la inhibición dependiente de la dosis de la lesión gástrica por hidrógeno en el agua potable electrolizada alcalina water

inhibición dependiente de la dosis de la lesión gástrica por hidrógeno en el agua potable electrolizada alcalina
Abstract
Antecedentes
de hidrógeno ha sido reportado para aliviar el daño en muchos modelos de enfermedades , y es un aditivo potencial en el agua potable para proporcionar efectos de protección para los pacientes ya que varios estudios clínicos revelados. Sin embargo, la ausencia de una relación dosis-respuesta en la aplicación de hidrógeno es desconcertante. Se intentó identificar la relación dosis-respuesta de hidrógeno en el agua potable alcalina electrolizada a través de la aspirina inducida modelo de lesión gástrica.
Métodos
En este estudio, el agua alcalina rica en hidrógeno se obtuvo mediante la adición de H 2 a agua electrolizada en una atmósfera de presión. Después de 2 semanas de consumo de alcohol, se detectó el daño de la mucosa gástrica junto con MPO, MDA y 8-OHdG en la aspirina rata modelo de lesión gástrica inducida.
Resultados
inhibición dependiente de la dosis de hidrógeno se observó en la mucosa del estómago. Bajo pH 8,5, 0,07, 0,22 y 0,84 ppm de hidrógeno mostraron una alta correlación con los efectos inhibidores mostrados por área de la erosión, la actividad MPO y el contenido de MDA en el estómago. histología gástrica también demostró la inhibición del daño por el agua alcalina rica en hidrógeno. Sin embargo, el 8-OHdG nivel en suero no tuvo efecto dependiente de la dosis de hidrógeno significativa. pH 9,5 mostró mayor pero no significativa respuesta inhibidora en comparación con pH 8,5.
Conclusiones
de hidrógeno es eficaz en el alivio de la lesión gástrica inducida por la aspirina-HCl, y el efecto inhibidor es dependiente de la dosis. La razón detrás de esto puede ser que el agua rica en hidrógeno directamente interactuado con el tejido diana, mientras que la concentración de hidrógeno en la sangre fue amortiguada por el glucógeno del hígado, que evoca un efecto dosis-respuesta suprimida. El agua potable rico en hidrógeno puede proteger a los individuos sanos de daño gástrico causado por el estrés oxidativo.
Palabras clave
agua alcalina dosis-respuesta electrolizada fondo gástrico hidrógeno lesión oxidativa estrés
hidrógeno endógena es producido por fermentación en el colon en el tracto gastrointestinal de roedores [1], los seres humanos [2], y hasta los insectos [3, 4]. El hidrógeno penetra rápidamente los tejidos y los vasos sanguíneos por difusión libre, y luego se transporta a todos los órganos. El promedio H 2 concentración en la capa mucosa del estómago del ratón es de 43 M [5]. Mientras que en el hígado, el bazo y el intestino delgado, las concentraciones son 53, 48 y 168 mM, respectivamente [6]. Francia El papel fisiológico de H 2 no es todavía clara. Ohsawa et al. [7] encontró que el hidrógeno tiene un papel antioxidante y anti-apoptótica que protege el cerebro contra el daño por isquemia-reperfusión y accidente cerebrovascular mediante la neutralización de los radicales hidroxilo selectivamente y peroxinitrito. Por tanto, estos resultados sugieren que H 2 se puede aplicar terapéuticamente como un gas médico. Además, la aplicación clínica de H 2 ha demostrado muchas ventajas adicionales. En primer lugar, H 2 no reacciona con el anión superóxido y peróxido de hidrógeno radical, que tienen importantes papeles fisiológicos [7]. En segundo lugar, se puede enviar fácilmente a través de gas, agua potable, y la infusión intravenosa; y sus características favorables de distribución permiten que llegue a muchos órganos que pueden no llegar a otros medicamentos, otorgándole el acceso a la mitocondria, núcleo, y al otro lado de la barrera sangre-cerebro. Y, finalmente, H 2 provoca pocos efectos secundarios. Su aplicación en Hydreliox, una mezcla exótica de respiración del 49% de hidrógeno, 50% de helio y el 1% de oxígeno, que se utiliza en el buceo profundo, demuestra su seguridad para uso humano [8, 9]. Del mismo modo, seis ensayos clínicos, entre las cuales la más prolongada del tratamiento fue de 6 meses, también mostraron efectos adversos detectables de hidrógeno en el agua potable, la hemodiálisis o infusión intravenosa [10-16].
En los últimos cinco años, los efectos protectores evidentes de H 2 se han documentado durante 63 modelos de enfermedad y las enfermedades humanas [17], incluyendo el infarto cerebral, hepático y la lesión miocárdica, enfermedad de Parkinson, el síndrome metabólico, la inflamación y la alergia, el trasplante de órganos, y así sucesivamente [18-20] . Sin embargo, los posibles efectos de hidrógeno sobre el daño gástrico están aún por ser estudiado, y además, la ausencia de un efecto de dosis-respuesta en el uso de hidrógeno como una molécula terapéutica en estudios anteriores es sorprendente por varias razones. En primer lugar, la cantidad de hidrógeno absorbido por el agua potable es mucho menor que por la inhalación de 1-4% de gas hidrógeno, el agua sin embargo rico en hidrógeno mostró efectos similares o incluso mejores beneficioso que el gas de hidrógeno [10, 21]. En segundo lugar, la cantidad de hidrógeno endógeno generado por las bacterias intestinales (aproximadamente 1 litro /día) es mucho más que la cantidad de agua potable rica en hidrógeno (generalmente menos de 50 ml /día) [18, 21]. En tercer lugar, el consumo de hidrógeno rico en agua en diferentes concentraciones, la inyección de diferentes cantidades de solución salina de hidrógeno, o la inhalación de diferentes cantidades de gas hidrógeno no mostró una diferencia discernible en efectos [22-24].
En este estudio, rico en hidrógeno alcalino agua se genera a través de la electrólisis. hidrógeno mezclado y gas nitrógeno (2: 8 y 7: 3) se utilizó para ajustar la concentración de hidrógeno en agua para obtener tres diferentes concentraciones de hidrógeno (0,07 ppm, 0,22 ppm, 0,84 ppm). No se realizó la neutralización como la mayoría de los estudios en el pasado [25-28], ya que ambos pH alto y el hidrógeno pueden aliviar lesiones aspirina en el estómago. agua alcalina electrolizada en sí mismo puede inhibir la lesión gástrica inducida por aspirina [29], y, además, la carga alcalina en el agua pueden evitar que un aumento de la excreción urinaria de minerales como, calcio y magnesio, causados ​​por la acidez del cuerpo [30]. No se observaron efectos inhibidores dependientes de la dosis de hidrógeno en el estómago, pero no eran evidentes en el suero. Los resultados sugieren que existe un efecto dosis-respuesta cuando el hidrógeno interactúa directamente con el tejido, pero una alta dosis de hidrógeno no puede aumentar los efectos beneficiosos en los órganos diana a través de transporte de sangre.
Métodos
declaración de Ética Animal
mantenimiento y los procedimientos experimentales se llevaron a cabo en estricta conformidad con el Comité Institucional de Cuidado de Animales y el empleo (IACUC) de la Universidad de Tsinghua, que es una rama de Pekín Cuidado de Animales y el empleo Comisión. Todos los experimentos fueron revisados ​​y aprobados por el IACUC (número de permiso 12-LY-02), y se hicieron todos los esfuerzos para minimizar el sufrimiento.
Reactivos
se prepararon todas las soluciones antes de su uso. Se obtuvo agua alcalina electrolizada de un electrolizador de agua ion alcalino (TK7505, Panasonic, Japón), un electrolizador comercial de Japón. El 8-OHdG y el kit ELISA HEL fueron adquiridos de Japan Institute para el Control de Envejecimiento (Jalca). ácido tiobarbitúrico se obtuvo de J & K Scientific Ltd; Bromuro de hexadecil trimetil amonio fue adquirido de Beijing río Amanecer Biotecnología Co., Ltd; y 3,3 ', 5,5', - tetrametilbencidina se obtuvo de Amresco, EE.UU.
Animales y modelo de lesión gástrica
ratas Sprague Dawley macho que pesan 150-170 g se adquirieron de Beijing Vital River Laboratories, y se aloja. en el Centro de Análisis Biomédicas, Universidad de Tsinghua. El experimento comenzó cuando las ratas alcanzaron 200-220 g de peso. El agua alcalina con hidrógeno se preparó todas las tardes de agua de la instalación del grifo (pH 6,8, conductividad 40 S /cm) y se introdujo en bolsas de aluminio. Dos valores de pH, 8.5 y 9.5, se seleccionaron en este estudio. pH 8,5 y 9,5 son los límites arriba de la norma de agua potable en China y el estándar para electrolizador en Japón (véase Japón Industrial Standard, JIS T 2004:. 2005), respectivamente. El agua alcalina con un pH de 8,5 y 9,5 contenía 0,07 ppm y 0,22 ppm de hidrógeno, respectivamente, durante la electrólisis (El electrolizador es Panasonic TK7505 de Japón). Además, más de hidrógeno se disolvió en agua con hidrógeno mezclado y gas nitrógeno (2: 8 y 7: 3), que se introduce en las bolsas de aluminio a una presión atmosférica, a fin de producir 0,22 ppm y el agua de hidrógeno 0,84 ppm. El uso de nitrógeno en la mezcla de gas era una consideración para la seguridad. Además, la atmósfera contiene 78% de nitrógeno, que hace que sea poco probable que un gas funcional en nuestro estudio. La concentración de hidrógeno en el agua se midió mediante un medidor portátil de hidrógeno disuelto DH-35A (DKK-TOA Corporation, Japón). La concentración de hidrógeno se mantuvo durante 24 h sin cambio detectable.
Cada animal se mantuvo en una jaula separada, y tuvieron libre acceso al agua por la noche 6 p.m.-09 a.m.. La ingesta de agua y el peso corporal se registraron diariamente para cada rata. Todas las ratas se distribuyeron al azar en 7 grupos de 6 a 8 ratas cada uno, y se les da agua potable diferente (Tabla 1). Grupo A: pH 9,5, 0,84 ppm H 2, B: pH 9,5, 0,22 ppm H 2, C: pH 8,5, 0,84 ppm H 2, D: pH 8,5, 0,22 ppm H 2, E: pH 8,5, 0,07 ppm H 2, F: pH 6,8, 0 ppm H 2 (el agua del grifo instalación), G: pH 6,8, 0 ppm H 2 (el agua del grifo instalación ). La dosis final de hidrógeno de cada grupo se enumeran en la Tabla 1. Después de dos semanas de tratamiento, los animales se mantuvieron en ayunas durante 18 horas con agua rica en hidrógeno todavía disponibles. El agua potable se retiró una hora antes de las ratas se dosificaron con 200 mg /kg de aspirina y 0,15 N HCl (8 ml /kg) junto con carboximetilcelulosa sódica 1% en la intubación. Grupo G fue de hambre, pero no tratada con aspirina-HCl, como se indica en la Tabla 1. Después de tres horas, los animales fueron anestesiados por uretano (1 mg /kg) y se extrajo sangre de la aorta abdominal, después de lo cual se sacrificaron por desangrado. Tabla 1 Los grupos de tratamiento y ganancia media de peso corporal, la ingesta diaria de agua y la presencia de lesiones gástricas Barcelona grupos
pH
H
2 ( ppm)
H
2 dosis (mg /d /kg)
† media ± SE
aumento de peso (g)
‡ media ± SE
La ingesta de agua (ml /d) media ± SE
Lesiones
Un
9,5
0,84
80,6 ± 1,9 85,5 ± 6,0

25,6 ± 0,8
Sí Francia B
9,5
0,22
21,1 ± 1,6 81,9 ± 6,4

26,6 ± 2,5
Sí
C
8.5
0,84
80,6 ± 2,4 87,3 ± 5,0

25,9 ± 1,2
Sí
D
8.5
0,22
20,1 ± 0,8 78,5 ± 5,6

25,2 ± 1,4
Sí
E
8.5
0,07
6,8 ± 0,4 92,5 ± 3,0

26,9 ± 1,8
Sí
F
6,8
0 0

89,9 ± 3,5 27,2 ± 1,1

Sí
G
6.8
0 0

81,5 ± 7,0 26,3 ± 0,8

Sin
Cada grupo se compone de 6-8 ratas. † La dosis H2 para cada rata se calcula (concentración de hidrógeno x ingesta media diaria de agua) /peso corporal medio. ganancia ‡ peso se calculó restando el peso corporal en el primer día de tratamiento del peso corporal antes de la lesión gástrica. No hay diferencia significativa entre los diferentes grupos.
Evaluación de las lesiones de la mucosa gástrica
Después los animales se sacrificaron, se eliminó cada uno de estómago, se abrió y se lavó con PBS. El área erosionado en la superficie del estómago trasera (puntuación gástrico) se midió bajo un microscopio de disección por una persona sin experimentar el procedimiento de dosificación. Para la evaluación histológica, se cortó un trozo de pared de órgano en la región inferior del estómago, embebidos en parafina, ácido periódico de Schiff (PAS) manchado, manchado de venta libre hematoxilina, y se examina bajo el microscopio de luz. La mucosa gástrica se raspó del estómago resto con un portaobjetos de vidrio y se almacenó a -80 ° C.
Mieloperoxidasa actividad (MPO)
Cada muestra gástrica se molió mediante Teflon Potter-Elvehjem homogeneizador en 500 l 10 mM tampón fosfato de potasio (pH 7,8) que contiene 30 mM KCl, 1% de fluoruro de fenilmetanosulfonilo y EDTA 5 mM, para obtener un homogeneizado. El homogenado se centrifugó y el sobrenadante se utilizó para detectar la concentración de proteína. El sedimento se re-homogeneizaron en 500 l de tampón de 0,05 M de fosfato de potasio (pH 5,4) que contiene bromuro de amonio hexadecil trimetil 0,5%, y luego se centrifuga. El sobrenadante 100 l se mezcló con el mismo volumen de tampón de 0,05 M de potasio fosfato (pH 5,4) que contiene 15 mM 3,3 ', 5,5', - tetrametilbencidina y 2% H 2O 2. actividad MPO se detectó mediante lector de microplacas a 630 nm cada 15 segundos durante 5 minutos, y se expresó como unidades por mg de proteína. La unidad de MPO se definió como un cambio de absorbancia (1,0 /minuto) a 630 nm a temperatura ambiente. La concentración total de proteínas en los homogenados de tejido se midió por el método de tinción con azul brillante de Coomassie.
Malondialdehído (MDA) concentración relativa Francia El MDA generado en la mucosa gástrica, como un producto de la peroxidación lipídica, se detectó por el ácido tiobarbitúrico reacción. mucosa gástrica se homogeneizó por Teflon Potter-Elvehjem homogeneizador y ultrasonidos en 500 l de 0,15 M de KCl a 0 ° C para obtener un homogeneizado. El homogeneizado se separó en dos tubos. Uno se utilizó para medir la concentración de proteína, mientras que el otro 150 l se utilizó para detectar MDA. La proteína se desnaturalizó mediante la adición de 150 ml de SDS, 150 ml de ácido acético y 150 ml recién preparados solución de ácido tiobarbitúrico 0,82%. La mezcla se colocó en un baño de agua hirviendo durante 45 min, después se enfrió y se centrifugó. El sobrenadante se utilizó para determinar la concentración relativa MDA por lector de microplacas a 532 nm.
Medición de suero de 8-hidroxi-2 'desoxiguanosina (8-OHdG)
concentración 8-OHdG es un biomarcador de daño del ADN y se detectó mediante un kit ELISA (Cat. IM-KOGHS 040914E) del Instituto Japonés para el control del envejecimiento. La prueba se realizó siguiendo las instrucciones del fabricante.
hexanoılo-lisina (HEL) concentración de aducto
HEL es también un biomarcador de estrés oxidativo. Las concentraciones en suero HEL se determinaron mediante un kit ELISA (Cat. KHL-700 /E) del Instituto Japonés para el control del envejecimiento. El ensayo se realizó siguiendo las instrucciones del fabricante.
Análisis estadístico
Los resultados se presentan como la media ± error estándar (SE), y los datos se compararon mediante análisis de varianza (ANOVA) de prueba solo por un camino de Statistics 18. las diferencias se consideraron significativas cuando el valor de p fue inferior a 0,05 por prueba de Tukey.
: resultados de la consumo de agua potable y el daño gástrico
Como era de esperar, el volumen promedio de consumo de agua y el aumento de peso promedio por rata fueron similares en todos los grupos de tratamiento, como se muestra en la Tabla 1. Estos resultados implican que tanto el pH (8,5 y 9,5) y la concentración de hidrógeno en el agua potable (0,84 ppm, 0,22 ppm, y 0,07 ppm) no afectaron el deseo de los animales para consumir agua, y por lo tanto las ratas crecieron a la misma velocidad. Por lo tanto, la lesión gástrica no debería haber sido afectado por posibles diferencias en la conducta de beber.
Resultados anatómicos mostraron que los grupos con alto pH 9.5, alta concentración de hidrógeno 0,84 ppm, o ambos (grupos A, B y C), tenían una inhibición significativa del daño gástrico en comparación con el agua del grifo para beber instalación de grupo (grupo F) (Figura 1). Y al mismo pH, inhibición significativa dependiente de la dosis de hidrógeno se observó dentro de los grupos C, D y E. Si se compararon los efectos inhibidores y de las concentraciones de hidrógeno, se encontró correlación positiva alta (Tabla 2). A la misma concentración de hidrógeno, un pH elevado también proporcionó más de inhibición (por ejemplo, A y C, o B y D), aunque los efectos no fueron estadísticamente significativos. Figura 1 La medición de la puntuación gástrico (el área de erosiones gástricas) de 7 grupos. Los valores son la media ± SE de 6 a 8 animales. **: P < 0,01, en comparación con el grupo F (control de agua neutra). #: P < 0,05, en comparación con el grupo E (bajo hidrógeno y grupo pH bajo).
Tabla 2 Correlación entre los efectos de inhibición y concentraciones de hidrógeno en agua electrolizada pH 8,5
Grupo
Erosión
†
MPO
†
MDA
†
8-OHdG
‡
C: H2 (6,8 g /d /kg)
2,1% 1,6%

32,6% -2,3%

D: H2 (20,1 g /d /kg)
13,6% 36,8%

36,8% 41,9%

E: H2 (80,6 g /d /kg)
38,6% 77,3%

61,9% 41,4%

coeficiente de Pearson 0,990

0,952 0,999

0,633
† efecto protector de la mucosa en cada concentración de hidrógeno se calculó (nivel de daño en el grupo F - nivel de daño en el grupo C o D o E) /(nivel de daño en el grupo F -. nivel de daño en el grupo G)
‡ en el suero, ya que el daño gástrico no afectó el nivel sérico 8-OHdG, el efecto protector se calcula (nivel de daño en el grupo F - nivel de daño en el grupo C o D o E ) /nivel de daño en el grupo F.
efectos inhibitorios también se evidencia a través de la tinción histológica. Las diferentes regiones del estómago tenían diferentes niveles de daño, que no eran consistentes dentro de un grupo de dosis. Hemos encontrado que la zona del fondo del estómago se lo general uniformemente dañado por la aspirina-HCl, y ningún sangrado Grove erosión se había observado en esa región. Por lo tanto, los tejidos histológicos de esa parte se eligieron para la comparación como se muestra en la Figura 2a. Como era de esperar, fuerte erosión no se observó en todas las muestras (Figura 2b). Las muestras de grupo G tenían capa de la mucosa intacta. Grupo F mostró que la superficie de la mucosa se había separado los desechos celulares, así como la producción de moco defectuoso en muchas regiones, las cuales han sido señalados en la Figura 2b. Las muestras de los grupos A y C tenían capa de moco relativamente intacta, y la mayoría de las células mucosas de secreción todavía eran funcionales en comparación con el grupo F, que ilustra los efectos inhibidores de agua electrolizada rico en hidrógeno. Grupo B, D y E también estaban manchadas y examina bajo el microscopio, y tenían niveles medios de la lesión (archivo adicional 1: Figura S2). Sin embargo, el fenotipo no se puede cuantificar. Figura 2 La posición de la muestra histológica (a) y tinción de PAS de estómago glandular de los grupos A, C, F y G (b). La flecha azul indica la capa de moco (rojo) en la superficie de la pared interior, y la flecha roja señala los moribundos y células desprendidas. Las flechas negras muestran las células productoras de moco (rojo). Ampliación: 100. Todas las imágenes muestran el fenotipo representativos de sus muestras correspondientes
hidrógeno rico en agua electrolizada aliviado se detectó de neutrófilos mediada por la inflamación y el estrés oxidativo en la mucosa del estómago
mieloperoxidasa actividad (MPO) a partir de la mucosa por tiobarbitúrico. reacción del ácido y se normalizó con la concentración de proteína para cada muestra. Las actividades fueron inhibidas por pH 9,5 y 8,5 de agua electrolizada de manera dependiente de la dosis de hidrógeno en comparación con el grupo F (Figura 3). Los niveles de inhibición se correlacionan bien con la dosis de hidrógeno (Tabla 2). Figura 3 El efecto del hidrógeno sobre la actividad MPO en la mucosa gástrica después de lesionados por la aspirina-HCl. Los valores son la media ± SE de 6 a 8 animales. *: P < 0,05, en comparación con los grupos E (bajo hidrógeno y grupo pH bajo) o F (control de agua neutral).
Malondialdehído (MDA) se genera a partir especies reactivas de oxígeno (ROS), y como tal, se ensayó in vivo como un biomarcador de estrés oxidativo. El contenido de MDA de la mucosa en los grupos tratados con agua electrolizada ricos en hidrógeno mostró una reducción significativa en comparación con el grupo de agua potable inalterada (Figura 4). Y el patrón de inhibición es similar a los resultados de puntuación gástrico y la actividad MPO. Figura 4 niveles de MDA en la mucosa gástrica de 7 grupos. La cantidad de MDA se normalizó con el nivel de MDA grupo G (sin control de las lesiones). Los valores son la media ± SE de 6 a 8 animales. *: P < 0,05, en comparación con el grupo F (control de agua neutral).
Agua electrolizada rico en hidrógeno redujo el nivel de 8-OHdG en suero
8-OHdG es una de las formas predominantes de daño del ADN por radicales libres inducida en núcleos y mitocondrias, y por lo tanto ha sido ampliamente utilizado como un biomarcador para el estrés oxidativo y la carcinogénesis. Los niveles en suero de 8-OHdG se redujeron significativamente en los grupos de hidrógeno de alta (concentración de hidrógeno mayor que o igual a 0,22 ppm) comparado con el grupo de control de agua del grifo F (Figura 5). Sin embargo, a diferencia de los otros criterios de valoración de pruebas, los niveles de reducción de la dosis y de hidrógeno no estaban correlacionados en pH 8,5 grupos, lo que sugiere que un efecto dosis-respuesta no estuvo presente en el suero 8-OHdG (Tabla 2). La otra conclusión diferente en la prueba 8-OHdG fue que el grupo G tenía nivel similar con el grupo F, lo que podría indicar ambos grupos tenían nivel de fondo de 8-OHdG. Otro marcador de estrés oxidativo, HEL, que detecta la peroxidación lipídica, también se ensayó en el suero, pero los resultados no mostraron diferencias significativas entre todos los grupos (archivo adicional 1: Figura S3). Figura 5 El nivel sérico de 8-OHdG en diferentes grupos. Los valores son la media ± SE de 6 a 8 animales. ***: P < 0,001, en comparación con el grupo E (bajo hidrógeno y grupo pH bajo), M (control de agua neutra), o G (sin control de las lesiones).
Discusión
mencionó anteriormente, un problema desconcertante en la aplicación del hidrógeno es la falta de efecto dosis-respuesta. Este estudio proporcionó algunas pruebas de que el hidrógeno efectos inhibidores dependientes de la dosis se pueden observar en el modelo de lesión estómago inducida por aspirina por medio de agua alcalina electrolizada, y por lo tanto, la ausencia de una relación establecida entre los niveles de dosis y efecto puede ser una consecuencia del método de entrega, el diseño experimental, y órgano diana.
en nuestro estudio, nos dimos tres diferentes concentraciones de hidrógeno en agua alcalina, y hemos observado efectos dependientes de la dosis evidentes en la mucosa del estómago, mientras que la mayoría de los informes sólo se compararon los efectos de hidrógeno con o sin [31-37]. Todos ellos aplica alta concentración de hidrógeno de 0,8 ppm a 1,5 ppm, y todos ellos observaron efectos protectores contra diferentes enfermedades o tratamientos médicos. A pesar de que no se dio de beber la cantidad exacta de los animales, se puede estimar la dosis de hidrógeno por su concentración ya que los animales eran siempre libre acceso al agua y el hidrógeno no cambió su conducta de beber. Sólo un estudio aplicó dos concentraciones de hidrógeno diferentes (0,08 y 1,5 ppm) en el tratamiento de modelo de ratón de la enfermedad de Parkinson. Sin embargo, sus resultados sugerido tanto dosis tenía una función similar en el alivio de los avances de la neurodegeneración [22]. Otra diferencia principal entre nuestros y estudios previos es que el hidrógeno se suministra a través de agua potable directamente en el estómago, en lugar de ser transportado por la sangre a los órganos diana [17, 18]. El agua puede ser absorbida en el estómago, y creemos que las concentraciones de hidrógeno en las células de la mucosa del estómago varían dependiendo de la concentración de hidrógeno en el agua. Sin embargo, para otros órganos esto puede no ser el caso, ya que el hidrógeno se introduce en la sangre primero, y luego se transporta a todos los órganos en todo el cuerpo. farmacocinética de hidrógeno no se entiende completamente; sin embargo, un estudio reciente mostró que el glucógeno hepático puede acumular hidrógeno del agua [38] potable. Este estudio no sólo reveló una de las razones por las que el consumo de incluso una pequeña cantidad de hidrógeno en un lapso de tiempo corto mejora eficientemente en diversos modelos de enfermedad, sino que también sugiere que la concentración de hidrógeno puede ser amortiguada en la sangre. Consideramos que este efecto amortiguador de glucógeno como una de las razones de la ausencia de fenómenos de dosis-respuesta en muchos otros estudios. En este estudio, los niveles de 8-OHdG en suero cambiar sin efecto dependiente de la dosis, lo que apoya esta hipótesis.
Aunque los grupos con alta concentración de hidrógeno mostraron suero significativamente más bajo nivel 8-OHdG en comparación con el agua de la instalación del grifo grupo de beber después de una lesión gástrica , fue sorprendente que el grupo G, que no había sido herido con aspirina-HCl, tenía casi el mismo nivel de 8-OHdG como el grupo de heridos F. Esto podría significar que poco daño en el ADN producido en el estómago, o que la mucosa del estómago dañado no dio a conocer el 8-OHdG en sangre durante el 3 horas después de la lesión. El hidrógeno puede haber reducido el nivel de fondo de 8-OHdG en el suero. Creemos que esto podría ser el mismo motivo de nivel HEL sin cambios en el suero. El daño oxidativo en el estómago no afectó la sangre mucho, y el nivel de fondo de HEL es demasiado baja para ser detectada por nuestro kit.
Aunque muchos puntos finales fueron probados en nuestro modelo de lesión, la puntuación gástrica, la actividad de la MPO y la cantidad de MDA son los mejores. La erosión gástrica es evidente bajo microscopio de disección 3 horas después de tratamiento con aspirina-HCl, y la zona de erosión se puede calcular mediante el uso de un micro-regla. Sin embargo, la gravedad de la erosión no se había considerado como la mayoría de los estudios anteriores. Algunas áreas de erosión eran manchas blancas irregulares, mientras que el sangrado se podía ver en otras regiones. No hay una regla para fijar los pesos para los diferentes niveles de gravedad de la erosión. Pensamos que puede ser una posible mejora, lo que puede hacerse para este modelo de lesión en el futuro.
MPO se expresa de forma más abundante en los granulocitos neutrófilos. evidencias sustanciales han sugerido que la inflamación mediada por neutrófilos está implicada en el desarrollo de la lesión gástrica inducida por aspirina [39-42]. Naito et al. [29] encontró que la actividad de MPO se incrementó en la mucosa gástrica después de 1 h el tratamiento con aspirina y persistió a las 3 h, y se podría reducir en pH 10 de agua electrolizada. La inflamación es generalmente inducida por las células que mueren en el tejido. Es difícil de detectar directamente la cantidad de células que mueren con la mucosa, ya que algunos de ellos ya se han roto en pedazos. Por lo tanto, el examen de las células inflamatorias que viven es una sabia elección.
El estrés oxidativo es uno de los principales efectos causados ​​por el tratamiento con aspirina en el estómago. Y el hidrógeno se ha reportado para aliviar el estrés oxidativo en muchos tejidos [17, 18]. MDA es uno de los biomarcadores más conocidos para el estrés oxidativo. Se trata de la degradación de lípidos poliinsaturados por las especies reactivas de oxígeno. Es una de las muchas especies electrophile reactivos que pueden formar aductos covalentes de proteínas que se refiere productos finales como lipoxidación avanzada (ALE). Antes de ver los resultados, teníamos miedo de que la MDA es demasiado reactivo para ser detectado en las muestras que se habían guardado en la nevera durante varias semanas. Afortunadamente, los resultados mostraron una reducción consistente de MDA con la dosis de hidrógeno, lo que demuestra que es un punto final fiable y estable en el modelo de lesión de la aspirina-HCl.
Se informó la expresión de TNF-α ser mejorada significativamente en la aspirina-HCl lesionado estómago y el suero [29]. Y beber agua alcalina electrolizada podría disminuir el TNF-α, tanto a nivel de proteína y ARNm. También a prueba el nivel de mRNA de TNF-α en el estómago y el ARNm de TNF-α hicimos aumento en el estómago heridos. Sin embargo, no se encontraron cambios significativos entre los diferentes grupos tratados (archivo adicional 1: Figura S4). Podría ser debido al punto de recolección de la muestra de tejido tiempo. TNF-α es un respondedor temprano para la lesión gástrica y puede inducir la apoptosis de las células epiteliales gástricas, así como las células endoteliales [43-45]. La inhibición significativa de la expresión de ARNm de TNF-α por el tratamiento de agua electrolizada se puede observar a 1 hora después de tratamiento con aspirina [29], pero no a las 3 horas como se comunicó con el autor de este trabajo previo. En 1 hora después del tratamiento aspirina-HCl, la erosión no se puede observar fácilmente, lo que significa que la capa de la mucosa es todavía relativamente intacto. En ese momento, cualquier pieza del estómago puede tener el nivel de ARNm de TNF-α similar. Sin embargo, cuando algunas erosiones formadas en 3 horas, diferentes piezas de la pared del estómago pueden tener diferentes niveles de ARNm de TNF-a, ya que las partes de erosión son relativamente más fuertemente dañados. Consideramos que es mejor tomar todo el estómago para el TNF-α mRNA cuantificación que no sea una pieza de una pared del estómago, pero necesitaremos un doble número de animales.
Otro punto en cuestión es el mecanismo de la rica en hidrógeno daños de agua inducida por efectos inhibidores alcalinas electrolizada. Los primeros trabajos ya se ha demostrado que la inhibición de daño gástrico es inducida indirectamente por el tratamiento continuo de agua alcalina electrolizada, pero no por la interacción directa de agua alcalina electrolizada y aspirina [29]. Además, los efectos inhibitorios de agua alcalina electrolizada no fueron causadas por la reducción de la acidez gástrica, lo que podría afectar la absorción de la aspirina [29]. El hidrógeno en el agua alcalina electrolizada se sugirió como un molecular activo. Ohsawa et al. encontrado que la reacción directa entre el hidrógeno y el radical hidroxilo y peroxinitrito [7]. Todos los autores leído y aprobado el manuscrito final.

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