Pasaulinis transkripcijos reakcija į karboanhidrazės IX trūkumų pele stomach

Global transkripcijos reakcija į karboanhidrazės IX trūkumas pelės skrandžio pervežimas tezės
Background pervežimas karboanhidrazės (CAS) yra fermentų šeima, kurie reguliuoja pH homeostazę į įvairių audinių. CA IX yra išimtinė narys šios šeimos, nes papildomai prie pagrindinio CA funkcija, ji buvo susijęs keliose kitų fiziologinių ir patologinių procesų. Funkcijos rasti CA IX apima vaidmenis ląstelių sukibimą ir piktybinių ląstelių invaziją. Be to, CA IX tikėtina reguliuoja ląstelių dauginimąsi bei diferenciaciją, kuri buvo įrodytas Car9
- /- pelės. Šios pelės turėjo skrandžio duobę ląstelių hiperplazija ir išeikvojimas vyriausiųjų ląstelių; Tačiau konkrečios molekulinius mechanizmus atsilieka stebimų fenotipų lieka nežinoma. Todėl norėjome ištirti CA IX trūkumo poveikį viso genomo genų ekspresijos skrandžio gleivinę. Tai buvo padaryta naudojant "Illumina Sentrix ®Mouse-6 išraiška BeadChip masyvus. Kelių genų su įsidėmėtina klosčių pokyčio vertės išraiška buvo patvirtinta KRL-PGR.
Rezultatai
CA IX trūkumas sukelia 86 genų indukcijos ir represijas 46 genų skrandžio gleivinę. Nebuvo 92,9% atitikimas tarp rezultatų, gautų mikrogardeliq analizės ir KRL-PGR. Į skirtingai išreikšti genai įtraukti tiems, kurie dalyvauja raidos procesus ir ląstelių diferenciacijos. Be to, CA IX trūkumas pakeitė genų, atsakingų už imuninės sistemos atsaką išraišką ir downregulated kelių virškinimo fermentų ekspresiją.
Išvados
mikrogardeliq analizės nurodė kelias galimas genų, kurių pakitęs išraiška galėtų paaiškinti sutrikęs ląstelių linijos fenotipo į Car9
- /- skrandžio gleivinė. Tyrimo rezultatai taip pat parodė naujovišką vaidmenį CA IX į imunologinių procesų ir virškinimo reguliavimu. Šie duomenys sustiprinti koncepciją, kad pagrindinis vaidmuo CA IX nėra pH reguliavimas skrandžio gleivinę. Vietoj to, ji yra reikalinga tinkamai veiktų kelių fiziologinių procesų
faktai
karboanhidrazės (CAS) yra cinko turinčių metalloenzymes kad katalizuoja grįžtamąjį hidrataciją anglies dioksido reakcijos šeima: CO. 2 + H 2O ↔ H + + HCO 3 -. Jie dalyvauja kelių fiziologinių procesų, tokių kaip rūgščių-šarmų pusiausvyrą, CO 2 ir HCO 3 - transportas, kvėpavimo, kaulų rezorbcija, ureagenesis, gliukoneogenezės lipogeneze, gamyba kūno skysčiuose ir tręšimas [ ,,,0],1, 2]. CA šeima susideda iš 13 veikiančių izofermentų žinduolių, iš kurių 12 yra išreikštos ir funkcijos žmonėms [3]. CA izofermentų turi įvairių audinių raiškos modelius, būdingus pavienių ląstelių tyri- mas lokalizacijos, taip pat unikalų kinetinė ir slopinamąjį savybes.
CA IX yra dimerinis baltymų susijęs su ląstelių membranos [4, 5]. Savo baltymų subrendusios formos, CA IX yra sudarytas iš N-terminalas proteoglikanų (PG) domene, CA katalizinio domene, transmembraniniu regione, ir per trumpą grandinės su uodegos prie C-galu [6]. CA IX yra tik narys CA šeimos, kurio sudėtyje yra PG domeną papildomai prie CA domeno. Todėl, CA IX buvo pasiūlyta dalyvauti ląstelių adhezijos procesams. Iš tikrųjų, naudojant MDCK (Madin-Darby šunų inkstų) epitelio ląsteles, buvo įrodyta, kad CA IX sumažina El cad-ląstele adheziją bendrauja su beta-kateninai [7].
CA IX išreiškiama tik mažai normaliųjų audiniai su išraiška yra stipriausia žmogaus, žiurkės ir pelės skrandžio gleivinės, kur ji yra nuo skrandžio duobes į gilių skrandžio liaukų [8, 9]. CA IX apsiriboja basolateral paviršiaus epitelio ląstelių ir yra gaminama visų pagrindinių tipų ląstelių, skrandžio epitelio [8]. CA IX yra išskirtinė narys CA šeimos, nes ji išreiškiama keliomis vėžio, kurie kyla iš CA IX neigiamų audiniuose, įskaitant inkstų, plaučių, gimdos kaklelio, kiaušidžių, stemplės ir krūties karcinomos [6]. Tačiau skrandžio vėžio ir ikivėžinių pakitimų parodė sumažėjo išraiška CA IX [10]. Navikų audiniuose,, CA IX yra susijęs su hipoksinio fenotipo, kuriam tarpininkauja hipoksija indukuojamas transkripcijos faktorius 1 (HIF-1), kuri jungiasi su hipoksija reaguoja elemento, HRE, iš CA9
promotoriaus [11]. Be hipoksinės sąlygomis, vėžinės ląstelės daugiausia priklauso nuo anaerobinio metabolizmo jų energijos gamybai. Tai anaerobinis navikas metabolizmas generuoja perviršis rūgščiojo produktų, tokių kaip pieno rūgšties ir H +, kurios turi būti ekstruzinio nuo ląstelių vidų. Ji buvo parodyta, kad CA IX gali prisidėti prie hipoksinio ekstraląstelinio aplinkoje parūgštinant, tokiu būdu padedant auglio ląstelių neutralizuoti ląstelėje pH [12]. Taigi, CA IX raiška dažnai rodo prastą prognozę ir atsparumą klasikinės radio- ir chemoterapijos [13]. Tačiau, CA IX yra ne tik apsiribojo hipoksinės regionuose navikų, rodančių, kad gali būti keletas kitų būdų, kurie reguliuoja savo išraišką. Tiesą sakant, CA IX išraiška gali būti sukeltas pagal normoxic sąlygomis aukšto ląstelių tankio, ir šis reglamentas yra sąlygotas fosfatidil 3-kinazės (PI3K) signalizavimo [14]. Be to, mitogenas aktyvuota baltymų kinazės (MAPK) kelias yra įtrauktas į CA IX raiškos reguliavimas per nekontroliuojami CA9
promotoriaus abi HIF-1-priklausomų ir -independent signalų [15]. Tai kelias, taip pat tarpusavyje su PI3K keliu ir SP1 (specifiškumas baltymų 1) transkripcijos faktorius
į Car9 kartos
-. /- Pelėmis parodė, kad kartu su pH reguliavimas ir ląstelių sukibimą, CA IX turi kitų funkcinių vaidmenų [16]. Tai Car9
pelç neparodė jokių anomalijų augimui, reprodukcinės potencialą ir gyvenimo trukmę. Tačiau, CA IX trūkumas atsirado hiperplazija, skrandžio gleivinės. Hiperplazinį gleivinė pateikta daugiau ir dalis gleives gaminančių kasyklų ląstelių KADANGI skaičius ir proporcija vyriausiųjų ląstelių buvo sumažintas. Iš viso pakauškaulio ląstelių nepakito ir, atitinkamai, CA IX trūkumas pelės turėjo normalų skrandžio pH, rūgščių sekreciją ir gastrinas koncentracijos serume. Tokiu būdu, šie duomenys rodo, kad CA IX prisideda prie diferenciacijos ir proliferacijos epitelio ląstelių linijų kontrolės skrandžio gleivinės. Ankstesnis tyrimas nagrinėjo, ar CA IX trūkumo poveikis gali būti pakeista aukštos druskos dietos, žinomas bendrai veiksnys kancerogenezėje [17]. Šie rezultatai parodė, kad didelio druskos dietos šiek tiek padidino liaukų atrofiją kūno gleivinės Car9
- /- C57BL /6 peles, o šis poveikis nebuvo pastebėtas BALB /c pelių. Tačiau jokių metaplastic arba displazijos anomalijos buvo pastebėtas virškinimo epitelio CA IX-netobuli C57BL /6 pelių. Taigi, šie stebėjimai rodo, kad vien CA IX trūkumas gali būti reikšmingas kancerogeninės veiksnys, tačiau gali inicijuoti kancerogeninį procesą įtakos ląstelių proliferaciją ir /ar diferenciacijos skrandžio gleivinę.
Šis tyrimas buvo sukurta siekiant geriau suprasti hiperplazinį fenotipas skrandžio gleivinę Car9
- /- pelių, nes molekulinius mechanizmus atsilieka jį šiuo metu nežinoma. Be to, mes norėjome konkrečiau išsiaiškinti funkcinius vaidmenis CA IX, nes yra vis daugėja įrodymų, kad jie pratęsti toli už pH reguliavimas. Šiam tikslui, genomo-pločio išraiška analizė buvo atlikta. Mikrogardeliq duomenų analizė atskleidė keletą genų, kurių išraiškos buvo pakeistas dėl Car9
genų sutrikimo į skrandžio gleivinę.
Rezultatai
transkripcijos reakcija į Car9 trūkumo skrandžio sienos
skrandžio RNR nuo 6 Car9
- /- pelės ir 6 laukinio tipo pelėms buvo analizuojami microarray. Analizė atskleidė 86 aktyvinama genus ir 46 downregulated genus, naudojant kartų kaitos cut-off ± 1,4 perduodami ir downregulated išraišką, atitinkamai (žr papildomą failą 1: Sąrašas genų skirtingai išreikštos iš Car9
- /- pelės). Ši ribinė vertė buvo pasiūlyta kaip atitinkamo lygio, virš kurio yra didelė koreliacija tarp microarray ir KRL-PGR duomenims, nepriklausomai nuo kitų veiksnių, kaip antai neatidėliotinų intensyvumo ir ciklo riba [18]. Kartus pokyčiai svyravo nuo 10.46 iki -12.14. Šioje dalyje genų naudojant atjungimo vertę ± 2,5 karto sąrašas yra rodomas (1 ir 2 lentelės). Naudojant šiuos kriterijus, visų genų su žymiai (p < 0,05) pakeisti išraiška yra rodomas, tai yra 14 genus, kurių sukeltas išraiškos ir 21 genus su nuslopintos išraiška. Visų reguliuojamų genų buvo funkciškai anotuotų sąrašas (žr papildomą failą 2: Funkcinis anotacija reglamentuojama Car9 skrandžio
pelç genų), nurodant praturtėjimą hidrolizės veiklos, raidos procesus, ląstelių diferenciacijos, proteolizę peptidazės veiklos struktūrinis molekulė veikla, ir imuninės sistemos procesas, be kita ko. Funkciniai anotacija kategorijos ir genų numeriai kiekvienoje kategorijoje rodomi 3.Table 1 lentelė genų su aktyvinama išraiškos naudojant atjungimo vertė 2,5 karto.
Genų simbolis

Aprašymas
GenBank number

FC

QRT-PCR

Cym
chymosin
NM_001111143
10.46
19.66
Slc9a3
solute vežėjas šeimos 9 (natrio /vandenilio šilumokaitis), narys 3
NM_001081060
8.07 pervežimas 10.72 pervežimas U46068 pervežimas kDNR seka U46068, stenograma 2 variantas
NM_153418
5.95 pervežimas Dmbt1
ištrintas piktybinių smegenų auglių 1
NM_007769
5.68
5.29
Il1rl1
interleukino 1 receptorių kaip 1, stenograma variantas 2
NM_010743
5.38
8.95
Tm4sf5
transmembraninis 4 superšeimai narys 5
NM_029360
4.26
9130204L05Rik pervežimas RIKEN kDNR 9130204L05 geno pervežimas NM_001101461
4.19
Sftpd
paviršiaus susijęs baltymų D
NM_009160
4.11
3.69
Nccrp1
nespecifinis citotoksinis ląstelių receptorių baltymų 1 homologas (zebrafish)
NM_001081115
3.81
Pkp4
plakophilin 4, stenogramą 1 variantas
NM_026361
3.54
1.09
Sprr2d
mažas prolino turtinga baltymų 2d
NM_011470
3.46
Gm14446
prognozuojama genas 14446, stenograma variantas 2
NM_001101605
3.45
Sprr3
mažą prolino turtinga baltymų 3
NM_011478
3.39
Sprr2i
mažas prolino turtinga baltymų 2I
NM_011475
3.31
Sprr1a
mažas baltymų 1A prolino turtinga
NM_009264
3.30
IVL
involucrin
NM_008412
3.08
Serpinb12
serino (arba cisteinas) peptidazės inhibitorius , virulentiškumo B (ovalbuminui) narys 12
NM_027971
3.02
Krt10
keratino 10
NM_010660
3,01 pervežimas Gm94
prognozuojama geną 94
NM_001033280
2.94
Krt13
keratino 13
NM_010662
2,94
Gsdmc2
gasdermin C2 stenograma variantas 2
NM_177912
2.88 pervežimas Lor
loricrin
NM_008508
2.84
Dmkn
dermokine, stenograma variantas 2
NM_172899
2.78
Ly6d
limfocitų antigenu 6 sudėtinga, lokusas D
NM_010742
2.69
Krt1
keratino 1
NM_008473
2.52
2 lentelė genų su downregulated išraiškos naudojant atjungimo vertę -2.5 kartus.
Genų simbolis

Aprašymas
GenBank skaičius

FC
KRL-PGR
Try4
tripsino 4
NM_011646
-12,14
Prss1
proteazės, serino, 1 (tripsino 1)
NM_053243
-10,57
Amy2a5
amilazės 2a5, kasos
NM_001042711
-9,85
Cela2a
chimotripsinas-kaip elastazė šeimos narys 2A
NM_007919
-7,59
-16,23
Gm12888
prognozuojama genas 12.888
NM_001033791 UAB - 7.12
Gdf9
augimo diferenciacija veiksnys 9
NM_008110
-7,04
Blm
žydi sindromas homologas (žmogaus), stenograma 1 variantas
NM_007550
-6,27
Pnlip
kasos lipazės
NM_026925
-6,23
-23,88
Cfd
papildyti faktoriaus D (adipsin)
NM_013459
-5,35
-27,45
Ctrb1
chymotrypsinogen B1
NM_025583
-5,00
Mug1
murinoglobulin 1
NM_008645
-4,30
Sostdc1
sklerostino domeną, turintį 1
NM_025312
-4,17
Tmed6
transmembraninis emp24 baltymų transportas domeną, turintį 6
NM_025458
-4,07
Cpa1
Karboksipeptidazė A1
NM_025350
-3,95
Slc27a2
tirpinio vežėjas šeima 27 (riebalų rūgščių transporteris) narys 2
NM_011978
-3,80
Adipoq
adiponektinas, C1q ir kolageno domeną, turintį
NM_009605
-3,74 -20,51

Car3
karboanhidrazės 3
NM_007606
-3,72
-15,39
EGF
epidermio augimo faktoriaus
NM_010113
-3,68
-3,71
Abpg
androgenų surišančio baltymo gamma
NM_178308
-3,67
Slc38a5
tirpinio vežėjas šeimos 38, valstybės 5
NM_172479
-3,64
chia
chitinase, rūgštus
NM_023186
-3,52
LOC638418
PREDICTED: panašus į Ela3 baltymų
XM_914439
-3,48
LOC100043836 pervežimas PREDICTED: panašus į ašarų androgenų surišančio baltymo deltoje, stenograma 1 variantas
XM_001481113
-3,41
EG640530
PREDICTED: prognozuojama genas, EG640530
XM_917532
-3,37
Nrn1
Neuritino 1
NM_153529
-3,36
Cela3b
chimotripsinas-kaip elastazė šeimos narys 3B
NM_026419
-3,32
-75,74
Spink3
serino peptidazės inhibitoriumi Kazal 3 tipas
NM_009258
-3,32
Scd1
Stearoilo-kofermento desaturazė 1
NM_009127
-3,27
"Ctrl
chimotripsinas-kaip
NM_023182
-3,19
Gper
G baltymu sujungtas estrogenų receptorių 1
NM_029771
-2,96
Sycn
syncollin
NM_026716
-2,91
Bhlha15
pagrindinė Helix-kilpa-Helix šeima, Valstybės A15
NM_010800
-2,77
Cpb1
karboksipeptidazės B1 (audinių)
NM_029706
-2,73
-18,22
Slc5a8
tirpinio vežėjas šeima 5 (jodido transporteris) narys 8
NM_145423
-2,68
2E1
citochromo P450, šeimos 2, pošeimiui e, polipeptidas 1
NM_021282
-2,65
Zg16
zymogen granulės baltymų 16
NM_026918
-2,57
3 lentelė funkcinės anotacija kategorijos genų reguliuojamų CA IX trūkumas.
Funkcinis Kategorija

Iš viso reguliuojamų genų
aktyvinama genus
Downregulated genus
vystymosi procesus *
20
13
7
keratinizacijos ir keratinocitų diferenciaciją,
8
8
0
struktūrinių molekulė veikla
13
13
0
embriono implantaciją, moterų nėštumo ir menstruacijų ciklą
3
3
0
ritminės procesas
4
3
1
Daugiafunkciniai organizmo procesą
5
5
0
ląstelių diferenciacijos
16
12
4
serino tipo endopeptidazės veikla, serino hidrolizės veikla ir serino tipo peptidazės veikla
9
3
6
proteolysis
15
6
9
peptidazės veikla
14
5
9
endopeptidazės veikla
10
4
6
tripsino ir chimotripsino veiklos
4
1 3
hidrolizės veikla
22
8
14
struktūrinių sudedamoji citoskeleto
5
5
0
Mobilusis komunikacijos
4
4
0
Metallocarboxypeptidase veikla, karboksipeptidazės veiklos ir metalloexopeptidase veiklos
3 0 3
Serino tipo endopeptidazės inhibitoriaus aktyvumą, endopeptidazės inhibitoriaus aktyvumą ir proteazės inhibitorius veikla
4
2
2
taksi ir chemotaksi
4
3 1
reagavimo į išorinį stimulą
7
4
3
imuninę sistemą procesas
10 5
5
gynybos reakcija
7
5
2
pozityviai reguliuoti ląstelių diferenciacijos pervežimas 3
2
1
PPAR signalizacijos kelias
3
0
3
Leukocitų migracija
3
2
1
* atstovas kategorija taip sutampančių kategorijų. epidermio morphogenesis, audinių morphogenesis, epidermio plėtra, ectoderm plėtra, audinių vystymasis, organų vystymasis, anatomijos struktūros vystymasis, anatomijos struktūrą morphogenesis, korinio vystymosi procesą, akytasis organizmo vystymuisi, ir epidermio ląstelių diferenciacijos
patvirtinimas microarray rezultatų KRL-PCR
pokyčiai ekspresijos lygio pasirinktų genų buvo patvirtinta ir mikrogardeliq rezultatai buvo patvirtinti KRL-PGR, naudojant tuos pačius RNR pavyzdžių tuos, kurie naudojami mikrogardeliq. Keturiolika genai su įsidėmėtina klosčių pokyčio vertės buvo pasirinktos tikrinami remiantis funkcinių anotacija rezultatus. Pasirinktos genai dalyvauja atstovai iš skirtingų funkcinių kategorijų. Trylika (92,9%) iš 14 genų parodė Współbrzmieniowy rezultatus tarp mikrogardeliq analizės ir KRL-PCR (1 ir 2 lentelės, 1 pav.) Vienintelis prieštaringa rezultatas buvo Pkp4
, kuris buvo aktyvinama pagal mikrogardeliq ir nepakeitė pagal KRL-PCR (1,09 karto). 1 pav tikrinimas mikrogardeliq duomenimis Car9 - /- pelių KRL-PGR. Įvairių nuorašai išraiška 6 Car9 pervežimas - /- pelių buvo, palyginti su 6 laukinio tipo kontrolės. rodomi normalizuotos vertės trijų dalių eksperimentams. A KRL-PGR analizė 6 genų su sukeltas išraiška. B KRL-PGR vertinimas 8 genų su nuslopintos išraiška. buvo nustatyti statistiškai reikšmingi skirtumai lyginant su laukinio tipo pelėms. * P < 0,05; ** P < . 0.01
Diskusijos
Ankstesnis tyrimas parodė hiperplazinį fenotipą skrandžio kūno gleivinės Car9
- /- pelių [16]. CA IX trūkumas lėmė perprodukcijos skrandžio kasyklų ląstelių ir mažinti pagrindinių ląstelių. Gana keista, skrandžio pH CA IX-stokojančių pelių išliko nepakitęs. Remiantis šių stebėjimų, galima daryti išvadą, kad pagrindinis vaidmuo CA IX į skrandžio gleivinės nėra susijęs su pH reguliavimas bet ji yra reikalingas normaliam skrandžio morfogenezę ir homeostazės per skrandžio gleivinės. Šiame darbe mes pranešime pakitimus iRNR išraiškos, kad galėtų prisidėti prie fenotipo pokyčius, teikiamais Car9
-deficient pelių pilvo. Tačiau vienas turi atsižvelgti į tai, kad kai kurie iš šių pokyčių gali tik atspindi skirtumus santykinių įvairių tipų ląstelių viduje skrandžio gleivinės
Kaip ir tikėtasi, Car9
-. /- Fenotipas pakeitė išraišką genų, dalyvaujančių vystymosi procesų ir ląstelių diferenciacijos. Vyriausiojo ląstelių Car9 išeikvojimas
- /- skrandžio gleivinė gali būti paaiškinamas tuo, didelė downregulation pagrindinio Helix-kilpa-spiralės šeimos narys A15 /Mist1
(Bhlha15
) genas, kuris yra B klasės pagrindinė Helix-kilpa-spiralė (bHLH) transkripcijos faktorius, kad eksponatų acinarinėse ląstelėms būdingas išraišką [19]. Mist1 genų ekspresija yra pastebėta įvairiausių audinių, serozinis tipo sekrecijos įskaitant kasos, seilių liaukos, vyriausiasis ląstelių, skrandžio, Paneth ląstelių plonojoje žarnoje, sėklinių pūslelių, ir ašarų liaukos [20]. Iš Mist1
blokų išbraukta normalu gleivinės kaklo ląstelių redifferentiation į zymogenic vyriausiųjų ląstelių kaip visų bazinių zymogen išskiriančių ląstelių Mist1
- /-. Pelėms rodyti kelis struktūrinius trūkumus [21]
Kitas įdomus kandidatas atsižvelgiant į ląstelių linijos? sutrikimo skrandžio epitelį CA IX-nepakankama pelių yra epidermio augimo faktoriaus
(EGF
), kuri turi išraišką, kai, palyginti su laukinio tipo pelių, kurios buvo žymiai sumažėjo. Tarp augimo faktorių, EGF šeima apima svarbius agentus skrandžio gleivinę. EGF viengrandžio polipeptidas pagal 53 amino rūgščių liekanų, kuri yra randama daugiausia iš pažandinių liaukų ir Brünner liaukos, virškinimo trakto [22]. EGF jungiasi ir aktyvina epidermio augimo faktoriaus receptoriaus, dėl ląstelių proliferacija, diferenciacijos, ir išlikimo [23]. Įdomu tai, kad keli tyrėjai pranešė, kad EGF receptorių yra praturtintas graužikų vyriausiųjų ląstelių [24, 25], o tai rodo, kad EGF funkcijos svarbą šių ląstelių. Todėl pakitimai EGF receptorių ligandų išraiškos ar, šiuo atveju, "EGF galėtų prisidėti prie diferenciacijos ir funkcijos vyriausiųjų ląstelių.
Vienas iš labiausiai aktyvinama genų šio tyrimo buvo išbrauktos piktybinių smegenų auglių 1
(Dmbt1
), kuri priklauso maitėda receptorių cisteino turtingas (SRCR) superfamily baltymų. Tai yra sekretuojamas ir membranos jungiasi baltymai, kurių SRCR domenų, kad yra labai konservatyvių žemyn į kempinės [26, 27] superšeimai. Iš DMBT1 išraiška yra didžiausia epitelyje ir paprastai pastebima viršūninio ląstelių paviršiuje arba luminal Egzokrininis išskyros. Pelėms, DMBT1 yra labiausiai išreikštas virškinimo sistemos [28]. DMBT1 siūloma būti auglio slopinamojo [26, 29, 30] ir /arba epitelinės diferenciacijos laipsnį [31], taip pat, kad jie turi vaidmenį įgimto imuninės sistemos ir uždegimas [32, 33] reguliatorius. DMBT1 yra kriptos ląstelių žmogaus, pelės ir triušio plonojoje žarnoje [31, 34, 35] ir kaklo srityje sveiko žmogaus skrandžio gleivinės [36], kuris yra daugiausia sudarytus iš kamieninių /kamieninių ląstelių. Tokiu būdu, tai genas yra gali būti susiję su fiziologiniu, atnaujinančio proceso virškinimo trakto epitelyje. Vaidmuo DMBT1 į įgimto imuniteto gynybos buvo įrodytas įvairių tyrimų. Žmogaus DMBT1 glikoproteinas, išreikštas seilių liaukos, kvėpavimo takų ir lytinių takų, jungiasi įvairūs patogenines bakterijas ir virusus [37-40]. Be to, išraiška pelės DMBT1 virškinimo trakte yra reguliuojama bakterijos [41, 42], ir jo išraiška yra padidinama infekcijos [43] metu. Taip pat buvo įrodyta, kad yra A Dmbt1
variantas alelio asociaciją su Krono liga ir yra saviraiškos lygius Dmbt1
sergančių uždegiminėmis žarnų ligos sunkumo [44] koreliacija.
Be to, DMBT1 prisijungia paviršinio aktyvumo baltymai SP-D ir SP-a. Tai yra collagen-, kurių sudėtyje yra (C tipas) kalcio priklausomą lektinai vadinami collectins kurie sąveikauja su glycoconjugates ir lipidų dėl mikroorganizmų paviršiaus daugiausia per savo angliavandenių pripažinimo srityse (CRD) [45]. SP-D ir SP-A dalyvauja imuninio funkcijas, įskaitant virusinės neutralizavimo, agregavimo ir žudymo bakterijų ir grybelių bei klirensas apoptozinių ir nudžiūvusiuose langelių diapazoną. Be imunologiškai plaučius, jie downregulate uždegimines reakcijas, tačiau, kai ginčijo su LPS ar apoptozinių ląstelių jie sukelia fagocitozę makrofagų, PRO uždegimo citokinų gamybą, ir stiprinimą įgyto imuninio atsako [46]. Įdomu tai, kad šiame tyrime, be to, Dmbt1
, paviršinio aktyvumo susijęs baltymas D
(Sftpd arba SP-D pervežimas) išraiška buvo labai sukeltas Car9
- /- pelės. Taigi, tiek Dmbt1
ir Sftpd ląstelę
rodo, kad KI IX trūkumas sukeltas imuninis procesą skrandžio gleivinę. Taip pat reikėtų pažymėti, kad CA IX buvo pasiūlyta įpareigoti dendritų ląstelių receptoriams tarpininkaujant būdu ir maitėda receptorių atrodo vaidina svarbų vaidmenį šiame procese [47]. Be to, CA IX atrodo, kad aktyvuoti imuninį atsaką taikant mechanizmą, tai būdingas temperatūrinio šoko baltymus. Taigi, CA IX galėjo tiesiogiai bendrauti su DMBT1 per maitėda receptorių.
Iš tiesų, iš Car9
geno sutrikimų dėl lemiamų keletą genų, kurie yra susiję su imuninės sistemos procesus. Tai patvirtina rezultatus iš ankstesnio tyrimo metu, kai skrandžio gleivine uždegimas buvo aptiktas kūno regione iš C57BL /6 dauguma Car9
- /- pelių [17]. Šioje studijoje, Il1rl1 /ST2
stenograma variantas 2 iRNR buvo labai sukeltas dėl CA IX trūkumas. Į Il1rl1 /ST2
genas yra interleukino-1 (IL-1) receptorius šeimos narys ir gamina tirpios sekretuojamą formą (sST2) ir transmembraninį formą (ST2L), koduojamos stenogramą variantai 2 ir 1, atitinkamai. Membrana-prijungti, sudaro išreiškiamas pirmiausia kraujodaros ląstelių ir tirpus forma yra daugiausia išreikšta fibroblastų [48]. Visų pirma, ST2L yra pageidautina, išreikštas graužikų ir žmogaus Th2 ląstelių ir gali būti naudojamas kaip tam tikrą žymeklio Th2 ląstelių in vitro
eksperimentų [49-52]. Todėl ST2L funkcija buvo pasiūlyta, kad jie koreliuoja su Th2 ląstelių medijuotos imunologinį atsaką ir IL-33, naujai atrado nario IL-1 citokinų šeimos, buvo pastebėtas tam tikrą ligando ST2L [53]. Įdomu tai, kad keli tyrimai parodė, kad tirpaus ST2 lygis serume yra padidėjusi astma ligos [54, 55]. Todėl, ji buvo pasiūlyta, kad tirpus ST2 taip pat gali vaidina svarbų vaidmenį Th2 ląstelių medijuotos ligų. Iš tikrųjų, tai buvo įrodyta, kad tirpus ST2 veikia kaip antagonistinio masalo receptorius IL-33, naudojant pelių timomos ląstelių linijos, EL-4, kuris stabiliai išreiškia ST2L, ir pelių modelį astmos [56]. Tai rodo, kad tirpus ST2 neigiamai moduliuoja Th2 citokinų gamybą, taikant IL-33 signalizacijos alerginio kvėpavimo takų uždegimu. Įdomu pažymėti, kad šiame tyrime, mRNR lygis IL-33 taip pat buvo padidėjusi ~ 2 kartus, nors šis pokytis nebuvo statistiškai reikšmingas. Taigi, atrodo tikėtina, kad CA IX kažkaip dalyvauja reguliavimo Th2 atsakymą.
CA IX taip pat galėtų prisidėti prie imuninės sistemos, kaip CA IX trūkumas plėtros žymiai downregulated žydi sindromas homologą (žmogaus)
geną (Blm
), kuris koduoja nuo ATF priklausomus DNR helikazės, kuris priklauso į evoliuciškai konservatyvią šeimos RecQ helicases [57]. Mutacija blm
sukelia retą žmogaus autosominiu recesyvinį sutrikimas vadinamas Bloomo sindromas (BS) Europos standartas, kuris yra būdingas ryškiai genomo nestabilumą. LST yra susijęs su augimo sulėtėjimu, gilus jautrumo dauguma vėžio rūšių, ir imunodeficitas [58], su pastarųjų dviejų funkcijų apskaitos ankstyvą mirtį [59]. Į BLM funkcijos buvo tik iš dalies apibūdina. Tačiau tai buvo įrodyta, kad BLM turi vaidmenį platinimo ir išlikimo tiek besivystančiose, tiek subrendusių T limfocitų, o jo išbraukta veda į Sugedo, T-ląstelių imunitetą [60]. Be to, sąlyga nokautas iš blm
prisidėjo prie pavojus B ląstelių kūrimą ir priežiūrą, stipriai sumažėja T ląstelių priklausomą ir -independent antikūnų atsakas po imunizacijos, o besivystančioms B ląstelių limfomų [61] polinkis. Todėl suprantama, kad Car9
- /- peles pažeista įgytas imuniteto atsaką
Netikėtas atradimas buvo, kad kelios mažos PROLINE turtingas baltymų
(Sprr
) buvo ypač aktyvinama įskaitant. Sprr1a
, Sprr2d
, Sprr2e
, Sprr2i
ir Sprr3
. Tačiau tik Sprr1a
indukcija buvo statistiškai reikšmingas. SPRR baltymai iš pradžių buvo nustatyta, kad žymenų galinių suragėjusių ląstelių diferenciacijos, kur jie yra pirmtakai iš cornified lėšomis [62]. Be to, SPRR baltymai yra išreikšta įvairiose nonsquamous audinių, ir jų biologinė funkcija yra ne tik struktūrinių baltymus cornified paketo [63]. Įrodyta, kad SPRR baltymai dalyvauti atsakant į įvairių įtempimų daugelyje audinių, be sluoksniuotoji epitelio. Į tulžies takų, SPRR2 prisijungę atrodo, kad prisidėti prie pakeitimo tulžies barjero sąlygomis streso [64]. Be to, SPRR1A buvo identifikuota kaip naują streso indukuojamąją vartotojų tarpininko iš gp 130 citokinų kardiomiocitų su kardioprotekcinių poveikio prieš išeminės streso [65]. Be to, pelėms, SPRR2A baltymas buvo pranešta, kad būti labai sukeltas skrandžio gleivinės užsikrėtę Helicobacter heilmannii
[66]. Be to, buvo pasiūlyta, kad SPRR1A yra regeneracija susijęs baltymas, nes jos indukcija neuronų traumos koreliuoja su regeneracinių pajėgumą, beveik visi sužeisti nugaros šaknelės neuronai išreikšti SPRR1A vieną savaitę po sėdimojo nervo sužalojimo [67]. Todėl, SPRR genai, matyt, sukeltas atsakas į skirtingų streso sąlygomis ir prisidėti prie ląstelių apsaugos, audinių remodeliavimo, ir /arba audinių regeneracijos. Atsižvelgiant į šias išvadas, atrodo tikėtina, kad CA IX trūkumas sukuria streso būklę skrandžio gleivinės, kuris veda į ląstelę kai kurių apsauginių veiksnių.
Mūsų analizė nustatė mRNR iš keturių narių tirpinio vežėjas šeimos baltymų turi būti misregulated į Car9
- /- pelių skrandžio gleivinė. Šie tirpinio vežėjas baltymai dalyvauja membranos transporto įvairių molekulių. Iš Slc9a3
išraiška buvo stipriai sukeltas, kadangi Slc27a2
, Slc38a5
išraiškos ir Slc5a8
buvo represuoti. Pagrindinė funkcija SLC9A3 ar NHE3 yra tarpląstelinio Na valiutos + už ląstelėje H + ir taip sukelti arba kilimą ląstelėje pH arba, jeigu kartu su kitų vežėjų, An ląstelių tūrio padidėjimu [veiksmų ,,,0],68]. Virškinimo trakte, SLC9A3 išreiškiamas viršūninio membranos ir perdirbimo endosomes iš klubinės žarnos, tuščiosios, storosios žarnos ir skrandžio [69]. Tolesni tyrimai yra reikalingi išaiškinti galimą sąveiką tarp CA IX ir SLC9A3 skrandžio gleivinę.
Keista, vieni downregulated genų Mes radome kelis genus virškinimą. Apėmė tripsino 1
, amilazės 2a5
, chimotripsinas-kaip elastazė šeimos narys 2A
ir kasos lipazė
statistiškai reikšmingų p reikšmės ir kiti, pavyzdžiui, chymotrypsinogen B1
, karboksipeptidazės A1
ir Karboksipeptidazė B1
su aptinkama nereikšmingais kiekiais p reikšmės. Šio konstatavimo POVEIKIS lieka neaiškus. Galimas paaiškinimas, tai gali būti, kad downregulation šių fermentų yra antrinis įvykis. Jei manoma, kad šie fermentai gaminami vyriausiųjų ląsteles, sumažintas skaičius vyriausiųjų ląstelių Car9
- /- pelių skrandžio gleivinė taip pat gali sukelti į fermentų jie gamina sumos sumažėjimą. Tačiau tikslus mechanizmas už šio reiškinio dar reikia išsiaiškinti.
Išvadas
Apibendrinant, CA IX trūkumas buvo parodyta pakeisti įvairių genų ekspresiją skrandžio gleivinę. Šalių, kuriose genų skaičius ir pokyčių mastas buvo santykinai didelė, tai rodo, kad KI IX turi nepaprastą vaidmenį skrandžio funkcijas. Mikrogardeliq analizė atskleidė keletą genus raidos procesus ir ląstelių diferenciacija, kuri galėtų paaiškinti ląstelių linijos sutrikimus skrandžio epitelio Car9
- /- pelių. Įdomu tai, kad kai kurie iš reguliuojamų genų nustatytų šiame tyrime dalyvauja virškinimo, taip pat funkcijų imuninių ir gynybos atsakymų. Ši išvada rodo, kad KI IX trūkumas kompromituoja imuninę sistemą skrandžio epitelio keliantis dar vieną vaidmenį šiame daugiafunkciniame fermento.
Metodai
Gyvūnų modelis ir audinių paruošimas
kartos tikslingai sutrikimų Car9
genas buvo anksčiau aprašyta Ortova Žarnyno et al. [16]. (tissue)
NM_029706
GGTTTCCACGCAAGAGAG
GTTGACCACAGGCAGAACA
Cym
chymosin
NM_001111143
ATGAGCAGGAATGAGCAG
TGACAAGCCACCACTTCACC
Dmbt1
deleted

• Skvanomos skrandžio: byla ataskaita
• Lokalizuota skrandžio amiloidozę diferencijuoti histologiškai iš Tarpikliai skrandžio vėžio naudojant endoskopinės gleivinės rezekcija: byla ataskaita