De abstracte
Achtergrond
Op dit moment is het goed vastgesteld dat kanker ontstaat in chronisch ontstoken weefsel. Een aantal van de NOD-like receptoren (NLR) vorm inflammasomen, intracellulaire multiprotein complexen van cruciaal belang voor het genereren van volwassen pro-inflammatoire cytokines (IL-1β en IL-18). Chronische ontsteking van het maagslijmvlies volgt op Helicobacter pylori infectie Materialen en methoden Fifty-one genetische polymorfismen werd het genotype in 310 etnische Chinezen (87 non-cardia GC gevallen en 223 controles functionele dyspepsie). Bovendien genexpressie van 84 moleculen betrokken bij het NLR signaleringsroute werd bepaald in THP-1-cellen geprikkeld met twee H. pylori s Resultaten card8 Conclusies Novel associaties tussen polymorfismen in het NLR signaleringsroute ( card8 Visum:. Castaño-Rodríguez N, Kaakoush NO, Goh KL, Fock KM, Mitchell HM (2014) De NOD-like receptor Signalling Pathway in Helicobacter pylori Uitgever: David M. Ojcius, University of California Merced, Verenigde Staten van Amerika Ontvangen: 2 maart 2014; Aanvaard: 8 mei 2014; Gepubliceerd: 5 juni 2014 Copyright: © 2014 Castaño-Rodríguez et al. Dit is een open-access artikel gedistribueerd onder de voorwaarden van de Creative Commons Attribution License, die onbeperkt gebruik, distributie en reproductie maakt in elk medium, op voorwaarde dat de oorspronkelijke auteur en de bron worden gecrediteerd Financiering:. Dit werk werd mede ondersteund door de Cancer Council van New South Wales, Australië (Grant no.66 /04). NEE. Kaakoush wordt ondersteund door een Early Career beurs van de National Health en Medical Research Council, Australië. De financiers hadden geen rol in de studie design, het verzamelen van gegevens en analyse, besluit te publiceren, of de voorbereiding van het manuscript Competing belangen:.. De auteurs hebben verklaard dat er geen tegenstrijdige belangen bestaan Introductie De totale incidentie van maagkanker (GC) varieert sterk tussen landen. Volgens de wereldwijde statistieken van kanker, een totaal van 952.000 nieuwe GC gevallen en 723.000-GC-gerelateerde sterfgevallen zijn naar schatting hebben plaatsgevonden in 2012, goed voor 6,8% van de totale gevallen van kanker en 8,8% van de totale kanker-gerelateerde sterfgevallen [1]. Meer dan 70% van de nieuwe gevallen en sterfgevallen in ontwikkelingslanden, met de hoogste incidentie wordt gemeld in Oost-Azië, Oost-Europa en Centraal- en Zuid-Amerika [2]. De bacteriële ziekteverwekker Helicobacter pylori Germ-line gecodeerde receptoren bekend als receptoren patroonherkenning (PRRS) maken deel uit van het aangeboren immuunsysteem en zijn cruciaal voor het opsporen van invariante microbiële motieven bekend als pathogeen geassocieerde moleculaire patronen (PAMPs). PRRS zijn verdeeld in vijf verschillende genetische en functionele clades: nucleotide-bindend oligomerisatie domein (NOD) -achtige receptoren (NLR), Toll-like receptoren, C-type lectine receptoren, retinoïnezuur-induceerbaar gen (RIG) -I-like receptoren en afwezig in melanoom 2 (AIM2) -achtige receptoren [5] [6]. de familie NLR niet alleen erkennen PAMPs maar ook schade-geassocieerde moleculaire patronen (gedempt) in het cytoplasma, die endogene liganden die na weefselschade of celdood [7]. Het NLR karakteristieke structuur een centrale nucleotide binding en oligomerisatie (NACHT) domein dat in alle NLR familieleden is, een C-terminale leucine-rijke repeats (LRRs) en een N-eindstandig caspase recruitment (CARD) of pyrin (PYD ) domein. Gebaseerd op fylogenetische analyse van NACHT domeinen werd bepaald dat de familie NLR omvat drie subfamilies: 1) de NOD familie die NOD1-2 omvat NOD 3 /NLRC3, NOD4 /NLRC5, NOD5 /NLRX1 en CIITA, 2) de NLRPs inclusief NLRP1-14 (ook bekend als NALPs), en 3) de IPAF subfamilie die bestaat uit IPAF (NLRC4) en NAIP [7]. De NLRP3 inflammasoom, de meest volledig gekarakteriseerd inflammasoom, bestaat uit de NLRP3 scaffold eiwit, de apoptose geassocieerd splinter-achtige eiwit (ASC) en caspase-1. NLRP3 samenwerkt en werft de adapter ASC via PYD-PYD interactie [8]. Deze interactie leidt tot de rekrutering van caspase-1, een intracellulair cysteïneprotease specifieke aspartaat, die vervolgens leidt tot de rijping en afgifte van pro-inflammatoire cytokinen zoals IL-1β en IL-18. In H. Daarom eerdere studies tonen duidelijk aan dat, in reactie op de H. pylori Materialen en methoden Genotypering van polymorfismen Betrokken bij de NOD-like receptor Signalling Pathway Ethics statement. Deze studie was goedgekeurd door de ethische commissie van de mens (HREC) van de Universiteit van New South Wales (UNSW) (HREC 08.115 en HREC 02.144). Schriftelijke toestemming is verkregen van elk individu aangeworven om de studie. Onderwerpen waren etnische Chinezen individuen die het bovenste maagdarmkanaal endoscopie ondergingen bij de Changi General Hospital (Singapore) en het Universitair Ziekenhuis van Maleisië (Kuala Lumpur), tussen januari 2004 en april 2007. Patiënten bekend te worden besmet met het humaan immunodeficiëntie virus of die had voorgeschreven niet-steroïdale anti-inflammatoire geneesmiddelen, antimicrobiële middelen of zuur suppressants in de periode van twee maanden voorafgaand aan de werving werden uitgesloten. Zevenentachtig nieuw gediagnosticeerde patiënten met een primaire non-cardia GC (International Classification of Diseases, 9 e herziening, code 151) op basis van histologische bevestiging werden uitgenodigd om deel te nemen aan de studie. De controlegroep bestond uit 223 individuen gediagnosticeerd met functionele dyspepsie (FD), die werd gedefinieerd als aanhoudende of terugkerende symptomen (pijn of ongemak gecentreerd in de bovenbuik) bij afwezigheid van organische ziekte (met inbegrip van endoscopie), overeenkomstig Rome II classificatiesysteem [14]. Helicobacter pylori H. pylori Polymorfismen selectie. Digitale bestanden (PubMed Scopus, Science Direct, Ovidius, Biosis Previews, Scirus databases, CINAHL, IMBIOMED, Scielo en SERINGEN) werden doorzocht tot en met februari 2013 voor polymorfismen betrokken bij het NLR signaleringsroute die werden in verband gebracht met kanker, besmettelijke ziekte of waren functioneel relevant. Eenenvijftig 6 polymorfismen in genen, die werden gerapporteerd een kleinere allel frequentie >hebben;. 1% in het National Center for Biotechnology Information (NCBI) dbSNP, werden geselecteerd voor analyse (Tabel S1 in Tabel S1) genotyperingstechnieken. Voor de genotypering van de 51 geselecteerde polymorfismen in het NLR signaleringsroute van elk individu in de studie, genomisch DNA werd geëxtraheerd uit perifeer volbloed monsters met behulp van de QIAamp Blood DNA Mini Kit zoals beschreven door de fabrikant (Qiagen, Chadstone, Australië). DNA werd gerehydrateerd in steriel water en genormaliseerd tot 10 ng /ul voor aangepaste SNP genotypering door toepassing van MALDI time-of-flight (MALDI-TOF) massaspectrometrie, de Sequenom MassARRAY IPLEX? Assay (San Diego, Californië , USA) [16], [17] op de Australian Genome Research Facility Ltd, St Lucia, de Universiteit van Queensland, Australië. Een polymorfisme die niet konden worden opgenomen in de Sequenom MassARRAY IPLEX test, bekend als NLRP3- Vier polymorfismen ( card8 Statistische analyse. de ongepaarde Student's genexpressie van moleculen die betrokken zijn bij de NOD-like receptor Signalling Pathway zoogdieren celcultuur de menselijke monocytische leukemie cellijn THP-1 (code: TIB-202). (American Type Culture Collection, Manassas, USA), werd gekweekt in RPMI 1640 medium aangevuld met 10% door warmte geïnactiveerd foetaal runderserum (FBS) (Invitrogen, Mulgrave, Australia), 1 mM natriumpyruvaat (Invitrogen), 2500 mg /L natriumbicarbonaat (Invitrogen ) en 100 ug /ml penicilline-streptomycine-oplossing (Invitrogen). De cellen werden gehandhaafd in 25-cm 2 weefselkweekflessen (Greiner Bio-On, Frickenhausen, Duitsland).. Bij 37 ° C met 5% CO 2 bacteriekweek H pylori Infection assay. THP-1 cellen werden uitgezet in een 6-putjes plaat bij een concentratie van 5 x 10 5 cellen /ml en vervolgens in macrofagen met forbol myrastate acetaat (Sigma-Aldrich) gedurende 72 uur [24] gedifferentieerd. vóór bacteriële infectie werden zoogdiercellen geïncubeerd in een antibiotisch-vrij medium. de H. pylori stammen After infectie, non-uitgedaagd en H. pylori Voor genexpressie data-analyse, de ΔΔ Ct-gebaseerde methode van relatieve kwantificatie werd uitgevoerd met behulp van het web-RT 2 Profiler PCR Array data Analysis versie 3.5 (http://pcrdataanalysis.sabiosciences.com/pcr/arrayanalysis.php). Ten minste twee-voudig veranderingen (≥2, ≤0.5) en P SDS-PAGE en Western Blotting THP -1 cellen werden gezaaid, gedifferentieerd en geïnfecteerd bij een MOI van 1, zoals eerder beschreven. Eiwitten werden geëxtraheerd met behulp RIPA buffer, gescheiden op 12% natriumdodecylsulfaat polyacrylamide gelelektroforese gels en overgebracht naar methanol behandeld polyvinylidine difluoride membranen die Trans-blot celoverdracht systeem (Bio-Rad). Membranen werden immunologisch met konijn anti-humaan polyklonale antilichamen tegen NLRX1 (1:200) of muis-anti-humane monoklonale antilichamen tegen β-actine (1:1000) (Santa Cruz). Geit anti-konijn en anti-muizen IgG antilichamen gekoppeld aan HRP (1:2000, Bio-Rad) werden toegepast als secundaire antilichamen, respectievelijk. Membranen werden gesondeerd in overeenstemming met de Pierce ECL Western Blotting Substrate protocol (Thermo Scientific, Scoresby, Australië). klinische kenmerken De klinische kenmerken van de proefpersonen waaronder geslacht, H. pylori polymorfismen in genen betrokken bij de NOD-like receptor Signalling pathway worden geassocieerd met maagkanker in etnische Chinezen Personen Fifty-one polymorfismen in genen die betrokken zijn bij het NLR signaleringsroute waren gegenotypeerd in 310 etnische Chinezen individuen (87 GC gevallen en 223 FD controles). De call rate van alle geselecteerde polymorfismen was 97-100% in deze studie. Alle polymorfismen in het NLR signaleringsroute bleken te zijn in HWE in de controlegroep tonen niet-significante χ 2 waarden behalve card8 allel en genotype frequenties en UPR en 95% betrouwbaarheidsinterval voor de resterende 27 polymorfismen worden getoond in Tabel 1 en Tabel S4 in tabellen S1. De card8 -Haplotype gebaseerde analyses een krachtige aanpak van de architectuur van complexe ziekten ontleden. In de huidige studie, de EM-algoritme geïdentificeerd 25 haplotypen met een frequentie > 0,01 in GC gevallen (Tabel S5 in de tabellen S1). Met behulp van de grote haplotype in de controlegroep als de referentie haplotype, twee card8-NLRP12 Polymorfismen in genen betrokken bij de NOD-like receptor Signalling Pathway worden geassocieerd met Helicobacter pylori Aangezien H. pylori Joint Effect van Helicobacter pylori Verdere analyses werden uitgevoerd om niet alleen de aanwezigheid of afwezigheid van de geselecteerde polymorfismen maar H beoordelen. pylori Helicobacter pylori Om verder te karakteriseren van het effect van de H. pylori Aangezien ontsteking is een kenmerk van maagkanker, we verder de expressie van pro-inflammatoire cytokines en chemokines bij blootstelling geanalyseerd twee H . pylori Helicobacter pylori Dertien genen die coderen voor NLR's werden beoordeeld in dit onderzoek, waaronder leden van de IPAF onderfamilie (NAIP, NLRC4), NLRPs (NLRP1, NLRP3-6, NLRP9, NLRP12) en knikt (NOD2, NLRC5, NLRX1 en CIITA) (Figuur 1B). De expressie van genen die coderen voor vijf NLR significant geregeld in H. pylori-cellen uitgedaagd (NLRC4, NLRC5, NLRP9, NLRP12 en NLRX1) (Tabel 5). Hiervan NLRP12 (fold regelgeving: 0,03, p-waarde: 0,016298) en NLRX1 (vouw regelgeving: 0,02, p-waarde: 0,01762) werden sterk neerwaarts geregeld in H. pylori GC026-uitgedaagd cellen. Als een validatie techniek, nadere Western blot assays onderzoeken NLRX1 expressie, werden uitgevoerd. Consequent, verminderde NLRX1 niveaus werden gevonden in THP-1-cellen uitgedaagd met zowel H. pylori GC026 en 26.695 (Ondersteunende informatie figuur S3). Gezien het feit dat NF-KB negatief wordt gereguleerd door NLRP12 en NLRX1, we verder in vergelijking de expressie van de NFKB1 Kopen en RELA Helicobacter pylori de expressie van andere moleculen die betrokken zijn niet alleen in de NLR signaleringsroute maar ook bij carcinogenese werd geanalyseerd door vergelijking van THP-1-cellen reageren op zowel H. pylori Discussie GC wordt nu beschouwd als een multifactoriële proces, waarbij bacteriële, milieu- en gastheer genetische factoren betrokken in verschillende stadia van kanker pathofysiologie. Momenteel is het bekend dat kanker ontstaat in chronisch ontstoken weefsel, en dit is bijzonder opmerkelijk in het maagdarmkanaal [4]. Chronische ontsteking van het maagslijmvlies volgt op H. Bij ons weten is dit de eerste gemeld dat het polymorfismen betrokken bij de NLR signaleringsroute geassocieerd met een verhoogd risico van GC in humane populaties. Multivariate statistische analyse bleek dat het card8 Als H. pylori
onderzochten wij de rol van genetische polymorfismen en expressie van genen betrokken bij het NLR signaleringsroute in H. pylori
infecties en hiermee samenhangende maagkanker (GC).
treinen, GC026 (GC) en 26.695 (gastritis).
-rs11672725, NLRP3
-rs10754558, NLRP3
-rs4612666, NLRP12
-rs199475867 en NLRX1
-rs10790286 significante associaties met GC. Op multivariate analyse, card8
-rs11672725 bleef een risicofactor (OR: 4,80, 95% BI: 1,39-16,58). Verder, NLRP12-
rs2866112 verhoogde het risico van H. pylori
infectie (OR: 2,13, 95% CI: 1,22-3,71). Statistische analyses beoordeling van het gezamenlijke effect van de H. pylori
infectie en de geselecteerde polymorfismen onthuld sterke associaties met GC ( card8
, NLRP3
, CASP1 Kopen en NLRP12
polymorphisms). In genexpressie analyses werden vijf genen die coderen voor NLR sterk gereguleerd in H. pylori
-challenged cellen ( NLRC4
, NLRC5
, NLRP9
, NLRP12 Kopen en NLRX1
). Interessant, aanhoudende up-regulatie van NFKB1 hotels met gelijktijdige down-regulatie van NLRP12 Kopen en NLRX1
werd waargenomen bij H. pylori
-GC026 uitgedaagd cellen. Verder NF-KB target genen die coderen voor cytokines, chemokines en moleculen betrokken bij carcinogenese werden aanzienlijk opgereguleerd in H. pylori
-GC026 uitgedaagd cellen.
, NLRP3
, NLRP12
, NLRX1
en CASP1
) en GC werden geïdentificeerd in het Chinees individuen. Onze genetische polymorfismen en genexpressie resultaten benadrukken het belang van het NLR signaleringsroute in de maag carcinogenese en de nauwe interactie met NF-KB
Infection and Related maagkanker: A Case-control Study en genexpressie analyses. PLoS ONE 9 (6): e98899. doi: 10.1371 /journal.pone.0098899
een essentiële etiologische factor voor GC (IARC, 1994), maar eerdere studies suggereren dat naast H. pylori
infectie en voedingsfactoren, gastheer genetica bijdragen aan GC [3]. Genetische polymorfismen zich de laatste jaren als determinanten van ziektegevoeligheid en de ernst, die geldt met name gastrointestinale maligniteit [4]. Daarom polymorfismen in genen betrokken bij aangeboren en adaptieve immuniteit kan een belangrijke rol in de pathogenese van H spelen. pylori
infectie en de ontwikkeling van de H. pylori
gerelateerde complicaties, waaronder GC.
pylori infectie, de eerste vier fysisch-chemische barrières de slijmlaag, maagepitheelcellen de TLRs en NLR. Een beperkt aantal studies de interactie tussen het NLR signaleringsroute en H beoordeeld. pylori
. Bijvoorbeeld, een eerste onderzoek van Basak et al. [9] is gebleken dat niet alleen H. pylori
lipopolysaccharide (LPS) geactiveerd caspase-1, maar dat caspase-1 activering betrokken LPS geïnduceerde IL-1β rijping. Later Hitzler et al. [10] is gebleken dat H.
pylori infectie activeert caspase-1, waardoor IL-1β /IL-18 verwerking en secretie, zowel in gekweekte dendritische cellen (DCs) en In vivo
. Consequent, twee recente studies met menselijke maag cellijnen bevestigde verhoogde expressie van caspase-1, IL-1β en IL-18 in H. pylori
geïnfecteerde cellen [11], [12]. Voorts is een recente studie door Kim et al. [13] is dat secretie van IL-1β getoond door DCs die besmet zijn met H. pylori
vereist TLR2, NOD2 en de NLRP3 inflammasoom.
, inflammasoom-afhankelijke caspase-1 activering is van cruciaal belang voor het genereren van volwassen pro-inflammatoire cytokines die cruciaal zijn voor Th1 reacties geassocieerd met de maag immunopathologie zijn. Aangezien er weinig bekend over de rol van inflammasoom en andere moleculen betrokken bij het NLR signaling pathway in reactie op H.
pylori infectie, en die functioneel relevante polymorfismen in genen van deze arm van het immuunsysteem hebben het potentieel om de grootte en richting van de gastheerrespons tegen de infectie beïnvloeden, onderzochten wij de rol van de NLR signaalweg waaronder inflammasome- gerelateerde moleculen, in H. pylori
-gerelateerde GC ontwikkeling door het beoordelen van 51 genetische polymorfismen in het Chinees individuen, een bekende hoog risico populatie voor GC, en het aanpakken van de genexpressie van 84 moleculen die betrokken zijn bij het NLR signaalwegen in een monocytische cellijn bij blootstelling aan H . pylori
.
Proefpersonen.
detectie.
IgG antilichamen in deze Chinese individuen werden bepaald met een eigen enzyme-linked immunosorbent assay [15] en immunoblot (MPD Helico Blot 2,1, MP Biomedicals, Australië).
42 bp-VNTR, werd gegenotypeerd door middel van standaard PCR. Primers werden ontworpen met Oligo Primer Analysis Software versie 6.71 (Molecular Biology Insights, Inc, Colorado Springs, Verenigde Staten). Experimenten werden uitgevoerd met de 2720 Thermal Cycler (Applied Biosystems, Foster City, USA). PCR producten werden onderworpen aan 1,5% agarosegelelektroforese en gevisualiseerd onder UV-transilluminatie met de Gel Doc 2000 System (Bio-Rad, Hercules, USA). De primer sequenties en thermische cycli voorwaarden voor genotypering van deze polymorfisme worden beschreven in Tabel S2 in de tabellen S1.
-rs2043211, card8
-rs6509368 card8
-rs12984929 en NLRP3
-rs10754558) gegenotypeerd door MALDI-TOF massaspectrometrie werden willekeurig geselecteerd voor de bevestiging van de resultaten met behulp van real-time PCR. De primer sequenties en thermale cycli condities worden opgesomd in tabel S2 in Tabellen S1. Als een validatie van de methodologie geïmplementeerd voor de genotypering van de NLRP3-
42 bp-VNTR werden sequencing analyses uitgevoerd in 10% van willekeurig geselecteerde studie monsters, in het Ramaciotti Centre, UNSW, Australië.
t-test werd gebruikt om de klinische eigenschappen te analyseren. De directe telling werd gebruikt om het genotype en allel frequenties te schatten. Afwijking van Hardy-Weinberg evenwicht (HWE) werd getest met behulp van de chi-kwadraat goodness-of-fit-test (χ 2). Bepaling van verbindingsevenwichtsafwijking (LD) is gebaseerd op een likelihood ratio test waarbij de significantie van de waargenomen waarschijnlijkheidsverhouding wordt gevonden door het berekenen van de nul verdeling van deze verhouding ervan uitgaande koppeling evenwicht met een permutatie procedure [18]. Haplotype gevolgtrekking werd uitgevoerd door middel van de Expectation-Maximalisatie (EM) algoritme voor multi-locus genotypische gegevens [19]. De odds ratio's (OR) en 95% betrouwbaarheidsintervallen (BI) werden berekend met behulp van de exacte waarschijnlijkheid testen van de Fisher's (tweezijdige p
-waarden). Om te corrigeren voor verstorende factoren, een binaire logistische regressie (LR) aangepast bij H. pylori
status en het geslacht werd uitgevoerd. P
-waarden < 0,05 werden beschouwd als statistisch significant. Kwaliteit filters voor de uitsluiting van polymorfismen uit de statistische analyse omvatte bellen tarieven onder 95% en de afwijking van HWE. De gegevens werden geanalyseerd met behulp van het programma Arlequin versie 3,1 [20], GraphPad Prism versie 5.02 (GraphPad Software Inc., San Diego, USA) en SPSS versie 19.0.0. (SPSS Inc., Chicago, USA)
stam GC026 ( cagA
+, Cage
+, CAGL
+, CAGT
+ Vaca
s1 m1 +, baba
+, OIPA
+, Dupa
+ en Saba
+) werd geïsoleerd uit een GC patiënt in het Universitair Ziekenhuis van Maleisië, Kuala Lumpur [21], [22]. De H. pylori
stam 26695 ( cagA
+ en Vaca
s1m1 +) werd geïsoleerd uit een patiënt met gastritis [23] (ATCC code 700392). Beide H.
pylori stammen werden gedurende twee dagen op paardenbloed-agarplaten (Blood Agar Base No.2 aangevuld met 6% steriele gedefibrineerd paardenbloed (Oxoid, Heidelberg West, Vic., Australië) bij 37 ° C in een anaerobe pot met een gas genereren kit (Oxoid) om een microaerobic sfeer van 6% O 2, 10% CO 2 en 84% N 2.
GC026 26.695 en werden vervolgens aan het medium toegevoegd bij een multipliciteit van infectie van 1, en gedurende 6 uur bij 37 ° C en 5% CO 2. De bacteriële concentratie toegevoegd werd bepaald op basis van een standaardkromme en optische dichtheid (OD) aflezingen bij 595 nm onder toepassing van een Bio-Rad microplaatlezer model 550 (Bio-Rad). De feitelijke concentratie toegevoegde werd bevestigd door het tellen van kolonievormende eenheden (CFU) gekweekt op paardenbloed-agarplaten na seriële verdunning van de bacteriële suspensie.
RNA-extractie, cDNA bereiding en PCR arrays.
-challenged THP-1 cellen werden gebruikt voor de isolatie van mRNA met behulp van de Qiagen RNeasy Mini Kit zoals beschreven door de fabrikant (Qiagen). Voor de analyse van de genexpressie van 84 moleculen betrokken bij het NLR signaalroute, werd cDNA gesynthetiseerd uit 0,8 ug totaal RNA met behulp van de RT 2 First Strand cDNA Kit (Qiagen) en verder geanalyseerd met het menselijk inflammasoom RT 2 Profiler PCR array (PAHS-097R) (Qiagen) zoals aanbevolen door de fabrikant. Genexpressie profielen werden verkregen uit drie onafhankelijke experimenten van H. pylori
-GC026 besmet, H. pylori
26.695 geïnfecteerde en overeenkomstige niet-geïnfecteerde (controle) monsters. De experimenten werden uitgevoerd in dienst van de Rotor-Gene Q cycler (Corbett Life Sciences, Doncaster, Australië).
-waarden. ≪ 0,05 werden beschouwd als statistisch significant
Resultaten
staat infecties en mediane leeftijd worden in tabel S3 in Tabellen S1. Mannelijk geslacht werd gevonden om meer te overheersen in GC patiënten dan in FD controles, met een positieve associatie met de ontwikkeling van GC in deze etnische Chinese bevolking (OR: 2,15, 95% CI: 1,29-3,58, P
-waarde: 0,0036). H.
pylori infectie gevonden aanwezig te zijn in 68,7% van de personen in deze studie (73/87 GC patiënten en FD 140/223 controles). Vergelijking van de prevalentie van H. pylori
infectie bij GC patiënten en FD controles bleek dat de H. pylori
infectie was een risicofactor voor de ontwikkeling van GC (OR: 2,38, 95% CI: 1,41-3,99, P
-waarde: < 0,0001). Hoewel patiënten in deze studie werden gevonden volgens 5-jarige leeftijdsgroepen, de gemiddelde leeftijd van patiënten GC (65,3 jaar) was significant hoger dan die van FD controles (54,3 jaar) ( P
-waarde: <. 0.0001)
-rs12984929 (χ 2: 35.98), CARD8-
rs4802445 (χ 2: 5,87) en CARD8-
rs6509368 (χ 2: 5,43). Eenentwintig polymorfismen in NLRP3
(n = 5), NLRP12
(n = 3), NLRX1
(n = 3), ASC
(n = 4) en CASP1
(n = 6) werden gevonden niet-polymorfe in deze etnische Chinese bevolking zijn (tabel S1 in tabellen S1).
-rs11672725 TT genotype liet een sterke associatie met GC in de bivariate statistische analyse (OR: 4,80, 95% BI: 1,39-16,58). In aanvulling op de card8
-rs11672725, nog eens vier polymorfismen toonden borderline resultaten in de bivariate analyse ( NLRP3
-rs10754558, NLRP3
-rs4612666, NLRP12
-rs199475867 en NLRX1
-rs10790286) (tabel 1). Verdere multivariate statistische analyses, gecorrigeerd voor H. pylori
infectie en mannelijk geslacht, toonde aan dat de card8
-rs11672725 TT-genotype bleef een risicofactor voor GC in deze etnische Chinese bevolking (tabel 2).
(HAP1 en Hap8), een NLRP3
(HAP3-) en drie NLRX1-CASP1
(Hap21, 23 en 24) haplotypes bleken het risico van GC in deze etnische Chinese bevolking verhogen. Interessant HAP1 herbergt de card8
-rs11672725 T-allel en Hap21 en Hap23 haven de NLRX1
-rs10790286 C-allel, waaruit blijkt de samenhang met de resultaten van het allel en genotype resultaten analyseert.
Infectie in etnische Chinezen Personen
is bekend dat een belangrijke risicofactor in verband met GC zijn, werden verdere analyses uitgevoerd om de associatie tussen genetische polymorfismen betrokken bij het NLR signaleringsroute en H beoordelen. pylori
infectie. Interessant, onze etnische Chinezen case-control studie toonde aan dat NLRX1
-rs10790286, NLRP12
-rs2866112, NLRP12
-rs4419163 en ASC
-rs8056505 geassocieerd met een significant verhoogd risico op H. pylori
infectie bij deze personen (Tabel S6 in de tabellen S1). Multivariate statistische analyse bevestigde dat NLRP12
-rs2866112 werd geassocieerd met een verhoogd risico op H. pylori
in het Chinees personen (OR: 2,13, 95% CI: 1,22-3,71)
Infectie en genetische polymorfismen Aanzienlijk verhoogt het risico op maagkanker in. etnische Chinese Personen
positie ten opzichte van het risico van GC, in een poging om het bestaan van biologische interactie in de vorm van synergisme of antagonisme bepaald. Opvallend is dat mensen herbergen tien van de geselecteerde polymorfismen ( card8
-rs10405717, NLRP3
-rs12079994, NLRP3
-rs3806265, NLRP3
-rs4612666, NLRP12
-rs2866112, NLRP12
-rs4419163, NLRX1
-rs10790286, CASP1
-rs2282659, CASP1
-rs530537 en CASP1
-rs61751523) en geïnfecteerd met H. pylori
werd waargenomen ten hoogste risico van GC, de meeste van deze UPR in het bereik 4,0-5,0 (tabel 3). Daarentegen, bij het ontbreken van H. pylori
infectie, card8
-rs2043211 significant af van het risico van GC (OR: 0,19, 95% CI: 0,06-0,63)
Invloeden. de expressie van een aantal moleculen die betrokken zijn bij de NOD-like receptor Signalling Pathway
moleculen die betrokken zijn bij het NLR signaalroute, onderzochten we de expressie van 84 genen die coderen voor NLR, andere inflammasoom componenten, negatieve regulatoren, pro-inflammatoire cytokines, pro-inflammatoire caspases en moleculen die betrokken zijn bij downstream signalering, in THP-1 afgeleide macrofagen na blootstelling aan twee verschillende H. pylori
stammen (GC026 en 26.695). In H. pylori
-GC026 uitgedaagd THP1 cellen werden 49 genen differentieel tot expressie in vergelijking met de controlegroep (tabel S7 in Tabellen S1 en Figuur S1 in figuur S1). Hiervan statistisch significante opwaartse regulatie en neerwaartse regulatie van ten minste twee maal werd aangetroffen in 17 en 28 genen, respectievelijk (Tabellen 4 en 5). Vijfendertig genen werden differentieel tot expressie tussen de controlegroep en de groep blootgesteld aan H. pylori
26.695 (tabel S7 in Tabellen S1 en S2 in figuur figuren S1). Hiervan statistisch significante opwaartse regulatie en neerwaartse regulatie van ten minste twee maal werd gevonden in 5 en 23 genen, respectievelijk (Tabellen 4 en 5).
Helicobacter Pylori
Stammen geassocieerde met maagkanker en gastritis leiden tot verschillende expressieniveaus van cytokines en chemokines
stammen. De expressie van negen genen die coderen voor pro-inflammatoire cytokines ( IFNB1
, IL1B
, IL12B
, IL6
, IL33
en TNF
) en chemokines ( CXCL1
, CXCL2, CCL5
) significant up-gereguleerd in THP-1-cellen uitgedaagd met zowel H. pylori
GC026 en 26.695 stammen (Tabel 4). Verder is een intense immuunreactie ( CXCL1
, CXCL2
, CCL5
, IL6
, IL12B
, TNF Kopen en IFNB1
) werd ingeleid tegen H. pylori
GC026 (Figuur 1A). Interessant is dat een aantal van de genen die coderen voor chemokines ( CCL2 Kopen en CCL7
) en cytokines ( IL18
, TNFSF11 Kopen en CD40LG
) werden down-gereguleerd in H. pylori
-challenged THP-1-cellen (Tabel 5).
infectie resulteert in Up-regulatie van NFKB1 hotels met gelijktijdige Marked down-verordening van NLRP12 Kopen en NLRX1
tussen H. pylori
GC026- en 26695-uitgedaagd cellen. Opmerkelijk is dat, hoewel de RELA
toonde verlaagde niveaus in THP-1 cellen blootgesteld aan zowel de H. pylori
stammen (het opvouwen van regelgeving: 0,49, p
-waarde: 0,044673 en vouw regelgeving: 0,26, p
-waarde. 0,131017 voor H pylori
GC026 en 26.695, respectievelijk), statistisch significant up-regulatie van NFKB1
werd alleen waargenomen in H. pylori
-GC026 uitgedaagd cellen (het opvouwen regelgeving: 2.50, p
-waarde: 0,006825). (figuur 1C)
Verhoogt de expressie van PTGS2 Kopen en BIRC3
stammen. Interessant, PTGS2
was significant up-gereguleerd in THP-1-cellen bij blootstelling aan zowel de H. pylori
stammen, H. pylori
-GC026 uitgedaagd cellen (het opvouwen regelgeving: 54.03, p
-waarde: 0,0247) toont significant hogere expressie niveaus in vergelijking met H. pylori
26695-uitgedaagd cellen (het opvouwen regelgeving: 19.56, p
-waarde: 0,016089) (figuur 1d). Verder werd een tweede gen dat betrokken is bij carcinogenese, BIRC3
, was uitsluitend up-gereguleerd in H. pylori
-GC026 uitgedaagd cellen (het opvouwen regelgeving: 12.28, p
-waarde: 0,001638). (figuur 1D)
pylori infectie en deze bacterie wordt initieel doelwit van PRRS, hebben we de rol van moleculen betrokken bij het NLR signaleringsroute in H.
pylori infectie en aanverwante GC.
-rs11672725 TT genotype een risicofactor voor consistente GC Chinese individuen. card8
, gelegen op 19q13, codeert voor het caspase recruitment domein eiwit 8 (card8), ook bekend als TUCAN, die werd gemeld om met NLRP3 onderdrukken NF-KB activerende signalen en overexpressie in menselijke kankerweefsels zoals eierstok-, long- en borstkanker weefsels [25] - [27]. Tot nu toe slechts één studie, uitgevoerd in een Duitse populatie, heeft zowel het rol van dit polymorfisme in de ziekte [28]. Deze auteurs in op de relatie tussen card8
-rs11672725 en colorectale kanker, maar geen enkele significante resultaten (OR: 1,02, 95% CI: 0,86-1,21) laten zien [28]. Verschillen in type kanker en studiepopulatie zou goed zijn voor deze tegenstrijdige uitkomsten.