PLoS One: nikotin Gátolja cisplatin indukálta apoptózis, keresztül Szabályozó α5-nAChR /AKT jelátviteli folyamatok emberi gyomorban Cancer Cells

absztrakt katalógusa

A gyomorrák előfordulása bizonyítja erős etiológiai egyesület a dohányzással. A nikotin, a fő komponens a dohányban, egy túlélési agonista, amely gátolja által indukált apoptózis bizonyos kemoterápiás szerek, de a pontos mechanizmusok továbbra is nagyrészt ismeretlen. Nemrégiben vizsgálatok jelezték, hogy α5-nikotinos acetil-kolin-receptor (α5-nAChR) erősen társított tüdőrák kockázata és a nikotin függőséget. Ennek ellenére nincs információ állt rendelkezésre arról, hogy a nikotin is hatással elterjedése az emberi gyomorrák sejtek szabályozásán keresztül α5-nAChR. Ahhoz, hogy értékelje a hipotézist, hogy a α5-nAChR szerepet játszhat a gyomorrák, megvizsgáltuk expresszióját gyomorrák szövetekben és sejtvonalakban. A kifejezés a α5-nAChR nőtt a gyomorrák szövetben képest para-carcinoma szövetekben. Tekintettel az eredményeket, azt folytatta, hogy vizsgálja ki, hogy a nikotin gátolja cisplatin indukálta apoptózis útján szabályozzák α5-nAChR gyomorrákban cellában. Az eredmények azt mutatták, hogy a nikotin jelentősen elősegítette sejtproliferáció egy adagot, és időfüggő módon keresztül α5-nAChR aktiválását humán gyomor sejtekben. A nikotin ezenkívül gátolja az apoptózist indukált cisplatin. Csend α5-nAChR abláció a védő hatását a nikotin. Azonban, amikor együtt beadni, LY294002, gátolja a PI3K /AKT-út, fokozott apoptózis volt megfigyelhető. Ez a hatás korrelál az indukciós a Bcl-2, Bax, survivin és a kaszpáz-3 a nikotin a gyomor sejtvonalakban. Ezek az eredmények azt sugallják, hogy az expozíció a nikotin negatívan befolyásolhatja az apoptotikus potenciálja kemoterápiás szerek és hogy α5-nAChR /AKT jelátviteli kulcsszerepet játszik az anti-apoptotikus aktivitás a nikotin által kiváltott cisplatin. Katalógusa

Citation: Jia Y Sun H, Wu H, Zhang H, Zhang X, Xiao D, et al. (2016) A nikotin Gátolja cisplatin indukálta apoptózis, keresztül Szabályozó α5-nAChR /AKT jelátviteli folyamatok emberi gyomorban a rákos sejteket. PLoS ONE 11 (2): e0149120. doi: 10,1371 /journal.pone.0149120 katalógusa

Szerkesztő: Salvatore V. Pizzo, Duke University Medical Center, Egyesült Államok katalógusa

Beérkezett: június 1, 2015; Elfogadva: január 15, 2016; Megjelent: február 24, 2016 katalógusa

Copyright: © 2016 Jia et al. Ez egy nyílt hozzáférésű cikk feltételei szerint terjeszthető a Creative Commons Nevezd meg! Licenc, amely engedélyezi a korlátlan használatát, a forgalmazás és a reprodukció bármilyen adathordozón, feltéve, hogy az eredeti szerző és a forrás jóváírásra. Katalógusa

Az adatok rendelkezésre állás: által bevezetett korlátozások Jinan Központi Kórház, adatok kérésre rendelkezésre állnak. Az érdekelt kutatók kapcsolatot Dr. Xiaoli Ma ([email protected]) kérni az adatokhoz való hozzáférést. Katalógusa

Forrás: Ezt a munkát támogatja a Nemzeti Természettudományi Alapítvány Kína (No. 81272588) és a Shandong tartományi Természettudományi Foundation of China (No. ZR2012HM061and ZR2013CM010). katalógusa

Érdekütközés: a szerzők kijelentették, hogy nem ellentétes érdekek léteznek. katalógusa

Bevezető katalógusa

a gyomorrák egyik fő oka a rákos halálesetek a világon. Úgy tűnik, genetikai és környezeti faktorok is részt vesznek a gyomor kialakulásában. Korábbi eredmények már feltérképezte a szoros összefüggést a cigarettafüst és a gyomorrák előfordulása [1-3], azonban a részletes mechanizmus még nem teljesen ismert. Katalógusa

A nikotin, a fő összetevője a cigarettafüst, bebizonyosodott, hogy kell vonni a beavatás, promóció, és még progressziója számos daganat, beleértve a gyomorrák. Számos bizonyíték arra utal, hogy a nikotin fejti ki sejtfunkciók keresztül nikotinos acetilkolin receptorok (nAChR). Különböző epiteliális sejtek, nem csak a neuron sejtek, expressz nAChR és szerkezetét nAChR egy homo- (α7or α9) vagy heteropentamer (α2-α10; B2-B4). Vizsgálatok kimutatták, hogy a nikotin stimulált proliferációját humán gyomorrák sejtek való kapcsolata révén α7-nAChR [4, 5]. Bár a különböző tagjai nAChR családi szabályozhatják konvergáló jelátviteli, gyakran eltérő, sőt ellentétes intézkedéseket. A közelmúltban, genom szintű asszociációs vizsgálatok jelezték, hogy α5-nAChR erősen társított tüdőrák kockázata és a nikotin függőség [6, 7]. Ennek ellenére nincs információ állt rendelkezésre arról, hogy a nikotin is hatással elterjedése az emberi gyomorrák sejtek szabályozásán keresztül α5-nAChR. Katalógusa

A szállítás kemoterápiás szer ciszplatin követi sebészi eltávolítását jelenleg meghatározza a standard kezelési gyomorrák [8 -10]. Sajnos, a szerzett rezisztencia ciszplatinnal gyakori és kijátszása sejt apoptózis elismert, mint az egyik fő felelős mechanizmusok ciszplatin rezisztencia [11, 12]. Közelebbről, a nikotin gátolhatja az apoptózist indukált cisplatin által tüdőrák-sejtek [13-15], és szájüregi rák [16]. A gátló hatást a nikotin apoptózis már tulajdonítható, hogy a képességét, hogy aktiválja az anti-apoptotikus proteinek, mint a Bcl-2 és a survivin, valamint inaktiválása proapoptotikus fehérjék, mint a Bax és a kaszpáz-3, az aktiválási mindkét PI3K /AKT és PKC /ERK jelátviteli rákos sejtekben [13-15]. Ez a hatás a nikotin a sejtek apoptózis is közvetíti nAChR, de emellett α5-nAChR, más alegységek úgy tűnik, hogy részt vesz [17, 18].

Bár sok ilyen mechanizmusok észleltek tüdőrák [19-21], nincs bizonyíték az anti-apoptotikus hatást, és a mechanizmus által kifejtett nikotin a gyomor rákos sejteket. A cél a jelen tanulmány volt, hogy megvizsgáljuk a nikotin gátolja a cisplatin indukálta apoptózis útján szabályozó α5-nAChR a gyomor rákos sejtben. Továbbá javasoljuk bevonásával pro-túlélési faktorok, mint például a Bcl-2 és Survivin, aktivált AKT utakat, ill. Katalógusa

Anyagok és módszerek katalógusa

Etikai Nyilatkozat katalógusa

a vizsgálati protokollt jóváhagyta az orvosi etika és humán klinikai vizsgálat Bizottságának Jinan Központi Kórház. Írásos beleegyezését adta a minden beteg. Katalógusa

szövetmintából, Cell kultúra és a gyógyszeres kezelés katalógusa

Ötven formalin-fixált, paraffinba ágyazott minták, amelyek 40 példányai gyomorrák és 10 para-karcinómaszövetek retrospektív és véletlenszerűen kiválasztott fájlokat a Jinan Központi Kórház után a protokoll hagyta jóvá a helyi kutatási etikai bizottság. Szerint a rekord a dohányzás (vagy nem) a kórtörténet a betegek, 32 esetben nem volt dohányzás bevitel történelem, 8 volt a dohányzás bevitel történetében. Valamennyi mintát értékeltünk a diagnózis céljára két tapasztalt patológusok a diagnózishoz.

Az emberi gyomor rákos sejtvonalak MKN28, SGC7901, BGC823, MGC803, AGS, HGC27, és MKN45 kaptuk a Cell Bank Shanghai, Intézet Biokémiai és Sejtbiológiai, a kínai Tudományos Akadémia. A sejteket DMEM-ben tenyésztjük (Invitrogen), kiegészítve 10% magzati borjúszérummal (FBS; Invitrogen), 1% antibiotikumot, 37 ° C-on, 5% CO2 nedvesített levegőt. Az összes kísérletben, 60-70% -a összefolyó sejteket megmostuk, és inkubáltuk szérummentes közegben 24 órán át végzett kezelés előtt a nikotin, a ciszplatin és az LY294002 (Sigma, St. Louis, MO) a feltüntetett ideig.

Immunhisztokémia

az immunhisztokémiai festést a sztreptavidin-peroxidáz módszerrel (SP módszer) végeztünk 4 um szakaszain paraffinba ágyazott minták kimutatására α5-nAChR expresszió gyomorrák és a para-karcinóma szövetekben. Röviden, miután deparaffinization és hidratálás, a tárgylemezeket kezeltük endogén peroxidáz 0,3% H _{2 O 2-on 30 percig, és blokkoltuk 2 órán át szobahőmérsékleten, 1,5% blokkoló szérum foszfát-pufferolt sóoldattal (PBS ). A metszeteket ezután inkubáljuk anti-α5-nAChR antitest (ABCAM, Inc. Cambridge, MA) (1: 100 hígítás), 4 ° C-on egy éjszakán át, PBS-sel mostuk, és inkubáltuk a másodlagos anti-egér biotinilezett antitest (KIT-5010 , Max Vision, Maixin.Bio, Kína) (1: 2000) PBS-ben, 30 percig 37 ° C-on. Az ellenanyag-kötődést a sztreptavidin-biotin-peroxidáz komplex /HRP-t (Code K0377; Dako), 3, 3- diaminobenzidin 3 percig, mint egy kromogén szubsztrát. A lemezeket ezután enyhén kontrasztfestést hematoxilinnel. Negatív kontrollként, ismétlődő metszeteket nélkül expozíció a primer antitesteket. Az eredményeket figyeltünk meg mikroszkóp alatt.}

kvantitatív valós idejű RT-PCR

Teljes RNS-t izoláltunk a Trizol reagens (Invitrogen) alkalmazásával a gyártó utasításai szerint. Huszonöt nanogramm teljes RNS mintánként-t reverz transzkripcióval felhasználásával reverz transzkripciós reakciót reagenskészlet (Takara kód: DRR061S) alkalmazásával a gyártó utasításai szerint. Kvantitatív valós idejű PCR-t végeztünk analizáltuk az Applied Biosystems 7300 Real-Time PCR System, hogy meghatározzák a relatív mennyiségét α5-nAChR és β-aktin (belső kontroll) mRNS kifejeződik. A SYBR Green Supermix használtunk minden valós idejű PCR-reakciók. PCR-primereket, amelyek ebben a vizsgálatban a következők: α5-nAChR Forward: GAAACTGAGAGTGGTAGTGGACCAA, Fordított: GGGCTATGAATTTCC AATCTTCAAC; glicerinaldehid-3-foszfát-dehidrogenáz (GAPDH) előre, 5'-CATGAGAAGTATGACAACAGCCT-3 'és reverz, 5'-AGTCCTTCCACG ATACCAAAGT-3'. A kvantitatív valós idejű PCR paraméterei a következők voltak: 95 ° C 10 s, mint a pre-denaturálják lépésben, majd 40 PCR-ciklus 95 ° C-on 5 s, 60 ° C-on 30 s és 72 ° C-on 10 percig. Valamennyi mintát végeztünk, három sorozatban az egyes kísérletben. A relatív mennyisége mRNS alkalmazásával számítottuk ki az összehasonlító CT módszer normalizálás után p-aktin-mRNS-szinteket.

Western blot analízis

sejtüledékeket homogenizáltuk extrakciós puffer (50 mmol /l Tris-HCI pH = 6,8, 0,1% SDS-t, 150 nmol /liter NaCl-ot, 100 mg /l fenil-metil-fluorid, 1 mg /l aprotinin, 1% NP-40 és 0,5% nátrium-ortovanadátot), inkubáljuk 4 ° C-on 30 percig, majd centrifugáljuk 20 percig 12000 g /perc. Teljes fehérjemennyiség a sejtlizátumot mértük használata a Bio-Rad kolorimetriás kit (Bio-Rad, Hercules, CA, USA). A Western-blot analízis, az összfehérje-t választunk el 10% -os SDS-PAGE és átvittük nitrocellulóz membránra (0,45 um, Millipore, Billerica, MA, USA), amely inkubáltuk 24 órán át 4 ° C-on az antitestek α5-nAChR (1: 500, ab41173 vagy ab166718), Akt (1: 500, Epitomics Cat No: 1085-1), p-Akt (1: 500, Epitomics Cat No: 2118-1), a kaszpáz-3 (1: 500, Epitomics Cat No: 1087-1), a Bcl-2 (1: 500, Epitomics Cat No: 1017-1), survivin (1: 500, Epitomics Cat No: 2463-1) és GAPDH (1: 1000; ab37168), majd torma peroxidázzal konjugált anti-egér /nyúl IgG antitesttel (santa Cruz Biotechnology) után egy végső mosás. Jelek detektálására a használat során a fokozott kemilumineszcencia készlet (Amersham Pharmacia, Buckinghamshire, Egyesült Királyság). GAPDH szintje volt belső standardként.

RNS-interferencia

Egy kettős szálú siRNS oligonukleotid célzási CHRNA5, amely kódolja α5-nAChR, (szensz: 5'-CCCGCAAACUACAAAAGUUTT-3 ', antiszensz: 5' -AACUUUUCUAGUUUGCCGGTG-3 ') szintetizálunk Shanghai Genepharma Co. Ltd. (Kína). Egy pár negatív kontroll siRNS is célja eltérő szekvenciák siRNS-CHRNA5, és nem homológok bármely szekvenciák találhatók génbankban (szensz: 5'-UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-3 ', antiszensz: 5'-ACGUGACACGUUCGGAGA-3'). A sejteket hat-üregű lemezeken. Amikor a sejtek elérték 30-50% összefolyás, a siRNS adunk, hogy a végső koncentráció 50 nM Lipofectamine 2000 (Invitrogen) alkalmazásával a gyártó előírásainak megfelelően.

életképesség teszt

A sejtek életképessége által meghatározott CCK8 assay (Dojindo, Tokió, Japán). Röviden, a sejteket szélesztettünk 96 mérőhelyes lemezeken (1500 sejt /üreg) kezeltük nikotin a jelzett dózisokban. A sejt proliferációs vizsgálati eljárást úgy végeztük hozzáadásával 10 ul CCK8 oldattal minden lyukba, majd inkubáltuk 37 ° C-on 2 órán át. Az abszorbanciát mértük hullámhosszon 450 nm-en egy mikrotiterlemez-leolvasó (Synergy 2 MultiÜzemmód Microplate Reader; BioTek, Winooski, VT, USA).

Annexin V /7-AAD festés

BGC823 sejteket a konfluencia a 6-lyukú szövettenyésztő lemezeken (Falcon, Becton Dickinson Labware) olyan komplett közegben. Ezután a médiumot lecseréltük friss komplett tápközeget vagy a szérummentes tápfolyadékban; A sejteket ezután stimuláltuk 100 jiM nikotin önmagában vagy kombinációban 20 mM ciszplatinnal 24 órán alapján a korábbi adatokkal, tripszinnel kezeljük, és kétszer mostuk PBS-sel. A sejteket megfestettük PE jelölt Annexin V /7-AAD (7-aminoactinomycine-D) utasításainak megfelelően a gyártó (Annexin V /7-AAD készlet; Becton, Dickinson and Company). Röviden, egy mosott sejtüledéket újra szuszpendáljuk 500 ul kötőpufferrel. Ezután 5 ul Annexin-V-PE és a 5 ul 7-AAD adunk. Áramlási citometriás vizsgálatot végeztünk után azonnal supravital festést. Az adatgyűjtést és elemzést végeztünk Becton Dickinson FACSCalibur áramlási citométeren CellQuest szoftvert. A sejteket korai szakaszában az apoptózis voltak Annexin V pozitív és 7-AAD negatív, míg a sejtek a késői szakaszában az apoptózis mindketten Annexin V és a 7-AAD pozitív.

Hoechst 33342 festéssel

Cells oltottunk 12 lyukú szövettenyésztő lemezeken, és az oldathoz a megadott koncentrációban a nikotin és a ciszplatin. A végén minden inkubálás sejteket fixáltuk 4% paraformaldehiddel 20 percig, PBS-sel mostuk, majd inkubáltuk Hoechst 33342 (1 ng /ml) 10 percig. Mosás után PBS-sel a sejteket figyeltek fluoreszcens mikroszkóp (Olympus, Japán). Legalább 400 sejteket a 12 véletlenszerűen kiválasztott mező per edény megszámoltuk, és az egyes kezeléseket három ismétléssel végeztük.

Statisztika elemzés

Az eredmény a immunhisztokémiai elemeztük a χ ^{2 teszt. Minden eredményeket átlagérték ± S.D. a három párhuzamos végzett kísérletek párhuzamos módon, kivéve, ha másként nem jelezzük. A jelentősége közötti különbség a kontroll csoportok és a nikotin a kezelési csoportok határoztuk meg két mintás t-próba. A különbségeket akkor tekintettük szignifikáns P < 0,05 vagy P < 0.01.}

Eredmények katalógusa

α5-nAChR kifejezések gyomorrák szövetmintából és sejtvonalak

A kifejezés α5-nAChR mutattunk és lokalizálódik paraffinba ágyazott emberi gyomor szöveti szakaszok. α5-nAChR főként lokalizált a membránon a tumorsejtek, bár néhány citoplazma festődés is megfigyelhető volt (1A ábra). Expression of α5-nAChR magasabb volt gyomorrák szövetekben (77,5%, 31/40), mint para-karcinóma szövetek (20%, 2/10). Az eredmények azt mutatták, a tendencia, hogy a pozitív ráta α5-nAChR kifejezés betegeknél fokozott a nikotin bevitel történelem (87,5%, 08/07), mint kezelés nélkül nikotin bevitel történelem (75,0%, 24/32). Katalógusa

α5-nAChR mRNS és fehérje kimutatható volt a testület a gyomor rákos sejtvonalak. A sejtvonalakat expresszált különböző szintű α5-nAChR fehérje, ahol sejtvonalak egy magasabb expressziós voltak BGC823, AGS és SGC7901 normalizáltuk, hogy a GAPDH (1B ábra). A szintek α5-nAChR mRNS expressziója kimutatható RT-PCR korrelált a szintek fehérje expresszió (ábra 1C). BGC823 fejezi magasabb α5-nAChR, mint a más sejtvonal. További funkcionális kísérletek BGC823 sejtvonalat választottuk miatt magasabb expressziót (alkalmas indukciós által nikotin vagy hangtompító siRNS).

nikotin mozdítani gyomorrák sejtek proliferációját keresztül α5-nAChR

meghatározásához, hogy a nikotin szabályozhatják az elterjedése a gyomor sejtek, megvizsgáltuk a hatását a nikotin különböző koncentrációjú a sejtek életképességére a BGC823 egy CCK8 elemzés (2A ábra). BGC823 voltak kitéve nikotin (0, 1, 10, 100, 500, 1000 jiM) 24, 48, és 72 órán át, ill. Amint azt a 2A ábra, nikotin mozdítani sejtproliferáció egy időfüggő és koncentráció-függő kapcsolatban. A nikotin jelentősen stimulált sejtproliferációt alacsonyabb koncentráció (1, 10, 100, 500 nM) és az időt (24-72 h), de észrevehető csökkenése a sejtszám volt megfigyelhető nikotintartalmú kezelt tenyészetekben a magasabb koncentráció (1000 jiM) és az idő (72 h). Vizsgálatok azt mutatták szintje nikotin a szervezetben igen eltérőek az egyének között is, ha a dohányzás az azonos számú, azonos cigaretták [22-24] .A koncentrációja a nikotin (100 jiM) használható a jelen tanulmányban utánozták a napi bevitel cigaretta mérsékelt dohányosok [ ,,,0],25, 26]. A koncentráció a nikotin (100 jiM) egyenértékű koncentráció a nyál dohányos, aki bevitel 25 cigaretta /nap [27]. További funkcionális kísérletekben, a koncentráció a nikotin (100 jiM) választottuk kezelésére gyomor sejtek 24h.

Annak meghatározására, hogy a nikotin-mediált előmozdítása sejtproliferáció gyomor-sejtek által közvetített α5-nAChR jelátvitel elemeztük a hatását a nikotin a kifejezés a α5-nAChR fehérje BGC823 sejtek Western-blottal. Amint azt a 2B ábra, a kezelés a nikotin dózisban nikotin (0, 1, 10, 100, 500, 1000 uM) 24 órán át elősegítette expresszióját α5-nAChR fehérje dózis-függő módon. Ahhoz, hogy tovább erősítse részvételét α5-nAChR jelátviteli a nikotin által közvetített előmozdítása gyomorrák sejtek szaporodását, mi blokkolja α5-nAChR fehérje expresszióját transzfektálása BC823 sejteket α5-nAChR-specifikus siRNS (si-α5-nAChR) ( 2C) és értékelte annak hatásait nikotin által közvetített előmozdítása sejtek szaporodásának CCK vizsgálattal (ábra 2D). Összehasonlítva a kódolt specifikus kontroll siRNS (si-NC), transzfekció Si-α5-nAChR gátolta a sejtproliferációt. Sőt, Si-α5-nAChR transzfekció szignifikánsan csökkentette a nikotin-mediált előmozdítása sejtproliferáció BGC823 sejtekben (ábra 2D).

nikotin gátlását cisplatin indukálta apoptózis,

további jellemzése a apoptózis hatását a nikotin kombinált ciszplatin BGC823, ciszplatin arra használták, hogy apoptózist indukál a BGC823 sejtekben. A sejteket 20 mM ciszplatinnal [28]. Ábrán látható a 3A, az apoptotikus sejtek vált lekerekített alakú, és azok magjaival mutatott fragmentált morfológia, alkotó apoptotikus testek. Ezzel ellentétben, a sejteket közösen kezelt nikotin és ciszplatinnal mutatott kevés nukleáris fragmentáció és kevés apoptotikus testek.

cisplatin indukálta apoptózis tovább vizsgáljuk Annexin V /7-AAD festés. Áramlási citometria parcellák azt mutatta, hogy az arányok a teljes apoptotikus sejtek (AnnexinV + /7-AAD-) csökkent from43.2 ± 2,32% to29.9 ± 1,26%, ha ki vannak téve a ciszplatin kombinált 100 umol nikotin (3B ábra). Ezek az eredmények arra utalnak, hogy a nikotin elnyomja által indukált apoptózis a cisplatin.

α5-nAChR /AKT jelátviteli útvonal részt vesz anti-apoptotikus hatását a nikotin a cisplatin indukálta apoptózis, a BGC823 sejtek

Annak megállapításához, a szerepét AKT közvetítésében a hatását a nikotin ezekben a sejtekben, azt meghatározni, hogy a nikotin indukálja aktiválása az Akt aktiválását a BGC823 sejtekben. Ábrán a 4A, 20 mM ciszplatinnal erősen elnyomott aktivitása Akt (2-es sáv), de nikotin fokozott AKT expresszió (3. sáv) jelenlétében ciszplatin. Azt javasolta, hogy az AKT aktiválták az expozíció után a 100 nM nikotin BGC823 sejtek jelentett a különböző papírok [29, 30]. A down-regulációja α5-nAChR expresszió csökkent a P-Akt expresszió (4-es sáv). A kezelés 10 mM LY294002, egy foszfatidilinozitol 3-kináz (PI3K) /AKT útvonal inhibitor, csökkent az anti-apoptotikus hatását nikotin BGC823 sejtek (5-ös sáv). Ezen túlmenően, kezelés LY294002 kombinált Si-CHRNA5 transzfekció jelentősen elnyomott nikotin által indukált P-Akt szint (6. sáv). Ezek az adatok arra utalnak, hogy α5-nAChR /AKT utakat kritikus szerepet játszanak közvetítésében a hatását a nikotin és a kemoterápia a gyomor rákos sejtekben.

tovább vizsgálták a hatását a nikotin a cisplatin indukálta kaszpáz-3 aktivációt BGC823 sejtek Western-blot-vizsgálattal. Ábrán látható a 4B, ciszplatin által kiváltott növekedését kaszpáz-3 aktiválását, míg a nikotin blokkolt cisplatin indukálta kaszpáz-3 aktiválását a BGC823 sejtekben. Sőt, expozíció BGC823 sejtek ciszplatin okozta expresszióját apoptotikus fehérje Bax növekedett, míg a prosurvival protein Bcl-2 és a survivin csökkent, ami gátolta kezeléssel nikotin.

Időközben, ábrán látható 4C, a anti-apoptotikus hatását a nikotin nyilvánvalóan blokkolta si-α5-nAChR BGC823 sejtekben. Áramlási citometria parcellák azt mutatta, hogy az aránya a teljes apoptotikus sejtek (AnnexinV + /7-AAD-) emelkedett 18,5 ± 0,92% -ról 34,9 ± 1,74% után si-5 kezelés képest si-NC-csoport. Emellett az AKT inhibitor LY294002 Si-α5-nAChR jelentősen elősegítette a apoptotikus hatását cisplatin 31,5 ± 1,57% és 61,2 ± 3,06% -kal szemben LY294002 csoport. Ezek az eredmények azt mutatják, hogy a nikotin fontos szerepet játszik a megelőzés a cisplatin indukálta apoptózis útján α5-nAChR /AKT jelátviteli. Katalógusa

Vita katalógusa

Ez a tanulmány az első, amely bizonyítani létfontosságú szerepe α5-nAChR nikotin anti-apoptosis ciszplatin humán gyomorrák sejtek. Az elemzés a klinikai minták jelezte, hogy α5-nAChR kifejezés általában magasabb a tumorsejtek képest para-karcinóma sejtekben. Az eredmények azt mutatták, a tendencia, hogy a pozitív ráta α5-nAChR kifejezés magasabb volt a nikotin bevitel történelem, mint a betegek nikotin nélkül bevitel történetében. Az in vitro eredmények azt mutatták, hogy a nikotin fel szabályozott expresszióját α5-nAChR fehérje, és gátolták a cisplatin indukálta apoptózis, szabályozása által α5-nAChR /AKT jelátviteli mechanizmus gyomor rákos sejtekben. A nikotin megakadályozta a ciszplatin-indukált aktiválását a kaszpáz-3 és Bax, és up-szabályozott expressziójának antiapoptotikus fehérjék, a Bcl-2 és a survivin. Továbbá aktiválása az Akt aktiválását találtuk, hogy szerepet játszik közvetítésében cisplatin indukálta apoptózis, valamint az anti-apoptotikus hatását nikotin BGC823 sejtekben. Érdekes lehet figyelni, hogy a kapcsolat a cigarettafüst (második dohányzás) és a gyomorrák előfordulása. Katalógusa

A korábbi megállapítások feltérképezte a szoros összefüggést a cigarettafüst és a gyomorrák [31, 32]. Nikotin kimutatták, hogy fokozzák a proliferációját és migrációját a gyomor rákos sejtek indukálásával cyclooxgenase-2 (COX-2), a prosztaglandin E2, VEGF, β-adrenerg receptorokat, protein-kináz-C [26, 33, 34]. Ezek a hatások tűnik, hogy közvetíti a homopentamer α7-nAChR [35]. A legújabb vizsgálatok kimutatták, egy váratlan hatás a heteropentamer α5-nAChR-nikotin bevitel [36-38]. A korábbi munkák számolt be, hogy a nikotin /α5-nAChR út kritikus tüdőrák sejtek életképességére [21, 39]. Ennek ellenére nincs információ állt rendelkezésre arról, hogy a nikotin is hatással elterjedése az emberi gyomorrák sejtek szabályozásán keresztül α5-nAChR. Itt azt vizsgáltuk, hogy szerepe α5-nAChR humán gyomorrák. Eredményeink igazolták, hogy expressziója α5-nAChR magasabb volt gyomorrák szövetekben képest para-karcinóma szövet, amely azt sugallta, hogy a α5-nAChR szerepet játszhat a gyomor karcinogenezis. Továbbá, a nikotin mozdítani α5-nAChR fehérje expressziója és a blokkoló aktiválását α5-nAChR siRNS gyengített nikotin által indukált gyomor rákos sejtek szaporodását. Azt javasolták, hogy α5-nAChR egyik legfontosabb molekulák közvetítik a sejt proliferáció által stimulált nikotin gyomor rákos sejtekben.

A jelenlegi standard kemoterápiát gyomorrák ciszplatin, de a siker mértéke a kezelés gyenge. A ciszplatin hatását függ a képesség, hogy DNS-károsodást indukáló [40, 41]. Ezért, hogyan rákos sejtek reagálnak a ciszplatin-indukált apoptózis kritikus szerepet játszik a ciszplatin érzékenységét. A legújabb jelentések azt mutatják, hogy a nikotin gátolja a ciszplatin által indukált apoptózist tüdőrák-sejtek, a szájüregi rák, RAW264.7 és EL4 sejteket [13, 16, 18], ami arra utalhat, hogy a nikotin megvan az a képessége nem csupán a rák fejlődését aktiválásával sejtnövekedés utak , hanem csökkenti a hatásosságát a kemoterápiás szerek által stimuláló túlélési utak. Egyetértésben a korábbi eredmények, az eredmények a jelen tanulmány kimutatta, hogy a társ-a sejtek kezelése ciszplatinnal és a nikotin, egy jelentős aktiválása kaszpáz-3 volt megfigyelhető, ami azt jelzi, hogy a nikotin képes meghatározni egy gátlását az apoptotikus potenciálja cisplatin a gyomorrák. katalógusa

A jelátviteli szabályozó sejt folyamatok, beleértve a sejtek szaporodását, a sejtciklus progresszióját és apoptózis, hogy jelentős hatással van döntő sejtes válasz cisplatin. Korábbi tanulmányok azt mutatták, hogy aktiválása az Akt aktiválását útvonal vezethet ellenállás ciszplatin [42, 43]. Egy túlzott expressziója szerin foszforilált AKT észlelt számos emberi rákos megbetegedések, beleértve a gyomorrák [44, 45]. Amint arról a különböző papírokat, nikotin kötődését nAChR vezet downstream aktiváció tumor elősegítő fehérjék, beleértve aktiválása AKT utakat [46-48]. Expozíció nikotin negatív hatása lehet az apoptotikus potenciálja ciszplatin humán szájüregi rák sejtek, és az AKT útvonal volt szükség nikotin funkció [16]. Azonban AKT útvonal nikotinos jelátviteli és az anti-apoptotikus hatását a nikotin a gyomor rákos sejtekben ismeretlen volt. Ezért megvizsgáltuk, hogy a P-Akt lehet felelős a antagonizáló hatás a nikotin a citotoxicitást a ciszplatin. Azt találtuk, hogy ko-siRNS-sel kezelt-α5-nAChR és LY294002, ami egy PI3K /AKT útvonal inhibitor, a megnövekedett a cisplatin indukálta apoptózis és legyengített hatásait nikotin BGC823 sejtekben. Számos tanulmány rávilágított nikotin aktivált AKT jelátviteli útvonalak van modulálására sejtproliferáció és túlélés aktiválása révén a prosurvival protein Bcl-2 és a survivin [15, 49, 50]. A kutatások azt is kimutatták, hogy szerepe a nikotin sejt által indukált apoptózis ciszplatin keresztül α5-nAChR /AKT megerősíti indukciós survivin és a Bcl-2, a végső effektor az utak felett. Katalógusa

Összefoglalva kimutattuk, hogy a nikotin aktivált α5-nAChR /Akt szignalizáció, és részt vesz az ellenállás a ciszplatin gyomorrák. Ezek az eredmények új betekintést a lehetséges molekuláris mechanizmusait nikotin gátlás a cisplatin indukálta apoptózis humán gyomorrák sejtek (5. ábra). A nikotin jelen cigarettafüstben zavarhatják gyomorrák gyógyszeres kezelés gátlásával kemoterápiás gyógyszer-indukált apoptózist. Célzó stratégiák megértése nikotin által közvetített jelátvitel fejlődését elősegítő javított terápiák gyomorrákban. Katalógusa

alátámasztó információk
S1 ábra. Kifejeződése α5-nAChR és α7-nAChR nélkül vagy α5-siRNS kezelés. Katalógusa doi: 10,1371 /journal.pone.0149120.s001 katalógusa (TIF) hotelben S2 ábra. Down-regulációja α5-nAChR expresszió csökkent szintje P-Akt.
Doi: 10,1371 /journal.pone.0149120.s002 katalógusa (TIF) katalógusa S3 ábra. Kifejeződése α5-nAChR BGC823 sejtek nélkül, vagy si-α5-nAChR kezelés. Katalógusa doi: 10,1371 /journal.pone.0149120.s003 katalógusa (TIF) hotelben S4 ábra. A nikotin támogatni BGC823 sejtburjánzás keresztül α5-nAChR és α7-nAChR. Katalógusa doi: 10,1371 /journal.pone.0149120.s004 katalógusa (TIF) hotelben S5 ábra. A nikotin támogatni SGC7901 sejtburjánzás keresztül α5-nAChR. Katalógusa doi: 10,1371 /journal.pone.0149120.s005 katalógusa (TIF) hotelben S6 ábra. A nikotin gátlása cisplatin indukálta apoptózis, a SCG7901.
Doi: 10,1371 /journal.pone.0149120.s006 katalógusa (TIF) katalógusa

• PLoS One: A nyirokcsomó Staging System gyomorrák: A hibrid típus alapján topográfiai és Numerikus Systems
• PLoS One: N-terminális polipeptid annexin A2 Csökkenti Fertőzés Mycoplasma hyorhinis gyomorrák Cells