PLoS ONE: mechanizmai GOLPH3 susijęs su skrandžio vėžiu progresavimo: preliminarų tyrimą

Anotacija

Studijos dizainas

Jei ištirti konkrečius mechanizmus, pagal kuriuos Goldžio fosfoproteinu 3 (GOLPH3) paveikia skrandžio vėžio progresavimą ir ištirti jo klinikinės reikšmės.

metodai

Imunohistocheminis analizė buvo naudojama įvertinti tarp GOLPH3 koreliacijas, fosforilinarai mTOR (p-mTOR), fosforilinarai Akt (p-Akt), fosforilinarai p70S6 (p-p70S6), fosforilinarai 4E-BP1 (p-4E -BP1) ir klinikos ypatumai skrandžio vėžio. MRNR ekspresijos lygis GOLPH3, mTOR, Akt, p70S6 ir 4e-BP1 skrandžio vėžys, vėžio gretimo ir suporuotas normalaus audinio buvo analizuojami naudojant RT-PGR. Imunoblotingu buvo siekiama nustatyti baltymų ekspresiją GOLPH3, p-mTOR, p-Akt, p-p70S6 ir p-4E-BP1 audiniuose.

Rezultatai

Aukšto išraiška baltymų lygiai GOLPH3, p-AKT, p-mTOR, p70S6, p-4E-BP1 buvo teigiamai susijęs su histologinio laipsnio ( p
< 0,05), gylis invazijos ( p
< 0,05 ), tolimos metastazės ( p
< 0,05) ir limfmazgių dalyvavimas ( p
< 0,05). Palyginti su karcinoma-greta ir suporuotas normaliuose audiniuose, mRNR ekspresijos lygis GOLPH3, AKT, mTOR, p70S6 ir 4EBP1 skrandžio vėžio audiniuose buvo žymiai didesnis. Baltymo ekspresijos lygis GOLPH3, p-AKT, p-mTOR, p-p70S6 ir p-4E-BP1 skrandžio vėžio audiniuose taip pat buvo žymiai didesnis nei karcinoma gretimo, ir suporuotas normaliuose audiniuose. Stipri teigiama koreliacija pastebėta tarp GOLPH3, p-mTOR, p-p70S6 ir p-4EBP1 išraiškos ( R
= 0,410, 0,303 ir 0,276, atitinkamai P
< 0,05), bet nepastebėta reikšminga koreliacija tarp GOLPH3 ir p-Akt išraiška.

Išvados

GOPLH3 išraiška lygis yra labai koreliuoja su Akt /mTOR signalizacijos žmogaus skrandžio vėžio pavyzdžius. GOLPH3 kartu su Akt /mTOR signalizacijos aktyvavimo gali vaidinti svarbų vaidmenį kuriant, diferenciacija, invazija ir metastazių skrandžio vėžio

nurodomoji dalis:. Peng J Fang Y Tao Y Li K S T Nong Y, ir kt. (2014) Mechanizmai GOLPH3 susijęs su skrandžio vėžiu progresavimo: preliminarų tyrimą. PLoS ONE 9 (10): e107362. Doi: 10,1371 /journal.pone.0107362

redaktorius: juanių-Greitai Ho Taipėjus medicinos universitetas, Taivanis

Įstojo: birželio 13, 2014; Priimtas rugpjūčio 7, 2014 m Paskelbta: Vasaris 6, 2014

Visos teisės saugomos: © 2014 Peng et al., Tai atviros prieigos straipsnis platinama pagal Creative Commons Attribution licencija, kuri leidžia nevaržomai naudotis, paskirstymo ir dauginimąsi bet kokioje laikmenoje sąlygomis, su sąlyga, kad pirmasis autorius ir šaltinis įskaitomos

Duomenų prieinamumas:. autoriai patvirtina, kad visi duomenys, kuriais grindžiamos išvados visiškai prieinama be apribojimų. Visi duomenys yra prieinami iš rankraščio ir skaičiai

Finansavimas:. Šis tyrimas parėmė tyrimų fondo Guangxi sveikatos tinkamomis technologijomis ir plėtros projekto (dotacijos numeris: S201415-01). Į finansuotojai neturėjo vaidmenį studijų dizainas, duomenų rinkimo ir analizės, sprendimų skelbti, ar ruošiant rankraštį

konkuruojančių interesų.. Autoriai pareiškė, kad nėra konkuruojantys interesai egzistuoja

Įvadas

Nors pasaulinė statistika rodo, kad skrandžio vėžys (GC) yra ketvirtoji dažniausia vėžio vyrams ir penkta labiausiai paplitusi vėžio moterų mirtingumas nuo skrandžio vėžio antra užima tik plaučių vėžį [1]. Pasaulinė dažnis skrandžio vėžiu mažėjo nuo Antrojo pasaulinio karo [2]. Tačiau besivystančiose šalyse, įskaitant Kiniją, sergamumo ir mirtingumo nuo skrandžio vėžio išliko aukštas. Skrandžio vėžio gydymas pagerėjo per pastaruosius metus, tačiau dauguma pacientų vis dar diagnozuota sergantys išplitusiu skrandžio vėžiu, dažnai įskaitant invazija ir tolimoje metastazių, todėl nepatenkinama gydymo poveikis norma. Kadangi skrandžio vėžys kelia didelę grėsmę žmonių sveikatai ir gyvybei, labai svarbu suprasti, skrandžio vėžio patogenezės į Tumorigenesis, invazija ir metastazių proceso vadovas ankstyvąją diagnostiką ir gydymą.

Tai dažniausiai pripažįstama, kad auglio susidarymą apima daugelio onkogenų, navikų supresorinių genų ir metastazės susijusių genų Nervų-fosfoproteinu misregulation 3 (GOLPH3), kuris taip pat žinomas kaip GPP34, GMx33, arba MIDAS, yra 34-kD membranos baltymo, kad iš pradžių buvo nustatytas pele Goldžio kompleksas kurį PROTEOMIKOS analize [3]. GOLPH3 siejamas su Nervų-matricos baltymų šeimos, kuri yra labai konservatyvios iš mielių žmonėms [4]. Po GOLPH3 buvo translationally pakeista, ji yra dinamiškai susijęs su neigiamu Goldžio matricos, greitai gabenamų per Trans-Goldžio tinklo (TGN) į citoplazmą ir pasiskirsto citoplazmos membrana pūslelių ir endokrininių ląstelių [4]. Keletas tyrimų parodė, kad GOLPH3 dalyvauja anterogradinė ir retrogradinė Goldžio prekyba, receptorių perdirbimo ir glikozilinant iš Goldžio kompleksas prie plazminės membranos; GOLPH3 taip pat vaidina svarbų vaidmenį Citoskeletas sąveikos ir priežiūra Goldžio struktūrą [4] - [7]. Scott ir kt. Pirmasis nustatė onkogeninio vaidmenį GOLPH3 atskleidžiant savo svarbų vaidmenį navikų ląstelių diferenciacijos ir proliferacijos ir jo buvimas daugelyje kietų vėžio [8]. Įdomu tai, kad kai kurie tyrimai rodo, kad GOLPH3 reguliuoja vėžines ląsteles didinant žinduolių rapamicino taikinio (mTOR) veikla. mTOR yra serino /treonino proteinkinazės ir pagrindinis integratorius, fosfatidilserino-inozitolio-3 kinazės receptorių (TKR-PI3K) būdus žinoma, kad reguliuoti ląstelių augimą, proliferaciją, ir išgyvenimą Naudojant žmogaus vėžio ląstelių [9] - [10]. Daugelis tyrimų metu tiriant ryšį tarp GOLPH3 ir keletas kietų vėžio Tačiau santykius, yra pakankamai įrodymų, patvirtina hipotezę, kad GOLPH3 išraiška yra susijęs su žmogaus skrandžio vėžio progresavimo ir prognozės, o mechanistinio pagrindu, pagal kurį GOLPH3 įtakos Tumorigenesis, invazija ir metastazės skrandžio vėžio lieka neaiškus. Šiame tyrime mes ištirti klinikinių significances, GOLPH3 ir AKT /mTOR signalizacijos skrandžio vėžio. Tuo tarpu, mes atrado GOPLPH3 ir AKT /mTOR signalizacijos santykį skrandžio vėžio atskleisti galimą vaidmenį GOLPH3 reguliuojant mTOR tarpininkaujant skrandžio vėžys Tumorigenesis, invazija ir metastazes.

Medžiagos ir metodai

etikos pareiškimas

Visos studijų procedūros buvo peržiūrėtos ir iš tarnybinės etikos peržiūros tarybos pirmasis filialas ligoninės Guangxi medicinos universiteto patvirtinta ir vykdoma pagal išreikštoms Helsinkio deklaracijos principais. Informuotas sutikimas buvo taikoma išimtis pagal valdybos dėl šviežių egzempliorių buvo tvarkoma ir anoniminiais pagal etikos ir teisės normų.

Audinių mėginiai ir klinikinių duomenų atranka

šviežios audinio mėginiai buvo imami iš aštuoniasdešimt pacientų su skrandžio vėžiu, kuris buvo atliktas chirurginis gydymas pirmajame filialas ligoninės Guangxi medicinos universiteto laikotarpiu nuo 2012 sausio iki 2013 sausio vėžinių ir karcinoma-gretimuose audiniuose (3 cm atstumu nuo vėžio) ir suporuotas normaliuose audiniuose buvo gauti iš kiekvieno paciento ir pacientas buvo diagnozuota nepriklausomai du patyrę patologai pagal Amerikos jungtinio komiteto dėl vėžio kriterijus [11]. Užbaigti originalios klinikiniai duomenys buvo prieinami pacientams, kuriems diagnozuotas skrandžio vėžys. Grupė įtraukta 36 moterų ir 44 vyrų, kurių vidutinis amžius apie 55,4 ± 13,1 metų (nuo 27-75 metų). Papildomos pacientų charakteristikos parodytos 1 lentelėje, 2 lentelė ir 3 lentelė Pacientams, gydomiems chemoterapija arba radioterapija prieš operaciją arba kurie turėjo kitų navikų istoriją buvo atmesti. Į šias tyrimais, bandinį, priimtą chirurginės operacijos metu dalis buvo iš karto spragtelėjimu užšaldomos skystame azoto ir vėliau prie -80 ° C, ir dalis buvo nustatyta esant 10% formalinu 24 h ir įdėta į parafiną.

imunohistocheminis

Parafino įterptųjų egzemplioriai buvo suskirstyta į 3-mkm storio sekcijų iš vėžinių karcinomos-greta, ir suporuotas normalių audinių mėginių ir montuojamas ant stikliukų. Skyriai iš pradžių buvo kepama 65 ° C temperatūroje 2 val. Tada, sekcijos buvo deparaffinized 100% ksileno ir rehidrataciją mažėjančia etanolio serijos (100%, 90%, 80%, ir 70% etanolio) ir distiliuoto vandens pagal standartinių protokolų. Po to, sekcijos buvo panardinti į citrato antigeno išėmimą iš buferinio tirpalo, kaitina autoklave, ir paliekamas atvėsti iki kambario temperatūros. Po to, kai dalys buvo išplautos PBS tris kartus penkias minutes, 3% vandenilio peroksido buvo įtraukta į blokuoti endogeninio peroksidazės aktyvumo ir nespecifinį antigeną rišantis kambario temperatūroje 20 min. Po to, kai vėl plaunant PBS, sekcijos buvo inkubuojamos su specifinių antikūnų drėgna kameroje per naktį 4 ° C temperatūroje. buvo naudojami šie pirminiai antikūnai: GOLPH3 antikūno 1:100 p-mTOR antikūno 1:200 p-Akt antikūno 1:200 p-p70S6 antikūno 1:100, ir p-4E-BP1 antikūno 1 :200. Už neigiama kontrolė, pagrindinis antikūnas buvo pakeistas su PBS, ir buvo atliktas likusių etapų kaip buvo aprašyta anksčiau. tada mėginiai buvo išplauti su PBS, ir polimeras-sustiprinti agentas buvo įtraukta į skyrius kambario temperatūroje 20 min. Po plovimo, audinių dalys buvo gydomi HRP-žyma ožkos anti-triušio IgG, biotinilintu anti-triušio imunoglobulino, ir streptavidino peroksidazės komplekso reagento 30 min. Tuomet skyriai buvo ryškinamos šviežia 3-3 "diaminobenzidinas tirpalas, hematoksilinu kontrasto, ir 0,1% vandenilio chlorido rūgštis (pagalba spalvų skaidymas). Galiausiai, skaidres buvo montuojamas į neutralią guma ir analizuojami su ryškiai lauko mikroskopu.

iš imunodažymu kiekvieno audinių skyriuje laipsnis buvo vertinamas nepriklausomai du patyrę patologai, kurie buvo aklas pacientų klinikinių duomenų. Baltymų ekspresijos lygis buvo įvertintas naudojant pusiau kiekybinį vertinimo sistemą, grindžiamą bendra procentas teigiamai tamsintas vėžinių ląstelių ir dažymo intensyvumo. Iš teigiamai tamsintas ląstelių procentas buvo įmuštas pagal šiuos kriterijus: 0 (≤5% teigiamų navikines ląsteles tamsintas), 1 (6-25% teigiamas naviko ląsteles tamsintas), 2 (26-50% teigiamas naviko ląsteles tamsintas), 3 (≥51% teigiami naviko ląstelės tamsintas). Dažymo intensyvumas pelnytas naudojant skalę nuo 0 iki 3 taip: 0 (dažymo), 1 (silpna dažymo = šviesiai geltonos), 2 (vidutinio dažymo = gelsvai rudos spalvos), 3 (stiprus dažymo = rudos spalvos). Analizei, Užpildų balo < 4 buvo apibrėžiamas kaip mažas išraiška, ir balų ≥ 4 buvo apibrėžta kaip aukšto išraišką

atvirkštinės transkripcijos polimerazės grandininė reakcija

Viso RNR buvo išskirta iš šviežių audinių naudojant. TRIzol reagentas (Invitrogen, Karlovi Varai, CA, JAV) pagal gamintojo instrukcijas. RT-PCR pradmenys naudojami tyrime buvo suprojektuoti ir sintetinamas Šanchajus Sangon biologinės inžinerijos technologijos & Services Co Ltd β-Actin buvo naudojamas kaip vidaus nuoroda. Informacija apie pradmenų sekas, kurios naudojamos tyrimo yra parodyta 4 lentelėje RT-PGR buvo atliekama naudojant dviejų pakopų metodą. Vienas mikrogramų viso RNR atvirkštiniu-transkripcija į cDNR 37 ° C temperatūroje 60 min ir 85 ° C temperatūroje 5 s. tada PGR buvo atliekamas pagal šias sąlygas: šildymo iki 95 ° C temperatūroje 5 min; 40 ciklų denatūracija, 30 s ne mažesnis nei 95 ° C, atkaitinimo esant 60 ° C temperatūroje 30 s, ir išplėtimo 30 s esant 72 ° C; ir galutinis išplėtimas 72 ° C temperatūroje 7 min prieš reakcija buvo laikomas 4 ° C temperatūroje. Septyni mikrogramų galutinio PGR produkto buvo pakrautas ant 2% agarozės gelis elektroforezės ir vaizdo analizės ultravioletinėje šviesoje. Kiekis Viena programa (Bio-Rad, Heraklis, CA, JAV) buvo naudojamas matuoti juostas ir ß-aktino pilka vertę PGR produktų.

imunoblotingu

vėžinėmis karcinomos-greta ir suporuoti normalaus audinio mėginiai buvo pasverti ir žemės į mažus gabaliukus skystame azote. Iš anksto atšaldyti PBS buvo naudojamas plauti bandiniams, kurios vėliau buvo centrifuguojamos 5000 apsisukimų per minutę, esant 4 ° C temperatūroje 5 min. Po plovimo tris kartus su PBS, buvo pridėta iš anksto atšaldyti fosfatas lizės buferis ir PMSF. Mėginys buvo disperguotos ultragarso pagalba 180 W, esant 4 ° C temperatūroje 5 min ir centrifuguojamas 1000 apsisukimų per minutę, esant 4 ° C temperatūroje 5 min; supernatantas buvo tada iš karto pašalintas, o baltymo koncentracija buvo įvertintas, Bradfordo analizėje, naudojant komercinę komplektas įsigyti iš Bio-Rad Laboratories. Supernatantq buvo sumaišyti su buferinio tirpalo ir virti esant 100 ° C temperatūroje 5 min denaturaciją baltymus. Lygios kiekiai kiekvieno mėginio buvo pakrauta į 4-12-% natrio dodecilsulfatas-poliakrilamido gelio šulinių, elektroforezė, ir perkelti į polivinilideno fluorido membrana. Membrana buvo užblokuotas su 5% BSA buferio 1 valandą, o purtant, ir inkubuojami esant 4 ° C temperatūroje per naktį su atskirų pirminių antikūnų praskiesti TBST. buvo naudojami šie pirminiai antikūnai: polikloninis triušio prieš žmogaus GOLPH3 (1:1000, Abcam plc ", Kembridžas, Jungtinė Karalystė), polikloninis triušio prieš žmogaus p p70S6 (Thr389) (1:1000, Mobilusis Signalizacijos Technology, Inc Beverli, MA, JAV), polikloninis triušio prieš žmogaus p Akt (Ser473) (1:1000, Mobilusis Signalizacijos Technology, Inc Beverli, MA, JAV), monokloninis triušio prieš žmogaus p mTOR (Ser2448) (1:1000, Mobilusis Signalizacijos Technology, Inc Beverli, MA, JAV) ir monokloninis triušio prieš žmogaus p Akt (1:1000, Mobilusis Signalizacijos Technology, Inc Beverli, MA, JAV). tada membrana buvo plaunamas TBST penkis kartus su kiekvienu penkių min, ir krienų peroksidazės-konjuguoto ožkos anti-triušio IgG antrinis antikūnas (Santa Cruz biotechnologijos, SC-2004) buvo pridėta prieš inkubaciją kambario temperatūroje 1,5 val purtant. β-aktino buvo naudojamas kaip vidaus kontrolės. Po plovimo su TBST tris kartus penkių min, palūkanų juosta buvo aptiktas naudojant ECL svarbiausias Vakarų pernašos komplektas (Šanchajus Pufei Biotechnologijos, Šanchajus, Kinija) ir Kiekis Vienas analizės programinė įranga (Bio-Rad, CA, JAV) buvo naudojamas įvertinti Densitometry duomenis.

statistines analizes

Visi statistinės analizės buvo atliekamos naudojant statistikos paketą, skirtą socialinių mokslų, versija 17.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, JAV). RT-PGR ir Imunoblotingo rezultatai pateikti kaip vidurkis ± SE. Vieno ANOVA po LSD kelių nuotolio bandymai buvo naudojamas analizuoti tarp grupių skirtumus. Tarp GOLPH3 ir p-mTOR, p-Akt, p-4E-BP, ir p-p70S6 ekspresijos lygį santykiai buvo apskaičiuotas naudojant Pearsono koreliacijos koeficientą. Tarp baltymų ekspresijos ir klinikos kintamųjų asociacijos buvo analizuojami naudojant chi kvadrato testas. "P < 0,05 (du-tailed) buvo naudojamas kaip statistinio reikšmingumo lygio

Rezultatai

Santykiai tarp klinikos kintamiesiems ir baltymų ekspresijos lygį imunohistocheminiu

Imunohistocheminis aptikimas. parodė, kad GOLPH3, p-AKT, ir p-4E-BP1 buvo dažniausiai atliekami citoplazmą, ir fosforilinto m-TOR (p-mTOR) taip pat buvo pateikti į branduolio, esančio kurioje žemo lygio. Tačiau, p-p70S6 dažymo buvo pastebėtas tik citoplazmoje. GOLPH3 ir fosforilinamos Akt /mTOR kelio metu baltymai buvo labiau išreikštas skrandžio vėžio grupėje, nei para-karcinoma audinių ir suporuotas normalios gleivinės grupes (1 pav, 5 lentelė). Be to, buvo nagrinėjami tarp klinikos kintamųjų ir baltymų raiškos santykiai ir apibendrinti 1 lentelėje 2 lentelė ir 3 lentelė statistinė analizė parodė, kad teigiamas išraiška rodiklis GOLPH3 į skrandžio vėžio grupės stipriai koreliuoja su histologinio laipsnio ( p
= 0,011), gylis invazijos ( p
= 0,007), tolimos metastazės ( p
= 0,002) ir limfmazgių dalyvavimas ( p
< 0,004), o tai nebuvo labai koreliuoja su amžiumi ar lyties ( p
= 0,801 ir 0,833, atitinkamai). Įdomu tai, kad buvo laikomasi aukštos raiškos lygmenys p-Akt, p-mTOR, p-4E-BP1 ir p-p70S6 būti suderinamas su aukštos GOLPH3 išraiška.

iRNR raiška GOLPH3 ir mTOR signalizacijos kelias susijusi genai RT-PCR

išgauti RNR nuo skrandžio vėžio, para-karcinoma audinio ir suderintų normalių audinių mėginių aštuoniasdešimt pacientams, sergantiems skrandžio vėžiu. Sąvoka lygiai GOLPH3 ir mTOR signalinio kelio susijusių genų, įskaitant Akt, mTOR eukariotinės vertimo inicijavimo faktoriaus 4E surišančio baltymo 1 (4E-BP1) ir P70 ribosomos baltymų S6 kinazės (p70S6), buvo vertinami trijose grupėse RT -PCR. Ekspresijos lygis šių genų skrandžio karcinoma buvo didesnis nei karcinoma-greta audinių ir žymiai didesnis nei suporuotas įprastomis skrandžio audiniuose. Vidutinis tankis ir išraiška platinimas GOPLH3, mTOR, Akt, 4E-BP1 ir p70S6 yra parodyta 2 paveiksle statistinė analizė atskleidė, kad sąvoka lygiai GOLPH3 ir mTOR signalinio kelio susijusių genų buvo gerokai skiriasi skirtingose ​​skrandžio audinių ( p
. < 0,05)

baltymai išraiška GOLPH3 ir mTOR signalinio kelio susiję baltymai imunoblotingo metodu

imunoblotingu analizė parodė, kad GOLPH3 p-mTOR p-Akt1 , p-4EB-P1 ir p-p70S6 taip pat buvo išreikštas skrandžio vėžio, karcinoma-greta, ir suporuotas normalus skrandžio gleivinės grupes. Įdomu tai, kad progresuojanti augo vidurkiams minėtų baltymų ekspresijos lygį iš suporuotų normalų skrandžio gleivinės grupė, skrandžio vėžio grupės (3 paveikslas), ir ten buvo didelis skirtumas tarp grupių ( P
. < 0,05)

koreliacija su GOLPH3 saviraiškos ir signalizacijos signalinio kelio susijusių baltymų

Pearson koreliacinė analizė atskleidė didelį ryšį tarp GOLPH3 saviraiškos ir kad signalizacijos kelio (lentelė 6). Statistinė analizė parodė, kad visi Pearson produktas momentas koreliacijos koeficientai buvo teigiamas skrandžio vėžio grupei. Įdomu tai, kad GOLPH3 išraiška buvo stipriai susijusi su p-mTOR, p-4E-BP1 ir p-p70S6 ( R
= 0,410, 0,203 ir 0,128, atitinkamai, P
< 0,05) išraiška ir teigiamas ryšys tarp GOLPH3 ir p-Akt buvo beveik reikšmingas ( p
= 0,054). Tuo tarpu, stiprūs koreliacija nustatyta tarp p-4E-BP1 saviraiškos ir minėtų baltymų su p-mTOR išimtis. Fosforilinamos mTOR išraiška buvo taip pat teigiamai koreliuoja su p-Akt išraiškos ( R
= 0,521 P
= 0,027). Fosforilinamos p70S6 sąvoka taip pat buvo susietas su p-Akt išraiškos ( R
= 0,274 P
< 0,001) ir p-mTOR ( R
= 0,451, p
= 0,007).

Diskusijos

Nors skrandžio vėžio atvejų sumažėjo pastaraisiais metais [2], jis lieka rimta grėsmė žmonių sveikatai. Dauguma skrandžio vėžiu pacientams diagnozuotas stadijose ir yra linkę pateikti su naviko invazija ir metastazių. Per pastarąjį dešimtmetį, nėra dideli patobulinimai buvo pasiekta dėl ankstyvos diagnozės ir gydymo skrandžio vėžio. Kad, molekulinės biologijos pagrindinės skrandžio vėžio supratimas vis dar trūksta. Nuo 2009 m GOLPH3 gavo daug dėmesio kaip onkogeno. Šis baltymas localizes į citoplazminio paviršiaus trans-Golgi ir buvo glaudžiai susijęs su tumorogeniš- [3], [8]. Dideli tyrimai parodė, kad GOLPH3 raiška vyksta keliose žmogaus vėžio, įskaitant epitelio kiaušidžių vėžio, inkstų ląstelių karcinoma, daugiaformė glioblastoma, stemplės suragėjusių ląstelių karcinoma ir burnos liežuvio vėžiu [12] - [16]. Faktai rodo, kad GOLPH3 dalyvauja Tumorigenesis ir koreliuoja su blogos prognozės. Be to, vienas tyrimas pranešė, kad GOLPH3 raiška yra susijusi su prasta klinikinės baigties skrandžio vėžio [17]. Tačiau tikslios mechanizmus, sukeliančius šiuos santykius yra neaišku, o tiksli molekulinės mechanizmas, pagal kurį GOLPH3 dalyvauja skrandžio vėžys Tumorigenesis, invazija ir metastazių yra sunkiai suprantamas. Ištirti galimą molekulinį mechanizmą, pagal kurį GOLPH3 dalyvaujantis skrandžio vėžio, mes pirmą kartą panaudotas imunohistocheminis rasti GOLPH3 išraišką įvairiose skrandžio audinius. Mes nustatėme, kad GOLPH3 pirmiausia buvo lokalizuota į citoplazmą, ir jis buvo išreikštas skrandžio vėžio, para-karcinoma ir suporuotas normaliomis skrandžio audinius. Įdomu tai, kad aukštos GOLPH3 išraiškos normos buvo 75,00% (60 iš 80) skrandžio vėžio audiniuose, 43.75% (35 iš 80) karcinoma-gretimuose audiniuose ir 12,50% (10 iš 80) sveikuose audiniuose, atitinkamai ( 5 lentelė). Be to, GOLPH3 per išraiška buvo pastebėtas skrandžio vėžio audinio ir buvo labai susijęs su skrandžio vėžio invazijos ir metastazių. Mūsų rezultatai rodo, kad aukštos GOLPH3 išraiška buvo reikšmingai susiję su histologinio laipsnio ( P
= 0,015), gylis invazijos ( P
< 0,001), limfmazgių metastazės (, p
< 0,001), ir toli metastazių ( p
= 0,006) skrandžio vėžio audinių (1 lentelė). Be to, imunoblotingu ir RT-PGR buvo atliekama siekiant įvertinti GOLPH3 išraiška baltymų ir iRNR lygiui. Įdomu tai, kad rezultatai buvo panašūs į tą, kuris pastebėtas į imunohistocheminiu analizės. Minėti faktai rodo, kad padidėjo GOLPH3 išraiška yra glaudžiai susijęs su skrandžio vėžio atvejų, o GOLPH3 gali būti įtraukti į skrandžio vėžio invazijos ir metastazių.

Neseniai buvo pranešta, kad daugėja signalo perdavimo kelius dalyvauja naviko invazija ir metastazių. Žinduolių rapamicino taikinio (mTOR), kuris yra serino /treonino kinazės pasroviui fosfatidil 3-kinazės (PI3K) /Akt signalinio kelio ir apima mTORC1 (mTOR /RAPTOR) ir mTORC2 (mTOR /RICTOR), reguliuoja baltymų sintezę, ląstelių proliferacija, ląstelių medžiagų apykaitą ir diferenciacija [18], [19]. Aktyvuotas mTORC1 nuosekliai tiesiogiai aktyvuoja pasroviui tikslus, įskaitant p70S6 kinazės (S6K) ir eukariotinių inicijavimo faktoriaus 4E-surišantis baltymas 1 (4E-BP1) ir mTORC2 buvo įrodyta, kad vaidina svarbų vaidmenį Akt fosforilinimo metu Ser473, todėl visiškai aktyvinimo AKT [20], [21]. Nors Akt tiesiogiai aktyvuoja mTOR /Raptor, ji taip pat gali tiesiogiai ar netiesiogiai aktyvuoti p70S6 kinazės /4EBP1 keliu šį kelią iki fosforilinimo į auglio slopinamojo TSC2 [22]. Akt /mTOR kelias buvo įrodyta, kad būti dažnai aktyvuojamas įvairių piktybinių navikų, įskaitant krūties vėžį, urotelinis karcinoma, kiaušidžių vėžio, kasos neuroendokrininės neoplazijos, žmogaus meduloblastomos, melanomos, endometriumo vėžio ir kepenų ląstelių karcinoma; Todėl, taikant šį planą reiškia galimą terapinį tikslą daugelyje vėžio [23] - [30]. Mūsų tyrime, RT-PGR ir imunoblotingu parodė, kad mRNR ir baltymo ekspresiją lygiai p-Akt, p-mTOR, p-4E-BP1 ir p-p70S6 skrandžio vėžio grupės buvo žymiai didesnis nei para-karcinoma audiniai ir suporuoti normalus skrandžio audinio grupės (2 pav 3 pav.) Norėdami nustatyti, ar ekspresijos lygis p-Akt, p-mTOR, p-4E-BP1 ir p-p70S6 buvo susiję su kritinių klinikos ypatybes, mes atliekame papildomus tyrimus. Šiame tyrime 81.25% iš 80 pacientų, sergančių skrandžio vėžiu turėjo aukštą p mTOR išraišką, 77,50% turėjo aukštą P-4E-BP išraišką, 76,25% turėjo didelės p-p70S6 išraišką, ir tik 75,00% turėjo aukštą p-Akt išraiška (5 lentelė). Stebėtinai, imunohistocheminis analizė parodė, kad ekspresijos lygis šių baltymų raiškos buvo reikšmingai susijęs su invazijos, limfmazgių ir tolimą metastazių, ir histologinio laipsnio gylio bet nebuvo susijęs su lyties ar amžiaus (1 lentelė, 2 ir 3 lentelėse) , Šie rezultatai rodo, kad Akt /mTOR kelias aktyvuojamas skrandžio vėžio ir gali vaidinti svarbų vaidmenį skrandžio vėžio Tumorigenesis, invazija ir metastazių.

Neseniai Scott ir kt. parodė, kad GOLPH3 gali skatinti ląstelių transformaciją ir naviko augimą constitutively aktyvuojant mTOR signalizacijos kelią į melanomos ląstelių ir kad GOLPH3 stimuliuoja mTOR signalizacijos kelią per mTORC1 ir mTORC2 kompleksų, taip skatinant naviko ląstelių augimą ir proliferaciją [8]. Tačiau neaišku, ar šis reiškinys taip pat pasitaiko skrandžio vėžio audiniuose. Mūsų žiniomis, mūsų tyrimas yra pirmasis ištirti GOLPH3 skatinamas Tumorigenesis, invazija ir metastazių skrandžio vėžio patogenezės. Mūsų duomenys rodo reikšmingą teigiamą ryšį tarp GOLPH3 saviraiškos ir p-mTOR, p-4E-BP1, ir p-p70S6 ( R
= 0,410, 0,203 ir 0,128, atitinkamai P
< 0,05). Tačiau tarp GOLPH3 ir p-Akt išraiškos koreliacija nebuvo reikšmingas ( R
= 0,258 P
> 0,05) (6 lentelė). Visų pirma, žymiai didesnis GOLPH3 išraiška buvo lydi didelis išraiškos p-mTOR, p-4E-BP1, ir p-p70S6 skrandžio vėžio audiniuose, ir šis santykis buvo reikšmingai susijęs su invazijos gylis, histologinio laipsnio, o limfmazgio ir toli metastazės. Mūsų rezultatai parodė, įvairius santykius tarp GOLPH3 ir AKT /mTOR signalizacijos baltymų, ir teigiamą ryšį tarp GOLPH3 ir p-Akt buvo beveik reikšmingas. Konkrečios priežastys šio santykio GOLPH3 ir p-Akt yra neaiškūs ir turėtų būti toliau tiriamas. Mes spėlioti, kad imties dydis gali būti per mažas. Be to, GOLPH3 gali pirmiausia aktyvuoti Akt /mTOR signalizacijos kelią per aktyvintosios mTORC1 sudėtingos, o ne mTORC2 komplekso, todėl p70S6 ir 4e-BP1 fosforilinimo, taip darydami poveikį skrandžio vėžio. Šie rezultatai rodo, kad GOLPH3 gali dalyvauti skrandžio vėžio Tumorigenesis, invazija ir metastazių per neįprastą aktyvavimo Akt /mTOR signalizacijos kelią.

Taigi, šis tyrimas aptiko aukštos raiškos lygius GOLPH3, p-Akt, p-mTOR p-4E-BP1 ir p-p70S6 į skrandžio vėžio grupės stipriai kuris koreliuoja su histologinio laipsnio, gylis invazijos, tolimos metastazės ir limfmazgius, kurį klinikos kintamųjų analizės ir imunohistocheminiu. Be to, GOPLH3 išraiška yra labai koreliuoja su AKT /mTOR signalinio kelio aktyvacijos žmogaus skrandžio vėžio mėginių. Remiantis šiais rezultatais, mes spėlioti, kad GOLPH3 gali būti paveikta progresavimą ir metastazes skrandžio vėžiu per Akt /mTOR signalinio kelio aktyvacijos. Be to, mes siūlome, kad genų į GOLPH3 ir mTOR signalinio kelio raiškos slopinimo gali tapti nauju tikslą skrandžio vėžio gydymo. Galiausiai, invazijos ir migracijos mechanizmai GOLPH3 skrandžio vėžio vis dar reikia atlikti papildomus tyrimus.

• PLoS ONE: prognostinis reikšmė neutrofilų limfocitų santykis pacientams, sergantiems skrandžio vėžiu: meta-Analysis
• PLoS ONE: išraiška XPG baltymų plėtros, raidą ir prognozes Skrandžio Cancer