PLoS One: csökkent expressziója AZGP1 társul rossz prognózissal Elsődleges gyomorkarcinóma

absztrakt katalógusa

Háttér katalógusa

2-cink-glikoprotein 1 (AZGP1) egy multidiszciplináris fehérje, amely részt vesz számos fontos funkciót az emberi testben, többek között trágyázás, immunregulációban és lipid mobilizáció. Újabban kimutatták, hogy a AZGP1 is részt vesz a karcinogenezis és a tumor differenciálódásának. Ebben a tanulmányban azt vizsgáltuk, az expressziós szintek és prognosztikus AZGP1 elsődleges gyomorrák. Katalógusa

módszerek és eredmények

kifejeződését vizsgáltuk AZGP1 35 páros rákos, és kiegyenlített szomszédos rákos gyomornyálkahártya szövetek valós idejű kvantitatív RT-PCR (qRT-PCR) és Western-blottal. Továbbá elemeztük AZGP1 kifejezés 248 átesett betegek eltávolítását eljárások 2005 és 2007 között immunhisztokémiai. Közötti kapcsolatok AZGP1 expressziós szint, a klinikopatológiai faktorok és a túlélés vizsgáltuk. AZGP1 expressziója szignifikánsan csökkentette mind az mRNS-t ( P
= 0,023), és a fehérje szint ( P
= 0,019) a tumor szövetminta, míg expressziója párosított szomszédos, nem-daganatos szövet mintákat . Az immunhisztokémiai festést adatok azt mutatták, hogy a AZGP1 expressziója szignifikánsan csökkent 52,8% (131/248) a gyomor adenokarcinóma eseteket. Klinikopatológiai elemzése azt mutatta, hogy a csökkent expressziója AZGP1 szignifikáns korrelációt mutatott a tumor helye ( P katalógusa = 0,011), a szövettani grade ( P katalógusa = 0,005) és a T stádium ( P
= 0,008). Kaplan-Meier túlélési görbék azt mutatta, hogy a csökkent expressziója AZGP1 járt egy rossz prognózissal gyomor adenokarcinóma betegek ( P katalógusa = 0,009). Többváltozós Cox analízisben azonosított AZGP1 expressziója független prognosztikai faktornak bizonyult az összesített túlélés a gyomor adenokarcinóma betegek (HR = 1,681, 95% CI = 1,134-2,494, P katalógusa = 0,011). Katalógusa

Következtetések

a tanulmány azt sugallja, hogy AZGP1 lehetne a jelölt tumorszuppresszornak potenciális prognosztikai biomarker a gyomorrák kialakulásában. katalógusa

Citation: Huang Cy, Zhao Jj, Lv L, Chen Yb, Li yf Jiang Ss, et al. (2013) csökkent expressziója AZGP1 társul rossz prognózissal Elsődleges gyomorrákban. PLoS ONE 8 (7): e69155. doi: 10,1371 /journal.pone.0069155 katalógusa

Szerkesztő: Alfons Navarro, University of Barcelona, ​​Spanyolország katalógusa

Beérkezett: március 5, 2013; Elfogadva: június 5, 2013; Megjelent: július 23, 2013 katalógusa

Copyright: © 2013 Huang et al. Ez egy nyílt hozzáférésű cikk feltételei szerint terjeszthető a Creative Commons Nevezd meg! Licenc, amely engedélyezi a korlátlan használatát, a forgalmazás és a reprodukció bármilyen adathordozón, feltéve, hogy az eredeti szerző és a forrás jóváírásra. Katalógusa

Forrás: Ez a munka támogatott doktori Alap Oktatási Minisztérium Kína (20100171110084). A finanszírozók nem volt szerepe a tanulmány tervezés, adatgyűjtés és elemzés, döntés, hogy közzéteszi, vagy a készítmény a kézirat. Katalógusa

Érdekütközés: A szerzők kijelentették, hogy nem ellentétes érdekek léteznek. Katalógusa

Bevezető

a gyomorrák a második leggyakoribb oka a rák összefüggő halálozás világszerte, 988.000 új esetet és 736.000 haláleset évente [1] - [2]. Kínában, gyomorrák jósolta, hogy a harmadik leggyakoribb rák 2005-ben 0,4 millió új esetet és 0,3 millió ember halálát jelentették [3]. A kezelés a gyomorrák kombinációját tartalmazza műtét, kemoterápia és sugárkezelés. De közel 60% -a érintett betegek zárkóznak gyomorrák után gyógyító reszekció egyedül vagy után kuratív rezekció későbbi adjuváns terápia [4]. A gyomorrák heterogén betegség mindkét szövettani és genetikai; így a betegek gyógyulását is nehéz megjósolni, klasszikus szövettani besorolást. A gyomor karcinogenezis multifaktoriális és többlépéses folyamat, amely magában aktiváló onkogének és inaktiváló tumorszuppresszor gének különböző szakaszaiban gyomorrák progresszió. Nemrégiben több új onkogének és tumorszuppresszor gének társított gyomorrákos azonosítottak. Ezért klinikailag fontos, hogy megtaláljuk a hatékony új célokat a korai diagnózis és hatékony kezelés gyomorrák.

AZGP1 (2-cink-glikoprotein 1, Zn-alfa-2-glikoprotein) egy 41 kDa-os oldható fehérje egy fő hisztokompatibilitási komplex 1 (MHC-1) -szerű szeres a struktúrájában, és ez kezdetben azonosított és tisztított humán szérumban 1961 [5]. A gént AZGP1, hozzárendelve a kromoszóma 7q22.1 keresztül fluoreszcens hibridizáció karyotipizálást, áll négy exont és három intront [6], [7]. Immunhisztokémiai vizsgálatok azt találták, hogy a AZGP1 ami leginkább epithelialis sejtek a mell, a prosztata, a májban és a különböző egyéb gastrointestinalis szervekben [8]. Összhangban a termelés által szekréciós hámsejtek, AZGP1 megtalálható számos testnedvek [9], [10], [11].

AZGP1 egy multidiszciplináris fehérje, amely részt vesz számos fontos funkciója van a emberi test, beleértve a megtermékenyítést [11], immunregulációban [12] és a lipid mobilizáció [13], [14], [15]. AZGP1 is társult rák cachexia. AZGP1 van egy magas szintű aminosav szekvencia homológiát mutat a tumor eredetű lipid-mobilizáló tényező [14], és egy egérmodelljében AZGP1-termelő daganatok, AZGP1 stimulált lipolízis adipociták vezető cachexia [16]. Újabban kimutatták, hogy a AZGP1 is részt vesz a karcinogenezis és a tumor differenciálódásának. Fehérje és mRNS expressziós vizsgálatok kimutatták, egy kapcsolat a AZGP1 szintek és a szövettani fokozatú emlőrák daganatok [17], [18]. Sőt, sok tanulmányok azt sugallják, hogy AZGP1 potenciális szérum markerének prosztatarák [9], [19]. Ezen túlmenően, kimutatták, hogy a AZGP1 viselkedik, mint egy újszerű tumorszuppresszor hasnyálmirigyrák [20]. Eddig azonban a kifejezés állapotát AZGP1 és prognosztikai értéke ennek a fehérjének a primer gyomor rák nem számoltak be. Katalógusa

Ebben a tanulmányban elemeztük AZGP1 expressziós szintjének gyomorrák segítségével valós idejű kvantitatív RT PCR-(qRT-PCR), western blot és immunhisztokémiai. Továbbá azonosítottuk a kapcsolatát AZGP1 expresszió és a klinikopatológiai jellemzői gyomorrák, és értékeltük a prognosztikai AZGP1 kifejezés utáni eltávolítását túlélése gyomorrákos betegek. Katalógusa

Eredmények katalógusa

AZGP1 mRNS-expresszió analizáltuk qRT-PCR

A transzkripciós szinteket AZGP1 határoztuk meg qRT-PCR assay-k 35 pár kimetszett minta (tumorszövet minták és kiegyenlített szomszédos, nem-daganatos szövet minta) származó gyomor rákos betegeknél. A AZGP1 mRNS-szinteket szignifikánsan csökkent a 28 (80%) a tumor szövetmintákat összehasonlítjuk a párosított szomszédos, nem-tumor szövetmintákat ( p
= 0,023, 1. ábra).

AZGP1 Expression Analyzed Western-blottal

a AZGP1 fehérje szint a reszekált gyomorrák mintákat határoztuk meg Western-blottal. Az eredmények azt mutatták sávot AZGP1 át 41 kDa, és az összeget a AZGP1 fehérje jelen mértük denzitometriás és magasság. Összhangban a QRT-PCR eredmények csökkenést AZGP1 expresszió volt megfigyelhető 25 (71,4%) mennyiségben a gyomor tumor szövetekben képest kiegyenlített szomszédos nem-daganatos szövetekben ( P
= 0,019, a 2A ábra). Nyolc pár reprezentatív gyomor daganatos szövetek és az egyező szomszédos nem-daganatos szöveteket 2B ábrán látható. Katalógusa

immunhisztokémiai elemzése AZGP1 Expression gyomorrákban szöveti mintákat és kapcsolata a Klinikopatológiai Jellemzők katalógusa

Annak érdekében, hogy erősítse a molekuláris biológiai eredmények és vizsgálja klinikopatológiai prognosztikai szerepét AZGP1 kifejezés végeztünk immunhisztokémiai analízis 248 paraffinba ágyazott gyomorrák szakaszok. A pozitív expresszióját AZGP1 volt a citoplazmában (ábra S1). Között a 248 gyomorrák mintákat, 117 (47,2%) mutatott magas AZGP1 expresszió (AZGP1 ++ vagy AZGP1 +++), míg a fennmaradó 131 esetben (52,8%) jelenik meg alacsony AZGP1 expresszió (AZGP1- vagy AZGP1 +) (3. ábra, 1. táblázat). Normál gyomor szövetek mutatta a legerősebb AZGP1 pozitív festéssel (3A). Katalógusa

Ennek alapján a kategória, hogy mi határozza meg a fent említett módszerek, az adatok azt mutatták, hogy az alacsony kifejeződése AZGP1 szignifikáns korrelációt mutatott a daganat lokalizációja ( P katalógusa = 0,011), a szövettani grade ( P katalógusa = 0,005) és a T stádium ( P katalógusa = 0,008), de nem az életkor, a nem, a daganat mérete, reszekcióra , nyirokcsomóstátusz (N stádium) vagy áttét állapot (M fázis). A mikroszkópos mutatja be a 3. ábra katalógusa

korrelációja AZGP1 Expression alapján immunhisztokémia és a betegek túlélési katalógusa

Az átlagos túlélési idő a 248 gyomorrákos betegek 45 hónap (2-89 hónap) . A teljes túlélési arány és az 5 éves túlélési arány szignifikánsan javult a nagy AZGP1 kifejezés csoportban, mint az alacsony kifejezés csoport [64,2% vs. 49,5% (teljes túlélési arány) és 65,1% vs. 50,4% (5 éves túlélés), illetve P katalógusa = 0,009, 4. ábra]. katalógusa

egy- és többváltozós elemzések katalógusa

az egyváltozós és többváltozós elemzéseket végeztünk, hogy összehasonlítsuk a hatását AZGP1 kifejezés és más klinikopatológiai paraméterek prognózis. Alapuló egyváltozós elemzés, amely tartalmazta az összes 248 beteg, 8 tényező találtak statisztikailag szignifikáns összefüggés a teljes túlélés. Ez az elemzés vett következő tényezők figyelembevételével: a daganat helyét, a daganat mérete, szövettani grade, AZGP1 expressziós szint, TNM (7. kiadás TNM osztályozás) és hogy egy reszekcióra végeztünk (2. táblázat). Minden 8 tényező vontak be egy többváltozós Cox modell segítségével állítsa be a hatását a kovariáns. A modell alapján, a tumor helye, AZGP1 expressziós szint, T-stádium és N szakaszában a daganat bebizonyosodott, hogy független prognosztikai faktorok (2. táblázat). Katalógusa

Vita katalógusa

A gyomorrák továbbra is az egyik a legtöbb halálos humán rosszindulatú betegségekben. Még előleg diagnosztika és a terápia, a prognózis gyomorrák még mindig lehangoló [1], [21]. A klinikai kimenetele gyomorrák függ egy sor tumor jellemzők, mint például a tumor növekedést, differenciálódást, invázió és távoli metasztázis, amely szabályozza a különböző kapcsolódó géneket. Ezért általában úgy, hogy a genetikai eltérések vezető aktiválását onkogének és a inaktiválása tumorszuppresszorok vannak a mögöttes oka a rák patogenezisében. A szekvenciális nyereség az onkogének és a veszteség a tumor szupresszor biztosítja a szükséges alapot a lépésenkénti előrehaladását szolid tumorok kezdetétől az átalakulás és a tumor progresszióját [22], [23], [24]. Korábban AZGP1 leírták, hogy rendelkeznek a tumor szuppresszív tulajdonságai a mellrák, prosztatarák, hasnyálmirigyrák és néhány más rosszindulatú daganatok [17], [20], [25]; azonban a szerepe AZGP1 elsődleges gyomorrák még nem vizsgálták. A tanulmány azt mutatta, hogy AZGP1 expressziója szignifikánsan csökkent mind az mRNS és fehérje szinten a tumor szövetminta, míg expressziója párosított szomszédos, nem-tumor szöveti mintákat. Összhangban a tanulmány Brysk MM et al. Kimutattuk továbbá, hogy a AZGP1 szintek magasabbak a normális orális szövetekben, mint az orális tumorokban [26]. Gagnon S et al. is bebizonyította, hogy AZGP1 jelen volt jóindulatú hyperplasiás mirigyek 91,1% -ában, de csak 40,7% (gyengén differenciált komponens) 48,5% (jól differenciált komponens) prosztata adenocarcinoma, és csak 8% metasztázisok [27]. Ezek a vizsgálati eredmények alátámasztják azt a hipotézist, hogy a AZGP1 szolgálhat egy tumorszuppresszor egyes daganatok.

Ahhoz, hogy tovább igazoljuk az csökkentését AZGP1 expressziója primer gyomorrák, végeztünk immunhisztokémiai analízissel, nyúl anti-hAZGP1 antitest. Megfigyeltük alacsonyabb kifejeződése AZGP1 immunfestést közelebbi vagy teljes gyomorrák képest távoli gyomorrák szövetekben. Egyes tanulmányok bizonyították, hogy a közelebbi gyomorrákos betegek rosszabb túlélési mint távoli gyomorrákos betegek [28]. Ezek az adatok arra utalnak, hogy az alacsony expressziója AZGP1 gyomorkarcinómában társított több malignus fenotípussal. Ezen túlmenően, azt találtuk, hogy csökkent expressziója AZGP1 társult rosszul differenciált adenocarcinoma (G3 vs. G1 /G2), jelezve, hogy AZGP1 indukálhatja a differenciálódását gyomorrák. Ezek az eredmények összhangban vannak a vizsgálat eredményeit Diez et al. [17], [18], aki leírta közötti társulás magas AZGP1 kifejezés és a magas szintű differenciálódás emlőrákban. Hasonló eredményeket is beszámoltak a prosztatarák [19], a mellrák és hasnyálmirigyrák [26]. Továbbá kimutattuk, hogy az alacsony kifejeződése AZGP1 járt fejlett T színpadon. Ezek az eredmények azt sugallta, hogy az alacsony kifejeződése AZGP1 elősegítheti a tumor növekedését. Összhangban a tanulmány Irmak S et al. azt javasolta, hogy AZGP1 kapcsolatban van a fejlesztés felszíni hólyagrák és átalakulási egy invazív fenotípust [29]. Ezek a megállapítások azt mutatják, együttesen fontos szerepet AZGP1 a differenciálódás és a növekedés a gyomorrák. Katalógusa

A Kaplan-Meier túlélési analízis az általunk vizsgált betegek alacsony AZGP1 kifejezés szignifikánsan rövidebb a teljes túlélés, mint a magas expressziós szinteket. Az egyváltozós elemzések azt mutatták, hogy a csökkent expressziója AZGP1 gyomorrákban szövetekben szignifikáns összefüggést a teljes túlélési arány és az 5 éves túlélési arány. A többváltozós elemzés igazolta, hogy AZGP1 kifejezés, valamint néhány hagyományos prognosztikai tényezők, mint például a tumor helyen, T-stádium és N szakaszban, független kockázati tényezők a gyomorrák prognózisa betegeknél. Ezek az eredmények arra utalnak, hogy a AZGP1 szolgálhat egy új előrejelzője prognózissal gyomorrákos betegek műtéti eltávolítása után. Katalógusa

A molekuláris mechanizmusainak AZGP1 tumor elnyomó tulajdonságokkal még nem tisztázott. AZGP1 tartozik macroglobulin család, egy ősi és evolúció konzervatív kapcsolat az immunrendszer. Zorin NA et al. azt javasolta, hogy a kapacitás macroglobulinokgyors kötődésért hidrolázok teszi a gátlása enzim által közvetített tumor invázió lehetséges [30]. Ugyanakkor, feleslegben makroglobulin /hidroláz komplexek aktiválhatja apoptózist [31]. Ő N et al. számolt be, hogy AZGP1 is leszabályozza ciklin-dependens kináz, amely a szabályozásáért felelős G2-M átmenetet, egy sebességmeghatározó lépés a sejtciklust. Ez azt sugallja, hogy AZGP1 közvetve szerepet játszik a hátráltató tumor progressziójának [32]. AZGP1 javasolták egy tumorszuppresszor a hasnyálmirigy rákot Kong B. et al. A tanulmány azt javasolta, hogy a AZGP1 gén indukál mesenchymalis-to-epiteliális transzdifferenciálódás gátlásával TGF-B-mediált ERK jelátviteli [20]. A funkcionális szerepe és mechanizmusai AZGP1 gyomorrákban szükség további vizsgálatra. Katalógusa

Végeredményben először vizsgáltuk az expressziós szintek és prognosztikus AZGP1 primer gyomor rák ebben a vizsgálatban. A tanulmány eredményei azt javasolta, hogy AZGP1 lehetne a jelölt tumorszuppresszornak prognosztikai biomarker primer gyomor rák és egy potenciális terápiás beavatkozási; azonban a molekuláris mechanizmusok szabályozásában vesz részt a AZGP1 gyomorrákban szavatolja a további vizsgálatot. katalógusa

Anyagok és módszerek katalógusa

Etikai Nyilatkozat katalógusa

Ez a kutatás által jóváhagyott Etikai Bizottsága Szun Jat-szen Egyetemen Cancer Center, és írásos beleegyezését adta minden beteg vett részt a tanulmányban. katalógusa

Humán Tissue Sample s Matton

az összesen 35 páros rákos és kiegyenlített szomszédos jóindulatú gyomornyálkahártya szöveteket gyűjtöttünk gyomorrákos betegek gastrectomián a Szun Jat-szen Egyetemen Cancer Center 2010-től 2011-műtéti eltávolítása után, a friss szövetek azonnal elmerül RNAlater (Ambion, Inc., USA), hogy elkerülje RNS-lebomlás, tároljuk 4 ° C hőmérsékleten egy éjszakán át, hogy lehetővé tegye alapos behatolását RNAlater a szövetbe, majd -80 ° C-on, amíg az RNS és a fehérje extrakciót végeztünk. Egy másik 248 paraffinba ágyazott primer gyomor carcinoma mintákban gyűlt össze 2005 és 2007 között kaptuk a Szun Jat-szen Egyetemen Cancer Center. Ezen betegek egyike sem kapott sugárterápia vagy kemoterápia a műtét előtt. A kórszövettani típusától és stádiumától gyomorrák szerint határoztuk meg a kritériumoknak a World Health Organization osztályozására és a TNM által meghatározott, az Unió nemzetközi Rákellenes. Katalógusa

kitermelése Teljes RNS és a valós idejű kvantitatív RT-PCR-

Teljes RNS-t extraháltunk TRIzol (Invitrogen, Carlsbad, Kalifornia, amerikai Egyesült Államok) alkalmazásával a gyártó protokollja szerint. A teljes RNS-koncentráció mérésével abszorbancia 260 nm-en egy nano DROP spektrofotométerrel (ND-1000, Thermo Scientific, USA). Reverz transzkripció (RT) szintetizálására az első cDNS szál alkalmazásával végeztük 2 ug össz-RNS-kezelt M-MLV reverz transzkriptáz (Promega, USA) a gyártó ajánlásai szerint. Az így kapott cDNS-t ezután vetjük alá a valós idejű kvantitatív RT-PCR-értékeléséhez a relatív mRNS szintjeit AZGP1 és GAPDH (gliceraldehid-3-foszfát-dehidrogenáz, mint belső kontroll), a következő primerekkel: AZGP1 Forward: 5'-GGAAGCAGGACAGCCAACTT -3 ', és reverz: 5'-TTATTCTCGATCTCACAACCAAAC-3'; GAPDH forward: 5'-CTCCTCCTGTTCGACAGTCAGC-3 ', és reverz: 5'-CCCAATACGACCAAATCCGTT-3'. Gén-specifikus amplifikációt végeztünk ABI 7900HT valós idejű PCR-rendszer (Life Technologies, Carlsbad, Kalifornia, USA) egy 15 ul PCR-keverék, amely 0,5 ul cDNS, 7,5 ul 2 × SYBR Green Master Mix (Invitrogen, Carlsbad, Kalifornia, amerikai Egyesült Államok), és 200 nM a megfelelő oligonukleotid primerek alkalmazásával. A keveréket előmelegített 95 ° C (10 perc), majd a felerősített 95 ° C (30 másodperc), és 60 ° C (1 perc) 45 cikluson keresztül. A felbontás görbe mértük 95 ° C-on 15 másodpercig, 60 ° C-on 15 másodpercig és 95 ° C-on 15 mp. A CT (küszöb ciklus) értékét minden egyes minta számított küszöbérték ciklusok az eszköz szoftver (SDS 2.3), és a relatív expresszióját AZGP1 mRNS átszámítható a GAPDH érték. Az adatokat elemeztük az összehasonlító küszöb ciklus (2 ^{-ΔCt) eljárás, a következő képlet szerint: relatív expressziós szint = 2 -ΔCt = 2 -CT (GAPDH) - 2 -CT (AZGP1), amelyben CT (GAPDH) jelenti a Ct érték GAPDH és a CT (AZGP1): az Ct értéke AZGP1.}

Western-blot-analízis

a homogenizált gyomorrák mintákat, beleértve a tumor és a nem-tumoros szövetekben, lizáltuk RIPA lízispufferben, és a lizátumot centrifugálással (12000 rpm), 4 ° C-on 30 percig. Körülbelül 20 ug fehérje mintákat ezután elektroforézissel elválasztottuk, egy 12% -os nátrium-dodecil-szulfát poliakrilamid gélen és átvisszük egy polivinilidén-fluorid membránok. Blokkolás után a nem specifikus kötőhelyeket 60 percig, 5% zsírmentes tej, a membránokat inkubáltuk egy éjszakán át 4 ° C-on egy nyúl monoklonális antitest ellen AZGP1 (PTG Company, USA, egy 1:200 hígítás). Ezután a membránokat háromszor mossuk TBST-vel (Tris-pufferolt sóoldattal Tween-20) 10 percig, és próbaként a torma-peroxidáz (HRP) konjugált kecske anti-nyúl IgG antitesttel (Immunology Consultants Laboratory, USA, egy 1: 2000 hígításban) 37 ° C-on 1 órán át. Három mosás után a membránokat által kifejlesztett egy továbbfejlesztett kemilumineszcenciás rendszert (Cell Signaling Technology, Danvers, Massachusetts, USA). A sáv intenzitása mértük denzitometriás segítségével Quantity One szoftver (Bio-Rad Laboratories, Inc. Hercules, CA, USA). A fehérje szintje normalizáltuk, hogy a GAPDH alkalmazásával detektáltuk egér anti-humán GAPDH monoklonális antitest (Shanghai Kangchen, Kína, egy 1:10000 hígítás).

Immunhisztokémia Elemzés

A szöveti metszetek arra paraffint a dimetilbenzol és rehidratált keresztül 100%, 95%, 90%, 80% és 70% etanolt tartalmaz. Három mosás után PBS-ben (foszfáttal pufferolt sóoldat), a lemezeket forraljuk antigén visszakeresés tartalmazó pufferben 0,01 M nátrium-citrát-sósav (pH = = 6,0) 15 percig egy mikrohullámú sütőben. Öblítés után PBS-sel, a szöveti metszeteket a primer antitest és a lemezeket ezután leöblítettük 3% peroxidáz kioltás oldatot (Invitrogen), hogy blokkolja az endogén peroxidáz. A metszeteket ezután inkubáltuk egy nyúl monoklonális antitest ellen AZGP1 (PTG Company, USA, egy 1:200 hígítás), 4 ° C-on egy éjszakán át, majd inkubáljuk torma-peroxidázzal (HRP) (ChemMateTM DAKO EnVisionTM Detection Kit) szobahőmérsékleten 30 perc alatt. Mosás után PBS-ben, a megjelenítő jelet fejlesztették 3, 3'-diamino-benzidin (DAB) oldattal, és az összes a metszeteket hematoxilinnel ellenfestettük. Negatív kontrollként a szomszédos metszeteket a fent ismertetett eljárással, kivéve, hogy egy éjszakán át inkubáltuk 4 ° C-blokkoló oldatban anélkül, hogy a primer antitesttel.

A mintákat elemezzük három megfigyelő (Chunyu Huang, Lin Lv, és Jingjing Zhao), akik tudták, hogy a betegek klinikai kimenetelt. Közötti eltérések megfigyelők találtak kevesebb, mint 10% -át a vizsgált diák és egyetértés született után további felülvizsgálatra. A teljes AZGP1 immunfestést pontszám számítottuk az összeg a százalékos pozitivitás (a százalékos aránya a pozitívan festődő tumorsejtek), és a festődés intenzitását. A százalékos pozitivitás pontoztuk, mint "0" (< 5%, negatív), "1" (5-25%, sporadikus), a "2" (25-50%, fokális), vagy a "3" (> 50 %, diffúz). A festődés intenzitása pontoztuk, mint "0" (nincs festés), "1" (gyengén festett), a "2" (mérsékelten festett), vagy a "3" (erősen festett). A teljes AZGP1 immunfesté pontszám paraméter 0 és 9 meghatároztuk a AZGP1 expressziós szinteket a következők szerint: "-" a pontszám 0-1, "+" egy pontszám 2-3, amelyeket meghatározott alacsony kifejezés; "++" A pontszám 4-6, és a "+++" egy pontszám > 6, amelyeket meghatározott magas kifejezés. Katalógusa

Follow-Up katalógusa

A posztoperatív nyomon -up végeztük a járóbeteg és tartalmazza a klinikai és laboratóriumi vizsgálatokat 3 havonta az első 2 évben, minden 6 hónap alatt a harmadik, negyedik és ötödik évben, és évente további 5 évig, vagy addig, amíg a beteg halálát, amelyik történt először. A teljes túlélés, amely definíció szerint az idő a művelet a beteg halála, illetve az utolsó utánkövetés használták az intézkedés a prognózist. Voltak körülbelül 4% a betegek elveszett nyomon követést.

Statisztikai elemzés

párosított-mintás t-tesztet alkalmaztunk, hogy összehasonlítsuk a AZGP1 mRNS szintek a tumorszövetben mintákat és a szomszédos nem tumorszövet minták. A χ katalógusa ^{2 teszt aránya és a Pearson-féle korrelációs együttható segítségével elemeztük a kapcsolatát AZGP1 véleménynyilvánítás és a különböző klinikopatológiai jellemzők. A teljes túlélési görbéket a Kaplan-Meier módszerrel és elemeztük a log-rank teszt. Cox-veszély analízist alkalmaztunk egyváltozós és többváltozós elemzés, hogy vizsgálja meg a hatását klinikopatológiai paramétereivel és AZGP1 kifejezés a túlélésre. A kétoldalas P katalógusa -érték < 0,05 tekintettük statisztikailag szignifikánsnak. Minden statisztikai elemzéseket az SPSS szoftver (version 17.0; SPSS Inc., Chicago, IL, USA). Katalógusa}

alátámasztó információk
ábra S1.
immunhisztokémiai kimutatását AZGP1 protein expresszió gyomorrák szövetben. A pozitív kifejeződése AZGP1 volt a citoplazmában. Katalógusa doi: 10,1371 /journal.pone.0069155.s001 katalógusa (TIF) hotelben

• PLoS One: Csökkent a miR-202-3p Expression, a Novel tumor szupresszor, a gyomor Cancer
• PLoS One: egy új felosztásáról a pT4 gyomorrák szerint a szélessége Savós Invasion