Genezing van ulcera en het mechanisme (s) van de actie betrokken zijn bij de gastrobeschermende activiteit van fracties verkregen uit Syngonanthus arthrotrichus en Syngonanthus bisulcatus

Genezing van ulcera en het mechanisme (s) van de actie betrokken zijn bij de gastrobeschermende activiteit van fracties verkregen uit Syngonanthus arthrotrichus Kopen en Syngonanthus bisulcatus
Abstract achtergrond
Syngonanthus arthrotrichus Kopen en Syngonanthus bisulcatus
, momenteel bekend om Comanthera aciphylla
(Bong.) LRParra & Giul. Kopen en Comanthera bisulcata
(Koern.) L.R. Parra & Giul, in de volksmond in Brazilië bekend als "sempre-vivas
," zijn planten uit de familie Eriocaulaceae. Ze zijn te vinden in de staten Minas Gerais en Bahia. De soort is bekend dat rijk is aan flavonoïden waaraan de maagbeschermende activiteit toegeschreven worden. In dit onderzoek werden experimentele protocollen uitgevoerd om de bijbehorende werkingsmechanismen te helderen.
Methods Ondernemingen De activiteit werd geëvalueerd met behulp van geïnduceerde maagzweer modellen (azijnzuur en ethanol-geïnduceerde maag-laesies in NEM of L-NAME voorbehandeld muizen en ischemie /reperfusie). Antioxidant enzymen, serum somatostatine en gastrine werden ook beoordeeld.
Resultaten
Bij chronische maagzweren, in een eenmaal daagse orale dosering van Sa
-FRF of Sb
-FRF (100 mg /kg lichaamsgewicht wt .) gedurende 14 opeenvolgende dagen versnelde genezing van maagzweren in een mate vergelijkbaar met dat bij een gelijke dosis cimetidine. De voorbehandeling van muizen met NEM (N-ethylmaleïmide) of L-NAME (N-nitro-L-arginine) hief de beschermende werking van Sa
-FRF, Sa
-FDF, Sb-FDF en Sb
-FRF of Sa en Sb
-FRF
-FRF respectievelijk, wat aangeeft dat antioxidanten en stikstofoxide synthase activiteit zijn betrokken bij de gastroprotectieve. Sa en Sb
-FRF
-FRF (100 mg /kg p.o.) beschermd het maagslijmvlies tegen zweren die werd geïnduceerd door ischemie /reperfusie (72 en 76%, respectievelijk). Daalde ook lipideperoxidatie en hersteld totale thiolen in de maagwand van muizen die waren behandeld met ethanol. Bij toediening aan op ethanol geïnduceerde gastrische lesies ingediend ratten, Sa en Sb
-FRF
-FRF (100 mg /kg, po) verhoogde de somatostatine serumspiegels, terwijl de serum gastrine concentraties evenredig verlaagd waren.

Conclusies de resultaten geven belangrijke heilzame werking en maagbeschermende activiteit voor de Sa en Sb
-FRF
-FRF, die waarschijnlijk deelnemen, SH groepen, stikstofoxide (NO), de antioxidant systeem, somatostatine en gastrine. Allen zijn een integraal onderdeel van cytoprotective mechanismen van het gastro-intestinale slijmvlies tegen agressieve factoren.
Sleutelwoorden
Eriocaulaceae Syngonanthus arthrotrichus
Syngonanthus bisulcatus
Flavonoïde Healing maagbeschermende achtergrond activiteit
Maagzweer is een ziekte die veel mensen treft de wereld en de progressie wordt toegeschreven aan een onbalans tussen agressieve factoren (zuur en pepsine, Helicobacter pylori,
stress, alcohol en blijvend gebruik van niet-steroïdale anti-inflammatoire middelen) en beschermende factoren (slijm, bicarbonaat, prostaglandine, bloedstroom, het antioxidant systeem, sulfhydrylverbindingen, stikstofmonoxide en celproliferatie) [1-3].
Maagulcus is een veel voorkomende ziekte met meerdere etiologieën. Zoals roken, stress, een slecht dieet en gastro-beschermende gebreken zijn nauw verbonden met de ontwikkeling van het maagslijmvlies ulceratie. Bacteriële infectie met Helicobacter pylori
is ook benadrukt als een belangrijke predisponerende factor voor het ontwikkelen van maagzweren [4].
Thru de jaren heen is een grote hoeveelheid kennis verworven over de ontwikkeling van maagzweren, en een breed spectrum van geneesmiddelen voor de behandeling zoals antacida, protonpompremmers, anticholinergica en histamine receptor antagonisten [5], ontwikkeld. Desondanks zijn de huidige therapieën voorkomende bijwerkingen (overgevoeligheid, aritmie, impotentie, gynaecomastie en hematopoietische veranderingen) en zijn duur. Dit heeft verder onderzoek naar nieuwe therapeutische alternatieven gestimuleerd. Op dit punt plaatst we medicinale planten vanwege hun verschillende voordelen zoals een grotere beschikbaarheid, betere bescherming, lagere kosten en lagere toxiciteit [6, 7]. Ondernemingen De eerste zoekopdracht op het gebied van medicinale planten in de behandeling van peptische zweren opende de ontdekking van de eerste geneesmiddel effectief tegen maagzweer; carbenoxolon van Glycyrrhiza glabra
[8-10], en zoethoutwortel vloeibaar extract werden gebruikt voor behandeling van maagzweren bij patiënten die niet had verbeterd met conventionele medicatie. De glycyrrizine van drop bleek twee enzymen die breken prostaglandine E [11] te stoppen. Effectiviteit van andere hulpmiddelen plantaardige kool verbetering maagzweren zijn gerapporteerd [12-14].
Onder de medicinale planten voorgesteld als kandidaten voor de behandeling van maagzweren we merken welke behoren tot de familie Eriocaulaceae. De familie bestaat uit meer dan 10 genera, zijnde ongeveer 1200 soorten. Hoewel het heeft een pan tropische distributie, de meeste soorten komen voor in de buurt van tropische gebieden, zoals in de bergen van Venezuela, of in Brazilië [15-17]. Eriocaulaceae is de dominante kruiden familie van de Cipó Gebergte in de staat Minas Gerais, Brazilië. We concentreerden ons op soorten die behoren tot het geslacht Syngonanthus
(Comanthera
), S. arthrotrichus en S. bisulcatus.
Deze soorten worden op dit moment bekend als Comanthera aciphylla en Comanthera bisulcata
[18],
respectievelijk, en in de volksmond bekend als 'semper-vivas-mini-saia "en" semper-vivas-chapadeira ".
fytochemische screening van de extracten van Syngonanthus bisulcatus
(Comanthera bisulcata
(Koern. ) LR Parra & Giul) en Syngonanthus artrotrichus
(Comanthera aciphylla
(Bong) LRParra &. Giul) uitgevoerd door Batista [19] is gebleken dat de belangrijkste verbindingen aanwezig in de extracten waren flavonoïden en fenolen.
de chromatografische studie van de flavonoïde rijke fracties verkregen uit de scapes van de soort S. bisulcatus Kopen en S. arthrotricus
werd uitgevoerd zoals beschreven door Batista [19]. de soort Syngonanthus bisulcatus
gepresenteerd belangrijke verbindingen zoals luteoline en geglycosyleerde derivaten luteoline bevestigd eerdere studies beschreven door Agrawal [20] en Harbone [21].
studies uitgevoerd door Coelho [22] toonde in deze fractie ook de aanwezigheid van isovitexin, lutonarine en 5, 6 , 3 ', 4'-tetrahidroxi-7-OD-glucopiranosilflavone. In de flavonoïde rijke fracties van Syngonanthus arthrotrichus
was het mogelijk om de verbinding luteoline isoleren. In studies eerder beschreven door Agrawal [20] en Rinaldi [23] werden ook geïdentificeerd luteolina, apigenine en luteoline-6-C-β-D-glucopiranoside.
Onderzoek heeft aangetoond dat geneeskrachtige planten bevorderen anti-inflammatoire, antioxidant, en gastrobeschermende effecten [24-29]. De maagbeschermende activiteit bevorderd door flavonoids is aangetoond in een literatuuroverzicht van gepubliceerd Mota et al. [30]. Studies uitgevoerd door onze groep hebben de gastrobeschermende activiteit van plantensoorten getoond zoals S. arthrotrichus
[31], S. bisulcatus
[32], en S. macrolepsis
[33] die alle werden verzameld in de staat Minas Gerais, Brazilië.
Gelet op het voorgaande, hebben we geprobeerd om gastrobeschermende effecten gepromoot door fracties verkregen van S. arthrotrichus Kopen en S. bisulcatus
verkennen, met behulp van gevarieerde geïnduceerde maagzweer modellen, aldus evalueren van de mechanismen van de actie betrokken.
Methods
Dieren
de experimentele protocollen die door het Comité voor Ethiek in de dierproeven (CEEA /UNICAMP) werden goedgekeurd met register nummer 502-1, in 2002. Mannelijke Zwitserse albino muizen (30-40 g) of mannelijke Wistar albino ratten (180-250 g), van het Centraal Animal Huis van de State University of Campinas (CEMIB /UNICAMP) werden gebruikt. De dieren werden gevoed met een gecertificeerde Nuvilab CR-dieet, en bovendien hadden vrije toegang tot water onder vastgestelde voorwaarden van de verlichting (12/12 uur licht /donker-cyclus), vochtigheid (60 ± 1,0%), en een temperatuur van (21 , 5 ± 1,0 °). Vasten werd gebruikt vóór alle assays, omdat standaard geneesmiddelen oraal toegediend (door gavage), of door intra-duodenale route met behulp van een 0,9% zoutoplossing (10 ml /kg) in het voertuig (negatieve controle). De dieren werden in kooien met verhoogde brede mesh vloeren coprofagie voorkomen gehouden.
Drugs Ondernemingen De drugs en reagentia werden onmiddellijk bereid voor gebruik. De volgende geneesmiddelen werden gebruikt: cimetidine (Sigma Chemical Co., USA), lansoprazol (pijn, Brazilië), absolute ethanol (Merck, Duitsland), zoutzuur (Merck, Duitsland), Nω-nitro-L-arginine methylester hydrochloride (Sigma Chemical Co., USA), en N-ethylmaleïmide (Sigma Chemical Co., USA). Alle drugs en fracties werden oraal (gavage) toegediend, of intraduodenaal.
Plantmateriaal
Scapes van S. arthrotrichus, Kopen en S. bisulcatus
werden verzameld in 2002 Cipó Mountain, Diamantina City, in de staat Minas Gerais, Brazilië. S. arthrotrichus
werd geverifieerd door Dr. Ana Maria Giulietti en S. bisulcatus
werd geverifieerd door Dr. Paulo Takeo Sano. Een waardebon van elk monster (n ° 2122 en 2137, respectievelijk) werd afgezet in het Herbarium van het Department of Botany, aan het Instituut voor Biosciences, USP.
Scapes (500 g) van S. arthrotrichus Kopen en S . bisulcatus
verzameld in de Serra do Cipó, Minas Gerais, werden in een oven gedurende 4 d en vervolgens gepoederd gedroogd bij 60 ° C. Het verkregen materiaal werd achtereenvolgens geweekt bij kamertemperatuur in dichloormethaan, EEOH en 70% EEOH gedurende één week bij ieder ervan. De extracten werden gefiltreerd en geconcentreerd onder vacuüm Ondernemingen De EEOH en 70% EEOH extracten werden geanalyseerd door TLC op silicagelplaten met behulp n- BuOH /HOAc /H2O. (6: 1: 2, v /v /v). De TLC vlekken werden gedetecteerd met behulp van UV-licht en NP /PEG reagens dat geel of oranje vlekken kenmerk van flavonoïden oplevert. Aangezien deze extracten bevatten materialen met gelijkaardige retentiefactoren (Rf), werden ze gecombineerd en gewogen. Een monster (3,5 g) van het ethanolextract werd opgelost in 10 ml MeOH en gefractioneerd op een Sephadex LH-20 kolom CC (10.033 cm). Het extract werd geëlueerd in MeOH bij een stroomsnelheid van 0,5 ml /min en 3 ml fracties werden verzameld. De fracties werden samengevoegd op basis van hun migratie in het TLC hierboven beschreven. Fracties 1-22 werden tekort aan flavonoïden, fracties 23-47 werden halfproducten en fracties 58-64 werden rijk aan flavonoïden en werd toegediend in een dosis van 100 mg /kg.
Healing in azijn- zuur-geïnduceerde gastrische lesie
het experiment werd uitgevoerd volgens de werkwijze beschreven door Takagi et al methode. [34], met enkele wijzigingen. Na vasten gedurende 24 uur, en onder anesthesie laparotomie werd uitgevoerd op alle dieren door een middellijn incisie epigastrische. Na blootstellen van de maag, werd een 30% (v /v) azijnzuur-oplossing (0,05 ml) geïnjecteerd in de subserosal laag in de glandulaire gedeelte van de voorwand. Het abdomen werd daarna gesloten en de dieren werden normaal gevoederd. Twee dagen na het azijnzuur indution van maag letsel, werden behandelingen gestart met orale toedieningen van Sa
-FRF, Sa
-FDF; Sb
-FRF, Sb
-FDF; cimetidine (100 mg /kg); of 0,9% zoutoplossing bij 10 ml /kg. Alle behandelingen werden oraal eenmaal daags gedurende 14 achtereenvolgende dagen. Op de dag na de laatste toediening van het geneesmiddel, (na vasten gedurende 12 uur), werden de ratten gedood en hun magen verwijderd worden. De macroscopische ulcus laesiegebied (ULA) van de binnen- en buitengrenzen mm 2 werden bepaald zoals beschreven bij de werkwijze.
-Ethanol geïnduceerde gastrische lesies in NEM-vooraf behandelde muizen
De muizen werden verdeeld in groepen (n = 5-7
dieren) en werden gevast gedurende 24 uur. Zij werden vervolgens intraperitoneaal behandeld met NEM (N-ethylmaleïmide) met 10 mg /kg, of 0,9% zoutoplossing bij 10 ml /kg. Op dertig minuten, de groepen ontvingen een orale dosis van hetzij 0,9% zoutoplossing, Sa
-FRF, Sa
-FDF, Sb
-FRF of Sb
-FDF. Na 60 minuten werden alle groepen oraal behandeld met 0,2 ml HCl /ethanol gastrische ulcer [35] induceren. Een uur na de toediening van HCl /ethanol werden de dieren gedood door cervicale dislocatie en hun magen uitgesneden. Maagschade werd bepaald volgens de ulceratieve index (UI) zoals beschreven door Szelenyi en Thiemer [36].
-Ethanol geïnduceerde gastrische mucosale laesie in L-NAME-voorbehandelde muizen
De muizen werden gevast gedurende 24 uur en verdeeld in 3 groepen (n = 5-7
) volgens voorbehandelingen: één groep kreeg 0,9% zoutoplossing (10 ml /kg, sc), en twee groepen ontvingen Nω-L-arginine-methylester (L -naam), een oxide synthase blokker, bij 70 mg /kg (sc). Dertig minuten na toediening werden de groepen oraal behandeld met ofwel 0,9% zoutoplossing, Sa
-FRF, Sa
-FDF, Sb
-FRF of Sb
-FDF. Zestig minuten later werden alle groepen oraal behandeld met 0,2 ml HCl /ethanol maagzweer [37] induceren. Een uur later werden de dieren gedood door cervicale dislocatie werden de magen uitgesneden en maagschade werd bepaald zoals eerder beschreven.
Gastric laesie geïnduceerd door ischemie /reperfusie
ischemie /reperfusie schade bij ratten werd geproduceerd door een door Ueda et al voorgestelde methode. [38]. De ratten werden gevast gedurende 24 uur en verdeeld (volgens voorbehandeling) in vier groepen (n = 5-7
): normaal (geen voorbehandeling en noch ischemie of reperfusie), sham (geen voorbehandeling) , 0,9% zoutoplossing (10 ml /kg) en Sa
-FRF of Sb
-FRF. Na 15 minuten werden de ratten geanesthetiseerd door een intramusculaire injectie van ketamine (50 mg /kg) en xylazine (10 mg /kg). De linkerkant van de buik werd geschoren en een incisie werd gemaakt. In het kort werd de buikholte slagader ontleed, vrij van vet en geklemd gedurende 30 minuten (ischemie fase) met een micro-bulldog klem. Re-oxygenatie werd daarna door verwijdering van de klem voor 60 min (reperfusie fase). De macroscopische laesies ulcus gebied bepaald.
Antioxidant activiteit Belgique Om de effecten van de Sa
-FRF en Sb
-FRF op het antioxidatieve systeem te beoordelen, onderzocht we lipideperoxidatie, en de niveaus van sulfhydrylgroepen (GSH), in de voormaag slijmvlies in die ratten met ischemie /reperfusie maaglesies.
lipidenperoxidatie (LPO) Ondernemingen De totale thiobarbituurzuur-reactieve stoffen (TBARS) niveau in de maag weefsel (een index van malonyldialdehyde (MDA) de productie), werd bepaald volgens de methode ontwikkeld door Ohkawa et al. [39]. Gastric segmenten werden in kleine stukjes gesneden en gehomogeniseerd in een ijskoude fosfaatbuffer (50 mM, pH 7,4) tot een 10% homogenaat geven. Het homogenaat van de ingeboren deel van de maag werd verdund in 0,15 M KCl (verhouding 01:10). Vervolgens 0,5 ml van het homogenaat werd 0,2 ml dodecyl sulfaat (8,1%), 1,5 ml azijnzuur 20% (aangepast met NaOH tot pH 3,5), 1,5 ml thiobarbituurzuur (0,8% w /v) en 0,3 ml gedestilleerd water. Vervolgens werd het mengsel verhit in een waterbad (bain-marie) met de op 95 ° C gedurende 1 uur thermostaat. Hierna werden de monsters afgekoeld en toegevoegd aan 1 ml gedestilleerd water en 5 ml van een n-butanol + pyridine (15: 1, v /v) mengsel, en geschud op een vortex gedurende 1 minuut, en vervolgens gecentrifugeerd bij 1400 G gedurende 10 minuten. Tenslotte werd de absorptie afgelezen bij 532 nm. TEPP (1,1,3,3-tetraethoxypropane) verdund in ethanol werd gebruikt als standaard. De resultaten werden uitgedrukt in picomol stoffen reageren met de thiobarbituurzuur (TBARS) per mg eiwit (nmol TBARS. Mg eiwit -1)
. Totaal thiolgroepen maag homogenaat
totale thiolen in de gastrische weefsels werden bepaald volgens de Faure Lafond [40] werkwijze met modificaties. Kort samengevat, 500 pl 0,25 mM Tris en 20 mM EDTA (pH 8,2), werd een aliquot (100 ml) van het homogenaat toegevoegd (in 10 mM fosfaat buffer, pH 7,8) die bij de maag schrapen. De absorptie (A1) van de uiteindelijke oplossing werd bepaald met spectrofotometer bij 412 nm. Vervolgens werd 10 pl 5-5'-dithio-bis (2-nitrobenzoëzuur) (DTNB) 10 mM (verdund in methanol) aan het mengsel toegevoegd. Na 15 min, namen we een tweede lezing (A2). DTNB verdund in buffer werd gebruikt als blanco (B). De sulfhydrylgroepen concentratie berekenen we de volgende vergelijking: (A2 - A1-B) x 1,57 mM. De resultaten werden uitgedrukt in nmol TBARS /mg proteïne × 10 3.
Serum somatostatine en gastrine Belgique Om dit protocol te voeren, werden maaglesies geïnduceerd door orale toediening van 1 ml absolute ethanol [41]. Dertig minuten vóór inductie laesie, de dieren kregen een orale dosis van 0,9% zoutoplossing, lansoprazol (30 mg /kg), Sa
-FRF of Sb
-FRF. Een uur na toediening ethanol; bloed werd verzameld door de abdominale aorta en geplaatst in buisjes die EDTA. Het monster werd gecentrifugeerd bij 3000 G gedurende 15 minuten en het verkregen uit elk monster plasma werd opgeslagen bij -20 ° C tot serum somatostatine en gastrine bepalingen.
Somatostatine
somatostatine dosering in het plasma van de dieren werd uitgevoerd volgens de methode beschreven door Arimura et al. [42], met behulp van een radioimmunoassay "kit" Euria-Somatostatine (RB-306, Eurodiagnóstica). Resterende radioactiviteit werd bepaald in een gamma-scintillatieteller (Beckman, type G5500), met een tijd van 2-4 minuten.
Gastrine
plasmagastrinespiegels bepaling werd uitgevoerd volgens de werkwijze beschreven door Slingerland et al methode. [43], met behulp van een radioimmunoassay "kit" (CIS bio International - GASK-PR). Resterende radioactiviteit werd bepaald in een gamma-scintillatieteller (Beckman, Model G5500) gedurende 1 minuut.

Statistische analyse De resultaten werden uitgedrukt als gemiddelde ± S.D. of gemiddelde ± S.E.M. Statistische significantie tussen groepen werd bepaald door eenrichtingsanalyse van variantie (ANOVA) gevolgd door een Dunnett-test met p
< 0,05 als significant beschouwd. Het statistische software programma gebruikt was GraphPad Prism® versie 4 (USA, 2003).
Resultaten
Healing in azijn- zuur-geïnduceerde maag- laesie
De effecten van de S. arthrotrichus Kopen en S. bisulcatus
fracties in azijn- zuur-geïnduceerde gastrische lesie model worden weergegeven in tabel 1. de resultaten tonen aan dat de Sa
-FRF (42 ± 1,6 *), Sb
-FRF (49 ± 4,3 *) en cimetidine (22 ± 2,5 **) verminderde significant de ULA, in vergelijking met de zoutoplossing groep (75 ± 8,6). Toch had Sa
-FDF en Sb
-FDF niet bevorderlijk significante bescherming. Deze resultaten suggereren dat Sa
-FRF en Sb
-FRF aangetoond genezing van de letsels veroorzaakt door azijnzuur acid.Table 1 Effecten van fracties verkregen uit Syngonanthus arthrotrichus Kopen en Syngonanthus bisulcatus
over genezing in azijnzuur geïnduceerde maag letsel
Gastric laesie modellen
Treatment (po)
Dosis (mg /kg)
ALU (mm2)
Remming ( %)
azijnzuur
Saline
- 75 ± 8,6
- Cimetidine
100
22 ± 2,5 **
71
Sa-FRF
100
42 ± 1,6 *
44
Sa-FDF
100
65 ± 7,0
13
Sb-FRF
100
49 ± 4,3 *
35
Sb-FDF
100
67 ± 25

• Gastrobeschermende mechanisme van Paederia foetida Linn. (Rubiaceae) - een populaire eetbare plant gebruikt door de tribale gemeenschap van Noord-Oost India
• Effect van kaneel op maaglediging, arteriële stijfheid, postprandiale lipemie, glycemie en eetlust reacties op vetrijk ontbijt