PLoS ONE: Идентификация и характеристика CDH1 зародышевой Варианты в спорадических больных раком желудка и у лиц, подверженных риску рака желудка

Абстрактный

Цель

На экран и охарактеризовать варианты зародышевых для Е-кадгерина (CDH1)
в ненаследственных рака желудка (GC) больных и у пациентов в риск GC.

Методы
<р> 59 ШС, 59 родственников первой степени (FDRs) ГХ, 20 аутоиммунные метапластический атрофический гастрит (AMAGs) и 52 доноров крови (BDS) анализировали на CDH1
путем прямого секвенирования, структурного моделирования и биоинформатики. Функциональное влияние на сплайсинг оценивали для интронных мутаций. были выполнены Е-кадгерин /β-катенин иммуногистохимического окрашивания и Е-кадгерина мРНК Количественное с помощью RT-PCR

Результаты
<р> В ШС, 4 варианта миссенс (p.G274S;. p.A298T; p.T470I; p.A592T), 1 мутации в 5'-UTR (-71C > G), и 1 мутация в интронной IVS12 (c.1937-13T &Гт область с) были обнаружены. Первый патогенные эффект мутации p.A298T был предсказан белка 3D моделирования. Мутация новые p.G274S не показали никакого ясного функционального значения. К тому же, во-первых, интронного IVS12 (c.1937-13T &° С) мутация была продемонстрирована привести к аберрантных CDH1
транскрипт с экзон 11 удаления. Эта мутация была обнаружена в 2-х ШС и в 1 BD. В FDRs, мы определили 4 варианта: полиморфный (p.A592T) и 3 мутации в нетранслируемые области с неустановленным функциональной роли для 5'UTR (-54G &° С), за исключением, что было обнаружено снижение CDH1
транскрипции. В AMAGs, мы обнаружили 2 изменения: 1 миссенс (p.A592T) и 1 новый вариант (IVS1 (c.48 + 7С &GТ; T)) не оказывает влияния на CDH1
сплайсинга. Несколько молчаливых и полиморфные замены были обнаружены во всех исследуемых группах.

Выводы

В целом наше исследование улучшает текущей характеристики CDH1
мутации и их функциональная роль в GC и у лиц, подверженных риску GC. Мутации найдены в нетранслируемые области и данные о сплайсинга эффектов заслуживают особого внимания, как связанный с уменьшенным количеством Е-кадгерина. Полезность CDH1
скрининга, в дополнение к идентификации других факторов риска, может быть полезным для раннего выявления GC у субъектов, подверженных риску (т.е. FDRs и AMAGs), и требует дальнейшего изучения.
<р> Цитирование: Garziera M, Canzonieri V, Cannizzaro R, Geremia S, Caggiari L, De Zorzi М., и др. (2013) Идентификация и характеристика CDH1
зародышевой Варианты в спорадических больных раком желудка и у лиц, подверженных риску рака желудка. PLoS ONE 8 (10): e77035. DOI: 10.1371 /journal.pone.0077035
<р> Редактор: Аманда Юарт Толанд, Государственный университет штата Огайо медицинский центр, Соединенные Штаты Америки
<р> Поступило: 29 апреля, 2013 года; Принято: 5 сентября 2013 года; Опубликовано: 29 октября 2013
<р> Copyright: © 2013 Garziera и др. Это статья с открытым доступом распространяется в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution, которая позволяет неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе, при условии, что оригинальный автор и источник кредитуются
<р> Финансирование:. Associazione Italiana за ла Ricerca суль Рак (AIRC De Re N. 10266 и AIRC Cannizzaro Специальная программа молекулярной клинической онкологии 5x1000 Н. 12214) и Direzione Centrale Del Lavoro, Formazione, Università е Ricerca Della Regione Autonoma Фриули Венеция Джулия, Codice PROGETTO 200502027001. Доноры не играет никакой роли в дизайн исследования, сбора и анализа данных, решение о публикации или подготовки рукописи
<р> Конкурирующие интересы:. доктор Valli De Re заявляет, что он является соавтором и членом редакционного совета PLoS ОДИН. Это не меняет приверженность авторов на всех политик PLoS ONE на данных и материалов общего доступа.

Введение
<р> Рак желудка (GC) остается четвертым самым распространенным злокачественным во всем мире, несмотря на то, его падения и связанные с ними показатели смертности снизились в последние десятилетия. GC прогноз тесно связан со стадией заболевания на момент постановки диагноза [1]. Раннее начало рака желудка (EOGC) определяется как GC представления в возрасте 45 лет или моложе [2] и имеет плохую общую выживаемость [3], [4]. Большинство ШС являются спорадическими и часто развиваются следующие хеликобактерной
(HP) -associated гастрит [5], [6]. Тем не менее, семейные исследования агрегации также подчеркивают важность генетической предрасположенности в развитии спорадических GC. Частота семейной группировки желудка составляет около 10%
<р> Наиболее распространенный GC гистопатологическую классификацию (классификация Лорен) [7] различает два типа GC:. Типа кишечного и диффузного типа. Диффузный ГХ показывает большую наследственную основу и в целом худший прогноз по сравнению с кишечным подтипа [8].

CDH1
ген, кодирующий Е-кадгерин был идентифицирован, чтобы иметь причинную роль примерно 30% -50% от наследственной диффузной GC (HDGC), аутосомно-доминантное GC и очаговая восприимчивость рак молочной железы синдром, составляющие 1-3% семейной группировки ГКС [9], [10] и в диффузной GC подтипа [11] , CDH1
зародышевые мутации (такая мутация передается на каждой клетке в теле потомства) конкретно связаны с HDGC (около 30% -40% случаев); большой CDH1
делеции были обнаружены в 6,5% случаев [12]. Семейную кишечный рак желудка (ФФИ) с положительной историей семьи также были описаны, но до сих пор ни зародышевой CDH1
дефекты не были связаны с FIGC или кишечных ШС. Это отсутствие доказательств CDH1
мутации в кишечном подтипа привело к гипотезе, что семейная кластеризация в этих случаях определяется общими факторами окружающей среды, в отличие от унаследованной генетической предрасположенности. Однако последние данные свидетельствуют о том, что CDH1
соматические изменения (такие изменения накапливаются в раковых клетках тела над продолжительностью жизни человека) являются частыми в кишечном как в диффузной GC [13], что указывает на важную роль CDH1
в обоих histotypes. Тем не менее, точная распространенность CDH1
зародышевые изменения в кишечной ШС до сих пор неизвестна. CDH1
промотор гиперметилирование является наиболее распространенной второй генетический удар в GC канцерогенного процесса [14], [15]. CDH1
мутации также связаны с повышенной чувствительностью к инвазивным и метастатическим [16], [17] толстой кишки, мочевого пузыря, предстательной железы, молочной железы и гинекологических видов рака [18] - [20]. E-кадгерина представляет собой трансмембранный гликопротеин, который играет роль в поддержании архитектуры эпителиальной ткани, вовлекая Ca ^{2+ зависимых межклеточных взаимодействий [21], [22]. Е-кадгерин содержит цитоплазматический домен, короткий трансмембранный домен и пять внеклеточных повторных кадгерина подобные домены (EC1-5), которые охватывают экзоны 4-13 и содержат высоко консервативные кальций-связывающие регионы [23], [24] и сохраняющиеся цистеина вероятные с образованием дисульфидных мостиков [25]
<р> в этом исследовании мы проанализировали CDH1
зародышевые мутации в серии последовательных случаев случайного GC и лиц, подверженных риску GC. в основном первой степени GC-родственники (FDRs) и аутоиммунные метапластические атрофический гастрит (AMAG) больных направлены в наш институт для желудочно-кишечных симптомов и эндоскопической оценки. Для того, чтобы изучить роль экспрессии E-кадгерина, структурные, функциональные и иммуногистохимические анализы проводились в образцах с CDH1
зародышевой мутации. Цель настоящего исследования состояла в том, чтобы оценить распространенность и характеристики CDH1
зародышевые мутации в серии последовательных спорадических пациентов GC не имеющих критерии классификации HDGC, а в выбранной группы риска развития GC, чтобы проверить ее полезность в качестве маркера, чтобы улучшить обнаружение ранней опухоли. Данные, полученные могут быть использованы для разработки инструмента, который быстро и дешево определяет CDH1
мутации в основном присутствует в нашей популяции.}

Результаты

характеристика пациентов и CDH1 <бр> зародышевой генетический скрининг
<р> Клинические и гистологические особенности ГХ, ОУП и AMAG субъектов обобщены в таблицах 1 и 2. Среди 59 пациентов GC, 2 (3,4%) имеют семейную историю GC (S15 является брат S16) не отвечают критериям для наследственной диффузной GC, как это определено Международным Желудочный Cancer Linkage Consortium (IGCLC) в момент взятия пробы. В нашей серии GC, 5 спорадические рано GC пациентов (≤45 лет) не присутствовали, но не CDH1
изменения были обнаружены у этих пациентов. Средний возраст FDRs составлял 49 лет (диапазон, 28-78 лет) и для AMAGs 56 лет (диапазон, 31-72 лет). Среди 59 пациентов GC, 16 субъектов имели первую степень относительно включенных в исследование (16/59 FDRs). FDRs и AMAGs пришли в нашу клинику для гастроэнтерологии визита и гастроскопии экзамена, они проявляются различные симптомы, но ни рак, ни кишечная метаплазия /дисплазия присутствует в этих предметах.

CDH1
генетические результаты скрининга приведены в таблице 3 с новые
мутаций: 1 интронный (ID 5), 1 миссенс (ID 10), и 2-х бесшумном режиме (ID 13 и ID18). В целом мы нашли 4 варианта, которые кодируют аминокислоты (AA) замещения (1 роман (ID10) и 3 сообщалось ранее в других популяциях (ID 11, ID 12, ID 15), 1 в области гена 5'near и 2 мутации в нетранслируемой (УТР) регуляторный элемент (ID 1, ID 3, уже сообщали) и 6 замен в интронных регионах (три мутации: ID 5, ID 9, ID 17, три интронные полиморфные варианты: ID 4, ID 6, ID 8, вероятно, не оказывают влияния на GC канцерогенеза). нет вставки или делеции не были обнаружены в границах экзонов.
<р> Другие изменения привели распространенных полиморфизмов (частота не менее 1% в популяции) или молчащие мутации, которые кодируют Без наблюдалось среди четырех групп пациентов, прошедших тестирование на ID 4, 6 или ID ID 19 вариантов той же аминокислоты, чем исходная цепь. статистическая связь.

RefSNP (RS) номера для идентификации генетических вариантов ранее опубликованных в а также их частота выявления (NIEHS окружающей среды Генный, Сиэтл, штат Вашингтон (URL: http://evs.gs.washington.edu/niehsExome/по состоянию на август 2013 г.); ftp://ftp.1000genomes.ebi.ac.uk/vol1/ftp/phase1/analysis_results/paper/Достигано декабря 2012), приведены в таблице 3.
<р> Все CDH1
варианты были в гетерозиготном состоянии для ID 4 и ID 19, в котором также был обнаружен гомозиготном состоянии, за исключением.
<р> Частота мутаций и вариантов были рассчитаны по предметам без GC или болезни AMAG (52BDs + 59FDRs, п = 111). Шестнадцать FDRs были первые родственники степени нашего GC серии; когда один из вариантов присутствовал в GC и связанной с ним случае FDR, мы исключили индивидуальные FDR из расчета частоты. ID4, например, присутствовал в 5 FDRs, связанных с нашим GC нашей серии; Поэтому частота контроля населения изменяется от общего числа 111 до 106 особей (7FDRs + 8BDs /106; 14,5%). На рисунке 1 показана секвенирования хроматограммы новых мутаций мы не нашли. Ранее мы уже сообщали о ID 10 хроматограмму в другой работе [26].

Биоинформатический прогностическая роль и структурного моделирования результаты вариантов миссенс найдено

миссенс мутировали остатки, которые мы нашли все локализованы в E -cadherin внеклеточный домен. Положение кодона в незрелых и зрелых (после N-концевых расщепления) белков и данных из PolyPhen-2 и SIFT в силикомарганца
анализа представлены в таблице 4. Все четыре варианта миссенс являются потенциально опасными по PolyPhen -2, но только p.A298T (ID 11) и p.A592T (ID 15) замены могут влиять на функции белка путем анализа SIFT (таблица 4). В p.G274S (ID 10), что мы недавно описанные [26], однако, не возмущает местной окружающей среды, но представляет потенциальную остаток для фосфорилирования и гликозилирования, которые могут иметь возможные последствия для стабильности и целостности Е-кадгерина как мы выдвинул гипотезу [26]. Патогенетической эффект ID 11 замещение ранее установлено [27], но здесь впервые продемонстрирована структурного анализа. Как показано на фигуре 2А, ​​изменение АА в экзоне 7 p.A298T (ID 11) расположен рядом с интерактивной области между протомерами EC1 и EC2. Таким образом, замещение полярного остатка аланин-треонин может приводить образование водородных связей через oxydrilic группы, и это может помешать локальной структуры белка в регионе, который имеет фундаментальное значение для Са ^{2+ взаимодействий. Треонин в положении 144 стерически продемонстрирована навязчивым, поскольку она взаимодействует с двумя остатками аспарагиновой кислоты (Asp136 и Asp 138), которые непосредственно участвуют в Ca 2+ связывания. Кроме того, длины связей в частности, подчеркнуто, составляет менее 3 А (Фигура 2В).
<Р> Что касается остальных двух миссенс мутаций, они имеют менее четкий функциональный эффект, как также показано в Таблице 4. р. T470I (ID 12) Примесь [28] изменяет поверхность АА extradomain EC3 в зрелом белке (фиг.2с). В обоих мышиного Е-кадгерина и последовательности N-кадгерина (PDB код: 3Q2W) треонин обычно находится О
-glycosylated указывает на важную роль этого остатка в структуре белка. Тем не менее, как показано на рисунке 2D, изменение в изолейцин, неполярной АА с гидрофобной боковой цепью, которая не может подвергаться посттрансляционной модификации, не предполагает никакого особого межмолекулярного напряженности. Мы предполагаем, что во внеклеточной среде, присутствие остатком изолейцина в том же самом положении, чем треонин может способствовать белок-белковых взаимодействий, и, таким образом, эта мутация может взять на себя защитное значение. Последние мутации сообщили, p.A592T (ID 15), был найден во всех группах испытуемых (таблица 3), предполагая невероятное влияние на GC патогенеза. В этом случае, аланин на extradomain EC4 зрелого E-кадгерина (рис 2E) обеспечивает конформационную свободу, даже тогда, когда в непосредственной близости от Са сайтами связывания 2+. Замещение треонин здесь имеет ограниченное влияние на локальную структуру и торсионных углов белка. Тем не менее, мы не можем исключить, что oxydrilic боковая цепь может быть посттрансляционная изменен в конкретной ситуации и, таким образом, влияют на структуру и функцию CDH1
(рис 2F).}

Стенограмма анализ интронные зародышевые мутации
<р> Чтобы исследовать если интронные мутации, обнаруженные в нашей GC серии (таблица 3) потенциально могут вызывать эффект на сплайсинг, мы провели CDH1
анализ транскрипции. Полиморфные и бесшумные варианты были исключены из этого анализа, так как они, вероятно, не имеют патогенную роль. кДНК получают из периферической крови выбранных GC лиц, несущих интронных ID 5, ID 9 или ID 17 мутаций (таблица 3), сравнивали с, что из двух здоровых доноров крови, одной только имеющим тот же ID 17 мутации в качестве пациентов GC (BD код S190 ), а другой (BD-код S189) без CDH1
мутация.
<р> для ID 5 и 7 ID интронных мутаций, мы усиливали область, покрывающую часть экзона 1 к части экзона 5, для ID 17 мутации, экзон 10 до 13 (рисунок 3). RT-PCR экзон 1 до 5 фрагментов не показали каких-либо различий при запуске на 4% агарозном геле (рис 3А), ни после того, как двунаправленного секвенирования (данные не показали); Конверс ID 17 интронного вариант может повлиять на сплайсинг что приводит к ненормальной меньшим CDH1
транскрипта (рис 3B). После выделения и секвенирования, мы обнаружили, что меньшая группа привела к пропущенному стенограмма экзон 11 не хватает, с экзон 10 непосредственно присоединен к экзоном 12. Это аберрантное транскрипт был также обнаружен в BD S190, несущий ту же зародышевую замену (рис 3B).

Анализ CDH1
белка обилие и экспрессия мРНК уровня по предметам, показывая CDH1
интронные мутации
<р> Сравнение уровня экспрессии мРНК E-кадгерина была выполнена из EBV увековечены лимфоциты, полученные из периферической крови S10 и S190 (мутация ID 17), S97 (ID 9) и S189 (нет CDH1
мутации) субъектов. Тема S10 была затронута раком желудка, при условии S97 является первой степени родства пациента с раком желудка (FDR), в то время как S189 и S190 оба были донорами крови. Мы наблюдали между донором крови управления (S189), не имея CDH1
мутации и пациентов, относительное сильное снижение экспрессии E-кадгерина (около 60%, рис 4) в S10 пациента, имеющего как ID 17 мутацию, ГХ, в то время как уменьшение в донорской крови S190 лишь около 2%, имеющих один и тот же ID 17 мутацию (<ЕМ> р
≪ 0,05, по отношению к GC S10). Для S97 (мутации ID 9, с учетом FDR), мы наблюдали аналогичное выражение E-кадгерина, что и в контроле S189.
<Р> Иммуногистохимическое анализ на опухоли желудка ткани интронной ID 17 случае (код пациента S10, рис 5E) показали пониженную экспрессию мембраносвязанного Е-кадгерина в опухолевых клетках перстнем (черные стрелки), в то время как мембрана и цитоплазматическая окрашивание присутствовали в нормальном эпителии. В тот же пациент, показали снижение β-катенина окрашивание в перстневидно клетках по сравнению с сильным выражением этого белка в нормальных смежных клеток (рис 5H). Потеря обоих E-кадгерина и β-катенина окрашивание было также заметно для второго пациентов (S46), имеющий такую ​​же интронных ID 17 мутации и пострадавших от GC тоже (рис 5F и 5I, соответственно, для Е-кадгерина и бета-катенина) .

Обсуждение
<р> пациенты GC обычно имеют плохой прогноз [29]. Выявление пациентов с повышенным риском развития ГХ и раннее обнаружение GC перспективные подходы к снижению заболеваемости и смертности от GC. FDR пациентов GC, как известно, имеют 2-3 раза повышенный риск GC, вероятно, из-за воздействия тех же самых экологических факторов риска и /или наследственной предрасположенности к раку [30]
. <Р> Разрушение париетальных клеток найдено в AMAG в сочетании с важной роли Е-кадгерина в эпителиальной полярности и желудка железистой архитектуры, предполагает, что зародышевые переделки CDH1
может быть дополнительным фактором риска для развития ГХ в AMAG пациента [31].

В 1998 году Гилфорд и коллеги описали в первый раз зародышевые мутации CDH1
гена [28]. В дальнейшем различные типы мутаций были зарегистрированы в семьях различной этничности с диффузным GC [32], [33]. Первая CDH1
зародышевой мутация была описана в итальянской семье в 2006 году, у пациента, который соответствует критериям IGCLC для HDGC [34]. Тем не менее, очень немногие исследования сообщают CDH1
зародышевые мутации в спорадических случаях GC без семейной группировки или у лиц с риском развития ГК [35], [36]. Кроме того, в этих исследованиях функциональные эффекты CDH1
варианты часто не исследованной.
<Р> Сила нашего исследования является коллекция из 59 белых пациентов со спорадическим GC, 59 FDRs и 20 AMAGs кто присутствовали наши услуги гастроэнтерологии в последние годы для желудка симптомов и диагноза или исключения ГХ после эндоскопического и оценки гистологического ткани.
<р> Как показано в таблице 3, различные различные зародышевые CDH1
варианты есть был обнаружен. В серии 59 ГК, за исключением полиморфных и молчащие изменения, которые, вероятно, не имеют патогенную роль, мы нашли 6 различных замен у 9 пациентов (9/59 ШС = 15,2%): 4 типа миссенс (ID 10, ID 11, ID 12, ID 15) в 4-х различных пациентов (6,8%) и 2 типа, не миссенс (ID 2 и ID 17) в 5 различных ШС (3,4%).
<р> ID 10 (p.G274S) является новым миссенс мутации, что мы нашли в старом самца с GC смешанным histotype. Этот вариант не был обнаружен в 187 свободных раковых лиц (108BDs + 59FDRs + 20AMAGs), таким образом, исключая полиморфизм. Патогенный эффект от ID 10 мутации не была поддержана после функциональной (агрегации и вторжения) в пробирке
анализы, как мы недавно сообщали [26], тем не менее данные в силикомарганца
характеристике мутации и снижение экспрессии β-катенина найдены в опухолевой ткани не может полностью исключить значение этой мутации в развитии GC. Таким образом, на сегодняшний день ID 10 остается роман CDH1
мутации с патогенезе неясного значения.
<Р> ID 11 (p.A298T) замена в экзоне 7 из CDH1 <бр> уже была описана в 36-летний молодой кавказских мужчин в семье HDGC [27]. В нашей серии, этот вариант был обнаружен только в 1 самца (S47) из 74-летнего со смешанным histotype. Потенциальный патогенный эффект этой мутации было подтверждено через в пробирке
функциональных исследований в различных лабораториях [27], [37], [38]. Вот первые результаты моделирования (рис 2A-B) путем анализа 3D-белок-лиганд взаимодействий связывания, решительно поддерживают потенциал измененном функции белка и привести к возможному молекулярного механизма, которые поддерживают этот процесс. Потенциал изменена функция белка поддерживается также из анализа SIFT (таблица 4) с хорошим счетом. Кроме того, недавнее исследование, используя в силикомарганца
дизайн белка FoldX алгоритмический подход [39], вновь утверждает патогенную роль ID 11 (p.A298T) замещения, основанный на вычислении изменений нативной государственной стабильности (ΔΔG > 0,08 ккал /моль) [40]. Авторы пациентов характеризуется укрывательство этой миссенс мутации как имеющие более молодой возраст на момент постановки диагноза и диффузный histotype. Наш случай подчеркнул, что ID 11 также может быть обнаружен в старом пациента со смешанным GC.
<Р> ID 12 (p.T470I) был найден в 57-летний мужчина (S39) с диагнозом GC , Это изменение было впервые описано в семье маори национальности с EOGC, но предмет, показывающий эту мутацию не была затронута GC во время исследования [28]. Здесь мы обнаружили, что изменение p.T470I АА переносится SIFT, а также с помощью анализа моделирования. К сожалению, опухоли образца биопсийные ткани была недостаточной для выполнения E-кадгерина IHC окрашивания.
<Р> ID 15 замещение (p.A592T) был обнаружен в каждой клинической группе испытания, что указывает на возможную полиморфный диффузии. Тем не менее, этот вариант уже сообщалось ранее связаны с опухолями щитовидной железы и очаговая рака молочной железы [41] - [43]. Наш структурный анализ и в пробирке
[35] и в силикомарганца
работах [38], [40] не поддерживают патогенную роль для этого варианта в GC.
<Р> в соответствии с рекомендациями последних клинических руководств по управлению [44], наблюдение эндоскопию следует проводить ежегодно в тех лиц, с мутациями неясного значения (например, миссенс). По нашему мнению, субъекты, несущие ID 15, а также ID 10, должны соблюдаться в течение 10 лет, прежде чем исключить роль хотя и слабым для этого изменения в патогенезе GC.
<Р> В ID 2 мы определили С -в-G изменить до стартового кодона (-71C > G, CDH1
5'UTR область), которая представляет собой наиболее распространенный вариант, связанный с GC в нашей серии, происходит в трех из 59 пациентов GC ( 5,1%). Этот вариант был также сообщил в финском исследовании [45] в 1 из 13 (7,7%) пациентов GC и в 2 из 51 контрольной группы (3,9%), а также в двух EOGC пациентов Северной американского происхождения (3,4%) [46] , В целом данные этих исследований свидетельствуют о том, что идентификационный номер 2 является довольно распространенной мутацией, но авторы не сообщают данные о ID 2 варианта по отношению к статусу экспрессии E-кадгерина. ID 2 был найден в нашей серии в одном кишечника, один смешанный, и один диффузных GC histotypes. Все эти пациенты имели более 50 лет на момент постановки диагноза и были отрицательными для НР-инфекции. Ни один из контрольных субъектов (n = 111), протестированных без GC, не показали эту мутацию (таблица 3). <ЕМ> Situ
оценки или корреляции между ID 2 и экспрессии Е-кадгерина в не смогла быть выполнена из-за отсутствия опухолевого материала. Потенциальный патогенный эффект этого промотора варианта на уровне экспрессии Е-кадгерина заслуживает дальнейших исследований

интронных ID 17 вариант (IVS12 c.1937-13T &° С). Был найден в 2-х самок с GC (2/59 ШС = 3,4%) как положительный результат на НР-инфекции, и было обнаружено также в 1 BD (1/52 = 1,9%, таблица 3). То же самое изменение было ранее сообщено в лобулярной рака молочной железы с высокой частотой (12/53 = 23%) [47], в HDGC семей (2/27 = 7,4%) [48] и у больных EOGC (7/79 = 8,9% ) [46], но и в относительном контрольной популяции [46]. Следует отметить, что мы покажем впервые, что эта замена приводит к аберрантной CDH1
транскрипт укрывательство делеция CDH1
экзона 11. экзон 11, вместе с частными производными последовательностей, фланкирующих экзоны , кодифицированы для домена ЕС4 зрелого белка [25]; ID 17 является удаление вне кадра и приводит к образованию преждевременного стоп-кодона в положении 384 промотора ЕС4. Следовательно, переведенный белок из CDH1 Дом ID 17 нить может не хватает трансмембранный домен и цитоплазматический хвост, который участвует в бета-катенина связывания. Оба S10 и S46 пациентов GC, имеющие мутацию ID 17, показали снижение экспрессии Е-кадгерина и β-катенина с помощью IHC анализа (рисунок 5); пациент GC S10, с карциномой перстневидно клеток, был диагностирован в возрасте 61 лет, и пациент GC S46, с диффузным аденокарциномы, был диагностирован в возрасте 58 лет. Кроме того, оценка экспрессии Е-кадгерина из EBV иммортализованные В-лимфоциты показали сильное снижение (60%) в GC S10 укрывательство ID 17 мутацию по сравнению с контролем BD (S189) без CDH1
изменений, но Кроме того, по сравнению с одного донора крови (S190), несущего один и тот же ID 17 вариант. Так как все предметы, несущие мутации ID 17 гетерозиготных для CDH1
гена, наши данные свидетельствуют о том, что индивидуальная S190, но не опухолевые клетки S10 и S46 пациентов, могут использовать некоторые компенсаторный механизм, который противодействует Е-кадгерина понижающая регуляция. В опухолях, Е-кадгерин под экспрессия связана с β усиливается-катенина транскрипционной активности, основной эффектор пути Wnt [49]. Экспрессия большого количества генов, связанных с опухолевой прогрессии, в том числе для циклин D1, C- <ЕМ> Мус
, фактор роста эндотелия сосудов, и сурвивин управляется через Wnt /β-катенина пути [50]. связывание с бета-катенин препятствует его транслокацию в ядро ​​Е-кадгерин; Соответственно, снижение экспрессии Е-кадгерина может способствовать GC патогенез через повышенное накопление ядерного β-катенина. Так как пациенты S10 и S46 с вариантом ID17 являются женщины показывая хеликобактерной (HP) инфекции, мы предполагаем, что ID 17 может быть связан с секс-специфический прогностический фактор (хорошо известно, что частота GC выше для мужчин, чем для женщин) и /или инфекции HP. Делеция экзоне 11 в <ЕМ> CDH1
ген был также описан у пациента HDGC, но в этом последнем случае аберрантных сплайсинг был связан с другим интронной мутации (IVS11 c.1711 + 5G > A) [27] , Любопытно, что альтернативно сращены, нефункциональным Е-кадгерин транскрипт, который испытывает недостаток экзона 11 гена также сообщалось в некоторых раковых клетках головы и шеи [51] и хронических случаев лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ), и, хотя на более низком уровне по сравнению с ХЛЛ, а также в нормальных в-клеток [52]. В этих случаях не наблюдалось никаких генетических изменений в экзоне 11 или в фланкирующих его интронных регионах; нефункциональных транскрипт имеет преждевременный кодон терминации и деградирует с помощью нонсенс-опосредованного РНК деградации [52]. факторы сплайсинга, связывание в области экзона 11 CDH1
, может иметь измененные уровни экспрессии или состояния активации в клетках ХЛЛ по сравнению с нормальными В-клетками, как недавно показано [53].
<р> в группе FDR субъектов, за исключением полиморфных и молчащих CDH1
мутаций, мы наблюдали 3 замен (ID 1, ID3 и ID 9), которые не были обнаружены в GC.
<р> ID 1 (5'near гена-176C &GТ; T) вариант был обнаружен в 32-летней женщины с неизвестным статусом HP инфекции. Этот вариант уже был представлен в популярных базах данных, но его значение неизвестно
<р> ID 3 (5'UTR-54G &° С). Вариант был найден в 72-летний мужчина положительным для НР-инфекции. Интересно, что эта мутация была уже обнаружена у здорового 41-летнего японского субъекта, без клинически обнаруживаемых опухолей в момент регистрации, и описан как редкий вариант, способный уменьшить транскрипционной активности <ЕМ> CDH1
[54]. Мы предполагаем, что эта мутация путем введения острова CpG в CDH1
область промотора увеличивает вероятность CDH1
гиперметилирование, хорошо известным событием в пользу транскрипционный инактивация, раннее событие в HP гастрит [ ,,,0],55] и ключевой фактор риска, связанный с развитием GC
<р> ID 9 (интронного IVS4 c.532-18C > T). был найден в 41-летний мужчина субъекта негативной для НР-инфекции. ID9 впервые было сообщено в двух EOGC пациентов из Англии и Португалии, соответственно [56], в двух HDGC немецких пациентов и у 1 субъекта управления поступил в том же исследовании [35]. В последнее время был предложен не патогенную роль для этого варианта [2]. Мы не заметили никакого влияния на CDH1
сплайсинга.
<Р> пациенты AMAG имеют 3-кратное увеличение относительного риска развития GC и никогда не были исследованы CDH1
зародышевые мутации до сих пор. В серии AMAG мы нашли только полиморфные варианты, за исключением ID 5, новая мутация интронного близка к экзоне 1 (IVS1 c.48 + 7С &GТ; T). ID 5 был обнаружен у женщины 51-летний с гипергастринемии. Мы не нашли ни одного укорочения или в рамки считывания производства белка, связанного с этой мутации. Несмотря на то, наша серия ограничена (п = 20), то эти данные, похоже, не поддерживают соответствующую роль CDH1
генетических изменений, связанных с болезнью AMAG.
<Р> В заключение, наши результаты показывают, что хорошо известный патогенный ID 11 мутация (p.A298T) также могут быть обнаружены в спорадических пациентов GC без соблюдения строгих критериев для HDGC. Кроме того, мы продемонстрировали пагубное влияние ID 17 варианта (IVS12 c.1937-13T &° С) на CDH1
сплайсинга и связанный с ним снижение экспрессии E-кадгерина, а также для бета-катенина. То же ID 17 мутация и сплайсинг эффект найден в 1 донора крови, но с ограниченным влиянием на уровне Е-кадгерина мРНК, интригует и заслуживает дальнейшего изучения. Учитывая корреляцию между конкретными CDH1
зародышевых изменений и histotype опухоли, мы обнаружили, что 8,3% (1 из 12 ГКС) смешанного (ID11) и 7,7% (2 из 26 ШС) диффузного (ID17) подтипы , несли потенциальную патогенную мутацию
<р> Наконец, в личности FDR риска для GC, мы нашли вариант ID 3 (5'UTR-54G &° с). с потенциальным эффектом повышения статуса гиперметилирование CDH1
, хорошо известным событием риск, связанный с развитием GC и прогрессии.
<р> Северо-Восток Италии представляет высокий GC заболеваемости и смертности хотя и ниже, уважение к центральным регионам, как Тоскана и Марке [57] , Наши результаты показывают преобладание в Миссенс CDH1
замены по сравнению с не-миссенс изменений, как сообщалось в недавнем metanalysis для средних зонах высокого риска GC как Центральной Италии [58].

• PLoS ONE: количественное измерение органических кислот в тканях больных раком желудка указывает на повышенный м…
• PLoS ONE: Защитная роль пилори инфекции Helicobacter в прогнозе рака желудка: данные из 2454 больных с желудочной Cancer