždine od svake životinje. Ti dijelovi su odabrani tako da su 0,05 mm od drugoga kako bi se izbjeglo da su iste stanice broje dva puta. MRNA-pozitivne stanice c-fos po sekciji su izbrojene unilateralno u nt na razini područja postrema i dorzalnoj polovici kralježnične moždine u kaudalnom torakalne razine (T8-T12). Ove strukture su identificirani u skladu s Molander i Grant [48] i Paxinos i Watson [49]. U leđnoj polovini leđne moždine, distribucija c-fos mRNA-pozitivne stanice na lamina IV (LI-LV), površina X (AX) oko središnjeg kanala i intermediolateral jezgre (IMLN) procijenjena je prema štakorima

• Tumora gastrointestinalne strome želuca oponaša jetreni tumor: prikaz slučaja
• Novi postupak za obnovu žučnog pomoću izoliranu želučane cijevi s vaskulariziranog stapke: live životinja eksperimentalnu studiju i prvi klinički slučaj