Globalni odgovor transkripcije na ugljične nedostatak anhydrase IX u miša želucu

Globalna transkripcije odgovor na ugljične nedostatak anhydrase IX u želucu miša
apstraktne pregled pozadini pregled ugljične anhydrases (CAS) su porodica enzima koji reguliraju pH homeostazi u različitim tkivima. CA IX je izuzetna član ove obitelji, jer osim osnovne funkcije CA, on je uključen u nekoliko fizioloških i patoloških procesa. Funkcije predložena za CA IX uključuju uloge u stanične adhezije i invazijom maligne stanice. Osim toga, CA IX vjerojatno regulira proliferaciju i diferencijaciju, koji je pokazao u Car9 pregled - /- miševa. Ovi miševi su imali želučane pit stanica hiperplaziju i iscrpljivanje glavnih stanica; Međutim, specifični molekularni mehanizmi koji stoje iza promatrane fenotipova ostaju nepoznati. Dakle, željeli smo ispitati učinak IX nedostatak kalcija na ekspresiju cijelog genoma gena u sluznici želuca. To je učinjeno pomoću Illumina Sentrix ®Mouse-6 Expression BeadChip polja. Ekspresija nekoliko gena s vrijednostima promjena značajna fold potvrđena QRT-PCR. Pregled Rezultati
IX nedostatak kalcija izazvao indukciju 86 gena i represiju od 46 gena u sluznici želuca. Bilo 92.9% podudarnosti između rezultata dobivenih analize mikropolja i QRT-PCR. Diferencijalno izraženi su geni uključeni oni koji su uključeni u razvojnim procesima i diferencijaciju stanica. Osim toga, CA IX nedostatak promijenile ekspresiju gena odgovornih za imuni odgovor i regulirani ekspresiju nekoliko probavnih enzima. Pregled Zaključci
Microarray analizom je utvrđeno nekoliko potencijalnih gena čija je promijenjena ekspresija može objasniti narušenu staničnu liniju fenotip u Car9 pregled - /- želučane sluznice. Rezultati su također pokazala novu ulogu za CA IX u regulaciji imunoloških procesa i probavu. Ovi rezultati pojačali koncept da je glavna uloga CA IX nije regulacija pH u sluznicu želuca. Umjesto toga, to je potrebno za pravilno funkcioniranje nekoliko fizioloških procesa pregled Pozadina pregled ugljične anhydrases (CAS) su porodica metalo cinka sadržavaju koji kataliziraju reverzibilnu hidrataciju ugljičnog dioksida u reakciji. CO 2 + H 2O ↔ H + + HCO 3 -. Oni sudjeluju u nekoliko fizioloških procesa, kao što su kiselo-bazne ravnoteže, CO 2 i HCO 3 - transport, disanje, resorpcija kosti, ureagenesis, gluconeogeneze, lipogenesis, izrada tjelesnih tekućina, i oplodnja [ ,,,0],1, 2]. Obitelj CA se sastoji od 13 aktivnih izoenzima u sisavaca, od kojih 12 su izraženi i funkcije kod ljudi [3]. CA izoenzima imati različite ekspresije tkiva uzorke, karakteristične subćelijski lokalizacije, kao i jedinstvene kinetički i inhibicijska svojstva.
CA IX dimemi protein povezan s stanične membrane [4, 5]. U zrelom obliku, CA IX se sastoji od N-terminalnog proteoglikana (PG) domene, CA katalitičke domene, transmembranske regije, te kratko intracitoplazmatskim repu na C-kraju [6]. CA IX je jedini član obitelji CA sadrži PG domenu uz CA domene. Prema tome, CA IX je predložen za sudjelovanje u procesima stanične adhezije. U stvari, koristeći MDCK (Madin-Darby psećeg bubrega) epitelnim stanicama, što je dokazano da CA IX smanjuje E-kadherina posredovano prianjanje stanica-stanica interakcije s P-katenina [7]. Pregled CA IX izražava u samo nekoliko normalna tkiva s izrazom kao najjači u čovjeka, štakora i miša želučane sluznice, gdje je prisutan od želučanih jame do dubine želučanih žlijezda [8, 9]. CA IX ograničen na bazolateralne površinu epitela i proizvodi sve glavne vrste stanica iz želučanog epitela. [8] CA IX je izuzetan član obitelji CA jer je izražena u nekoliko vrsta raka koje proizlaze iz CA IX negativnih tkivima uključujući bubrega, pluća, grlića maternice, jajnika, jednjaka i karcinoma dojke [6]. Međutim, rak želuca i prekanceroze pokazali smanjena ekspresija CA IX [10]. U tumorskim tkivima, CA IX je povezan s hipoksične posredovana s transkripcijski faktor hipoksijom inducibilni 1 (HIF-1), koji se veže na element hipoksija, ljudska prava, od CA9 pregled promotora [11]. U uvjetima hipoksije, stanice raka ovise uglavnom na anaerobni metabolizam u njihovoj proizvodnji energije. To anaerobni metabolizam tumora stvara višak kisele proizvode, kao što su mliječne kiseline i H + koji moraju biti istisnut iz unutrašnjosti stanice. Pokazano je da CA IX mogu doprinijeti zakiseljavanja hipoksičnog ekstracelularnom miljeu, čime tumorske stanice kako bi se neutralizirala unutarstaničnog pH [12]. U skladu s tim, CA IX prekomjerna ekspresija često ukazuje lošu prognozu i otpornost na klasične radio i kemoterapije [13]. Međutim, CA IX nije samo ograničena na hipoksije regijama tumora, što pokazuje da možda postoji neki drugi putevi koji reguliraju svoj izraz. U stvari, ekspresija CA IX može se inducirati u normoksičnim uvjetima po veliku gustoću stanica, a to regulacija posredovana s fosfatidilinozitol 3-kinaze (PI3K), signalne [14]. Štoviše, mitogen-aktivirane protein kinaze (MAPK) put sudjeluje u regulaciji CA izražavanja IX putem kontrole u CA9 pregled promotor obje HIF-1 ovisnim ili neovisnim signala [15]. Ovaj put također je povezana s PI3K i SP1 (specifičnost proteina 1) faktor transkripcije
generaciju Car9 pregled -. /- Miševa pokazala je da osim regulacije pH i stanične adhezije, CA IX posjeduje i druge funkcionalne uloge [16]. To Car9 pregled knockout miševa nisu pokazali abnormalnosti u rastu, reproduktivnom potencijalu i životni vijek. Međutim, CA IX nedostatak rezultiralo hiperplazije sluznice želuca. Hiperpla sluznica sadržana je smanjen povećan broj i udio sluzi za proizvodnju pit stanicama dok se broj i udio glavnih stanica. Ukupan broj parietalnim stanicama ostala nepromijenjena, i prema tome, CA IX deficijentne miševe je normalan želučanog pH, izlučivanje kiseline, i razine u serumu gastrina. Tako, ovi rezultati pokazuju da CA IX doprinosi kontrolu diferencijacije i proliferacije epitelnih staničnih loza u sluznicu želuca. Prethodna studija ispituje jesu li učinci IX nedostatak kalcija može se mijenjati pomoću high-sol dijeta, poznati ko-faktora karcinogeneze [17]. Ovi rezultati su pokazali da je visoko sol dijeta neznatno povećava žljezdani atrofiju u tijelu sluznici u Car9 pregled - /- miševima C57BL /6, a taj učinak nije primijećen u BALB /c miševa. Međutim, bez metaplastičnim ili displastične abnormalnosti su vidjeli u probavnom epitelu CA IX-manjkav C57BL /6 miševa. Dakle, ova promatranja sugeriraju da CA IX nedostatak sama ne može biti značajan čimbenik kancerogeni, ali bi mogao pokrenuti kancerogeni proces utječući proliferaciju stanica i /ili diferencijaciju u sluznici želuca.
Ova studija je osmišljen kako bi bolje razumjeli hiperplastične fenotip sluznicu želuca od Car9 pregled - /- miševa zato što su molekularni mehanizmi koji stoje iza njega su trenutno nepoznati. Osim toga, željeli smo točnije razjasniti funkcionalne uloge CA IX, jer postoji sve više dokaza koji pokazuju da se protežu daleko izvan regulaciju pH vrijednosti. Za ovu svrhu, izraz analiza genoma širom je izvršena. Analiza Microarray podataka otkriveno je nekoliko gena čija ekspresija je promijenjen zbog Car9 pregled poremećaja gena u želučanoj sluznici. pregled Rezultati
transkripcijsku odgovor na nedostatak Car9 u zidu želuca
želuca RNA iz 6 Car9 Netlogu - /- miševa i 6 divljeg tipa miševa analizirana je microarray. Analiza je pokazala 86 regulira prema gore gene i 46 regulirani geni, koristite puta promjene isključenje ± 1.4 za nad- i regulirani izraz, (vidjeti dodatne datoteke 1: Popis gena različito izražena u želucu Car9 pregled - /- miševi). To cut-off vrijednosti je predložen kao odgovarajuću razinu iznad koje postoji visoka korelacija između microarray i QRT-PCR podataka, bez obzira na druge čimbenike kao što su točke intenzitet i prag ciklusa [18]. Tor promjene u rasponu od 10,46 do -12.14. Ovdje, popis gena pomoću cut-off vrijednosti od ± 2,5 puta je prikazan (Tablice 1 i 2). Prilikom korištenja ove kriterije, sve gene sa značajno (p < 0,05) promijenjena ekspresija se prikazuju, odnosno 14 gena s induciranim izražavanja i 21 gena s potisnuti izražavanja. Popis svih reguliranih gena je funkcionalno bilješkama (vidi dodatne datoteke 2: Funkcionalna označavanje gena reguliranih u želucu Car9
knockout miševa), pokazujući obogaćivanje hidrolaza aktivnosti, razvojnih procesa, diferencijaciju stanica proteolizu, peptidaze aktivnosti, strukturna molekula aktivnost, a imunološki sustav procesa, među ostalima. Funkcionalne kategorije zapažanje i brojevi gen u svakoj kategoriji prikazane su u tablici 3.Table 1 gena sa regulira prema gore ekspresiju pomoću cut-off vrijednosti od 2,5 puta. Pregled Gene simbol
Opis
GenBank number

FC

QRT-PCR

Cym
chymosin
NM_001111143
10.46
19.66
Slc9a3
solute Nosač obitelj 9 (natrij /vodika izmjenjivač), član 3. pregled NM_001081060 pregled 8,07
10,72
U46068
cDNA slijed U46068, prijepis varijanta 2 pregled NM_153418 pregled 5,95
Dmbt1 pregled izbrisati malignih tumora mozga 1 pregled NM_007769 pregled 5,68 pregled 5.29 pregled Il1rl1 pregled interleukina 1 receptor-like 1, prijepis varijanta 2 pregled NM_010743 pregled 5,38 pregled 8.95 pregled Tm4sf5 pregled transmembranski 4 član superobitelji 5 pregled NM_029360 pregled 4,26 pregled 9130204L05Rik
Riken cDNA 9130204L05 gena
NM_001101461
4,19 pregled Sftpd pregled surfaktanta povezana proteina D pregled NM_009160
4.11 pregled 3,69 pregled Nccrp1 pregled, nespecifični protein citotoksičnih stanični receptor 1 homologni (zebraste ribice) pregled NM_001081115 pregled 3,81 pregled Pkp4 pregled plakophilin 4, prijepis varijanta 1 pregled NM_026361 pregled 3,54 pregled 1,09 pregled Sprr2d pregled malog prolin bogatom proteinima 2D pregled NM_011470
3,46 pregled Gm14446 pregled predvidio gen 14446, transkript varijanta 2
NM_001101605
3,45 pregled Sprr3
mali prolin-bogatih proteina 3 pregled NM_011478 pregled 3,39 pregled Sprr2i pregled, mali prolin-bogatih proteina 2I pregled NM_011475
3,31
Sprr1a pregled, mali prolin-bogatih proteina 1A pregled NM_009264
3.30
IVI
involucrin
NM_008412
3,08 pregled Serpinb12 pregled, serin (ili cistein) inhibitor peptidaze , clade B (ovalbumin), član 12 pregled NM_027971 pregled 3,02 pregled Krt10 pregled keratina 10 pregled NM_010660 pregled 3,01
Gm94
predvidio gen 94 pregled NM_001033280
2,94 pregled Krt13 pregled keratin 13 pregled NM_010662 pregled 2,94 pregled Gsdmc2 pregled gasdermin C2, transkript varijanta 2 pregled NM_177912 pregled 2,88
Lor pregled loricrin
NM_008508
2,84 pregled Dmkn pregled dermokine, transkript varijanta 2 pregled NM_172899
2,78 pregled Ly6d pregled limfocitni antigen 6 složen, locus D pregled NM_010742
2,69
Krt1 pregled keratin 1 pregled NM_008473
2,52 pregled Tablica 2 gena s regulirani izražavanja pomoću cut-off vrijednosti od -2.5 puta. pregled Gene simbol
Opis
GenBank broj
FC
QRT-PCR
Try4 pregled tripsina 4
NM_011646 pregled -12,14 pregled Prss1 pregled proteaze, serin, 1 (tripsin 1) pregled NM_053243 pregled -10,57 pregled Amy2a5 pregled amilaza 2a5, gušterače pregled NM_001042711
-9,85 pregled Cela2a pregled kimotripsinu elastaza obitelj, 2A član pregled NM_007919 pregled -7,59 pregled -16,23 pregled Gm12888 pregled predvidio gen 12.888 pregled NM_001033791 pregled - 7.12 pregled Gdf9 pregled čimbenika rasta diferencijacija 9 pregled NM_008110 pregled -7,04 pregled BLM pregled cvatu sindrom homologni (ljudski), transkript varijanta 1 pregled NM_007550 pregled -6,27 pregled Pnlip pregled, lipaza iz pankreasa pregled NM_026925 pregled -6,23 pregled -23,88 pregled CFD
nadopuniti faktor D (adipsina) pregled NM_013459 pregled -5,35 pregled -27,45 pregled Ctrb1 pregled kimotripsinogen B1 pregled NM_025583 pregled -5,00 pregled Mug1 pregled murinoglobulin 1 pregled NM_008645 pregled -4,30 pregled Sostdc1 pregled sclerostin domene sadrži 1 pregled NM_025312
-4,17 pregled Tmed6 pregled transmembranski emp24 sadrži protein prijevoz domene 6 pregled NM_025458 pregled -4,07 pregled Cpa1 pregled karboksipeptidazi A1 pregled NM_025350 pregled -3,95 pregled Slc27a2
rastvoren prijevoznik obitelj 27 (masna transporter kiselina), član 2. pregled NM_011978 pregled -3,80 pregled Adipoq pregled adiponektina, C1Q i kolagen domena sadrži pregled NM_009605 pregled -3,74 pregled -20,51 pregled Car3
ugljične anhidraze 3 pregled NM_007606 pregled -3,72 pregled -15,39 pregled EGF pregled čimbenika rasta epiderma pregled NM_010113 pregled -3,68 pregled -3,71
Abpg
androgena vezujući protein gama pregled NM_178308 pregled -3,67 pregled Slc38a5 pregled otopljene tvari nosača obitelji 38, člana 5. pregled NM_172479 pregled -3,64 pregled Chia pregled chitinase, kiseli pregled NM_023186
-3,52 pregled LOC638418
PREDICTED: slična Ela3 proteina pregled XM_914439 pregled -3,48 pregled LOC100043836
PREDICTED: slična suzne proteina delta androgena vežu, transkript varijanta 1 pregled XM_001481113 pregled -3,41 pregled EG640530 pregled PREDICTED: predviđeni gen, EG640530 pregled XM_917532 pregled -3,37 pregled Nrn1 pregled neuritin 1 pregled NM_153529 pregled -3,36 pregled Cela3b pregled kimotripsinu elastaza obitelj, član 3B pregled NM_026419 pregled -3,32 pregled -75,74 pregled Spink3 pregled inhibitora serin peptidaze, Kazal tip 3 pregled NM_009258
-3,32 pregled Scd1 pregled stearoil-koenzim A desaturaza 1 pregled NM_009127 pregled -3,27 pregled Ctrl
kimotripsinu pregled NM_023182 pregled -3,19 pregled Gper
G proteinski vezani estrogenski receptor 1 pregled NM_029771 pregled -2,96 pregled Sycn pregled syncollin pregled NM_026716 pregled -2,91 pregled Bhlha15 pregled osnovni spirala-loop-helix obitelj, član A15 pregled NM_010800 pregled -2,77 pregled Cpb1 pregled karboksipeptidaze B1 (tkiva) pregled NM_029706 pregled -2,73 pregled -18,22 pregled Slc5a8 pregled otopljena prijevoznik obitelj 5 (jodida transporter), član 8. pregled NM_145423 pregled -2,68 pregled Cyp2e1 pregled citokroma P450, obitelj 2, u podvrstu e, polipeptid 1 pregled NM_021282 pregled -2,65 pregled Zg16 pregled zimogen granule protein 16 pregled NM_026918 pregled -2,57 pregled Tablica 3 funkcionalne kategorije primjedba za genima propisanim IX nedostatak kalcija. pregled Funkcionalna kategorija pregled
Ukupno regulirani geni pregled
regulira prema gore gene
regulirani geni
razvojnih procesa *
20 pregled, 13 pregled 7
keratinizacije i diferencijacijom keratinocita
8 pregled 8
0 pregled strukturne molekule aktivnost
13 pregled, 13 pregled, 0
implantacija embrija, žena trudnoću i menstrualni ciklus pregled 3
3
0 pregled Ritmička proces pregled 4 pregled 3
1 pregled procesa Multi-organizma pregled 5
5
0 pregled staničnom diferencijacijom pregled 16
12 pregled 4 pregled, serin tipa endopeptidaze aktivnost, serin hidrolaza aktivnost, a serin tipa peptidaza aktivnost pregled 9
3
6
Proteoliza pregled 15 pregled 6
9 aktivnost pregled peptidaza
14 pregled 5
9 pregled djelovanja endopeptidaze
10 pregled 4
6 pregled tripsin i kimotripsin aktivnost pregled 4
1 pregled 3 pregled hidrolaze aktivnost
22 pregled, 8
14 pregled Strukturna sastavnica citoskeleta pregled 5
5
0 pregled Cell komunikacija Netlogu 4
4
0 pregled Metallocarboxypeptidase aktivnosti, karboksipeptidaze aktivnost i metalloexopeptidase aktivnost pregled 3
0 pregled 3 pregled, serin tipa inhibitora endopeptidaze aktivnost, aktivnost inhibitora endopeptidaze i inhibitora proteaze aktivnost
4
2 pregled, 2
taksija i kemotaksiju
4 pregled 3
1 pregled odgovor na vanjski podražaj Netlogu 7 pregled 4 pregled 3 pregled imunološkog sustava proces pregled odgovor 10 pregled 5
5 pregled obrane pregled, 7
5
2 pregled Pozitivan regulaciju diferencijacije stanica
3 Netlogu 2 pregled, 1 pregled PPAR signalnog puta pregled 3
0 pregled 3
migracije leukocita pregled 3. pregled 2 pregled, 1 Netlogu * predstavnik kategorija za sljedeće preklapajuće kategorije:. pokožica morfologije, morfologije tkiva, razvoj epiderme, razvoj ektoderm, razvoj tkiva, razvoj organa, razvoj anatomskih struktura, anatomska struktura morfologije, stanični razvojni proces, višestanični razvojnih organskim, i diferencijacije epidermalna stanica
Potvrda rezultata microarray strane QRT-PCR pregled Promjene u razinama ekspresije odabranih gena su potvrđene, a rezultati microarray su potvrđene od strane QRT-PCR korištenjem istih uzoraka RNK onih koji se koriste za microarray. Četrnaest gene s istaknutim fold vrijednosti promjena bili odabrani za validaciju na temelju rezultata funkcionalne komentaru. Odabrane geni uključeni predstavnici iz različitih funkcionalnih kategorija. Trinaest (92,9%) od 14 gena pokazala je saglasan rezultata između microarray analize i QRT-PCR (tablice 1 i 2, slika 1). Jedini proturječan rezultat je bio Pkp4 pregled, koji je regulira prema gore prema microarray i ne mijenjaju se u skladu s QRT-PCR (1,09 puta). Slika 1 Provjera microarray podataka iz Car9 - /- miševa QRT-PCR. Ekspresija različitih transkripata u 6 Car9
- /- miševa u usporedbi s onom u 6 kontrolama divljeg tipa. prikazani su normalizirane vrijednosti trostrukih pokusa. A, QRT-PCR analiza 6 gena s induciranim izražavanja. B, QRT-PCR procjena 8 gena s potisnuti izražavanja. Statistički značajne razlike u odnosu na divlji tip miševa određena. * P < 0,05; ** P < . 0.01 pregled Rasprava pregled prethodna studija pokazala je hiperplastične fenotip želučane sluznice tijela u Car9 pregled - /- miševa [16]. CA IX nedostatak je dovelo do hiperprodukcije želučanih pit stanica i smanjenje glavnih stanica. Sasvim neočekivano, želučani pH CA IX-deficijentnih miševa ostao nepromijenjen. Na temelju tih promatranja, može se zaključiti da je glavna uloga CA IX u sluznicu želuca se ne odnosi na reguliranje pH, ali to je potrebno za normalan želučane morfogeneze i homeostazu unutar želučane sluznice. U ovom radu, prijaviti promjene u ekspresiji mRNA koje bi mogle pridonijeti fenotipskih promjena prijavljenih u želucu Car9 pregled -deficient miševa. Međutim, treba uzeti u obzir da su neki od tih promjena može samo odražavati razlike u relativnim omjerima različitih tipova stanica u sluznici želuca
Kao što se i očekivalo, Car9 pregled -. /- Fenotip promijenio izraz od gena koji sudjeluju u razvojnim procesima i diferencijaciju stanica. Iscrpljivanje glavnih stanica u Car9 pregled - /- želučane sluznice može objasniti značajnim silazni osnovne helix-loop-helix obitelji, A15 član /Mist1 pregled (Bhlha15 pregled) gena, koja je klasa B osnovni spirala-loop-helix (bHLH) transkripcijski faktor koji pokazuje stanica specifičan izraz zrnastih [19]. Izraz Mist1 gena zabilježen je u široku lepezu tkiva s seroznog izlučivanja tipa, uključujući i gušterača, žlijezda slinovnica, glavni stanice želuca, Paneth stanice tankog crijeva, sjemene vrećice i suznim žlijezdama [20]. Brisanje Mist1 pregled blokova normalno redifferentiation sluznice grla stanica u zymogenic glavnih stanica kao i svi bazalnih stanica zimogenom izlučuju u Mist1 pregled - /-. Miševi pokazuju više strukturnih defekata [21] pregled Još jedan zanimljiv kandidat s obzirom na staničnu liniju poremećaja u želučanom epitela CA IX-deficijentnih miševa je epidermalni faktor rasta pregled (EGF pregled), koji je izraz koji je značajno smanjen u odnosu na miševa divljeg tipa. Među faktorima rasta, obitelj EGF uključuje važne tvari za želučane sluznice. EGF je polipeptid jednolančani ostataka 53 amino kiseline, koji se nalaze uglavnom u submandibilarne žlijezde i Brunner u žlijezdama gastrointestinalnog trakta [22]. EGF veže i aktivira receptor faktora rasta dobivenog u staničnu proliferaciju, diferencijaciju i preživljavanje [23]. Zanimljivo, nekoliko istraživači su objavili da se EGF receptora obogaćeni u glavni stanicama štakora [24, 25], što ukazuje na važnost EGF funkcija u ovim stanicama. Stoga promjene u ekspresiji EGF receptor liganda ili, u ovom slučaju, EGF moglo pridonijeti diferencijaciju i funkciju glavnih stanica.
Jedan od najjače regulira prema gore gena ovog istraživanja bio je izbrisan u zloćudnim tumorima mozga 1
(Dmbt1 pregled), koja spada u bogatom cisteinom (SRCR) superobitelji scavenger receptor proteina. To je nadporodica izlučenih membranu vezani proteini, SRCR domene koje su visoko konzerviranih do spužvi [26, 27]. Izraz DMBT1 je najviše u epitelu i obično se promatraju na površini apikalni stanica ili luminalnih egzokrine sekreta. Kod miševa, DMBT1 je najjače izražen u gastrointestinalnom sustavu [28]. DMBT1 Predloženo je da se tumor supresor [26, 29, 30] i /ili regulator epitelne diferencijacije [31], kao i da ulogama u urođeni imunitet i upale [32, 33]. DMBT1 se nalazi u kripti stanicama čovjeka, miša i zeca tankog crijeva [31, 34, 35] i vratu regiji normalne ljudske želučane sluznice [36], koji se uglavnom sastoje od matičnih /ishodišnih stanica. Tako, ovaj gen potencijalno uključen u fiziološkoj obnavljajući proces gastrointestinalnog epitela. Uloga za DMBT1 u imunog obrani je pokazao u različitim studijama. Ljudski DMBT1 glikoprotein, izražena u žlijezdama slinovnicama, dišnih puteva i genitalnog trakta, veže raznih bakterijskih patogena i virusa [37-40]. Osim toga, ekspresija mišjeg DMBT1 u gastrointestinalnom traktu je regulirano bakterija [41, 42], a njegova ekspresija se povećava tijekom infekcije [43]. Ona je također pokazala da postoji povezanost jednog Dmbt1 pregled varijanta alela od Crohnove bolesti, a postoji korelacija razine ekspresije Dmbt1 Netlogu s upalnim težine crijeva bolesti [44].
Nadalje, DMBT1 veže Površinski aktivne tvari proteina SP-D i SP-a. To su collagen- sadrže, (C-tip) kalcij-ovisne lektini nazivaju collectins koji stupaju u interakciju sa sluzi i lipida na površini mikroorganizama uglavnom preko svoje domene prepoznavanja ugljikohidrat (CRD) [45]. SP-D i SP-A koji su uključeni u rasponu imunoloških funkcija, uključujući virusne neutralizacije, agregacija i ubijanja bakterija i gljivica i vrijeme apoptotskih i nekrotične stanice. U imunološki naivne pluća, oni potiskuju upalne reakcije, kada je izazvan s LPS ili apoptičkih stanica što potiču fagocitozu pomoću makrofaga, pro-upalne proizvodnje citokina, i poboljšanje adaptivnih imunosnih odgovora [46]. Zanimljivo je da je u ovom istraživanju, osim Dmbt1 pregled, izraz surfaktant protein povezan D Netlogu (Sftpd ili SP-D
) vrlo je izazvan u Car9 pregled - /- miševa. Dakle, uzlazni oba Dmbt1 Netlogu i Sftpd pregled ukazuju na to da nedostatak kalcija IX inducirani imuni proces u sluznici želuca. Također se treba naglasiti da CA IX Predloženo je da se vežu na dendritične stanice na način receptor-posredovane i čistača receptori imaju važnu ulogu u ovom procesu [47]. Osim toga, CA IX čini se aktivira imuni odgovor mehanizmom karakteristika da proteini toplinskog šoka. Dakle, CA IX može izravno komunicirati s DMBT1 putem smetlar receptora.
U stvari, ometanje Car9 pregled gena uzrokovane neregularnost nekoliko gena koji su uključeni u imunološkim procesima. To potvrđuje rezultate iz prethodne studije u kojoj je upala želuca submukozna otkriven u tijelu regije u većini C57BL /6 Car9 pregled - /- miševa [17]. U ovom istraživanju, Il1rl1 /ST2 pregled transkripta varijanta 2 mRNA vrlo je izazvan zbog nedostatka IX CA. U Il1rl1 /ST2 pregled gen član interleukina-1 (IL-1), obitelj receptora i daje topivi izlučeni oblik (sST2) i oblik transmembranski (ST2L), kodirani od transkripta varijante 2 i 1, redom. Oblik membranski izražava ponajprije hematopoetskih stanica, a topivi oblik uglavnom izražen fibroblastima [48]. Posebno, ST2L se prioritetno eksprimira u miša i čovjeka i Th2 stanice mogu se koristiti kao biljeg specifičan za Th2 stanice u in vitro eksperimentima
[49-52]. Dakle, funkcija ST2L je sugerirao da korelira s Th2 imunoloških odgovora i IL-33, nedavno otkrivenoj član citokina obitelji IL-1 posredovanu stanicama, je prijavljen kao specifični ligand za ST2L [53]. Zanimljivo, veći broj studija pokazao je da je razina topljivog ST2 u serumu je povišena u astmatičnih oboljenja [54, 55]. Stoga, predloženo je da topljivi ST2 može također igrati ključnu ulogu u Th2 stanica posredovane bolesti. U stvari, pokazalo se da je topljivi ST2 djeluje kao antagonističke Decoy Receptor za IL-33, upotrebom mišjeg timoma staničnu liniju, EL-4, koja stabilno eksprimira ST2L i mišjem modelu astme [56]. To sugerira da topljivi ST2 negativno modulira produkciju Th2 citokina putem IL-33 prijenos signala u alergijskoj upali dišnih puteva. Zanimljivo je napomenuti da je u ovom istraživanju, razina mRNA IL-33 je također bio povišen ~ 2 puta, iako je ta promjena nije bila statistički značajna. Dakle, čini se vjerojatnim da CA IX nekako je uključen u regulaciju Th2 odgovora.
CA IX također može doprinijeti razvoju imunološkog sustava kao IX nedostatak kalcija značajno regulirani na cvatu sindrom homologa (ljudski)
gen (BLM pregled), koji kodira ATP-ovisne DNA uzvojnicu, koji pripada evolucijski konzervativan obitelji recQ helicases [57]. Mutacija BLM pregled uzrokuje rijedak ljudski autosomno recesivni poremećaj zvan Bloomova sindrom (BS), koji se karakterizira izraziti genomske nestabilnosti. BS je povezana sa usporavanja rasta, duboke osjetljivosti na većinu vrsta raka, te imunodeficijencije [58], a posljednje dvije značajke računovodstvo prerane smrti [59]. Funkcije BLM su samo djelomično karakterizira. Međutim, pokazalo se je da BLM ima ulogu u proliferaciji i preživljavanju obje razvoju i zrele T-limfocita, a brisanje dovodi do defektnih imuniteta T-stanica [60]. Osim toga, uvjetno nokaut od BLM pregled doprinijeli ugrožena razvoju i održavanju B-stanica, snažno i nagluhe T stanice ovisnim ili neovisnim odgovor antitijela nakon cijepljenja, a sklonost razvoju limfoma B stanica [61]. Stoga je razumljivo da Car9 pregled - /- miševi su ugrožena stečene imunosti odgovora
neočekivana spoznaja bila je da je nekoliko malih prolin-bogata proteinima
(Sprr
) su posebno regulira prema gore, uključujući. Sprr1a pregled, Sprr2d pregled, Sprr2e pregled, Sprr2i pregled i Sprr3 pregled. Međutim, samo indukcija Sprr1a
je statistički značajno. SPRR proteini prvobitno identificirani kao markeri za terminalne diferencijacije ljuskavih stanica gdje su prekursori rožnatih omotača [62]. Osim toga, SPRR proteini se eksprimiraju u različitim tkivima nonsquamous i njihova biološka funkcija nije ograničen na strukturnih proteina omotača rožnatih [63]. Pokazano je da SPRR proteini sudjeluju u odgovoru na različite sile u mnogim tkivima bez epitela. U bilijarnog trakta, članovi SPRR2 pojavljuju pridonijeti izmjeni bilijarnog barijere u uvjetima stresa [64]. Isto tako, SPRR1A je identificiran kao novi stresa induciranog nizvodno medijatora gp130 citokina u kardiomiocitima s kardioprotektivnom djelovanjem protiv ishemijski stresom [65]. Nadalje, u miševa, SPRR2A protein je izvijestila da se vrlo induciran u sluznici želuca zaražena bakterijom Helicobacter heilmannii Netlogu [66]. Osim toga, to je sugerirao da SPRR1A je regeneracija protein povezan jer mu je indukcija u ozljeda živčanih stanica u korelaciji s regenerativne sposobnosti, a gotovo svi ozlijeđeni neuronima dorzalnog korijenskog ganglija izražavanja SPRR1A tjedan dana nakon bedreni ozljede živaca [67]. Stoga SPRR gena vjerojatno su inducirana u odgovoru na različite stresne uvjete i doprinose zaštiti stanica, obnove tkiva, i /ili regeneraciju tkiva. U svjetlu ovih nalaza čini se vjerojatnim da je nedostatak CA IX stvara stanje stresa u sluznici želuca, što dovodi do pojačanja djelovanja nekih zaštitnih čimbenika.
Naše analize identificirani mRNA od četiri člana otopljena prijevoznik obitelji proteina koji se misregulated u Car9 pregled - /- miševa sluznicu želuca. Ovi proteini rastvoren prijevoznik sudjeluju u membranskog transporta raznih molekula. Izraz Slc9a3 Netlogu snažno je inducirana, dok je ekspresija Slc27a2 Netlogu, Slc38a5 Netlogu i Slc5a8 pregled je potisnuto. Osnovna funkcija SLC9A3 ili NHE3 je razmjena izvanstanične Na + za unutarstanični H +, stoga uzrokovati porast intracelularne pH ili, ako je u kombinaciji s djelovanjem drugih prijevoznika, povećanje volumena stanica [ ,,,0],68]. U gastrointestinalnom traktu, SLC9A3 izražava u vanjskoj membrani i recikliranje endosomima ileuma, jejunum, debelog crijeva i želuca [69]. Potrebna su daljnja istraživanja kako bi se razjasnila moguću interakciju između CA IX i SLC9A3 u sluznici želuca.
Začudo, među regulirani geni koje smo pronašli nekoliko gena koji su uključeni u probavu. Među njima su tripsin jedan pregled, amilaza 2a5 pregled, kimotripsinu elastaza član obitelji 2A pregled i lipaze pregled pankreasa sa statistički značajnim p-vrijednosti i drugima, kao što su kimotripsinogen B1 Netlogu, karboksipetidaze A1 pregled i karboksipeptidaze B1 pregled sa nonsignificant p-vrijednosti. Implikacija ovog nalaza nije jasan. Moguće objašnjenje za to može biti da regulacija ovih enzima je sekundarni događaj. Ako se pretpostavi da su ti enzimi proizvode glavnih stanica, smanjen broj glavnih stanica u Car9 pregled - /- miševa želučane sluznice mogu uzrokovati smanjenje u iznosu od enzima koje oni proizvode. Međutim, točan mehanizam iza ovog fenomena Ostaje da se razjasni.
Zaključci pregled Zaključno, nedostatak CA IX je pokazalo da mijenja ekspresiju različitih gena u želučanoj sluznici. Broj pogođenih gena i veličina promjene bile su relativno visoka, što ukazuje da je CA IX ima izuzetnu ulogu u želučanih funkcija. Microarray analiza otkrila je nekoliko gena koji su uključeni u razvojnim procesima i diferencijacije stanica, što bi moglo objasniti staničnu liniju poremećaj u želučanoj epitelu Car9 pregled - /- miševa. Zanimljivo je da su neki od reguliranih gena identificiranih u ovoj studiji su uključeni u probavu, kao i funkcije imunološkog i obrambene reakcije. Ovo otkriće sugerira da je nedostatak CA IX kompromise imunološki sustav u želučanoj epitela što podrazumijeva još jednu ulogu za ovaj višenamjenski enzima.
Metode pregled modela životinja i priprema tkivo pregled generacija ciljanim raskidanjem Car9 Netlogu gen je prethodno opisano u Gut Ortova sur. [16]. (tissue)
NM_029706
GGTTTCCACGCAAGAGAG
GTTGACCACAGGCAGAACA
Cym
chymosin
NM_001111143
ATGAGCAGGAATGAGCAG
TGACAAGCCACCACTTCACC
Dmbt1
deleted

• Švanom želuca: slučaj report
• Lokalizirani želučane amiloidozu diferenciranu histološki od scirrhous raka želuca pomoću endoskopske sluznice resekcija: slučaj report