Guarigione dell'ulcera e il meccanismo (s) di azione coinvolti nell'attività gastroprotettiva delle frazioni ottenute da Syngonanthus arthrotrichus e Syngonanthus bisulcatus

Guarigione dell'ulcera e il meccanismo (s) di azione coinvolti nell'attività gastroprotettiva delle frazioni ottenute da Syngonanthus arthrotrichus
e Syngonanthus bisulcatus
astratta
sfondo
Syngonanthus arthrotrichus
e Syngonanthus bisulcatus
, attualmente noto per Comanthera aciphylla
(Bong.) LRParra & Giul.
E Comanthera bisulcata
(Koern.) L.R. Parra & Giul, popolarmente conosciuta in Brasile come "sempre-vivas
," sono piante della famiglia Eriocaulaceae. Si trovano negli stati di Minas Gerais e Bahia. Le specie sono noti per essere ricco di flavonoidi a cui la loro attività gastroprotettiva è stato attribuito. In questa ricerca, protocolli sperimentali sono stati eseguiti per chiarire i meccanismi associati di azione.
Metodi
L'attività è stata valutata sulla base di modelli indotti ulcera gastrica (acido acetico ed etanolo-indotta lesioni gastriche in NEM o L-NAME pre-trattati topi, e da ischemia /riperfusione). Sono stati inoltre valutati enzimi antiossidanti, somatostatina siero, e gastrina.
Risultati
in ulcere gastriche croniche, una singola dose giornaliera per via orale di Sa
-FRF o Sb
-FRF (100 mg /kg di peso corporeo .) per 14 giorni consecutivi accelerati guarigione dell'ulcera in misura simile a quello osservato con una dose uguale di cimetidina. Il pre-trattamento dei topi con NEM (N-ethylmaleimide) o L-NAME (N-nitro-L-arginina) ha abolito l'attività protettiva di Sa
-FRF, Sa
-FDF, Sb-DFF e Sb
-FRF o, Sa
-FRF e Sb
-FRF, rispettivamente, il che indica che i composti antiossidanti e nitrico sintasi ossido di attività sono coinvolti nella gastroprotettori. Sa
-FRF e Sb
-FRF (100 mg /kg p.o) protetto mucosa gastrica contro ulcerazione che è stata indotta da ischemia /riperfusione (72 e 76%, rispettivamente). E 'anche diminuito la perossidazione dei lipidi e restaurato tioli totali nella parete gastrica di topi che erano stati trattati con etanolo. Quando somministrato ai ratti sottoposti a lesioni gastriche indotte da etanolo, Sa
-FRF e Sb
-FRF (100 mg /kg, po) aumentato i livelli sierici di somatostatina, mentre i livelli di gastrina di siero sono stati proporzionalmente diminuite.
Conclusioni
I risultati indicano significativi effetti curativi e l'attività gastroprotettiva per la Sa
-FRF e Sb
-FRF, che probabilmente prevede la partecipazione di gruppi SH, l'ossido nitrico (NO), il sistema antiossidante, somatostatina e gastrina. Tutti sono parte integrante dei meccanismi citoprotettivi della mucosa gastrointestinale contro fattori aggressivi.
Parole
Eriocaulaceae Syngonanthus arthrotrichus
Syngonanthus bisulcatus
Flavonoid Healing attività gastroprotettiva Sfondo
ulcera gastrica è una malattia che colpisce molte persone in giro il mondo, e la sua progressione è attribuita ad uno squilibrio tra fattori aggressivi (acido, pepsina, Helicobacter pylori,
stress, alcool e uso continuato di farmaci anti-infiammatori non steroidei), e fattori protettivi (muco, bicarbonato, prostaglandina, il flusso di sangue, il sistema antiossidante, composti sulfidrilici, ossido di azoto e di proliferazione cellulare) [1-3].
ulcera gastrica è una malattia comune con più eziologie. Fattori come il fumo, lo stress, una dieta impropria, e le carenze gastro-protettivi sono strettamente correlati allo sviluppo di ulcere gastriche mucose. Infezione batterica da Helicobacter pylori
è stato anche messo in evidenza come un importante fattore predisponente per lo sviluppo di ulcere gastriche [4].
Attraverso gli anni, un grande bagaglio di conoscenze sono state acquisite per quanto riguarda lo sviluppo di ulcera gastrica, e un ampio spettro di farmaci per il suo trattamento come gli antiacidi, inibitori della pompa protonica, anticolinergici e [5] antagonisti dei recettori dell'istamina, si è sviluppata. Tuttavia, le terapie esistenti hanno comunemente effetti avversi (ipersensibilità, aritmia, impotenza, ginecomastia e cambiamenti ematopoietiche), e sono costosi. Questo ha stimolato la continua ricerca di nuove alternative terapeutiche. A questo punto, inseriamo piante medicinali per la loro vari vantaggi quali una maggiore disponibilità, protezione più efficace, a basso costo, e minore tossicità [6, 7].
La ricerca presto nella zona di pianta medicinale nel trattamento di peptica ulcere ha aperto la scoperta del primo farmaco efficace contro l'ulcera peptica; carbenoxolone da Glycyrrhiza glabra
[8-10], e estratto fluido radice di liquirizia sono stati usati per il trattamento di ulcere in pazienti che non avevano migliorato con farmaci convenzionali. La glicirrizina di liquirizia è stato trovato per fermare due enzimi che degradano prostaglandina E [11]. Sono stati riportati efficacia di altre risorse vegetali come cavoli a migliorare ulcere peptiche [12-14]. Con gli piante medicinali presentati come candidati per il trattamento dell'ulcera gastrica notiamo quelli appartenenti alla famiglia Eriocaulaceae. La famiglia è composta da più di 10 generi, essendo circa 1.200 specie. Anche se ha una distribuzione tropicale padella, maggior parte delle specie si verificano nelle regioni tropicali vicino, come ad esempio nelle montagne del Venezuela, o in Brasile [15-17]. Eriocaulaceae è la famiglia a base di erbe dominante della gamma Cipó montagna, nello stato di Minas Gerais, Brasile. Ci siamo concentrati sulle specie appartenenti al genere Syngonanthus
(Comanthera
), S. arthrotrichus, e S. bisulcatus.
Queste specie sono attualmente noti come Comanthera aciphylla e Comanthera bisulcata
[18],
rispettivamente, e popolarmente conosciuta come "sempre-vivas-mini-saia" e "sempre-vivas-chapadeira".
La proiezione phytochemical degli estratti di Syngonanthus bisulcatus
(Comanthera bisulcata
(Koern. ) LR Parra & Giul) e Syngonanthus artrotrichus
(Comanthera aciphylla
(Bong) LRParra &. Giul) eseguita da Batista [19] hanno dimostrato che i principali composti presenti negli estratti erano flavonoidi e composti fenolici.
lo studio cromatografica delle frazioni ricche flavonoidi ottenuti dai paesaggi della specie S. bisulcatus
e S. arthrotricus
è stata eseguita come descritto da Batista [19]. le specie Syngonanthus bisulcatus
presentato importante composti come la luteolina e derivati ​​glicosilata di luteolina confermano studi precedenti descritti da Agrawal [20] e Harbone [21].
gli studi eseguiti da Coelho [22] hanno dimostrato anche in questa frazione la presenza di isovitexina, lutonarine e 5, 6 , 3 ', 4'-tetrahidroxi-7-OD-glucopiranosilflavone. Nelle frazioni ricche di flavonoidi di Syngonanthus arthrotrichus
era possibile isolare la luteolina composto. In studi precedentemente descritti da Agrawal [20] e Rinaldi [23] sono stati anche identificati luteolina, apigenina e luteolina-6-C-β-D-glucopiranoside.
Ricerca ha dimostrato che le piante medicinali promuovono antinfiammatorio, antiossidante, e effetti gastroprotettori [24-29]. L'attività gastroprotettiva promossa da flavonoidi è stata dimostrata in una revisione della letteratura pubblicata da Mota et al. [30]. Gli studi effettuati dal nostro gruppo hanno dimostrato l'attività gastroprotettiva di specie vegetali come ad esempio S. arthrotrichus
[31], S. bisulcatus
[32], e S. macrolepsis
[33] i quali sono stati raccolti nello stato di Minas Gerais, Brasile.
Considerato quanto sopra, abbiamo puntato ad esplorare gli effetti gastroprotettori promossi da frazioni ottenute da S. arthrotrichus
e S. bisulcatus
, utilizzando vari modelli di ulcera gastrica indotte, a tal valutare i meccanismi di azione coinvolti.
Metodi
Animali
i protocolli sperimentali sono stati approvati dal Comitato per l'Etica nella sperimentazione animale (CEEA /UNICAMP) con numero di registro 502-1, nel 2002. topi albini svizzeri maschile (30-40 g) o ratti albini Wistar maschi (180-250 g), dalla centrale Animal House dell'Università Statale di Campinas (CEMIB /UNICAMP) sono stati utilizzati. Gli animali sono stati alimentati con una dieta Nuvilab CR-certificato, e, inoltre, ha avuto libero accesso all'acqua, in condizioni di illuminazione fissi (12/12 h luce /buio ciclo), umidità (60 ± 1,0%), e una temperatura di (21 , 5 ° ± 1.0). Il digiuno è stato utilizzato prima tutti i saggi, perché farmaci standard sono stati somministrati per via orale (mediante sonda gastrica), o per via intra-duodenale con una soluzione salina allo 0,9% (10 ml /kg) del veicolo (controllo negativo). Gli animali sono stati tenuti in gabbie con pavimenti in maglia larga in rilievo per prevenire coprofagia.
Drugs
I farmaci e reagenti sono state preparate immediatamente prima dell'uso. I seguenti farmaci sono stati utilizzati: cimetidina (Sigma Chemical Co, Stati Uniti d'America), lansoprazolo (dolore, Brasile), etanolo assoluto (Merck, Germania), acido cloridrico (Merck, Germania), Nω-nitro-L-arginina metil estere cloridrato (Sigma Co chimica, Stati Uniti d'America), e N-Ethylmaleimide (Sigma Chemical Co, Stati Uniti d'America). Tutti i farmaci e le frazioni sono stati somministrati per via orale (gavage), o intraduodenally. Materiale
impianto
Scapes di S. arthrotrichus,
e S. bisulcatus
sono stati raccolti nel 2002 al Cipó Montagna, Diamantina City, in lo stato di Minas Gerais, Brasile. S. arthrotrichus
è stato autenticato dal Dr. Ana Maria Giulietti, e S. bisulcatus
è stato autenticato dal Dr. Paulo Takeo Sano. Un buono di ogni campione (rispettivamente n ° 2122 e 2137,) è stato depositato nel Erbario del Dipartimento di Botanica, presso l'Istituto di Bioscienze, USP.
Scapes (500 g) di S. arthrotrichus
e S . bisulcatus
raccolti nella Serra do Cipó, Minas Gerais, sono stati essiccati in stufa a 60 ° C per 4 d e poi polverizzati. Il materiale risultante è macerazione sequenzialmente a temperatura ambiente in cloruro di metilene, EEOH e il 70% EEOH per una settimana con ciascun solvente. Gli estratti sono stati filtrati e concentrati sotto vuoto
La EEOH e 70% estratti EEOH sono stati analizzati mediante TLC su piastre di gel di silice usando n- BuOH /HOAc /H2O. (6: 1: 2, v /v /v). Gli spot TLC sono state rilevate usando la luce UV e NP /PEG reagente che produce macchie di colore giallo o arancione caratteristico dei flavonoidi. Dal momento che questi estratti materiale contenuto con fattori di ritenzione simili (RF), sono stati combinati e pesati. Un campione (3,5 g) dell'estratto etanolico viene sciolto in 10 ml di MeOH e frazionato su un LH-20 colonna Sephadex CC (10033 cm). L'estratto è stato eluito in MeOH a una portata di 0,5 ml /min e 3 ml frazioni sono state raccolte. Le frazioni sono state combinate in base alla loro migrazione nel sistema TLC descritto sopra. Le frazioni 1-22 erano carenti di flavonoidi, le frazioni 23-47 sono stati frazioni intermedie e le frazioni 58-64 erano ricchi di flavonoidi e sono stati somministrati alla dose di 100 mg /Kg.
Guarigione in acido acetico lesione gastrica indotta da acido
l'esperimento è stato eseguito secondo il metodo descritto da Takagi et al. [34], con alcune modifiche. Dopo un digiuno di 24 ore, e in anestesia, una laparotomia è stata eseguita su tutti gli animali attraverso un'incisione epigastrica linea mediana. Dopo esponendo lo stomaco, 30% (v /v) di acido acetico (0,05 mL) è stato iniettato nello strato sottosierosa nella parte ghiandolare della parete anteriore. L'addome è stato quindi chiuso e tutti gli animali sono stati alimentati normalmente. Due giorni dopo la indution acido acetico di lesione gastrica, i trattamenti sono stati avviati con le amministrazioni per via orale di Sa
-FRF, SA
-FDF; Sb
-FRF, Sb
-FDF; cimetidina (100 mg /kg); o una soluzione salina allo 0,9% a 10 mL /kg. Tutti i trattamenti sono stati somministrati per via orale una volta al giorno per 14 giorni consecutivi. Il giorno dopo l'ultima somministrazione, (e dopo digiuno per 12 h), i ratti sono stati sacrificati e le loro stomaci poi rimosse. L'area di lesione ulcerativa macroscopica (ULA) delle frontiere interne ed esterne in mm 2 sono stati determinati come descritto nel metodo.
Etanolo-indotta lesioni gastriche in NEM topi pre-trattati
I topi sono stati divisi in gruppi (n = 5-7
animali), e sono stati tenuti a digiuno per 24 ore. Essi sono stati quindi trattati per via intraperitoneale con NEM (N-etilmaleimide) a 10 mg /kg, o una soluzione salina allo 0,9% a 10 ml /kg. A trenta minuti, i gruppi hanno ricevuto una dose orale di soluzione salina allo 0,9%, Sa
-FRF, Sa
-FDF, Sb
-FRF o Sb
-FDF. Dopo 60 minuti, tutti i gruppi sono stati trattati per via orale con 0,2 ml di HCl /etanolo per indurre gastrica-ulcera [35]. Un'ora dopo la somministrazione di HCl /etanolo gli animali sono stati sacrificati per dislocazione cervicale e loro stomaci sono stati asportati. danno gastrico è stato determinato utilizzando l'indice ulcerosa (UI) come descritto da Szelenyi e Thiemer [36].
topi etanolo-indotta gastrica lesione della mucosa in L-NAME-pre-trattati
I topi sono stati a digiuno per 24 ore e suddivisi in 3 gruppi (n = 5-7
), secondo la pre-trattamenti: un gruppo ha ricevuto soluzione salina allo 0,9% (10 ml /kg, sc), e due gruppi ricevuto Nω-L-arginina metil estere (L -NOME), un ossido sintasi agente bloccante, a 70 mg /kg (sc). Trenta minuti dopo la somministrazione, i gruppi sono stati trattati per via orale con soluzione fisiologica allo 0,9%, Sa
-FRF, Sa
-FDF, Sb
-FRF o Sb
-FDF. Sessanta minuti dopo, tutti i gruppi sono stati trattati per via orale con 0,2 ml di HCl /etanolo per indurre ulcere gastriche [37]. Un'ora dopo, gli animali sono stati sacrificati mediante dislocazione cervicale, stomaci sono stati asportati, e danno gastrico è stata determinata come precedentemente descritto.
Lesione gastrica indotta da ischemia /riperfusione
ischemia danni /riperfusione è stata prodotta nei ratti da un metodo proposto da Ueda et al. [38]. I ratti sono stati tenuti a digiuno per 24 ore e suddivise (in base alle pre-trattamento) in quattro gruppi (n =
5-7): normale (nessun pretrattamento e né ischemia né riperfusione), sham (senza pre-trattamento) , 0,9% soluzione salina (10 ml /kg), e Sa
-FRF o Sb
-FRF. Dopo 15 min, i ratti sono stati anestetizzati con una iniezione intramuscolare di ketamina (50 mg /kg) e xilazina (10 mg /kg). Il lato sinistro dell'addome era rasata e una incisione è stata fatta. In breve, l'arteria celiaca è stato dissezionato, privo di grasso in eccesso, e bloccato per 30 minuti (fase di ischemia), utilizzando una pinza micro-bulldog. Re-ossigenazione viene quindi lasciata dalla rimozione del morsetto per 60 min (fase riperfusione). L'area ulcera lesioni macroscopiche sono stati determinati.
Attività antiossidante
Per valutare gli effetti della Sa
-FRF e Sb
-FRF sul sistema antiossidante, abbiamo dosato perossidazione lipidica, e dei livelli di sulfidrili (GSH), nello stomaco ghiandolare mucosa in quei ratti con ischemia /riperfusione lesioni gastriche.
perossidazione lipidica (LPO)
Le sostanze acide totali-reattiva tiobarbiturico livello (TBARS) nel tessuto gastrico, (un indice di malonildialdeide (MDA) di produzione), è stato determinato secondo il metodo sviluppato da Ohkawa et al. [39]. segmenti gastrici sono stati tagliati in piccoli pezzi e poi omogeneizzati in un tampone fosfato ghiacciato (50 mM, pH 7,4), che invia un omogenato 10%. L'omogenato della porzione ghiandolare dello stomaco è stato diluito in 0,15 M KCl (rapporto 1:10). Poi a 0,5 ml di questa omogenato sono stati aggiunti 0,2 ml di solfato di dodecil (8,1%), 1,5 ml di acido acetico al 20%, (regolato con una soluzione di NaOH a pH 3,5), 1,5 ml di acido tiobarbiturico (0,8% w /v) , e 0,3 ml di acqua distillata. Successivamente, la miscela è stata riscaldata in un bagno d'acqua (bagnomaria) con il termostato a 95 ° C per 1 ora. Dopo questo, i campioni sono stati raffreddati e aggiunti a 1 mL di acqua distillata, e 5 mL di una n-butanolo + piridina (15: 1, v /v) della miscela, e agitati in un vortex per 1 min, e poi centrifugate a 1400 g per 10 minuti. Infine l'assorbanza è stata letta a 532 nm. TEPP (1,1,3,3-tetraethoxypropane) diluito in etanolo è stato utilizzato come standard. I risultati sono stati espressi come picomoli delle sostanze che reagiscono con l'acido tiobarbiturico (TBARS), per mg di proteine ​​(TBARS nmol. Mg di proteina -1)
. Totale gruppi tiolici in omogeneizzato stomaco
Il totale tioli nel tessuto gastrico sono stati determinati secondo il Faure e Lafond [40] metodo con modifiche. Brevemente, 500 ml di 0,25 mM Tris, e 20 mM soluzione di EDTA (pH 8,2), è stato aggiunto ad una aliquota (100 mL) di omogenato (in mM tampone fosfato 10, pH 7,8) ottenuto dalla raschiatura stomaco. L'assorbanza (A1) della soluzione finale è stata determinata mediante spettrofotometro a 412 nm. Poi, 10 ml di 5-5'-ditio-bis- (acido 2-nitrobenzoico) (DTNB) 10 mM (diluito in metanolo) è stata aggiunta alla miscela. Dopo 15 minuti, abbiamo preso una seconda lettura (A2). DTNB diluito in tampone è stato utilizzato come bianco (B). Per calcolare la concentrazione di gruppi sulfidrilici abbiamo utilizzato la seguente equazione: (A2 - A1-B) × 1,57 mM. I risultati sono stati espressi in TBARS nmol /mg di proteina × 10 3.
Siero somatostatina e gastrina
Per eseguire questo protocollo, lesioni gastriche sono stati indotti dalla somministrazione orale di assoluti etanolo 1 ml [41]. Trenta minuti prima dell'induzione lesione, gli animali hanno ricevuto una dose orale di soluzione salina allo 0,9%, lansoprazolo (30 mg /kg), Sa
-FRF o Sb
-FRF. Un'ora dopo la somministrazione di etanolo; sangue è stato raccolto dalla aorta addominale e posto in provette contenenti EDTA. Il campione è stato centrifugato a 3000 g per 15 minuti e il plasma ottenuti da ciascun campione è stato conservato a -20 ° C fino somatostatina siero e gastrina determinazioni.
Somatostatina
stato eseguito il dosaggio somatostatina nel plasma degli animali secondo la metodologia descritta da Arimura et al. [42], utilizzando un radioimmunologico "kit" Euria-Somatostatina (RB-306, Eurodiagnóstica). radioattività residua è stata determinata in un contatore gamma a scintillazione (Beckman, modello G5500), con un tempo di 2-4 minuti.
Gastrin
determinazione gastrina plasma è stata eseguita secondo il metodo descritto da Slingerland et al. [43], utilizzando un "kit" radioimmunoassay (CIS bio international - GASK-PR). la radioattività residua è stata determinata in un contatore gamma a scintillazione (Beckman, G5500 Model) per 1 minuto. Analisi statistica
I risultati sono stati espressi come media ± S.D. o media ± S.E.M. La significatività statistica tra i gruppi è stata determinata mediante analisi della varianza ad una via (ANOVA) seguita da test di Dunnett, con p
< 0.05 considerati significativi. Il programma software statistico utilizzato era GraphPad Prism® versione 4 (USA, 2003).
Risultati
guarigione in acido acetico lesione gastrica indotta da acido
Gli effetti della S. arthrotrichus
e S. bisulcatus
frazioni nel modello di lesione gastrica indotta da acido acetico sono riportati nella Tabella 1. I risultati mostrano che il Sa
-FRF (42 ± 1,6 *), Sb
-FRF (49 ± 4,3 *) e cimetidina (22 ± 2,5 **) significativamente ridotto il ULA, rispetto al gruppo salina (75 ± 8,6). Eppure, Sa
-FDF e Sb
-FDF non promuovono la protezione significativa. Questi risultati suggeriscono che Sa
-FRF e Sb
-FRF dimostrato la guarigione delle lesioni indotte da acetico acid.Table 1 Effetti di frazioni ottenute da Syngonanthus arthrotrichus
e Syngonanthus bisulcatus
sulla guarigione in acido acetico indotta lesione gastrica
modelli lesioni gastriche
Trattamento (po)
Dose (mg /kg)
ALU (mm2)
inibizione ( %)
acido acetico
Saline -
75 ± 8,6 -
cimetidina
100

• meccanismo di gastroprotettori di Paederia foetida Linn. (Rubiaceae) - una pianta commestibile popolare usato dalla comunità tribale del Nord-Est India
• Effetto di cannella sullo svuotamento gastrico, la rigidità arteriosa, lipemia postprandiale, la glicemia, e le risposte appetito per la prima colazione ad alto contenuto di grassi