PLoS One: N-terminális polipeptid annexin A2 Csökkenti Fertőzés Mycoplasma hyorhinis gyomorrák Cells

absztrakt katalógusa

Mycoplasma fertőzés az emberi és szennyeződés sejttenyészetekben világszerte problémát. A gyógyszerek jelenleg rendelkezésre álló megelőzésére vagy kezelésére Mycoplasma fertőzés szenvednek alacsony érzékenység, erős ellenállást és nagy toxicitás. A korábbi munka azt mutatta, hogy Mycoplasma hyorhinis katalógusa ( M katalógusa. hyorhinis katalógusa) fertőzés által közvetített kölcsönhatás p37 a M katalógusa. hyorhinis katalógusa és annexin A2 (ANXA2) gazdasejt, azonban a transzlációs értéke ennek a mechanizmusnak ismeretlen volt. Itt, mi szintetizált N-terminális a ANXA2 polipeptid (A2PP), és megállapította, hogy a A2PP csökkentheti a fertőzés M
. hyorhinis katalógusa gyomorrák sejtek és a blokk M katalógusa. hyorhinis katalógusa fertőzés okozta sejtek migrációját. Továbbá azt találtuk, hogy A2PP csökkentheti M
. hyorhinis katalógusa szennyeződése áthaladás sejteket. Továbbá, míg a kereskedelmi antibiotikumok általánosan használt sejttenyésztési, hogy megakadályozzák M
. hyorhinis katalógusa fertőzés A2PP bizonyította nagyobb hatékonyság, de az alacsony toxicitása a sejtek szaporodását. Így a tanulmány először mutatta A2PP potenciális kezelésére és megelőzésére M katalógusa. hyorhinis katalógusa fertőzés.

Citation: Yuan S, Qu L, Shou C (2016) N-terminális polipeptid annexin A2 Csökkenti Fertőzés Mycoplasma hyorhinis katalógusa gyomorrák sejtek . PLoS ONE 11 (1): e0147776. doi: 10,1371 /journal.pone.0147776 katalógusa

Szerkesztő: Gernot Zissel, Universitätsklinikum Freiburg, Németország katalógusa

Beérkezett: október 16, 2015; Elfogadva: január 7, 2016; Megjelent: január 26, 2016 katalógusa

Copyright: © 2016 Yuan et al. Ez egy nyílt hozzáférésű cikk feltételei szerint terjeszthető a Creative Commons Nevezd meg! Licenc, amely engedélyezi a korlátlan használatát, a forgalmazás és a reprodukció bármilyen adathordozón, feltéve, hogy az eredeti szerző és a forrás jóváírásra. Katalógusa

Az adatok elérhetősége: minden releváns adatok a papírra. Microarray adatok már letétbe NCBI Gene Expression Omnibus (GEO) (csatlakozás no.GSE73777). Katalógusa

Forrás: Támogatók Nemzeti Természettudományi Alapítvány Kína (81572532). http://www.nsfc.gov.cn/publish/portal1/. SCC megkapta a támogatást. A finanszírozók nem volt szerepe a tanulmány tervezés, adatgyűjtés és elemzés, döntés, hogy közzéteszi, vagy a készítmény kézirat. Katalógusa

Érdekütközés: A szerzők kijelentették, hogy nem ellentétes érdekek léteznek. Katalógusa

Bevezető

A kórokozó mycoplasma beleértve Mycoplasma pneumoniae ( M katalógusa. pneumoniae katalógusa), mycoplasma hyorhinis ( M katalógusa. hyorhinis katalógusa), szájon át mycoplasma ( M katalógusa. szájon át katalógusa) és Mycoplasma genitalium ( M katalógusa. genitalium katalógusa), osztályba tartoznak Mollicutes, amely a legkisebb mikroorganizmus él jellegű, és ismétlődő függetlenül [1-2]. Számos tanulmány kimutatta, hogy a fertőzés ilyen mycoplasma társult daganat kialakulásában [3-8]. M katalógusa. orale
okoz kromoszóma rendellenesség a humán diploid sejteken, és indukálja sejt transzformáció [6]. Fertőzés M katalógusa. hyorhinis katalógusa vagy M katalógusa. genitalium katalógusa növelheti a migráció és invazív prosztata hámsejtek [3]. M katalógusa. hyorhinis katalógusa fertőzés összefüggésbe hozták arthritis, serositis, meddőség és a rák az emberi [9-12]. Katalógusa

Továbbá, mycoplasma szennyeződés sejttenyészetben egy komoly probléma, és az arány a folyosón sejtek fertőzött Mycoplasma magas. Sejtkultúra széles körben használják az élettudományok, például az alapkutatás, a klinikai vizsgálatok kutatás, fejlesztés és gyártás a biológiai termékek, valamint a területén gyógyászati ​​és vakcina előállítására. Megakadályozza a sejtek mikrobiológiai szennyeződés fontos biztosítani a kutatás minőségét. A mikoplazma-szennyeződés a leggyakoribb problémát sejttenyészetben egy előfordulási gyakorisága 30% -60% [1]. Kimutatták, hogy a négy faj mikopiazmák véve több mint 95% -a fertőzött sejt kultúra, beleértve a M katalógusa. szájon át katalógusa, arginin mycoplasma ( M katalógusa. arginini katalógusa), M katalógusa. hyorhinis katalógusa, és Levin nem acholeplasma ( Egy fiatal. laidlawii katalógusa) [13,14,15,16]. Mivel a kis méretű, mycoplasma alig találhatók fénymikroszkóp alatt, és könnyen figyelmen kívül hagyja a kutatók. Az utóbbi években számos használt antibiotikumok Mycoplasma kezelés többször eredményezte a megjelenése Mycoplasma ellenállás. Ezen okok miatt elengedhetetlen, hogy új szerek megelőzésére vagy csökkentésére mycoplasma fertőzés. Katalógusa

A korábbi munka azt mutatta, hogy M katalógusa. hyorhinis katalógusa fertőzés függ a kölcsönhatás a p37 (nagy membrán fehérjét M katalógusa. hyorhinis katalógusa), valamint a fogadó ANXA2 keresztül az N-terminális domént. Azt is megállapították, poliklonális ellenanyagot p37 blokkolhatják a fertőzés M katalógusa. hyorhinis katalógusa és csökkenés M katalógusa. hyorhinis katalógusa -promoted migráció gyomorrák sejt [17]. Ezek alapján felfedezések, azt emelt hipotézist, hogy a peptid, szintézispélda szerinti aminosav-szekvenciáját ANXA2 N-terminális régiót (a 1 ^{ST 30 th AA, itt megnevezett ezt a peptidet mint A2PP), blokkolhatják M katalógusa. hyorhinis katalógusa fertőzés keresztül versenyben ANXA2 és esetleg használható a gyógyszer megakadályozza M katalógusa. hyorhinis katalógusa fertőzés sejttenyészetben. Ebben a tanulmányban megvizsgáltuk ezt és összehasonlította a A2PP más gyógyszerekkel megelőzésében M katalógusa. hyorhinis katalógusa fertőzés.}

Anyagok és módszerek katalógusa

Cell Culture katalógusa

AGS gyomorrák sejtvonal az American Type Culture Collection (ATCC). BGC823 gyomorrák sejtvonalat hoztunk létre a Peking Egyetem Népi Kórház és vásároltunk a Cell Culture Center a kínai Orvostudományi Akadémia (Peking, Kína). AGS és BGC823 sejteket tenyésztettünk RPMI 1640 tápközegben 10% magzati borjúszérummal nyert Invitrogen (Carlssbab, CA, USA). Mycoplasma tesztet végrehajtani, mielőtt minden új kísérletet PCR amplifikáció a M katalógusa. hyorhinis p37 katalógusa.

Mycoplasma Szaporítás és Co-Culture katalógusa

Mycoplasma szaporítás és a társ-kultúra végeztük a korábban leírtak szerint [17,18,19]. Katalógusa

antitestek és reagensek katalógusa

Anti-p37 monoklonális antitest PD4 keletkezett és ahol korábban [5,20,21]. Poliklonális anti-p37 ellenanyagot a immunizálunk nyúl GST-p37 fúziós fehérjét követően a szokásos protokoll alkalmazásával. Anti-EGFR és anti-foszfo-EGFR vásárolt a Cell Signaling Technology (CST, USA). Anti-ANXA2 származott Novus Biotechnology (Novus Biotechnology, Amerikai Egyesült Államok). Anti-foszfo-ANXA2 volt a Santa Cruz (Santa Cruz, CA, USA). A2PP (1 ^{st 30 th aa) és a különböző csonkított A2PP peptidek, beleértve A2PP-ND4 (5 th 30 th aa), A2PP-ND8 (9 edik 30 th aa), A2PP-Nd12 (13 rd 30 th aa), A2PP-Nd16 (17 th 30 th aa), A2PP-CD4 (1 st 26 th aa), A2PP-CD8 (1 st 22 nd aa), A2PP-CD12 (1 st 18 th aa), A2PP- CD16 (1 st 14 th aa) együtt random kontroll peptideket (coNP) állítottam elő Sbsbio (Peking, Kína). Az antimikrobiális hatású mycoplasma I (MYCO I) és mycoplasma II (MYCO II) vásároltunk a M &C géntechnológia (Peking, Kína). Ciprofloxacin (CIP) volt a Double-Crane Pharm (Peking, Kína). Katalógusa}

kimutatása M katalógusa. hyorhinis katalógusa szerint kvantitatív PCR (qPCR) hotelben

A DNS-t kivonjuk AGS vagy BGC823 sejtek után M katalógusa. hyorhinis
fertőzés DNS lízis-pufferben (50 mM Tris, pH = 8,5, 1 mM EDTA, 0,5% Tween-20, és 200 mg /l proteináz K) szabvány szerinti protokollal. qPCR végeztük 30 ng DNS-t és SYBR Green Real-time PCR 2 × premix reagenskészlet (Takara, Otsu, Japán) alkalmazásával lépés rendszer ABI (Foster City, CA, USA). A reakció programok és p37 katalógusa specifikus primereket (előre: 5'-TATCTCATTGACCTTGACTAAC-3 "fordított: 5'-ATTTTCGCCAATAGCATTTG-3 ') számoltak be korábban [22]. Összehasonlítani M katalógusa. hyorhinis
DNS-szint a sejtekben, GAPDH katalógusa (Forward: 5'-TGAAGGTCGGAGTCAACGG-3 ', reverz: 5'-CCTGGAAGATGGTGATGGG-3') amplifikáltuk kontrollként, és az adatokat elemeztük a 2 ^{-ΔΔCt módszer. A primereket szintetizáltuk Sangon (Shanghai, Kína).}

Western-blot

A sejteket összegyűjtöttük a tenyésztő edény 2 × SDS loading pufferben. Poliakrilamid gélelektroforézissel (SDS-PAGE) és Western-blot végeztük a korábban leírtak [23].

Cell ELISA

96 lyukú oltottunk sejtekkel (1 × 10 ^{4 /lyuk), majd a kezelés a jelzett peptidek és fertőzése M
. hyorhinis katalógusa 24 óra. A sejteket immobilizált 0,05% glutáraldehid, 10 perc, majd sejtes ELISA-val végeztük a korábban leírtak szerint [24].}

Solid-Phase kötési vizsgálat és pull-Le Assay

rekombináns GST-P37 és GST fehérjéket állítottunk elő, és tisztítottuk a korábban leírtak [17]. GST-P37 és GST hígítottunk puffer (0,1 M Na _{2CO 3, 0,1 M NaHCO 3, pH = 9,6) és bevont 96-lukas lemezeken, 4 ° C hőmérsékleten egy éjszakán át. A lemezeket mostuk PBS-sel háromszor és blokkoltuk 5% fölözött tej /PBS-ben, szobahőmérsékleten (RT), 2 óra hosszat keverjük. Mosás után PBS-sel, jelzett koncentrációjú biotin-konjugált A2PP (által szintetizált Sbsbio) adtunk, és szobahőmérsékleten inkubáljuk 2 órán át. Mosás után PBST 3-szor, sztreptavidin-HRP-vel konjugált (Baltimore Pike, West Grove, PA, USA) adunk hozzá, és szobahőmérsékleten inkubáljuk 30 percen át. Miután a szín kifejlődését orto-fenilén-diamin (Sigma), az optikai sűrűség 490 nm-en (OD490) rögzítettük egy Microplate Reader (Bio-Rad 550). Pull-down assay, 100 ng GST-p37 vagy GST fehérje volt co-inkubáltuk 20 uM biotin-A2PP és sztreptavidin gyöngyök (GE Healthcare, Pittsburgh, PA, USA) kötőpufferben (50 mM Tris-HCl, pH = 8,0, 150 mM NaCI, 0,5% NP-40, 0,5 mM DTT-t, 1 mM PMSF-et és 1 × teljes proteázinhibitorok) 4 ° C hőmérsékleten egy éjszakán át. A csapadékot mossuk kötőpufferrel négy alkalommal, és analizáltuk Western-blottal.}

Co-immunprecipitációs

M
. hyorhinis
fertőzött sejtek (BGC823 vagy AGS) homogenizáltuk lízis pufferben (50 mM Tris-HCl, pH = 8,0, 150 mM NaCI, 1% Triton X-100, 0,5 mM DTT-t, 1 mM PMSF-et és 1 × teljes proteáz-inhibitorok), 4 ° C-on 10 percig. Miután 12, 000 g-n centrifugálva 10 percen át 4 ° C-on, a felülúszókat kinyerjük. Fehérje lizátumok (500 ng) inkubáltuk 20 uM A2PP vagy coNP, 1 ng anti-ANXA2 plusz protein G Sepharose gyöngyökön (GE Healthcare), 4 ° C-on egy éjszakán át. Pre-immun IgG-t (1 ug) használtuk kontrollként. A kicsapódott gyöngyöket mostuk lízis puffert négy alkalommal, eluálószerként 2 × loading pufferben, főtt, és analizáltuk Western-blottal.

immunofluoreszcens teszt

sejteket oltottunk fedőlemezre és egy éjszakán át tenyésztettük. A következő napon a sejteket kezeltük jelzett peptidek és fertőzött M
. hyorhinis katalógusa 24 óra. Ezután a sejteket mostuk jéghideg PBS-sel háromszor mostuk, rögzítettük 4% paraformaldehidben, 15 percig szobahőmérsékleten. Blokkolás után 1 óra hosszat 5% BSA /PBS-ben a sejteket inkubálunk a jelzett antitestekkel szobahőmérsékleten 1 óra hosszat keverjük. Ezután a sejteket mostuk, 3 alkalommal újra PBST és FITC vagy TRITC-vel jelzett szekunder antitesteket 30 percig szobahőmérsékleten. A mosást követően a PBS-sel és counterstaining DAPI-val, a sejteket szerelt 50% glicerin /PBS-ben. Zeiss LSM780 konfokális mikroszkóppal (Zeiss Microsystems, Oberkochen, Németország) használtunk megfigyelni a lokalizáció a jelzett fehérjéket.

sejtmigráció Assay

transwell kamrát 8,0 jim pórusméretű membránok (Corning, NY, USA) alkalmaztunk a sejtek migrációját vizsgálatban. Az alsó kamra tele volt 800 ul tápközegben, amely 10% FBS-t, mint kemoattraktáns. A sejteket újra szuszpendáljuk szérummentes tápközegben, amely M
. hyorhinis katalógusa plusz A2PP vagy coNP, majd óvatosan vigyünk át a felső kamrába minden Transwell berendezésben sűrűségben 2 × 10 ^{5 sejt /ml (120 ul /kamra). A sejteket hagytuk vándorolni 24 órán át 37 ° C-on. A felső felület egyes membrán megtisztítjuk a sejteket egy vattacsomót. Cells behatolt az alsó oldalán a membrán fixáltuk hideg metanollal, megfestettük 0,1% -os kristályibolya, és megszámoltuk a kilenc véletlenszerűen kiválasztott mikroszkópos mezőn lyukanként. Minden egyes mintát készítettünk három példányban kamrák és minden kísérletnél megismételtük legalább 3-szor.}

Cell Proliferation Assay

Gyomorrák sejteket szélesztettünk 96-lyukú tenyésztő lemezekre sűrűsége 5 × 10 ^{3/100 ul /üreg mennyiségben, három, és kezeltük a jelzett reagensek. Elterjedése sejtek mennyiségét a sejt torkolatánál egy CloneSelect Imager (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA). Katalógusa}

Microarray Analysis és Real-Time RT-PCR

AGS és BGC823 sejtek ( 1 × 10 ^{6 per 10 cm 2 lemez) kezeltünk A2PP, CIP, MYCO I és MYCO II 24 óra, PBS-sel mostuk, és betakarított Trizol reagens. Az RNS-mintákat vizsgáltunk OE Biotechnology (Shanghai, Kína) Affymetrix GeneChip ® PrimeView ™ Human Gene Expression Array. Microarray adatok már letétbe NCBI Gene Expression Omnibus (GEO) (csatlakozás no.GSE73777). Nyers adatokat rögzíti Affymetrix GeneChip parancskonzolba (4.0 Affymetrix). Ezután GeneSpring szoftver (version 12.5, Agilent Technologies) alkalmaztunk, hogy befejezze az alapvető elemzést a nyers adatokat. Kezdjük azzal, hogy a nyers adatokat normalizálódott a RMA algoritmus. Differenciáltan expresszálódó géneket azonosítottak, majd szeres változás. Meghatározott küszöböt felfelé és lefelé gének volt szeres változást ≥ 2,0. Ezután, menjen és Kegg analízis kiválasztására alkalmazott ki géneket, hogy a kapcsolódó sejtciklus és apoptózis. Real-time RT-PCR-t alkalmaztunk az eredmények validálására microarray és szerint végezzük a gyártó utasítás (SYBR, TOYOBO). Expressziós szintjét a rokon gének normalizáltuk keresztül GAPDH
és a 2 -ΔΔCT segítségével számítottuk a relatív génexpresszió. A primerek valós idejű RT-PCR ( ATF katalógusa, előre, 5'-GAGTGGCGACAGGATAGAGC-3 ', fordított, 5'-TTTAGCCTCCCTCCCTTAGC-3'; DDIT3 katalógusa, előre, 5 ' -GCGCATGAAGGAGAAAGAAC-3 ', fordított, 5'-ACCATTCGGTCAATCAGAGC-3'; CEBPB katalógusa, előre, 5'-AGCGACGAGTACAAGATCCG-3 ', fordított, 5'-AGCTGCTCCACCTTCTTCTG-3') szintetizálunk által Sangon.}

Statisztikai elemzés katalógusa

az adatokat átlag ± SD. A különbségek elemeztük ANOVA SPSS 11.0 szoftver és a P < 0,05 értéket tekintettük statisztikailag szignifikánsnak. Katalógusa

A microarray elérési szám katalógusa

A microarray adatok kerültek letétbe NCBI Gene Expression Omnibus (GEO) (csatlakozás nélkül. GSE73777). Katalógusa

Eredmények

A2PP nincs hatással az életképessége, illetve a migráció, a gyomor rákos sejtek katalógusa

Annak érdekében, hogy értékelje a szerepe ANXA2 a N-terminális domén M katalógusa. hyorhinis
fertőzés, mi először szintetizált A2PP megfelelő peptid N-terminális a ANXA2 (1A ábra). Biotinnal jelzett A2PP kimutatták, hogy specifikus kölcsönhatásba a GST-p37 a szilárd fázis kötési assay (1B ábra) és pull-down assay (ábra 1C). Észrevettük, hogy A2PP nem befolyásolja a morfológiai AGS és BGC823 sejtekben (1D). Ezen túlmenően, ha a koncentráció kisebb, mint 20 jiM, A2PP nem gátolta a sejtproliferációt (ábra 1E), ami arra utal, hogy a A2PP minimális toxicitási sejteket. EGFR szerepet játszik szabályozásában ANXA2 foszforiláció [17,25,26], míg A2PP nem volt hatással a foszforiláció vagy fehérje-szintjét az EGFR és ANXA2 [2A]. Sőt, A2PP nem volt hatással a migráció az AGS és BGC823 sejtek (2B és 2C). Cellular lokalizációja ANXA2 szabályozza foszforilációja, ami kritikus a funkcióját [17,27,28]. Találtunk A2PP nem változott a szubcelluláris lokalizációját endogén ANXA2 (ábra 2D). Ezek az eredmények azt mutatják, hogy A2PP egyedül nincs hatással a rosszindulatú fenotípus vagy az EGFR-ANXA2 jelátviteli gyomorrák sejtek. Katalógusa

A2PP Csökkenti M katalógusa. hyorhinis katalógusa Fertőzés katalógusa

A korábbi munkák kimutatták, hogy az N-terminális ANXA2 közvetít M katalógusa. hyorhinis katalógusa fertőzés [17]. Amint azt az eredmény a sejt ELISA vizsgálattal azt találtuk, hogy M
. hyorhinis katalógusa fertőzés által blokkolt A2PP dózis-függő módon BGC823 és AGS sejteket, de coNP kezelt sejteket mindig erősen fertőzött M katalógusa. hyorhinis katalógusa (3A ábra). Ezek az eredmények alátámasztották qPCR vizsgálatokkal (3B ábra). Következetesen, A2PP is csökkent protein szintje p37 fehérje Western blot analízis (3C és 3D). Eközben szintje phophos-AXNA2 és phophos-EGFR a fertőzött sejteket alulszabályozott kezeléssel A2PP (ábra 3C és 3E), míg a teljes szintek AXNA2 és az EGFR viszonylag stabilak voltak (ábra 3C). Az immunfluoreszcens analízis, A2PP találtuk, hogy gátolják a M
. hyorhinis katalógusa fertőzés által kiváltott p37 felhalmozódása és kolokalizációs között p37 és ANXA2 (ábra 4A). A co-immunprecipitációs vizsgálatban fehérje lizátumát M katalógusa. Hyorhinis
fertőzött sejteket, A2PP csökkent a kölcsönhatás p37 és ANXA2 (4.b ábra). Együttesen ezek bizonyítékait támogatta azt az elképzelést, hogy a A2PP csökkentheti M katalógusa. hyorhinis katalógusa fertőzés, és megerősítette a korábbi felfedezés, hogy az N-terminális ANXA2 szükséges közvetítés M katalógusa. hyorhinis katalógusa fertőzés [17]. Katalógusa

A2PP elnyomja M katalógusa. hyorhinis katalógusa kiváltott migráció katalógusa

A korábbi vizsgálatok azt sugallták, hogy a M katalógusa. hyorhinis katalógusa fertőzés elősegítheti migrációját gyomorrák sejtek [17, 23]. Ebben a tanulmányban azt vettük észre, hogy M katalógusa. hyorhinis
-promoted migrációját gyomorrák-sejtek nem befolyásolta coNP volt, de dózisfüggően gátolta A2PP (5A és 5B). Ezek az eredmények arra utalnak, hogy A2PP gátolta M katalógusa. hyorhinis katalógusa indukált migráció, amely kapcsolatban állt a képessége, hogy csökkentik a fertőzés elősegített foszforiláció EGFR és ANXA2 (3C és 3E). Katalógusa

A2PP Has Essential motívum a csökkenés M katalógusa. hyorhinis katalógusa Fertőzés katalógusa

jellemzésére kritikus motívumot A2PP igyekeztünk meghatározni, hogy különböző csonkított peptidek A2PP (6A) lehetne csökkenti M katalógusa. hyorhinis katalógusa fertőzés. A qPCR elemzés A2PP és rövidített peptidek A2PP-ND4, ND8, Nd12, CD4, CD8, CD12 és csökkentett M katalógusa. hyorhinis katalógusa fertőzés a gyomorrák sejtek, de A2PP-Nd16 és A2PP-CD16 nem csökken M katalógusa. hyorhinis katalógusa fertőzés (6B). Hasonló minta gátlást nyert Western blot vizsgálattal (ábra 6C). Ezek az eredmények azt sugallják, hogy létezik egy sajátos motívuma A2PP elengedhetetlen, hogy képes csökkenteni M
. hyorhinis katalógusa fertőzés. További térkép a központi szekvenciákat e potenciál motívumban szintetizált két peptid megfelelő 11 ^{th -20 th aa (nevezik A2PP-10aa) és 13 th -18 th aa (nevezik A2PP-6aa) (7A). Ebben qPCR vizsgálatban mindkét peptid csökkenthetik M katalógusa. hyorhinis katalógusa fertőzés (7B), amelyet támogatott a Western blot vizsgálattal (ábra 7C). Nevezetesen, a gátló hatásait A2PP-10aa jobbak voltak, mint azok a A2PP-6aa, de a hatás, mindkét peptid voltak kevésbé robusztus, mint az A2PP (7B és 7C). Thesefore, a központi szekvenciákat (11 th -20 th) a A2PP lehet a lényeges motívum, hogy gátolják a M katalógusa. hyorhinis katalógusa fertőzés.}

összehasonlítása A2PP más gyógyszerekkel megakadályozásában M katalógusa. hyorhinis katalógusa Fertőzés katalógusa

M katalógusa. hyorhinis katalógusa volt az egyik fő szennyezőforrások sejttenyészet [13,14,15]. A legjobb módja annak, hogy megszüntesse M katalógusa. hyorhinis katalógusa fertőzés megválni sejtek és gyorsan sterilizálja az összes kapcsolatot hajó, de néhány fertőzött sejtek nem helyettesíthető több esetben. Következésképpen, elengedhetetlen, hogy speciális antimikrobiális megközelítések megelőzése vagy megszüntetése M katalógusa. hyorhinis katalógusa fertőzés. Voltak különböző antimikrobiális szerek megelőzésére M katalógusa. hyorhinis katalógusa megfertőzze. Például a ciprofloxacin (CIP) lehetett kiirtani M katalógusa. hyorhinis katalógusa megfelelő koncentrációban [29]. Két antimikrobiális alkatrészek nevezték mycoplasma I (MYCO I) és mycoplasma II (MYCO II) lehetne csökkenteni M katalógusa. hyorhinis katalógusa fertőzés, megakadályozva a fehérje- és nukleinsav szintézist. Azonban néhány szempontokat, mint például az alacsony érzékenység, erős ellenállást és magas toxicitás korlátozhatják alkalmazásaik sejttenyészetben. E megfontolások alapján úgy véljük, hogy össze kell hasonlítani a hatásfokot A2PP, CIP, MYCO I. és II MYCO megelőzésében M katalógusa. hyorhinis katalógusa fertőzés. Western-blottal és qPCR vizsgálatokban azt találtuk, hogy A2PP a gátló hatást a M
. hyorhinis katalógusa fertőzés hasonló volt a MYCO én, de jobb volt, mint a CIP és MYCO II (8A és 8B). Érdekes módon azt találtuk, hogy a A2PP is hatékonyan megszünteti a M katalógusa. hyorhinis katalógusa fertőzés erősen fertőzött sejtekben a folyamat szakaszait P _{1 P 3 (8C és 8D). Továbbá, míg a MYCO I és MYCO II A2PP kevésbé volt gátló hatása a sejtek proliferációját (ábra 9A). Hogy vizsgálja meg a mechanizmusok A2PP, CIP, MYCO I. és II MYCO gyakorolt ​​hatása proliferáció végeztünk microarray és átvizsgált egy részét differenciáltan expresszálódó gének A2PP, CIP, MYCO I. és II MYCO kezelt sejtekben. Kvantitatív RT-PCR analízis fokozott expressziója az apoptózis kapcsolatos gének ( ATF5 katalógusa, DDIT3 katalógusa, CEBPB katalógusa) által MYCO I. és II MYCO kezelés, de kevés a változások megfigyelt A2PP és CIP csoportok (9B). Ezek az eredmények azt jelzik, hogy A2PP kevesebb toxicitást és jobb preventív potenciális blokkoló M
. hyorhinis katalógusa fertőzés tenyésztett sejtekben. Katalógusa}

Vita katalógusa

A Mycoplasma fertőzés és szennyeződés még mindig jelen vannak ma, és hogy jelentős kockázatot a betegek és a kutatás minőségét. Az utóbbi években számos tanulmány azt javasolta, hogy mycoplasma fertőzés is társult tumorogenezisben [3-8]. Mycoplasma fertőzés okozhatja a DNS-károsodás, befolyásolja a génexpressziót, és megzavarják a sejtciklus ellenőrző pontot, és apoptotikus választ [30]. M katalógusa. hyorhinis
találtak 56% -a gyomor rák, 55,1% vastagbél rák és 39,7% emlőrákok szövetekben [20]. Különben is, a szerológiai vizsgálat azt mutatta, hogy 36% jóindulatú prosztata megnagyobbodás (BPH) és 52% prosztatarák szöveteket M katalógusa. hyorhinis katalógusa pozitív [4]. Ezek a vizsgálatok arra utalnak, hogy lehetséges összefüggést a M katalógusa. hyorhinis katalógusa fertőzés előfordulása daganatok [4,20]. Mi több, a folyamat a sejttenyészet, a leggyakoribb szennyező források vannak Mycoplasma, baktériumok és a penész, de a szennyeződés mértéke Mycoplasma viszonylag magasabb [13]. Eredmények a különböző csoportok kimutatták, hogy az arány a mikoplazma-szennyeződés változott 15-80%, néhány még elérte a 100% [15,31]. Az elemzés DNS-szekvenciák 1000 genomok projektjavaslatokat sugallta, hogy 7% -a a mintákat szennyezett Mycoplasma [32]. Ugyanakkor megakadályozza mycoplasma fertőzés és szennyeződés nehezen. Egyrészt azért, mert a pleomorph, a plaszticitás, a szűrhetőség és könnyű oldhatóság, mikoplazmák lehetett átmennek mikroszűrő membránon könnyen, rendering őket létezik a gazdasejt felszínén, vagy lehet endocitózissal sejtek által [1,13,33]. Másodszor, mikoplazma hiányzik sejtfalak, rendering őket érzéketlen az antibiotikumokra, amelyek gátolják a sejtfal szintézisét, mint például a penicillin. Hatékony antimikrobás szerek léteznek, de ezek folyamatos alkalmazás sejtkultúrában nem ajánlott, mert a toxicitás a sejtekhez. Végül, a Mycoplasma egy atípusos baktériumok, okozva difficulities a helyes diagnózis [34].

Számos anti-mikoplazma gyógyszereket fejlesztettek ki, mint az eritromicin, leukomicin, roxitromicin, ofloxacin, és ciprofloxacin. Azonban a káros hatások, toxicitás, és az ellenállás mindig bajt szennyezéscsökkentésre [10,11,35-38]. Emellett, folyamatos adagolása ezen antibiotikumok nem szünteti meg teljesen a Mycoplasma egy vagy akár több héten [39,40]. Ezért fontos, hogy új utakat találni, amely megszünteti a mycoplasma fertőzés vagy szennyezés hatékony és időszerű. A megoldás, hogy ezt a célt valószínűleg megtalálható a jellemzése molekuláris mechanizmusa mycoplasma fertőzést. Katalógusa

A korábbi tanulmány megállapította, hogy a kölcsönhatás a P37 fehérje AXNA2 közvetített M katalógusa. hyorhinis katalógusa fertőzés [17]. Ebben a vizsgálatban, mi először szintetizált N-terminális polipeptid ANXA2 (A2PP) és validált specifikus kölcsönhatás GST-p37 fehérje a szilárd fázis kötési és streptavidin legördülő vizsgálatokban. Ihlette ilyen kölcsönhatás, akkor vajon A2PP lehetett antagonizálhatják fertőzése M katalógusa. hyorhinis katalógusa. Azt találtuk, hogy A2PP, megfelelő koncentráció (20 | iM), csökkent M
. hyorhinis katalógusa fertőzés, gátolt fertőzés előléptetett migráció, és csökkent a fertőzés-provokált a foszforiláció EGFR és ANXA2 gyomorrákban sejtekben. Ezeket a hatásokat csökkenésével jár kölcsönhatása p37 és ANXA2. Meg kell jegyezni, hogy A2PP egyedül mutatott minimális hatása sejtek proliferációját és foszforiláció EGFR és ANXA2, ami arra utal, hogy a A2PP valószínűleg hasznos reagens csökkentése M
. hyorhinis katalógusa fertőzés. Ez az elképzelés a támogatott összehasonlítások a A2PP és kereskedelmi antibiotikumok "befolyásolja a sejtek szaporodását és M katalógusa. hyorhinis katalógusa fertőzés, ami azt mutatta, hogy A2PP csakugyan kevesebb toxikus a sejtekre, de erős képes ellensúlyozni a fertőzés. Katalógusa

Annak ellenére, hogy A2PP, 30 aa polipeptid, csökkenthetik M katalógusa . hyorhinis katalógusa fertőzés hatékonyan, mi kell még, hogy megértsük, hogy csonkolt formái A2PP lehetett elérni hasonló anti- M katalógusa. hyorhinis katalógusa képességét. Segítségével több csonkolt peptideket A2PP, azt találtuk, hogy a központi szekvenciákat (11 ^{th -20 th) a A2PP lehet a lényeges motívum, hogy gátolják a M
. hyorhinis katalógusa fertőzés. Azonban a gátló hatásait, rövidített peptidek még mindig nem olyan erős, mint a teljes hosszúságú A2PP, ami arra utal, hogy a határoló szekvenciák lényeges fenntartani a megfelelő szerkezet eléréséhez hatékony kötődést P37. További vizsgálatok szükségesek, hogy megtalálják a hatását a módosítás és /vagy mutációja ez a motívum a gátló M katalógusa. hyorhinis katalógusa fertőzés.}

Köszönetnyilvánítás katalógusa

Köszönjük, és hálával Lin Meng, Dr. Zhihua Tian (mind a pekingi egyetem Cancer Kórház & Intézet) biztosító kritikus reagensek vagy technikai segítségnyújtás. katalógusa

• PLoS One: nikotin Gátolja cisplatin indukálta apoptózis, keresztül Szabályozó α5-nAChR /AKT jelátviteli folyamatok emberi gyomorban Cancer Cells
• PLoS One: ritkán fordul elő szinkron vagy metakrón Daganatok után endoszkópos nyálkahártya alá boncolása Korai gyomorrák differenciálatlan Szövettan