Fonas
Šiuo metu jis yra gerai nustatyta, kad vėžys atsiranda lėtiniai uždegimo apimtus audinius. A Nod-kaip receptoriai (NLRs) sudaro Inflamasomos skaičius ląstelėje multiprotein kompleksai kritinių generuoti brandus PRO-uždegiminių citokinų (IL-1β ir IL-18). Kaip lėtinis uždegimas skrandžio gleivinės yra pasekmė, Helicobacter pylori Medžiagos ir metodai Penkiasdešimt vienas genetiniai polimorfizmas buvo genotipą 310 etninės Kinų (87 ne CARDIA GC atvejai ir 223 kontrolę su funkcinės dispepsijos). Be to, genų ekspresijos 84 molekulių, dalyvaujančių NLR signalinio kelio buvo įvertintas THP-1 ląstelių juslėmis dviejų H. pylori s Rezultatai CARD8 Išvados Nauji asociacijos tarp polimorfizmų NLR signalinio kelio ( CARD8 nurodomoji dalis:. Castaño-Rodríguez N Kaakoush NE, Goh KL Foko KM Mitchell HM (2014) kinkuoti-Kaip receptorių signalizacijos Kelias į Helicobacter pylori redaktorius: M. David Ojcius, Kalifornijos universitetas Merced, Jungtinės Amerikos Valstijos Įstojo: kovo 2, 2014; Priėmė 8 Gegužė 2014 m Paskelbta: Birželis 5, 2014 Visos teisės saugomos: © 2014 Castaño-Rodríguez ir kt. Tai atviros prieigos straipsnis platinama pagal Creative Commons Attribution licencija, kuri leidžia nevaržomai naudotis, paskirstymo ir dauginimąsi bet kokioje laikmenoje sąlygomis, su sąlyga, kad pirmasis autorius ir šaltinis įskaitomos Finansavimas:. Šis darbas buvo iš dalies remiamą vėžys tarybos Naujasis Pietų Velsas, Australija (dotacijos no.66 /04). N.O. Kaakoush remia išankstinio Karjera stipendijos iš Nacionalinio sveikatos ir medicinos tyrimų tarybos, Australija. Į finansuotojai neturėjo vaidmenį studijų dizainas, duomenų rinkimo ir analizės, sprendimų skelbti, ar ruošiant rankraštį konkuruojančių interesų.. Autoriai pareiškė, kad nėra konkuruojantys interesai egzistuoja Įvadas bendras sergamumas skrandžio vėžiu (GC) svyruoja plačiai tarp šalių. Pagal pasaulines vėžio statistiką, iš 952,000 naujų GC atvejais ir 723,000 GC susijusių mirčių viso Apskaičiuota, kad įvyko 2012 metais, sudaro 6,8% visų vėžio atvejų ir 8,8% visų vėžio mirčių [1]. Daugiau nei 70% naujų atvejų ir mirčių įvyksta besivystančiose šalyse, su aukščiausios dažnis buvo pranešta Rytų Azijoje, Rytų Europoje ir Centrinėje ir Pietų Amerikoje [2]. patogenines bakterijas, Helicobacter pylori gemalai-line užkoduota receptoriai žinomas kaip modelio pripažinimo receptorių (RRKS) yra dalis įgimtą imuninę sistemą ir yra gyvybiškai svarbios nekintamų mikrobų motyvų atskleidimo žinomas kaip patogeno -associated molekulinės modeliai (PAMPs). RRKS buvo suskirstytos į penkias skirtingų genetinių ir funkcinių dangalus: nukleotidas privalomas oligomerizuoti domeną (Nod) -kaip receptorių (NLRs) rinkliavų panašūs receptorius, C-tipo lėktino receptorius, retino rūgšties-indukuojamąją geną (rig) -I-kaip receptorių ir nebūna melanomos 2 (AIM2) -kaip receptoriai [5] [6]. NLR šeima ne tik pripažinti PAMPs bet žalai-susijusios molekulinės modeliai (amortizuoja) citoplazmoje, kurie endogeninių ligandų pagaminta po audinių sužalojimo ar ląstelių mirtis [7]. NLRs būdinga struktūra apima centrinę nukleotidų-privalomas ir oligomerizacija (Nacht) domeną, yra visuose NLR šeimos nariams, C-galinio Leucinas turtingas kartojasi (LRRs) ir N-terminalas kaspazės įdarbinimas (kortelės) arba pyrin (PYD ) domenas. Remiantis filogenetycznej analizės Nacht srityse, buvo nustatyta, kad NLR šeima susideda iš trijų pošeimiai: 1) kinkuoti šeimos, kuri apima NOD1-2, NOD 3 /NLRC3, NOD4 /NLRC5, NOD5 /NLRX1 ir CIITA; 2) NLRPs įskaitant NLRP1-14 (taip pat žinomas kaip NALPs), ir 3) IPAF pošeimio kurią sudaro IPAF (NLRC4) ir NAIP [7]. NLRP3 inflammasome, labiausiai visiškai būdingas inflammasome, susideda iš NLRP3 pastolių baltymų, apoptozę susijęs taškelis-kaip baltymas (ASC) ir kaspazė-1. NLRP3 sąveikauja ir samdo adapterio ASC per PYD-PYD sąveikos [8]. Ši sąveika veda į kaspazės-1 įdarbinimo, intraląstelinis aspartato specifinis cisteino proteazės, kuris būtų vėliau sukelti ir brendimo išleidimo priešuždegiminiais citokinų, tokių kaip IL-1β ir IL-18. H. pylori Todėl ankstesni tyrimai aiškiai rodo, kad, atsakant į H. pylori Medžiagos ir metodai genotipo polimorfizmas dalyvaujančių NOD-kaip receptorių signalizacijos kelią Etikos ataskaitoje. Šis tyrimas buvo žmogaus etikos komiteto (HREC) iš Naujojo Pietų Velso (UNSW) universitete (HREC 08115 ir HREC 02144) patvirtintas. Parašė informuotas sutikimas buvo gautas iš kiekvieno įdarbinto į tyrimo asmeniui. Dalykai buvo etniniai Kinijos asmenys, kurie dėl įgimtų viršutinės virškinimo trakto endoskopija tuo Changi pagrindinė ligoninė (Singapūras) ir universitetinės ligoninės Malaizijos (Kvala Lumpūras), nuo 2004 sausio ir balandžio 2007. Pacientai užkrėsti su žmogaus imunodeficito viruso ar kas buvo nustatyta nesteroidinių priešuždegiminių vaistų, antimikrobinių medžiagų arba rūgšties slopintuvai į dviejų mėnesių laikotarpį prieš įdarbinant buvo atmesti. aštuoniasdešimt septyni pacientai naujai diagnozuota pirminė ne CARDIA GC (Tarptautinės ligų klasifikacijos, 9 -oji versija, kodas 151), remiantis histologinio patvirtinimo buvo pakviesti dalyvauti tyrimas. Kontrolinė grupė sudarė 223 asmenų diagnozuota funkcinės dispepsijos (FD), kuris buvo apibrėžtas kaip nuolatiniai ar pasikartojantys simptomai (skausmas ar diskomfortas centre viršutinėje pilvo) organinės ligos nebuvimo (įskaitant viršutinės endoskopija), pagal Romos II klasifikavimo sistema [14]. Helicobacter pylori h. pylori Polimorfizmas pasirinkimas. "elektroninės duomenų bazės (PubMed, Scopus, Science Direct, Ovidijus, BIOSIS peržiūra, Scirus duomenų bazės, CINAHL, IMBIOMED, Scielo ir Alyva) buvo ieškoma iki 2013 vasario mėn polimorfizmas dalyvaujančių NLR signalizacijos keliu, kuris buvo susiję su vėžio, infekcinė liga arba buvo funkciškai svarbi. Penkiasdešimt vienas polimorfizmas 6 genų, kurie buvo pranešta, kad nedidelį alelėms dažnį >. 1% Nacionalinėje centro Biotechnology Information (NCBI) dbSNP, buvo atrinkti analizei (S1 Stalo lentelėse S1) genotipo būdai. genotipo iš 51 pasirinktų polimorfizmų NLR signalinio kelio kiekvieno individo įtraukti į tyrimą, genomo DNR buvo išskirta iš periferinio viso kraujo mėginių, naudojant QIAamp kraujo DNR Mini Kit, kaip aprašyta gamintojo (Qiagen; Chadstone, Australija). DNR buvo rehidrataciją steriliu vandeniu ir normalizuojama iki 10 ng /iL individualų SNP genotipo per matrica padeda lazerio desorbcijos jonizacijos laiko ir skrydžio taikymo (MALDI-TOF) masių spektrometrija, The Sequenom MassARRAY IPLEX? Analizė (San Diegas, CA , JAV) [16], [17] tuo Australijos genomo tyrimų infrastruktūros Ltd ", Sent Lusija, universitetas Kvinslandas, Australija. Vienas polimorfizmas, kad negalėjo būti įtrauktas į Sequenom MassARRAY IPLEX testą, vadinamą NLRP3- Keturi polimorfizmas ( CARD8 neporiniai Studento , T Genų ekspresija molekulių, dalyvaujančių NOD-kaip receptorių signalizacijos kelią žinduolių ląstelių kultūros žmogaus monocitinę leukemija ląstelių linija THP-1 (kodas: TIB-202). (Amerikos tipas kultūra kolekcija; Manasasas, JAV), buvo kultivuojamas RPMI 1640 vidutinės papildytas 10% šilumos-inaktyvuota vaisiaus galvijų serumo (FBS) (Invitrogen; Mulgrave, Australija), 1 mM natrio piruvato (Invitrogen), 2500 mg /l natrio bikarbonato (Invitrogen ) ir 100 mikrogramų /ml penicilino-streptomicino tirpalas (Invitrogen). Ląstelės buvo palaikoma 25 cm 2 audinio kultūros kolbos (Greiner-Bio-on; Frickenhausen, Vokietija).. 37 ° C temperatūroje su 5% CO 2 bakterijų kultūros H.pylori infekcija tyrimas. THP-1 ląstelės buvo pasėjamos į 6 šulinėlių kultūros plokštės esant koncentracijai 5 × 10 5 ląstelių /ml, o vėliau diferencijuojami į makrofagus su phorbol myrastate acetato ( "Sigma-Aldrich) 72 valandas [24]. prieš bakterinės infekcijos, žinduolio ląstelės buvo inkubuojamos terpę be antibiotikų. H. pylori Po infekcija, ne užginčytos ir h. pylori genų ekspresijos duomenų analize, ΔΔ CT-pagrįstas metodas santykinio kiekybinio buvo įgyvendintas naudojant žiniatinklio RT 2 Profiler PGR masyvas duomenų analizė versija 3.5 (http://pcrdataanalysis.sabiosciences.com/pcr/arrayanalysis.php). Bent du kartus pokyčiai (≥ 2, ≤0.5) ir P SDS-PAGE ir Imunoblotingo THP -1 ląstelės buvo pasėjamos, diferencijuotas ir užsikrėtęs nuo 1 MOI, kaip buvo aprašyta anksčiau. Baltymai buvo paimti naudojant Ripa buferis, atskirtos 12% natrio laurilsulfatas poliakrilamido gelyje geliai, ir perkelti į metanolį gydytų polyvinylidine difluoridą membranų naudojant Trans susilpninimas ląstelių perdavimo sistemą (Bio-Rad). Membranos buvo immunolabeled su triušio prieš žmogaus polikloniniais antikūnų NLRX1 (1:200) arba pelės anti-žmogaus monokloninių antikūnų prieš beta-aktino (1:1000) (Santa Cruz). Ožkos kovos su triušiena ir anti-pelės IgG antikūnai suporuotos su HRP (1:2000; Bio-Rad) buvo naudojami kaip antriniai antikūnai, atitinkamai. Membranos buvo tyrinėjo pagal Pierce "ECL Imunoblotingo Pagrindo protokolo (Thermo Scientific; Scoresby, Australija). klinikines charakteristikas klinikiniai charakteristikos studijų dalykų įskaitant lytį, H. Helicobacter pylori infekcija polimorfizmai genus į NOD-kaip receptorių signalizacijos pathway yra susiję su skrandžio vėžiu, etninės Kinijos asmenims Penkiasdešimt vienas polimorfizmas genų, dalyvaujančių NLR signalinio kelio buvo genotipą 310 etninių kinų asmenų (87 GC atvejais ir 223 ŽD kontrolė). Skambutis norma visiems atrinktiems polimorfizmas buvo 97-100% šiame tyrime. Nustatyta, kad visi polimorfizmas į NLR signalinio kelio būti HWE kontrolinėje grupėje, kuriame ne reikšminga χ 2 dydžiai, išskyrus CARD8 alelį ir genotipas dažniai kaip taip pat atokiausiems regionams ir 95% PI likusiems 27 polimorfizmas yra parodyta 1 lentelėje, o lentelė S4 lentelėse S1. CARD8 haplotipas pagrindu analizė yra galingas metodas perpjauti sudėtingų ligų architektūrą. Atsižvelgiant į dabartinę studijų, EM algoritmas įvardijo 25 haplotipų su dažnio > 0,01 GC atvejais (lentelė S5 lentelėse S1). Naudojant didelį haplotipas kontrolinėje grupėje kaip atskaitos haplotipas, du, CARD8-NLRP12 polimorfizmai genus į NOD-kaip receptorių signalizacijos pathway yra susiję su, Helicobacter pylori Kadangi H. pylori Bendras poveikis Helicobacter pylori buvo atliekama Daugiau analizes įvertinti ne tik buvimą ar nebuvimą pasirinktų polimorfizmas, bet ir H. pylori Helicobacter pylori išraiška toliau apibūdinti H poveikį. pylori Kadangi uždegimas yra skrandžio kancerogenezėje bruožas, mes toliau nagrinėjo PRO-uždegiminių citokinų ir chemokinus išsiskyrimą išraišką dviejų H , pylori Helicobacter pylori Trylika genai koduoja NLRs buvo vertinamas šiame tyrime, įskaitant narių IPAF pošeimiui (NAIP, NLRC4), NLRPs (NLRP1, NLRP3-6, NLRP9, NLRP12) ir linkteli (NOD2, NLRC5, NLRX1 ir CIITA) (1b pav.) Penkių genų, koduojančių NLRs išraiška buvo žymiai reglamentuoja H. pylori ginčijami ląstelių (NLRC4, NLRC5, NLRP9, NLRP12 ir NLRX1) (5 lentelė). Iš jų NLRP12 (fold reguliavimą: 0,03, p-reikšmė: 0.016298) ir NLRX1 (fold reguliavimą: 0,02, p-reikšmė: 0.01762) buvo ženkliai žemyn reguliuojama H. pylori GC026 ginčijo ląsteles. Kaip įverčio metodiką, dar Vakarų dėmė tyrimai, tiriantys NLRX1 išraišką, buvo atlikti. Nuosekliai mažėjo NLRX1 koncentracijos buvo rastos THP-1 ląstelių ginčijami tiek H. pylori GC026 ir 26695 (pagalbinė informacija S3 pav.) Kadangi NF-κB neigiamai reglamentuoja NLRP12 ir NLRX1, mes dar palyginti žodžio NFKB1 parsisiųsti ir RELA Helicobacter pylori išraiška kitų molekulių, dalyvaujančių ne tik NLR signalizacijos kelią, bet ir kancerogeninio poveikio taip pat buvo analizuojami lyginant THP-1 ląstelių atsaką į abi O. pylori Diskusijos GC dabar yra laikomas daugiaveiksnė procesas, kuriame bakterijų, aplinkosaugos ir priimančiosios genetika veiksniai dalyvauja įvairiuose etapuose vėžio patofiziologija. Šiuo metu, tai yra gerai nustatyta, kad vėžys atsiranda, o lėtiniai uždegimo paveiktą audinį, ir tai yra ypač pastebimas virškinimo trakte [4]. Kaip lėtinis uždegimas skrandžio gleivinės yra H pasekmė. Helicobacter pylori infekcija Mūsų žiniomis, tai pirmas pranešė įrodymų, kad polimorfizmas dalyvaujančios NLR signalinio kelio yra susiję su padidėjusia rizika GC Be žmonių populiacijos. Daugiamatė statistinė analizė parodė, kad CARD8 Kaip H. pylori
infekcija, mes ištirti genetinių polimorfizmas ir genų, dalyvaujančių NLR signalinio kelio į H vaidmenį. pylori
infekcija ir susijusios skrandžio vėžys (GC).
traukiniai, GC026 (GC) ir 26.695 (gastritas).
-rs11672725 NLRP3
-rs10754558, NLRP3
-rs4612666 NLRP12
-rs199475867 ir NLRX1
-rs10790286 parodė žymų asociacijų su GC. Dėl Dispersinės analizės duomenimis, CARD8
-rs11672725 liko rizikos veiksnys (ARBA: 4.80, 95% PI: 1.39-16.58). Be to, NLRP12-
rs2866112 padidino H riziką. pylori
infekcija (ARBA: 2,13, 95% PI: 1,22-3,71). Statistines analizes įvertinti bendrą poveikį H. Helicobacter pylori infekcija
ir atrinkti polimorfizmas atskleidė stiprias asociacijas su GC ( CARD8
NLRP3
CASP1 parsisiųsti ir NLRP12
polimorfizmas). Be genų ekspresijos analizės, penki genai koduoja NLRs buvo žymiai reglamentuoja H. pylori
-challenged ląstelės ( NLRC4
NLRC5
NLRP9
NLRP12 parsisiųsti ir NLRX1
). Įdomu tai, kad nuolatinis iki-reguliavimas, NFKB1
su sinchroniniu žemyn reguliavimo NLRP12 parsisiųsti ir NLRX1
buvo pastebėtas H. pylori
GC026 ginčijo ląstelės. Be to, NF-κB tikslinės genai koduoja PRO-uždegiminių citokinų, chemokinus ir molekulės dalyvauja kancerogenezėje buvo ženkliai iki-reguliuojami H. pylori
GC026 ginčijo ląstelės.
NLRP3
, NLRP12
NLRX1
, ir CASP1
) ir GC buvo nustatyta kinų asmenims. Mūsų genetiniai polimorfizmas ir genų ekspresijos rezultatai pabrėžti NLR signalinio kelio skrandžio kancerogenezėje svarbą ir jos glaudų bendravimą su NF-κB
infekcijos ir priklausoma skrandžio vėžiu: atvejo ir kontrolės tyrimas ir genų ekspresijos analizė. PLoS ONE 9 (6): e98899. Doi: 10,1371 /journal.pone.0098899
yra esminis etiologinė veiksnys GC (IARC, 1994), tačiau ankstesni tyrimai rodo, kad kartu su H. pylori
infekcija ir mitybos veiksniai, priimančiosios genetika prisidėti prie GC [3]. Genetiniai polimorfizmas atsirado pastaraisiais metais lemiančių ligos jautrumo ir sunkumo, o tai ypač aktualu virškinimo piktybinių navikų [4]. Todėl, polimorfizmas genų viduje dalyvaujančių įgimtą ir pritaikomas imunitetas gali vaidinti svarbų vaidmenį H patogenezėje. Helicobacter pylori infekcija
ir plėtrą, H. pylori
"susiję sutrikimų, įskaitant GC.
infekcija, pirmieji keturi fizinės ir cheminės kliūtys yra gleivių sluoksnis, skrandžio epitelio ląstelių, TLRs ir NLRs. Ribotą skaičių studijų įvertino tarp NLR signalinio kelio ir H sąveiką. pylori
. Pavyzdžiui, į pirminį tyrimą pagal Basak et al. [9] parodė, kad ne tik H. pylori
lipopolisacharido (LPS) aktyvuoja kaspazės-1, bet kad tai kaspazės-1 aktyvavimo dalyvauja LPS sukeltos IL-1β brendimą. Vėliau, HITZLER ir kt. [10] parodė, kad H. pylori
infekcija suaktyvina kaspazės-1, todėl IL-1β /IL-18 perdirbimo ir sekreto, tiek išauginti dendritų ląstelių (DCS) ir vivo
. Nuosekliai, du naujausi tyrimai, naudojant žmogaus skrandžio ląstelių linijas, patvirtino padidėjo išraiška kaspazė-1, IL-1β ir IL-18 H. pylori
-infected ląstelės [11], [12]. Be to, neseniai atliktas tyrimas Kim et al. [13] parodė, kad IL-1β išsiskyrimą, užsikrėtusių H DCS. pylori
reikalauja TLR2, NOD2 ir NLRP3 inflammasome.
, inflammasome priklausoma kaspazės-1 aktyvinimas yra labai svarbus generuojant brandus PRO-uždegiminių citokinų, kurie yra labai svarbus TH1 atsakymų, susijusių su skrandžio immunopathology. Atsižvelgiant į tai, kad mažai žinoma apie Inflamasomos ir kitų molekulių, dalyvaujančių NLR signalizacijos kelias kaip atsakas į H vaidmenį. Helicobacter pylori infekcija
, o funkciškai svarbios polimorfizmas į genų šio imuninę sistemą rankos turi potencialą paveikti dydį ir kryptį priimančiosios atsakas į infekciją, mes ištyrė NLR signalinio kelio vaidmuo, įskaitant inflammasome- susiję molekulės, į h. pylori
AMŽIAUS GC plėtrą įvertinant 51 genetinius polimorfizmas Kinijos asmenų, žinomą aukštos rizikos populiacija GC, ir sprendžiant genų ekspresiją 84 molekulių, dalyvaujančių NLR signalizacijos kelius į monocitine ląstelių linijos nuo sąlyčio su H , pylori
.
Studijų dalykai.
aptikimas.
IgG antikūnai šių Kinijos asmenų buvo nustatoma naudojant in-house imunofermentinės analizės metodu [15] ir imunobloto (MPL Helico dėmė 2.1 MP Biomedicals, Australija).
42 BP-VNTR, buvo nustatytas genotipas per standartinį PGR. Gruntai buvo sukurta su oligo Gruntas analizė Software version 6.71 (molekulinė biologija Įžvalgos, Inc; Kolorado Springsas, JAV). Eksperimentai buvo atliekami naudojant 2720 termocikleriu (Applied Biosystems; Foster City, JAV). PGR produktai buvo veikiami 1,5% agarozės gelio elektroforezės ir ryškinamos pagal ultravioletinėje šviesoje naudojant gelis Dok 2000 sistema (Bio-Rad; Hercules, JAV). Grunto sekas ir terminiai Dviračiai sąlygos genotipo šio polimorfizmo aprašyti S2 lentelės lentelėse S1.
-rs2043211 CARD8
-rs6509368 CARD8
-rs12984929 ir NLRP3
-rs10754558) genotipą pagal MALDI-TOF masės spektrometrija buvo atsitiktinai atrinkti patvirtinimo rezultatus, naudojant realaus laiko PGR. Grunto sekas ir terminiai Dviračiai sąlygos yra išdėstyti S2 Stalo lentelėse S1. Kaip metodikos įgyvendinta už NLRP3-
42 BP-VNTR genotipo patvirtinimo, sekos tyrimai buvo atlikti 10% atsitiktinai pasirinktų studijų pavyzdžių, tuo Ramaciotti centras, UNSW, Australija.
Statistinė analizė.
-test buvo naudojamas analizuoti klinikines charakteristikas. Tiesioginis skaičiavimo metodas buvo naudojamas siekiant įvertinti genotipo ir alelių dažnius. Nuokrypis nuo Hardy-Weinberg pusiausvyros (HWE) buvo išbandytas naudojant chi kvadrato gėris-of-fit testą (χ 2). Nustatymas šarnyro pusiausvyros pažeidimo (LD) buvo grindžiamas tikimybės santykis bandymo, kurioje stebimas tikimybė santykis reikšmė randama apskaičiuojant null pasiskirstymą šio santykio pagal susiejimo pusiausvyros hipotezės, naudojant permutation procedūrą [18]. Haplotipas išvada buvo atliktas taikant Laukimas-maksimizavimas (EM) algoritmas kelių lokuso genotipo duomenų [19]. Šansai santykis (OR) ir 95% pasikliautinieji intervalai (PI) buvo apskaičiuoti taikant Fišerio miesto tikimybės testo (du-tailed P
k dydžiai). Siekiant ištaisyti veikiančių veiksnių, dvejetainis logistinė regresija (LR) reguliuojamas H. buvo atliktas pylori
statusas ir lytis. P
k dydžiai < 0,05, buvo laikomi statistiškai reikšmingas. Kokybės filtrai atskirties polimorfizmas iš statistinės analizės įtraukti skambinti mažesnę kaip 95% ir nukrypimą nuo HWE. Duomenys buvo analizuojami naudojant programų Arlequin versija 3.1 [20], GraphPad Prizmė versija 5.02 (GraphPad Programinė įranga Inc "; San Diegas, JAV) ir" SPSS versija 19.0.0. (SPSS Inc., Čikaga, JAV)
padermės GC026 ( CagA
+ narve
+ cagL
+ cagT
+ Vaca
S1 M1 + " Baba
+ oipA
+ dupa
+ ir Saba
+), buvo izoliuotas nuo GC pacientas tuo universitetinės ligoninės Malaizija, Kuala Lumpūras [21], [22]. h. pylori
padermė 26.695 ( CagA
+ ir Vaca
s1m1 +), buvo izoliuotas nuo paciento su gastritu [23] (ATCC kodas 700.392). Tiek H. pylori
kamienai buvo auginami dviejų dienų arklys kraujo agaro lėkštelių (kraujo agaro Base Nr.2 papildytas 6% sterilus defibrinated arklys kraujyje (OXOID, Heidelberg West, Vic., Australija) 37 ° C anaerobinės stiklainį, kuriame yra dujų generavimo komplektas (Oxoid) suteikti microaerobic atmosferą 6% o 2, 10% CO 2 ir 84% N 2.
padermių GC026 ir 26695 tada buvo pridėta į terpėje tokiu užkrėtimo 1 darinys, ir inkubuojami 6 valandas 37 ° C temperatūroje ° C temperatūroje ir 5% CO 2. pridėtinės bakterijų koncentracija buvo nustatoma remiantis standartine kreive, ir optinis tankis (OT) rodmenis tuo 595 nm, naudojant Bio-rad mikroplašu skaitytojo modelis 550 (Bio-rad). Tikrasis koncentracija pridėtinės buvo patvirtinta skaičiuojant kolonijas sudarančių vienetų skaičius (CFU) išaugintų žirgų kraujo agaro lėkštelių po serijos praskiesti bakterijų suspensija.
RNR išskyrimo, kDNR paruošimo ir PGR matricos.
-challenged THP-1 ląstelės buvo naudojamas mRNR atskirai, naudojant Qiagen RNeasy Mini Kit, kaip aprašyta gamintojo (Qiagen). Už genų ekspresijos 84 molekulių, dalyvaujančių NLR signalinio kelio analizės, kDNR buvo susintetintas iš 0,8 mikrogramų viso RNR, naudojant RT 2 Pirma kryptis kDNR komplektas (Qiagen) ir toliau analizuojami naudojant Žmogaus Inflammasome VK 2 Profiler PGR masyvas (PAH-097R) (Qiagen), kaip rekomenduoja gamintojas. Genų ekspresijos profilius buvo gauti iš trijų nepriklausomų eksperimentų H. pylori
GC026 užsikrėtę h. pylori
26.695 infekuotiems ir atitinkamas neužkrečiama (kontrolės) mėginius. Eksperimentai buvo atliekami naudojant rotoriaus-Genų Q Jutiklis ciklų (Corbett Gyvosios gamtos mokslai; Doncaster, Australija).
k dydžiai. ≪ 0,05, buvo laikomi statistiškai reikšmingas
Rezultatai
statusą ir vidutinis amžius yra parodyta S3 Stalo lentelėse S1. Vyriška lytis buvo nustatyta, kad daugiau vyrauja GC pacientų nei FD kontrolės, rodo teigiamą asociaciją su GC plėtros šioje etninės Kinijos gyventojų (ARBA: 2,15, 95% PI: 1.29-3.58 P
-Pridėtinės: 0,0036). h. pylori
infekcija buvo nustatyta, kad dalyvauja 68,7% asmenų šiame tyrime (73/87 GC pacientų ir 140/223 ŽD kontrolė). Palyginimas H paplitimą. pylori
infekcija GC pacientų ir FD kontrolės parodė, kad H. pylori
infekcija buvo rizikos veiksnys GC plėtros (Arba: 2,38, 95% PI: 1,41-3,99 P
-Pridėtinės: < 0,0001). Nors dalykai šiame tyrime buvo suderintos pagal 5 metų amžiaus grupėse, vidutinė amžius GC pacientų (65,3 metų) buvo reikšmingai didesnis nei FD kontrolę (54,3 metų) ( P
-Pridėtinės: <. 0,0001)
-rs12984929 (χ 2: 35,98), CARD8-
rs4802445 (χ 2: 5.87) ir CARD8-
rs6509368 (χ 2: 5.43). Dvidešimt viena polimorfizmas į NLRP3 pervežimas (n = 5), NLRP12 pervežimas (n = 3), NLRX1
(n = 3), ASC
(n = 4) ir CASP1
(n = 6), buvo nustatyta, kad ne polimorfinės šiame etninės Kinijos gyventojų (lentelė S1 S1 lentelėse).
-rs11672725 TT genotipą parodė tvirtą asociacijos GC į bivariate statistinė analizė (Arba: 4,80, 95% PI: 1.39-16.58). Be CARD8
-rs11672725, dar keturi polimorfizmas parodė tyrimų rezultatai yra ribiniai bivariate analizė ( NLRP3
-rs10754558 NLRP3
-rs4612666 NLRP12
-rs199475867 ir NLRX1
-rs10790286) (1 lentelė). Daugiau daugiamatės statistinės analizės, koreguojantys už H. pylori
infekcija ir vyriška lytis, parodė, kad CARD8
-rs11672725 TT genotipą liko rizikos veiksnys GC šiame etninės Kinijos gyventojų (2 lentelė).
(Hap1 ir Hap8), vienas NLRP3
(Hap3) ir trys NLRX1-CASP1
(Hap21, 23 ir 24) buvo rasta haplotipas padidinti GC riziką šioje etninės Kinijos gyventojų. Įdomu tai, kad Hap1 uostų CARD8
-rs11672725 T alelių, ir Hap21 ir Hap23 uosto į NLRX1
-rs10790286 C alelio, kuris rodo, suderinamumas su gautais rezultatais alelio ir genotipo tyrimus.
infekcija etninių Kinijos asmenims
yra žinoma, kad pagrindinis rizikos veiksnys, susijęs su GC, buvo atlikti papildomi tyrimai, siekiant įvertinti tarp genetinių polimorfizmas dalyvaujančių NLR signalinio kelio ir H asociacija. pylori
infekcija. Įdomu tai, kad mūsų tautinė Kinijos atvejo-kontrolės tyrimas parodė, kad NLRX1
-rs10790286 NLRP12
-rs2866112 NLRP12
-rs4419163 ir ABCD
-rs8056505 buvo susijęs su žymiai padidėjusia rizika H. pylori
infekcija šių asmenų (lentelė S6 lentelėse S1). Daugiamatė statistinė analizė patvirtino, kad NLRP12
-rs2866112 buvo susijęs su padidėjusia rizika H. pylori
Kinijos asmenų (ARBA: 2,13, 95% PI: 1.22-3.71)
Infekcija ir genetiniai Polimorfizmas Žymiai padidina skrandžio vėžio riziką. etninės Kinijos Asmenys
statusą, atsižvelgiant į GC rizika, bandant nustatyti biologinės sąveikos egzistavimas į sinergizmo ar antagonizmo forma. Įdomu pastebėti, asmenys slėpimas dešimt atrinktų polimorfizmas ( CARD8
-rs10405717 NLRP3
-rs12079994 NLRP3
-rs3806265 NLRP3
-rs4612666, NLRP12
-rs2866112 NLRP12
-rs4419163 NLRX1
-rs10790286 CASP1
-rs2282659 CASP1
-rs530537 ir CASP1
-rs61751523) ir užsikrėtę H. pylori
buvo pastebėta, kad daugiausiai rizikos GC, šių atokiausių regionų būdamas 4.0-5.0 nuotolio (3 lentelė) balsų dauguma. Priešingai, atsižvelgiant į H nesant. pylori
infekcija CARD8
-rs2043211 žymiai sumažino GC rizika (OR: 0.19, 95% PI: 0,06-0,63)
įtakų. kelių molekulių, dalyvaujančių NOD-kaip receptorių signalizacijos kelią
nuo molekulių, dalyvaujančių NLR signalizacijos keliu, mes įvertino 84 genų ekspresiją, koduojančio NLRs, kitus inflammasome komponentus, neigiamų reguliatoriai, Pro-uždegiminių citokinų, PRO-uždegiminių kaspazių ir dalyvauja vartotojų signalinės molekulės, į THP-1 -derived makrofagai šie poveikio dviejų skirtingų H. pylori
padermės (GC026 ir 26695). Be H. pylori
GC026 ginčijo THP1 ląstelės, 49 genai buvo skirtingai išreikšti, lyginant su kontroline grupe (lentelė S7 lentelėse S1 ir S1 paveiksle skaičiais S1). Iš jų statistiškai reikšmingas iki reglamentavimas ir žemyn reguliavimas bent du kartus buvo nustatyta 17 ir 28 genų (atitinkamai 4 ir 5 lentelėse). Trisdešimt penkių genai buvo atskirtinai išreikštas tarp kontrolinės grupės ir grupės, veikiami H. pylori
26695 (lentelė S7 lentelėse S1 ir S2 pav skaičiais S1). Iš jų statistiškai reikšmingas iki reglamentavimas ir žemyn reguliavimas bent du kartus buvo nustatyta 5 ir 23 genų (atitinkamai 4 ir 5 lentelėse).
Helicobacter pylori
padermės asocijuotųjų su skrandžio vėžiu ir Gastritas lemia skirtingą ekspresijos lygi citokinų ir chemokinus
atmainos. Devynių genų, koduojančių PRO-uždegiminių citokinų ( IFNB1
IL1B
IL12B
IL6
IL33
išraiška ir , TNF
) ir chemokinus ( CXCL1
CXCL2, CCL5
) buvo gerokai iki-reguliuojami THP-1 ląstelių juslėmis ir H. pylori
GC026 ir 26695 padermės (4 lentelė). Be to, intensyvus imuninis atsakas ( CXCL1
CXCL2
CCL5
IL6
IL12B
TNF parsisiųsti ir IFNB1
) buvo iškelta H. pylori
GC026 (1A pav.) Įdomu tai, kad genų, koduojančių chemokinus ( CCL2 parsisiųsti ir CCL7
) ir citokinais ( IL18
TNFSF11 parsisiųsti ir CD40LG
skaičius>) buvo žemyn reguliuojama H. pylori
-challenged THP-1 ląstelės (5 lentelė).
Infekcija Rezultatai UP-reguliavimo, NFKB1
su sinchroniniu pažymėtas žemyn-reglamento NLRP12 parsisiųsti ir NLRX1
tarp H. pylori
GC026- ir 26.695 ginčijo ląsteles. Nuostabiausia, nors RELA
parodė sumažėjo lygį THP-1 ląstelių, veikiamų tiek H. pylori
padermės (fold reguliavimas: 0,49 P
-Pridėtinės: 0,044673 ir kartų reguliavimas: 0,26 P
-Pridėtinės:. 0,131017 už H.pylori
GC026 ir 26.695, atitinkamai), statistiškai reikšmingas iki-reguliavimas, NFKB1
buvo stebimas tik H. pylori
GC026 ginčijo ląstelės (fold reguliavimas: 2,50 P
-Pridėtinės: 0,006825). (1c pav)
Padidina išraiškos PTGS2 parsisiųsti ir BIRC3
atmainos. Įdomu tai, kad PTGS2
gerokai buvo reguliuojama per THP-1 ląstelių išsiskyrimą ir H. pylori
padermių h. pylori
GC026 ginčijo ląstelės (fold reguliavimas: 54.03 P
-Pridėtinės: 0,0247) rodo žymiai didesnį raiškos lygį, palyginti su H. pylori
26.695 ginčijo ląsteles (fold reguliavimas: 19.56 P
-Pridėtinės: 0,016089) (1d pav). Be to, antrasis genų dalyvauja kancerogenezėje BIRC3
, buvo tik iki-reguliuojami H. pylori
GC026 ginčijo ląstelės (fold reguliavimas: 12,28 P
-Pridėtinės: 0.001638). (1D paveikslas)
ir ši bakterija iš pradžių orientuota RRKS, mes ištirti molekulių, dalyvaujančių NLR signalinio kelio į H vaidmenį. Helicobacter pylori infekcija
ir susijusios GC.
-rs11672725 TT genotipą yra nuoseklus rizikos veiksnys GC Kinijos asmenims. CARD8
, įsikūręs 19q13, koduoja kaspazės įdarbinimas domeno baltymų 8 (CARD8), taip pat žinomas kaip TUCAN, kuris buvo pranešta bendrauti su NLRP3, slopinti NF-κB aktyvuoti signalus ir būti ekspresija žmogaus vėžinių audinių įskaitant kiaušidžių, plaučių ir krūties vėžio audiniuose [25] - [27]. Iki šiol tik vieno tyrimo, atlikto Vokietijos gyventojų, įvertino šio polimorfizmo vaidmenį ligos [28]. Šie autoriai kreipėsi į tarp CARD8
-rs11672725 ir kolorektalinio vėžio asociaciją, tačiau neįrodė, jokių reikšmingų rezultatų (Arba: 1,02, 95% PI: 0,86-1,21) [28]. Skirtumai vėžio tipo ir studijų gyventojų gali sudaryti šių prieštaringų rezultatų.