Ploche ONE: Mechanizmy GOLPH3 súvisiacich so zavedením progresiu rakoviny žalúdka: predbežná štúdia

abstraktné

Dizajn štúdie

Ak chcete vyšetrovať konkrétne mechanizmy, ktorými Golgi fosfoproteínov 3 (GOLPH3) ovplyvňuje progresiu rakoviny žalúdka a preskúmať jeho klinický význam.

metódy

Imunohistochemické analýza sa na ohodnotenie korelácia medzi GOLPH3, fosforylovaný mTOR (p-mTOR), fosforylovaný Akt (Akt-p), fosforylovaný p70S6K (p-p70S6K), fosforylovaný 4E-BP1 (p-4E -BP1) a klinicko-patologické rysy rakoviny žalúdka. Úrovne expresie mRNA GOLPH3, mTOR, Akt, p70S6K a 4E-BP1 v karcinómu žalúdka, karcinómu priľahlé a párové normálneho tkaniva boli analyzované pomocou RT-PCR. Western blotting bol použitý na stanovenie expresie proteínu GOLPH3, p-mTOR, p-Akt, p-p70S6K a p-4E-BP1 v tkanivách.

Výsledky

Vysoké hladiny expresie proteínu z GOLPH3, p-AKT, p-mTOR, p70S6K, p-4E-BP1 boli pozitívne spojené s histologického stupňa ( p
menšie ako 0,05), hĺbka invázie ( p
menšie ako 0,05 ), vzdialené metastázy ( p Hotel < 0,05) a zapojenie lymfatických uzlín ( p Hotel < 0,05). V porovnaní s karcinómom-susedí a spárované normálnych tkanivách, hladiny expresie mRNA GOLPH3, AKT, mTOR, p70S6K a 4EBP1 v žalúdočnej rakovinové tkanive boli výrazne vyššie. Hladiny expresie proteínu GOLPH3, p-Akt, p-mTOR, p-p70S6 a p-4E-BP1 v žalúdočnej rakovinové tkanive bola tiež významne vyššia ako u karcinómu priľahlé a spárované normálneho tkaniva. Silný pozitívna korelácia bola pozorovaná medzi GOLPH3, p-mTOR, p-p70S6K a p-4EBP1 expresie ( r
= 0,410, 0,303 a 0,276, v danom poradí, p
menšie ako 0,05), ale nebola pozorovaná žiadna významná korelácia medzi expresiou GOLPH3 a p-Akt.

Závery

hladina expresie GOPLH3 vysoko koreluje s Akt /mTOR signalizácie v ľudských vzorkách s karcinómom žalúdka. GOLPH3 v kombinácii s Akt /mTOR signalizáciu aktivácie môže hrať dôležitú úlohu vo vývoji, diferenciáciu, inváziu a metastázy karcinómu žalúdka

Citácia :. J Peng, Fang Y, Y Tao, Li K, N, T, Nong Y, et al. (2014) Mechanizmy GOLPH3 spojená s progresiou rakoviny žalúdka: predbežná štúdia. PLoS ONE 9 (10): e107362. doi: 10,1371 /journal.pone.0107362

Editor: Yuan-Soon Ho, Taipei lekárska univerzita, Taiwan

Prijaté: 13. júna 2014; Prijaté: 07.08.2014; Uverejnené: 06.10.2014

Copyright: © 2014 Peng et al. Toto je článok o otvorený prístup distribuovaný pod podmienkami Creative Commons Attribution licencie, ktorá umožňuje neobmedzené použitie, distribúciu a reprodukciu v nejakom médiu, za predpokladu, že pôvodný autor a zdroj sú pripísané

Dostupné dát: Text. autori potvrdzujú, že všetky údaje súvisiace závery sú plne k dispozícii bez obmedzenia. K dispozícii sú z rukopisu a postáv všetky dáta

Financovanie :. Táto štúdia bola podporená Research Foundation of Guangxi zdravie vhodnú technológiu a rozvoj projektu (Grant číslo: S201415-01). Platcovia mal žiadnu úlohu v dizajne štúdie, zber a analýzu dát, rozhodnutie publikovať, alebo prípravu rukopisu

Konkurenčné záujmy: .. Autori vyhlásili, že žiadne konkurenčné záujmy neexistujú

Úvod

Hoci globálne štatistiky ukazujú, že rakovina žalúdka (GC) je štvrtou najčastejšou rakovinou u mužov a piatou najčastejšou rakovinou u žien, úmrtnosť na rakovinu žalúdka na druhom mieste len s rakovinou pľúc [1]. Globálne výskyt rakoviny žalúdka klesá od druhej svetovej vojny [2]. Avšak, v rozvojových krajinách, vrátane Číny, morbidity a mortality rakoviny žalúdka zostali vysoké. Žalúdočné liečba rakoviny sa v posledných rokoch zlepšila, ale väčšina pacientov stále diagnostikovaný s pokročilou rakovinou žalúdka, často vrátane invázie a vzdialených metastáz, čo vedie k neuspokojivým tempom liečebný efekt. Vzhľadom k tomu, rakovina žalúdka predstavuje významnú hrozbu pre ľudské zdravie a život, je veľmi dôležité pochopiť mechanizmy vzniku rakoviny žalúdka v procese vzniku nádorového ochorenia, invázie a metastáz viesť včasnú diagnózu a liečbu.

Je všeobecne uznáva, že tvorba nádoru zahŕňa misregulation početných onkogény, tumor supresorových génov a génov metastáz súvisiacich s Golgiho fosfoproteínov 3 (GOLPH3), ktorý je tiež známy ako GPP34, GMx33 alebo MIDAS, je 34-kDa membránový proteín, ktorý bol pôvodne identifikovaný v myší Golgiho aparát podľa proteomické analýzy [3]. GOLPH3 patrí do rodiny proteínov Golgiho matrice, ktorá je vysoko konzervatívny z kvasiniek na človeka [4]. Potom, čo bol GOLPH3 translačný modifikovaný, je dynamicky pripojený k zápornému Golgiho matrice, rýchlo transportovaný cez trans-Golgi siete (TGN) do cytoplazmy, a rozdelené do plazmových membránových vačkov a endokrinných buniek [4]. Niekoľko štúdií preukázalo, že sa podieľa na GOLPH3 anterograde a retrográdna obchodovanie Golgiho, recyklácia receptoru, a glykozylácia z Golgiho aparátu do plazmatické membrány; GOLPH3 tiež hrá úlohu v interakciách cytoskeletu a udržiavanie štruktúry Golgiho [4] - [7]. Scott et al. prvýkrát identifikovaný onkogénne úlohu GOLPH3 tým, že ukáže svoju dôležitú úlohu v diferenciácii a proliferáciu nádorových buniek a jeho prítomnosť v mnohých nádorových ochorení [8]. Je zaujímavé, že niektoré štúdie ukázali, že GOLPH3 reguluje rakovinové bunky tým, že zvyšuje cicavčie cieľ rapamycín (mTOR) aktivitu. mTOR je proteín kináza serín /treonín a kľúčovým integrátor fosfatidyl-inositol-3 kinázy (RTK-PI3K) dráh známe, že regulujú rast buniek, proliferáciu a prežitie v ľudských rakovinových bunkách [9] - [10]. Mnoho štúdií sa v súčasnosti skúma vzťah medzi GOLPH3 a niekoľko solídnych nádorov však nie je dostatok dôkazov, aby podporujú hypotézu, že GOLPH3 expresia je spojená s progresiou rakovina žalúdka u ľudí a prognózu a mechanický základ, ktorým GOLPH3 ovplyvňuje vzniku nádorov, inváziu a metastázy karcinómu žalúdka zostáva nejasný. V tejto štúdii sme skúmali klinickej významov GOLPH3 a Akt /mTOR signalizácie v karcinómu žalúdka. Medzitým sme objavili vzťah GOPLPH3 a Akt /mTOR signalizácie u karcinómu žalúdka odhaliť potenciálne úlohu v regulácii GOLPH3 mTOR sprostredkované rakovina žalúdka vzniku nádorov, invázie a metastáz.

Materiály a metódy

etické oznámenie

Všetky študijné postupy boli skontrolované a schválené podľa Institutional Review etické rady pričlenené nemocnice Guangxi lekárskej univerzity a vykonané v súlade so zásadami vyjadrenými v Helsinskej deklarácie. Informovaný súhlas bol oslobodený od dosky vzhľadom k čerstvej vzorky boli spracované a na anonymné v súlade s etickými a právnymi normami.

Tkanivové vzorky a klinické dáta výber

Vzorky čerstvé tkanivá boli odobraté z osemdesiatich pacientov s rakovinou žalúdka, ktorí podstúpili chirurgický zákrok na pričlenené nemocnice Guangxi lekárskej univerzity v období od januára 2012 do januára 2013. rakovinové a karcinómu susediace tkanív (3 cm vzdialenosti od rakoviny) a spárovaných normálnych tkanív boli získané od každého pacienta a pacient bol diagnostikovaný nezávisle dvoma skúsenými patológov podľa spoločného výboru amerického o kritériách rakoviny [11]. boli k dispozícii u pacientov s diagnózou rakoviny žalúdka kompletné originálne klinické údaje. V súbore bolo 36 žien a 44 mužov s priemerným vekom 55,4 ± 13,1 rokov (rozmedzie 27-75 rokov). Ďalšie charakteristiky pacientov sú uvedené v tabuľke 1, tabuľka 2 a tabuľka 3. pacientov podstupujúcich chemoterapiu alebo rádioterapiu pred operáciou alebo pacienti s históriou iných nádorov boli vylúčené. V týchto štúdiách, časť vzorky odobraté počas chirurgického zákroku bola okamžite bleskovo zmrazený v kvapalnom dusíku a následne sa uloží pri -80 ° C, a časť bola stanovená na 10% pufrovaného formalínu po dobu 24 hodín, a vložené do parafínu.

Imunohistochémia

vzoriek parafínových bola rozdelená do 3 um silné oddiely z rakovinových, karcinóm-priľahlý, a spárovaný vzorky normálneho tkaniva a upevnené na sklenené sklíčka. Rezy boli najprv pečie pri teplote 65 ° C po dobu 2 hodín. Potom boli rezy zbavené parafínu v 100% xylénu a rehydratované v sérii zostupne etanolu (100%, 90%, 80% a 70% etanol) a destilovanou vodou podľa štandardných protokolov. Potom boli rezy nasiaknuté v citrátovom pufri antigénne načítanie, zahrieva v autokláve, a nechá sa ochladiť na teplotu miestnosti. Potom, čo boli rezy premyté v PBS sa trikrát po dobu piatich minút, 3% peroxidu vodíka sa pridá k zablokovaniu endogénnej peroxidázy a nešpecifické väzby antigénu pri teplote miestnosti po dobu 20 minút. Po opätovnom premytí PBS boli rezy inkubované so špecifickou protilátkou vo vlhkej komore cez noc pri teplote 4 ° C. Boli použité nasledujúce primárne protilátky: GOLPH3 protilátky na 1: 100, p-mTOR protilátky na 1: 200, p-Akt protilátky na 1: 200, p-p70S6 protilátky na 1: 100, a p-4E-BP1 protilátky na 1 : 200. U negatívnej kontroly sa primárne protilátka bol nahradený PBS, a zostávajúce kroky boli vykonávané ako bolo popísané vyššie. Vzorky boli potom premyté PBS, a činidlo polymér vystužujúce bol pridaný do sekciách pri izbovej teplote po dobu 20 minút. Po umytí sa tkanivové rezy boli ošetrené s HRP značený kozí anti-králičí IgG, biotinylizované anti-králičie imunoglobulín, a streptavidín peroxidázou komplexného činidla po dobu 30 minút. Rezy potom boli vizualizované v čerstvom roztoku 3-3 'Diaminobenzidine, hematoxylínom kontrastným farbivom, a 0,1% kyseliny chlorovodíkovej (na podporu separácie farieb). Nakoniec boli doštičky namontované v neutrálnej guma a analyzujú s jasnom poli mikroskopu.

Stupeň imunobarvení každej sekcie tkaniva bola hodnotená nezávisle na sebe dvoma skúsenými patológov, ktorí boli slepí k klinických dát pacientov. Hladiny expresie proteínu bola hodnotená za použitia semikvantitatívny bodovací systém založený na celkové percento pozitívne zafarbených nádorových buniek a intenzita farbenia. Percento pozitívne zafarbených buniek bol hodnotený podľa nasledujúcich kritérií: 0 (≤5% pozitívnych nádorových buniek zafarbených), 1 (pozitívna nádorové bunky 6-25% zafarbených), 2 (pozitívna nádorové bunky 26 až 50% zafarbené), 3 (≥51% pozitívnych nádorových buniek zafarbené). Intenzita sfarbenia bola hodnotená s použitím stupnice od 0 do 3 nasledujúcim spôsobom: 0 (žiadne škvrny), 1 (slabé zafarbenie = svetlo žltej), 2 (stredná farbenie = žlto-hnedá), 3 (silné farbenie = hnedá). Pre analýzu, celkovým výsledkom < 4 boli definované ako nízku expresiu, a skóre ≥ 4 boli definované ako vysokú expresiu

reverznej transkripcie polymerázová reťazová reakcia

Celková RNA bola extrahovaná z čerstvých tkanív použitím. TRIzolu činidlá (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) podľa inštrukcií výrobcu. RT-PCR primery použité v štúdii boli navrhnuté a syntetizované Shanghai Sangon Biological Engineering Technology & Služby Co. Ltd. β-aktínu bol použitý ako vnútorná referencia. Informácie o sekvenciách primérov použité v štúdii sú uvedené v tabuľke 4. RT-PCR bola vykonaná za použitia metódy dvojstupňový. Jeden mikrogram celkovej RNA bola reverzne transkribovaných do cDNA pri teplote 37 ° C počas 60 min a 85 ° C po dobu 5 sekúnd. PCR sa potom vykonáva v súlade s nasledujúcimi podmienkami: ohrev na 95 ° C počas 5 min; 40 cyklov denaturácie 30 s pri 95 ° C, žíhanie pri teplote 60 ° C počas 30 sekúnd a predĺženie po dobu 30 s pri 72 ° C; a záverečná extenzie pri 72 ° C počas 7 minút, načo sa reakčná zmes skladovať pri teplote 4 ° C. Sedem mikrogramov konečného produktu PCR boli naložené na 2% agarózovom géli pre elektroforézu a analýzu zobrazovacie pod ultrafialovým svetlom. Je množstvo One softvér (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) bola použitá na meranie pásom a beta-aktínu šedej hodnoty PCR produktov.

Western blotting

rakovinové , párové vzorky normálneho tkaniva karcinómu susediace a boli zvážené a zem na malé kúsky v tekutom dusíku. Pre-chladené PBS sa používa na umývanie skúšobných vzoriek, ktoré boli následne odstredovanie pri 5000 otáčkach za minútu pri teplote 4 ° C po dobu 5 min. Po trojnásobnom premytí PBS sa pridá vopred vychladené fosfát Lysis Buffer a PMSF. Vzorka sa vystaví pôsobeniu ultrazvuku pri 180 W pri 4 ° C po dobu 5 minút a odstredí sa pri 1000 otáčkach za minútu pri teplote 4 ° C počas 5 min; Supernatant bol potom okamžite odstránený, a koncentrácia proteínu bola kvantifikovaná testom Bradford za použitia komerčné súpravy zakúpenú od Bio-Rad Laboratories. Supernatanty boli zmiešané s nanášacím pufrom a varí pri teplote 100 ° C počas 5 minút, aby sa denaturáciu proteínov. Rovnaké množstvo každej vzorky bolo nanesené do jamiek 4-12% dodecylsulfát sodný-polyakrylamidovom gélu, elektroforéze, a prenesené na membránu Polyvinylidénfluorid. Membrána bola blokovaná 5% BSA pufru po dobu 1 hodiny za pretrepávania a potom inkubované pri 4 ° C cez noc s jednotlivými primárnymi protilátkami zriedenými v TBST. Boli použité nasledujúce primárne protilátky: polyklonálne králičie anti-ľudský GOLPH3 (1: 1000, abca plc, Cambridge, UK), polyklonálne králičie anti-ľudský p-p70S6 (Thr389) (1: 1000, Cell Signaling Technology, Inc. Beverly, MA, USA), polyklonálne králičie anti-ľudský p-Akt (Ser473) (1: 1000, Cell Signaling Technology, Inc. Beverly, MA, USA), monoklonálne králičie anti-ľudský p-mTOR (Ser2448) (1: 1000, cell Signaling Technology, Inc. Beverly, MA, USA), a monoklonálne králičie anti-ľudský p-Akt (1: 1000, cell Signaling Technology, Inc. Beverly, MA, USA). Membrána sa potom premyje päťkrát TBST po dobu piatich minút každý, a chrenovou peroxidázou konjugovaná kozia anti-králičia IgG sekundárnej protilátky (Santa Cruz Biotechnology, SC-2004) bola pridaná pred inkubáciou pri teplote miestnosti po dobu 1,5 hodiny za stáleho miešania. β-aktínu bol použitý ako vnútorná kontrola. Po premytí TBST trikrát za päť minút, skupina záujmu bola detekovaná pomocou ECL prime western blotting kit (Shanghai Pufei Biotechnology, Shanghai, Čína) a softvér na analýzu Množstvo One (Bio-Rad, CA, USA) bol použitý vyhodnocovať dáta denzitometria.

štatistickej analýzy

Všetky štatistické analýzy boli vykonané s použitím štatistického balíček pre sociálnych vied, verzia 17.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA). RT-PCR a westernovým prenosom výsledky sú uvedené ako priemer ± SE. Jednosmerný ANOVA nasledované testami viacrozsahové LSD bol použitý na analýzu rozdielov medzi skupinami. Vzťahy medzi GOLPH3 a p-mTOR, p-Akt, p-4E-BP, a hladín expresie p-p70S6 sa odhadli pomocou Pearsonov korelačný koeficient. Súvislosti medzi expresiu proteínu a klinicko premenné boli analyzované pomocou testu chí-kvadrát. P menšie ako 0,05 (dvojstranný) bol použitý ako úroveň štatistickej významnosti

Výsledky

Vzťahy medzi klinicko-premenných a expresných hladín proteínu imunohistochemicky

Imunohistochemické detekcie. ukázal, že GOLPH3, p-Akt, a p-4E-BP1 boli najčastejšie v cytoplazme a fosforylovaný m-TOR (p-mTOR) bol tiež prítomný v jadre na nízkej úrovni. Avšak, p-p70S6 farbenie bol pozorovaný len v cytoplazme. GOLPH3 a fosforylovanej Akt /mTOR proteíny vysoko exprimovaný v žalúdočnej skupiny rakoviny, ako v para-karcinómu tkanivá a spárované normálne sliznicu skupín (obrázok 1, tabuľka 5). Okrem toho, že vzťahy medzi klinicko-patologické premenné a expresie proteínu boli skúmané a sú zhrnuté v tabuľke 1, tabuľke 2 a tabuľke 3. Štatistická analýza ukázala, že pozitívne expresie rýchlosť GOLPH3 v žalúdočnej skupiny rakoviny silne koreluje s histologického stupňa ( p
= 0,011), hĺbka invázie ( p
= 0,007), vzdialených metastáz ( p
= 0,002) a postihnutím lymfatických uzlín ( p
< 0,004), zatiaľ čo nijako významne koreluje s vekom alebo pohlavím ( p
= 0,801 a 0,833, príslušne). Je zaujímavé, že boli pozorované vysoké hladiny expresie p-Akt, p-mTOR, p-4E-BP1 a p-p70S6K, že je v súlade s vysokou expresiou GOLPH3.

mRNA expresie GOLPH3 a mTOR signálne dráhy súvisiace gény pomocou RT-PCR

extrahuje sme RNA z karcinómu žalúdka, karcinómu para-tkanív, a párových vzoriek normálneho tkaniva od osemdesiat pacientov s rakovinou žalúdka. Hladiny expresie GOLPH3 a mTOR signálne gény dráh súvisiacich, vrátane Akt, mTOR, eukaryotické translačný iniciačný faktor 4E viažuci proteín 1 (4E-BP1) a p70 ribozomálnu proteín S6 kinázy (p70S6), boli hodnotené v troch skupinách podľa RT -PCR. Hladiny expresie týchto génov u karcinómu žalúdka, boli vyššie ako u karcinómu, priľahlé tkanivá a výrazne vyššie ako v párových normálnej žalúdočnej tkaniva. Priemerná hustota a distribúcia expresie GOPLH3, mTOR, Akt, 4E-BP1 a p70S6K sú znázornené na obrázku 2. Štatistická analýza odhalila, že hladiny expresie GOLPH3 a mTOR signálnych génov dráhy súvisiace boli významne odlišné v rôznych tkanivách žalúdku ( p
. < 0,05)

Proteín výrazom GOLPH3 a mTOR signálne súvisiacich dráh proteínov westernovým prenosom

Western blotting analýza ukázala, že GOLPH3, p-mTOR, p-AKT1 , p-4EB-P1 a p-p70S6 boli vyjadrené v karcinómu žalúdka, karcinómu susedí, a spárované normálne žalúdočnú sliznicu skupiny. Je zaujímavé, že progresívne zvýšenie bolo pozorované v priemerných hodnôt uvedených úrovní expresie proteínov zo spárovaného normálne žalúdočnej sliznice skupiny do žalúdka skupiny rakoviny (obrázok 3), a tam bol významný rozdiel medzi skupinami ( p
. < 0,05)

korelácia medzi expresiou GOLPH3 a signalizáciu signalizačné bielkoviny dráh v súvislosti s

korelačný analýza Pearsonov odhalili silnú koreláciu medzi GOLPH3 prejavu a že signalizačné dráhy (tabuľka 6). Štatistická analýza ukázala, že produkt Pearson momentový korelačné koeficienty boli všetky pozitívne v žalúdočnej skupiny rakoviny. Je zaujímavé, že GOLPH3 expresia bola pevne spojená s p-mTOR, p-4E-BP1 a p-p70S6K ( r
= 0,410, 0,203 a 0,128, v danom poradí, p
menšie ako 0,05) expresie a pozitívna korelácia medzi GOLPH3 a p-Akt bol takmer významný ( p
= 0,054). Medzitým boli pozorované silné korelácia medzi expresiou p-4E-BP1 a vyššie uvedených proteínov, s výnimkou p-mTOR. Fosforylovaný mTOR expresia bola tiež pozitívnu koreláciu s p-Akt výrazu ( r
= 0,521, p
= 0,027). Fosforylovaný p70S6K expresie bola tiež v korelácii s expresiou p-Akt ( r
= 0,274, p Hotel &0,001) a p-mTOR ( r
= 0,451, p
= 0,007).

Diskusia

Hoci je výskyt rakoviny žalúdka klesla v posledných rokoch [2], je aj naďalej vážnu hrozbu pre ľudské zdravie. Väčšina pacientov s rakovinou žalúdka je diagnostikovaná v pokročilom štádiu a majú tendenciu prezentovať s nádorovú inváziu a metastázy. Počas posledných desiatich rokov, boli dosiahnuté žiadne veľké zlepšenie, pokiaľ ide o diagnostike a liečbe rakoviny žalúdka. Pochopenie molekulárnej biológie podkladovej karcinómu žalúdka je stále chýba. Od roku 2009, GOLPH3 získal značnú pozornosť ako onkogén. Tento proteín sa lokalizuje do cytoplazmatickej tvári trans-Golgi a bol úzko spätý s karcinogenity [3], [8]. Veľké štúdie zistili, že GOLPH3 nadmerná expresia sa vyskytuje v niekoľkých ľudských nádorov, vrátane epiteliálneho karcinómu vaječníkov, karcinómu obličiek, multiformný glioblastóm, pažeráka spinocelulárny karcinóm a rakovina ústnej pero [12] - [16]. Dôkazy naznačujú, že GOLPH3 sa podieľa na vzniku nádorov a koreluje so zlou prognózou. Okrem toho, jedna štúdia uvádza, že nadmerná expresia GOLPH3 je spojená so zlým klinickým výsledkom v karcinómov žalúdka [17]. Avšak presný mechanizmus, z ktorých tento vzťah je nejasný, a presný molekulárnej mechanizmus, ktorým je GOLPH3 podieľa na vzniku nádorov, karcinómu žalúdka invázie a metastáz je zle pochopený. Vyšetriť potenciálny molekulárnej mechanizmus, ktorý je zapojený do GOLPH3 karcinómu žalúdka, sa najprv používa imunohistochémia lokalizovať GOLPH3 expresie v rôznych tkanivách žalúdku. Zistili sme, že GOLPH3 bol primárne lokalizované v cytoplazme, a bola vyjadrená v karcinómu žalúdka, para-karcinómu a spárované normálne žalúdočné tkaniva. Zaujímavé je, že výskyt vysokého GOLPH3 výrazu bolo 75,00% (60 z 80) v žalúdočných rakovinových tkanív, 43,75% (35 z 80) u karcinómu, priľahlé tkanivá a 12,50% (10 z 80) v normálnych tkanivách, v uvedenom poradí ( tabuľka 5). Okrem toho, GOLPH3 nadmerná expresia bola pozorovaná v žalúdočnej tkanive rakoviny a bol veľmi súvisí s žalúdočné invázii rakoviny a metastáz. Naše výsledky naznačujú, že vysoká expresia GOLPH3 významne súvisí s histologického stupňa ( p
= 0,015), hĺbka invázie ( p Hotel &0,001), lymfatických uzlín ( p
< 0,001), a vzdialených metastáz ( p
= 0,006), v žalúdočných rakovinových tkanivách (tabuľka 1). Okrem toho, Western blot a RT-PCR bola vykonávaná pre vyhodnotenie GOLPH3 expresie v proteínu a na úrovni mRNA. Je zaujímavé, že výsledky boli podobné tým pri analýze imunohistochemického. Uvedené zistenia naznačujú, že zvýšená expresia GOLPH3 je úzko spojená s výskytom rakoviny žalúdka, a GOLPH3 môžu byť zapojené do žalúdka inváziu rakoviny a metastáz.

V poslednej dobe sa stále viac signálnych transdukčných dráh boli hlásené byť zapojený do nádorovej invázie a metastáz. Cicavčie cieľ rapamycínu (mTOR), čo je serín /treonín kináza po prúde fosfatidylinozitol 3-kinázy (PI3K) /Akt signálne dráhy a zahŕňa mTORC1 (mTOR /RAPTOR) a mTORC2 (mTOR /Rictor), reguluje syntézu proteínov, bunky proliferácie, bunkový metabolizmus a diferenciácie [18], [19]. Aktivované mTORC1 postupne priamo aktivuje downstream cieľov vrátane p70S6K kinázy (S6K) a eukaryotických iniciačný faktor 4E viažuci proteín 1 (4E-BP1), a mTORC2 bolo preukázané, že hrajú kritickú úlohu v Akt fosforylácie na Ser473, čo vedie k plnej aktivácii akt [20], [21]. Hoci Akt priamo aktivuje mTOR /raptor, môže tiež priamo alebo nepriamo aktivovať funkciu p70S6K kináza /4EBP1 dráhy túto dráhu fosforyláciou nádorového supresor TSC2 [22]. Akt /mTOR bolo preukázané, že sa často aktivované v rôznych malígnych nádorov, vrátane karcinómu prsníka, močového karcinómu, rakoviny vaječníkov, pankreasu neuroendokrinných nádorov ľudského meduloblastómu, melanómu, karcinómu endometria a hepatocelulárneho karcinómu; Preto táto cesta predstavuje možný terapeutický cieľ v mnohých nádorových ochorení [23] - [30]. V našej štúdii RT-PCR a Western blot ukázala, že mRNA a expresie proteínu p-Akt, p-mTOR, p-4E-BP1 a p-p70S6K v žalúdku skupine rakoviny boli významne vyššie než v para-karcinómu tkaniva a párové normálne skupiny žalúdočné tkaniva (obrázok 2, obrázok 3). Ak chcete zistiť, či sú hladiny expresie p-Akt, p-mTOR, p-4E-BP1 a p-p70S6 boli spojené s kritickými klinicko-charakteristikami, sme vykonali ďalšie analýzy. V tejto štúdii, 81,25% z 80 pacientov s rakovinou žalúdka mal vysokú p-mTOR expresiu, 77,50% malo vysokú expresiu p-4E-BP, 76,25% malo vysokú p-p70S6K expresiu, a iba 75,00% malo vysokú p-Akt expresiu (tabuľka 5). Prekvapivo, imunohistochemická analýza odhalila, že hladiny expresie týchto výrazov proteínu boli významne spojené s hĺbkou invázie, lymfatické uzliny a vzdialené metastázy, a histologického stupňa, ale neboli spojené s pohlavia alebo veku (tabuľka 1, tabuľka 2 a tabuľka 3) , Tieto výsledky naznačujú, že Akt /mTOR je aktivovaná u karcinómu žalúdka a môže hrať dôležitú úlohu v žalúdku rakoviny vzniku nádorov, invázie a metastáz.

V poslednej dobe, Scott et al. bolo zistené, že GOLPH3 môže podporovať bunkovú transformáciu a rastu nádoru konštitutívny aktiváciou mTOR signálne dráhy v melanómu buniek a že GOLPH3 stimuluje mTOR signálny dráhu cez mTORC1 a mTORC2 komplexov, čím sa podporí rast nádorových buniek a proliferáciu [8]. Je však jasné, či tento jav sa vyskytuje aj v žalúdočných rakovinových tkanív. Pokiaľ je nám známe, naša štúdia je prvou, ktorá preskúmala patogenéze GOLPH3 propagované vzniku nádorov, inváziu a metastázy rakoviny žalúdka. Naše údaje ukazujú významný pozitívny vzťah medzi expresiou GOLPH3 a p-mTOR, p-4E-BP1 a p-p70S6 ( r
= 0,410, 0,203 a 0,128, v danom poradí, p
< 0,05). Avšak, je vzťah medzi expresiou GOLPH3 a p-Akt nebol významný ( r
= 0,258, p Hotel &0,05) (tabuľka 6). Najmä významne vyššie expresiu GOLPH3 bol sprevádzaný vysokou expresiou p-mTOR, p-4E-BP1 a p-p70S6K v žalúdočnej rakovinové tkanive, a tento vzťah bol významne spojená s hĺbkou invázie, histologického stupňa, a lymfatických uzlín a vzdialené metastázy. Naše výsledky odhalili rôzne vzťahy medzi GOLPH3 a Akt /mTOR signálne proteíny, a pozitívne asociácie medzi GOLPH3 a p-Akt bol takmer významné. Konkrétne príčiny tohto vzťahu medzi GOLPH3 a p-Akt sú nejasné a malo by byť ďalej skúmaná. Domnievame sa, že veľkosť vzorky môže byť príliš malá. Okrem toho, GOLPH3 môže aktivovať v prvom rade na Akt /mTOR signálnych dráh cez aktivovaný mTORC1 komplexu skôr než mTORC2 komplexu, čo vedie k p70S6K a 4E-BP1 fosforylácie, čím ovplyvňuje rakovinu žalúdka. Tieto výsledky ukazujú, že GOLPH3 môžu byť zapojené do žalúdka rakoviny vzniku nádorov, invázie a metastáz pomocou abnormálne aktivácia Akt /mTOR signálnej dráhy.

Na záver, táto štúdia zistené hladiny expresie s vysokým GOLPH3, p-Akt, p-mTOR, p-4E-BP1 a p-p70S6 v žalúdočnej skupine rakoviny silne ktorá koreluje s histologického stupňa, hĺbkou invázie, vzdialené metastázy, a lymfatických uzlín u klinickopatologické analýzy premenných a imunohistochemicky. Okrem toho, expresia GOPLH3 vysoko koreluje s aktiváciou Akt /mTOR signálne dráhy v ľudských vzorkách s karcinómom žalúdka. Na základe týchto výsledkov sme sa domnievať, že by mohli byť ovplyvnené GOLPH3 progresiu a metastázy rakoviny žalúdka prostredníctvom aktivácie Akt /mTOR signálnej dráhy. Navyše, navrhujeme, že inhibícia expresie génov v GOLPH3 a mTOR signálne dráhy môže predstavovať nový cieľ pre terapiu rakoviny žalúdka. Nakoniec, invázie a migrácie mechanizmy GOLPH3 u karcinómu žalúdka ešte potrebovať ďalšie vyšetrovanie.

• Ploche ONE: prognostický význam neutrofilov lymfocytov Ratio u pacientov s karcinómom žalúdka: meta-Analysis
• Ploche ONE: Expresia XPG bielkovín v Development, vývoj a prognóza žalúdočné Cancer