PLoS ONE: smanjena ekspresija AZGP1 je povezana s lošom prognozom u Osnovnoj rak želuca

Sažetak pregled

Pozadina pregled

2-cink-glikoproteina 1 (AZGP1) je multidisciplinarni protein koji sudjeluje u mnogim važnim funkcijama u ljudskom tijelu, uključujući i oplodnje, imunološkom i mobilizacije lipida. Nedavno je pokazano da AZGP1 također uključena u karcinogeneze i diferencijacije tumora. U ovoj studiji istraživali smo razine ekspresije i prognostičku vrijednost AZGP1 u osnovnim želučanog karcinoma. Pregled

Metode i rezultati

Ispitali smo ekspresiju AZGP1 u 35 paru zloćudni i uskladiti susjedne noncancerous sluznicu želuca tkiva u realnom vremenu kvantitativnog RT-PCR (QRT-PCR) i Western blot. Nadalje, analizirali smo ekspresiju AZGP1 u 248 pacijenata koji su se podvrgnuli postupke resekcija između 2005. i 2007. godine uz korištenje imunohistokemija. Odnosi između razina AZGP1 ekspresije, istraživali su kliničkopatološkim čimbenici i opstanak pacijent. AZGP1 izraz bio je značajno smanjen na razini mRNA ( P pregled = 0,023) i proteina razina ( P pregled = 0,019) u uzorcima tkiva tumora, u usporedbi s izrazom u odgovarajućih uzoraka tkiva susjednih ne-tumorske , Imunohistokemijske podaci bojanja pokazali da AZGP1 izražavanje bilo značajno smanjena u 52,8% (131/248) adenokarcinoma slučajeva želuca. Kliničkopatološkim analiza je pokazala da je smanjena ekspresija AZGP1 bilo značajno povezano s postavljanjem tumora ( P pregled = 0,011), histološkog stupnja ( P pregled = 0,005) i T fazi ( P
= 0.008). Kaplan-Meier krivulje preživljavanja pokazala da je smanjena ekspresija AZGP1 bila je povezana s lošom prognozom u bolesnika želučanog adenokarcinoma ( P pregled = 0,009). Multivarijatna analiza Cox identificirati AZGP1 izraz bio neovisan prognostički čimbenik za ukupno preživljenje pacijenata želučanog adenokarcinoma (HR = 1.681, 95% CI = 1.134-2.494, P pregled = 0,011). Pregled

Zaključci

Naša studija pokazuje da AZGP1 može poslužiti kao supresor tumora kandidat i potencijalni prognostički biomarkera u želučanom karcinogeneze pregled

Izvor:. Huang Cy, Zhao JJ, Lv L, Chen Yb, Li YF, Jiang ss, et al. (2013) Smanjen Izražavanje AZGP1 je povezana s lošom prognozom u Osnovnoj rak želuca. PLoS ONE 8 (7): e69155. doi: 10,1371 /journal.pone.0069155 pregled

Urednik: Alfons Navarro, Sveučilište u Barceloni, Španjolska pregled

Primljeno: ožujak 5, 2013; Prihvaćeno: 5. lipnja 2013; Objavljeno: 23. srpnja 2013 pregled

Copyright: © 2013 Huang i sur. Ovo je otvorenog pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan

financiranja. Ovo djelo bio podržan od doktorskog fonda Ministarstva prosvjete Kine (20100171110084). U financijeri nisu imali ulogu u studiju dizajna, prikupljanja i analize podataka, Odluka o objavi, ili pripremu rukopisa pregled

U konkurenciji interese.. Autori su izjavili da ne postoje suprotstavljeni interesi pregled

Uvod pregled

rak želuca je drugi najčešći uzrok smrtnosti od raka povezanih širom svijeta, sa 988,000 novih slučajeva i 736,000 smrtnih slučajeva godišnje [1] - [2]. U Kini, rak želuca može se predvidjeti treći najčešći rak u 2005. godini s 0,4 milijuna novih slučajeva i 0,3 milijuna smrtnih slučajeva prijavili [3]. Liječenje karcinoma želuca uključuje kombinaciju operacije, kemoterapije i terapije zračenjem. No, gotovo 60% pogođenih pacijenata podleći raka želuca nakon samo kurativne resekcije ili nakon kurativne resekcije s naknadnim adjuvantne terapije [4]. Rak želuca je heterogena bolest u oba histologiju i genetike; Dakle, rezultat je pacijent teško predvidjeti klasičnim histološkim klasifikacije. Želuca karcinogeneze je više faktora i više koraka koji obuhvaća aktivaciju onkogena i inaktivaciju gena za suzbijanje tumora u različitim stadijima progresije želučane raka. Nedavno je nekoliko novih onkogena i tumor supresorski geni povezani s rakom želuca su identificirani. Stoga je klinički važno pronaći učinkovite nove ciljeve za rano dijagnosticiranje i učinkovito liječenje karcinoma želuca. Pregled

AZGP1 (2-cink-glikoproteina 1, Zn-alfa 2-glikoprotein) je 41 kDa topivi protein s glavnim histokompatibilnim-1 (MHC-1) nalik na poklopac u njegovu strukturu, a početno je identificiran i pročišćen u humanom serumu 1961 [5]. Gen za AZGP1, dodijeljen kromosomu 7q22.1 preko fluorescentnih hibridizacijski karyotyping, sastoji se od četiri eksona i tri introna [6], [7]. Imunohistokemijskim studija utvrđeno je da AZGP1 se izlučuje pretežno u epitelnim stanicama dojke, prostate, jetre i razne druge gastrointestinalne organe [8]. U skladu sa svojim produkciji izvodnih epitelnih stanica, AZGP1 nalazimo u brojnim tjelesnim tekućinama [9], [10], [11]. Pregled

AZGP1 je multidisciplinarni protein koji sudjeluje u mnogim važnim funkcijama u ljudsko tijelo, uključujući i oplodnje [11], imunološkom [12] i lipida mobilizacije [13], [14], [15]. AZGP1 također povezan s cachexia raka. AZGP1 ima visoku razinu aminokiselinskom homologije s lipidima mobilizacije faktora tumor potječe [14], i u mišjem modelu tumora AZGP1 proizvodnju, AZGP1 stimulira lipolizu u adipocitima vode cachexia [16]. Nedavno je pokazano da AZGP1 također uključena u karcinogeneze i diferencijacije tumora. Proteina i mRNA testovi pokazuju vezu između razine AZGP1 i histološke razred tumora dojke [17], [18]. Osim toga, mnoge studije sugeriraju da AZGP1 je potencijalni serum marker za rak prostate [9], [19]. Osim toga, pokazano je da djeluje kao AZGP1 novi tumor supresor kod raka gušterače [20]. Međutim, do sada je izraz status AZGP1 i prognostičku vrijednost ovog proteina u osnovnim želučanog karcinoma nisu zabilježene. Pregled

U ovoj studiji analizirali smo razinu AZGP1 izraz u želučanog karcinoma pomoću realnom vremenu kvantitativni RT -PCR (QRT-PCR), western blot i imunohistokemijski. Nadalje, utvrdili smo odnos između izraza AZGP1 i kliničkopatološkim obilježja karcinoma želuca, a mi smo ocijenili prognostičku vrijednost AZGP1 izraza za post-resekcija preživljavanje pacijenata s rakom želuca. Pregled

Rezultati

AZGP1 mRNA Analizirano sa QRT-PCR Netlogu

transkripcijski razine AZGP1 su određene s QRT-PCR testova koji koriste 35 pari reseciranih uzoraka (uzorci tkiva tumora i odgovarajuće uzorke tkiva susjednih ne-tumorske) od pacijenata s rakom želuca. Razine AZGP1 mRNA su značajno smanjeni u uzorcima 28 (80%) tumorskog tkiva u usporedbi s odgovarajućih uzoraka susjedna non-tumorskog tkiva ( P pregled = 0,023, Slika 1). Pregled

AZGP1 ekspresija je analizirana pomoću Western blot

razine proteina AZGP1 u reseciranog uzoraka raka želuca određuje se pomoću Western blot-a. Rezultati su pokazali područje za AZGP1 na 41 kDa, a količina AZGP1 proteina nazočnog mjerena je denzitometrijom i visine. U skladu s rezultatima QRT-PCR, smanjenje ekspresije AZGP1 opažena u 25 (71,4%), od tumorskog tkiva želuca u usporedbi s podudarnim susjednim ne-tumorskih tkiva ( P pregled = 0,019, Slika 2A). Osam parova reprezentativnih želučane tumorskih tkiva i podudarni susjednih ne-tumorskih tkiva su prikazani na slici 2B. Pregled

imunohistokemijska analiza AZGP1 izražavanja u rak želuca uzorci tkiva i njegov odnos s kliničkopatološkim Značajke pregled

kako bi se potvrdila molekularnih bioloških otkrića i istražiti kliničkopatološka prognostičke uloge AZGP1 izražavanja, proveli smo imunohistokemijske analize u 248 sekcijama rak želuca parafin-ugrađen. Pozitivni izraz AZGP1 je lokaliziran u citoplazmu (Slika S1). Među 248 uzoraka želučane raka, 117 (47,2%) su pokazali visoku AZGP1 izraz (AZGP1 ++ ili AZGP1 +++), dok je preostalih 131 slučajeva (52,8%) prikazuje nisku AZGP1 izraz (AZGP1- ili AZGP1 +) (slika 3, tablica 1). Normalni želučani tkiva pokazala je najjači AZGP1 pozitivno bojenje (slika 3A). Pregled

Na temelju kategorija koje smo definirali u gore navedenih metoda, podaci su pokazali da je niska ekspresija AZGP1 je značajno korelira s položaja tumora ( P pregled = 0,011), histološki stupanj ( P pregled = 0,005), a T faza ( P pregled = 0,008), ali ne s dobi, spolu, veličini tumora, radikalna resekcija , čvora status (N faza) ili stanje metastaza (M faza). Mikrografi su prikazani na slici 3. pregled

Korelacija AZGP1 izražavanja na temelju imunohemije i preživljenje bolesnica Netlogu

Prosječno vrijeme preživljavanja pacijenata oboljelih od raka želuca 248 bio je 45 mjeseci (raspon 2-89 mjeseci) , Ukupna stopa preživljavanja i 5-godišnje stopa preživljavanja je znatno poboljšana u high AZGP1 ekspresije skupine od niske ekspresije skupine [64,2% naspram 49,5% (ukupna stopa preživljavanja), a 65,1% u odnosu na 50,4% (stopa preživljavanja od 5 godina), odnosno, p pregled = 0,009, Slika 4]. pregled

univarijantna i multivarijatne analize pregled

Jednosmjerna i multivarijatne analize su provedene usporediti utjecaj izražavanja AZGP1 i drugih kliničkopatološkim parametara na prognoza. Na temelju univarijantne analize koja je uključivala sve 248 bolesnika, 8 faktora je utvrđeno da su statistički značajne povezanost s ukupnom preživljavanju. Ova analiza je sljedeće čimbenike u obzir: lokacija tumora, veličina tumora, histološki stupanj, razina AZGP1 izraz, TNM stadija (7. izdanje TNM klasifikacija) i da li se radikalna resekcija je izvedena (Tablica 2). Svih 8 faktori su uključeni u više varijacija Cox proporcionalnih rizika modela za podešavanje učinaka kovarijanata. Na temelju ovog modela, lokacija tumora, AZGP1 razinama ekspresije, T pozornici i N stadiju tumora su potvrđeni kao nezavisni prognostički čimbenici (tablica 2). Pregled

Rasprava pregled

karcinoma želuca i dalje jedan od najsmrtonosnijih ljudskih malignoma. Čak i uz napredak u dijagnostici i terapiji, prognoza za rak želuca još uvijek tužan [1], [21]. Klinički ishod raka želuca ovisi o nizu karakteristika tumora, kao što su rast tumora, diferencijacije, invazije i udaljenim metastazama, koje su regulirane različitim srodnih gena. Dakle, općenito se smatra da genetski promjene dovode do aktivacije onkogena i inaktivacije tumor smetnji su temeljni uzroci patogenezi raka. Pojedinačno dobitak od onkogena i gubitka tumora smetnji pružiti potrebnu osnovu za korak po korak, napredovanje na solidnih tumora od uvođenja u transformaciji i progresiju tumora [22], [23], [24]. Prije toga, AZGP1 je izvijestila da posjeduje tumora supresivnu svojstva kod raka dojke, rak prostate, rak gušterače i nekih drugih zloćudnih tumora [17], [20], [25]; Međutim, još uvijek nije procijenjena uloga AZGP1 u osnovnoj raka želuca. Naša studija pokazuje da izražavanje AZGP1 je značajno smanjena na obje razine mRNA i proteina u uzorcima tkiva tumora, u usporedbi s izrazom u odgovarajućih uzoraka tkiva susjednih ne-tumorske. U skladu s našim studija, Brysk MM i dr. Također je pokazalo da su razine AZGP1 su više u normalnim oralnim tkivima nego u oralnim tumorima [26]. Gagnon S et al. Također je dokazao da AZGP1 bio prisutan u benignim hiperplastičnih žlijezde u 91,1% slučajeva, ali u samo 40.7% (slabo diferencirane komponenta) do 48,5% (dobro diferencirani komponenta) od prostate adenokarcinoma i samo 8% metastaza [27]. Ovi rezultati studije podupiru hipotezu da AZGP1 može poslužiti kao supresor tumora kod nekih oblika raka. Pregled

Da bi se potvrdilo ovo smanjenje AZGP1 izražavanja u osnovnoj karcinoma želuca, proveli smo imunohistokemijske analize sa zečjim anti-hAZGP1 antitijela. Uočili smo nižu ekspresiju AZGP1 imunološkim u proksimalnom ili ukupnog raka želuca u usporedbi s udaljenim želučanog tkiva raka. Neke studije su pokazale da bliži pacijenata s rakom želuca imaju lošiju preživljavanje od dalekih bolesnika s karcinomom želuca [28]. Ovi podaci sugerirali da niska ekspresija AZGP1 kod raka želuca je povezana s više malignih fenotipa. Osim toga, otkrili smo da je smanjena ekspresija AZGP1 povezana je sa slabo diferencirani adenokarcinome (G3 nasuprot G1 /G2), što ukazuje da AZGP1 mogu inducirati diferencijaciju raka želuca. Ovi rezultati su u skladu s nalazima Diez i sur. [17], [18] koji je opisao povezanost između visoke AZGP1 izražavanja i visoke razine diferencijacije u raka dojke. Slični rezultati su također izvijestili za rak prostate [19], raka dojke i raka gušterače [26]. Osim toga, otkrili smo da je niska ekspresija AZGP1 bio povezan s naprednim T fazi. Ovi rezultati implicira da je niska ekspresija AZGP1 može promicati rast tumora. U skladu s našim studija, Irmak S i sur. predložio da AZGP1 je povezana s razvojem površinskog karcinoma mokraćnog mjehura i njegove transformacije u invazivni fenotipa [29]. Ovi rezultati ukazuju na kolektivno važnu ulogu za AZGP1 u diferencijaciju i rast karcinoma želuca. Pregled

Pomoću analize preživljavanja Kaplan-Meier, pacijenti su u našem istraživanju s niskim AZGP1 izražavanja imali značajno kraće ukupno preživljenje od onih s visokim ekspresije. Jednosmjerna analiza je pokazala da je smanjena ekspresija AZGP1 u želučanim tkiva raka je značajno povezan s ukupnom stopom preživljavanja i stope preživljenja od 5 godina. Multivarijatna analiza je pokazala da je AZGP1 izraz, zajedno s nekim tradicionalnim prognostičkih čimbenika kao što su lokacija tumora, T pozornici i N fazi, bili neovisni rizični čimbenici u prognozi bolesnika s rakom želuca. Ovi rezultati sugeriraju da AZGP1 može poslužiti kao novi prediktor prognozu u bolesnika s karcinomom želuca nakon kirurške resekcije. Pregled

Molekularni mehanizmi tumorske potiskuju svojstava AZGP1-a i dalje su nejasni. AZGP1 pripada makroglobulin obitelji, drevnom i evolucijski konzervativne link imunološkog sustava. Zorin NA et al. Predlaže se da sposobnost makroglobulini za vezanje hidrolaza čini inhibiciju tumorske invazije posredovanog enzimima mogućih [30]. Istovremeno, suvišak makroglobulin /hidrolaza kompleksa može aktivirati apoptozu [31]. Je N et al. izvijestili da AZGP1 također podregulira ciklin-ovisne kinaze, koja je odgovorna za reguliranje G2-M prijelaza, koja određuje brzinu korak staničnog ciklusa. To sugerira da AZGP1 posredno igra ulogu u sprečava progresiju tumora [32]. AZGP1 predložen je kao sredstvo za suzbijanje tumora u karcinoma pankreasa Kong B. et al. Njihova studija je predložio da AZGP1 gen uzrokuje mezenhimalne-na-epitela transdiferencijacija inhibirajući TGF-b-posredovane ERK signalizaciju [20]. Funkcionalna uloga mehanizmi AZGP1 kod raka želuca je potrebno daljnje istraživanje. Pregled

Na kraju, prvo smo istražili razine ekspresije i prognostičku vrijednost AZGP1 u osnovnim želučanog karcinoma u ovoj studiji. Naši rezultati istraživanja sugerira da AZGP1 može poslužiti kao supresor tumora kandidat i prognostički biomarkera u osnovnoj želučanog karcinoma i biti potencijalna meta za terapijsku intervenciju; Međutim, molekularni mehanizmi koji su uključeni u regulaciju AZGP1 u želučanih naloga raka daljnje istrage. pregled

materijali i postupci

Izjava Etika pregled

Ovo istraživanje je odobrilo Etičko povjerenstvo Sun Yat-sen University Cancer Center i pismeni informirani pristanak dobiven je od svakog pacijenta koji su uključeni u studiju. pregled

Human Tissue Uzorak s

ukupno 35 paru kancerogeni i odgovarajući susjedne noncancerous želučane sluznice tkiva prikupljeni su od pacijenata s rakom želuca prolaze gastrektomije na Sun Yat-sen University Cancer Center u razdoblju od 2010. do 2011. Nakon kirurške resekcije, svježe tkiva su odmah uroni u RNAlater (Ambion, Inc., SAD) kako bi se izbjeglo degradacija RNA, pohranjeno na 4 ° C preko noći kako bi se omogućilo prodiranje temeljito RNAlater u tkivu i zatim zamrznute na -80 ° C sve dok se ekstrakcija RNA i proteina je provedena. Još 248 primarni uzorci karcinom želuca parafin uklopljenih koji su prikupljeni u razdoblju između 2005. i 2007. godine dobiveni su iz Sun Yat-sen University Cancer Center. Nijedan od ovih bolesnika nije primio radioterapiju ili kemoterapiju prije operacijskog zahvata. Histopatološko tip i stadij raka želuca određuje se prema kriterijima klasifikacije Svjetske zdravstvene organizacije i pozornice TNM utvrđenim od strane Unije za međunarodnu kontrolu raka. Pregled

Ekstrakcija ukupne RNA i real-time Kvantitativna RT-PCR pregled

Ukupna RNA je ekstrahirana korištenjem Trizol (Invitrogen, Carlsbad, Kalifornija, SAD) prema uputama proizvođača. Ukupna koncentracija RNA je procijenjena mjerenjem apsorbancije pri 260 nm upotrebom spektrofotometra (NANO DROP ND-1000, Thermo Scientific, USA). Reverzna transkripcija (RT) za sintezu prvog lanca cDNA izvedena je pomoću 2 ug ukupne RNA tretira s M-MLV reverzne transkriptaze (Promega, SAD), prema preporukama proizvođača. Dobivena cDNA je zatim podvrgnut stvarnom vremenu kvantitativnog RT-PCR za procjenu relativne mRNK razinama AZGP1 i GAPDH (gliceraldehid-3-fosfat dehidrogenaze, kao interna kontrola) sa slijedećim klicama: AZGP1 naprijed: 5'-GGAAGCAGGACAGCCAACTT -3 ', i obrnuto: 5'-TTATTCTCGATCTCACAACCAAAC-3'; GAPDH naprijed: 5'-CTCCTCCTGTTCGACAGTCAGC-3 ', i obrnuto: 5'-CCCAATACGACCAAATCCGTT-3'. amplifikacije gena specifičnih provedena je pomoću real-time PCR sustav ABI 7900HT (Life Technologies, Carlsbad, Kalifornija, SAD) s 15 ul PCR smjese s 0.5 jal cDNA, 7,5 ul 2 × SYBR Green master mix (Invitrogen, Carlsbad, California, USA), i 200 nM odgovarajućih oligonukleotididnih primera. Mješavina zagrije na 95 ° C (10 min), a zatim pojačan na 95 ° C (30 sekundi) i 60 ° C (1 minuta) za 45 ciklusa. Krivulja rezolucija je mjerena na 95 ° C 15 s, 60 ° C tijekom 15 sekundi i 95 ° C tijekom 15 sekundi. CT (prag ciklusa) vrijednosti svakog uzorka je izračunata s praga ciklusa s softveru instrumenta (SDS 2,3), a relativna ekspresija AZGP1 mRNA se normalizira vrijednosti GAPDH. Podaci su analizirani primjenom usporedne prag ciklusa (2 ^{-ΔCt) Postupak koji se prema sljedećoj formuli: Relativna razina ekspresije = 2 -ΔCt = 2 -Ct (GAPDH) - 2 -Ct (AZGP1), u kojoj Ct (GAPDH) znači vrijednost CT GAPDH i CT (AZGP1) znači vrijednost CT AZGP1.}

Western blot-analiza

homogenizirani uzorci želučane raka, uključujući tumor i nontumor tkiva, liziran je u RIPA pufera za lizu, a lizati su skupljene centrifugiranjem (12.000 okretaja u minuti) na 4 ° C tijekom 30 minuta. Približno 20 J..lg proteina uzoraka se zatim razdvoji elektroforezom u 12% natrij dodecil sulfata poliakrilamidnom gelu i prenesen na polivinilidenfluorid membrane. Nakon blokiranja nespecifična mjesta za vezanje 60 min s 5% bezmasnim mlijekom, membrane se inkubiraju preko noći na 4 ° C sa zečjim monoklonalnog antitijela protiv AZGP1 (PTG Company, SAD, na 1:200 razrjeđenje). Membrane su zatim isprane tri puta s TBST (tris-puferiranoj otopini soli s Tween-20) tijekom 10 minuta i ispitana sa peroksidazom hrena (HRP), koje je konjugirano kozje anti-zečje IgG protutijelo (Immunology konzultanata Laboratory, SAD, na 1: 2000 razrjeđenje) na 37 ° C kroz 1 sat. Nakon tri ispiranja, membrane su razvijeni od strane hemiluminiscencija sustava (Cell Signaling Technology, Danvers, Massachusetts, USA). Intenzitet Bend je mjerena densitometrij pomoću softvera Količina One (Bio-Rad Laboratories, Inc. Hercules, CA, USA). Razine proteina su normalizirane na one GAPDH detektira uporabom anti-miša humanog GAPDH monoklonsko protutijelo (Shanghai Kangchen Kina, na 1:10000 razrjeđenje).

Imunohistokemijska analiza pregled

Rezovi tkiva su deparafmizirani s dimetilbenzen i rehidrirane 100%, 95%, 90%, 80% i 70% etanola. Nakon tri ispiranja u PBS (fosfat-buferirana otopina soli), stakalca su kuhani u antigena dohvat puferu koji je sadržavao 0,01 M natrijev citrat-solnom kiselinom (pH = 6,0), tijekom 15 min u mikrovalnoj pećnici. Nakon ispiranja s PBS, sekcije tkiva su inkubirani sa primarnim antitijelima te su stakalca tada ispere 3% otopine peroksidaza gašenje (Invitrogen) kako bi se blokirala unutarnja peroksidaza. Sekcije su zatim inkubirane sa zečjim monoklonalnog antitijela protiv AZGP1 (PTG Company, SAD, na 1:200 razrjeđenja) na 4 ° C preko noći i potom inkubiraju s peroksidazom iz hrena (HRP) (DAKO ChemMateTM EnVisionTM Detection Kit) na sobnoj temperaturi 30 min. Nakon ispiranja u PBS, vizualizacija signal je razvijen s 3, 3'-diaminobenzidin (DAB) otopini i sve slajdove su prebrojane s hematoksilinom. Kao negativne kontrole, susjedne sekcije su obrađeni kako je gore opisano, osim što su inkubirani preko noći na 4 ° C u blokirajućoj otopini bez primarnog antitijela, pregled

Uzorci su analizirani pomoću tri promatrači (Chunyu Huang, Lin LV i Jingjing Zhao), koji su zaslijepljeni kliničkih ishoda pacijenata. Razlike između promatrača pronađeni su u manje od 10% pregledanih dijapozitiva, postignut je konsenzus nakon daljnje razmatranje. Ukupna ocjena AZGP1 imunološko izračunata je kao zbroj posto pozitivnosti (postotak od pozitivno obojenih stanica tumora) i intenzitet bojenja. Posto pozitivnost ocijenjena je kao "0" (< 5%, negativno), "1" (5-25%, sporadično), "2" (25-50%, žarišna), ili "3" (> 50 %, difuzno). Intenzitet bojenja ocijenjena je kao "0" (bez mrlja), "1" (slabo obojeni), "2" (umjereno obojeni), ili "3" (snažno obojeni). Ukupna AZGP1 imunološko ocjena u rasponu od 0 do 9. definirana je razina AZGP1 izraz na sljedeći način: "-" za rezultatom 0-1, "+" za rezultatom od 2-3, koje su definirane kao niska izražavanja; "++" Za rezultatom 4-6, a "+++" za rezultat >. 6, koji su definirani kao veliku ekspresiju pregled

Follow-Up pregled

operativno praćenje -up je provedeno u našoj ambulanta i uključiti kliničke i laboratorijske preglede svaka 3 mjeseca za prve 2 godine, svakih 6 mjeseci tijekom treće do pete godine, a svake godine za dodatnih 5 godina ili do smrti pacijenta, koje je prvo dogodile. Ukupno preživljenje, koja se definira kao vrijeme od operacija smrti pacijenta ili posljednje praćenja, korišten je kao mjera prognozom. Bilo je oko 4% bolesnika izgubili follow-up. Pregled

Statistička analiza pregled

uparenim uzorcima t-test je korišten za usporedbu razina AZGP1 mRNA u uzorcima tkiva tumora i susjedni upotrijebljenih uzorci tkiva tumora. χ pregled ^{2 test za proporcije i koeficijenata korelacije Pearsonov su korišteni za analizu odnosa između izražavanja AZGP1 i raznih kliničkopatološkim karakteristike. Ukupni krivulje preživljavanja izračunate su sa Kaplan-Meier metodi i analizirani su s log-rank testa. Cox analiza proporcionalnog opasnosti je bio korišten za univarijantne i multivarijatne analize istražiti učinak kliničkopatološkim varijabli i AZGP1 izraz na preživljavanje. Dvostrani P pregled-vrijednost < 0,05 smatra se statistički značajnom. Sve statističke analize provedene su s SPSS programa (verzija 17,0; SPSS Inc., Chicago, IL, USA). Pregled}

popratne podatke
Slika S1.
imunohistokemijsku detekciju ekspresije AZGP1 proteina u želučanom tkivu raka. Pozitivan izraz AZGP1 je lokaliziran u citoplazmi pregled doi:. 10,1371 /journal.pone.0069155.s001 pregled (TIF) pregled

• PLoS ONE: Smanjenje Mir-202-3p izražavanja, roman supresor tumora, u želučanom Cancer
• PLoS ONE: Nova subklasifikacije od pT4 karcinome želuca prema širini serozne Invasion