PLOS ONE: NMe2 Minskar Proliferation, migration och invasion av Gastric cancerceller att begränsa Metastasis

Abstrakt

Gastric cancer är en av de vanligaste maligniteter och har en hög grad av metastaser. Vår hypotes är att NMe2
(nukleosiddifosfatkinas 2), som tidigare har ansetts vara en anti-metastatisk genen spelar en roll i invasions av gastric cancerceller. Med hjälp av en vävnad chip-teknik och immunohistokemi visade vi att NMe2 uttryck i samband med nivåer av differentiering av gastric cancerceller och deras metastaser i lymfkörtlarna. När NMe2
genprodukten var över uttrycks av; In vitro
stabil transfektion, celler från BGC823 och MKN45 gastric cancercellinjer hade reducerade spridning, migration och invasion genom kollagen matris, vilket tyder på en hämmande aktivitet NMe2 i spridning och invasion av magcancer. NMe2 kunde därför allvarlig som en riskmarkör för magcancer invasiv och ett potentiellt nytt mål för genterapi för att förbättra eller inducera NMe2 uttryck

Citation. Liu Yf, Yang A, Liu W, Wang C, Wang M, Zhang L, et al. (2015) NMe2 Minskar spridning, migration och invasion av Gastric cancerceller att begränsa metastaser. PLoS ONE 10 (2): e0115968. doi: 10.1371 /journal.pone.0115968

Academic Redaktör: Jian Cao, Stony Brook University, USA

Mottagna: 18 april, 2014. Accepteras: 3 december 2014. Publicerad: 20 februari 2015

Copyright: © 2015 Liu et al. Detta är en öppen tillgång artikel distribueras enligt villkoren i Creative Commons Attribution License, som tillåter obegränsad användning, distribution och reproduktion i alla medier, förutsatt den ursprungliga författaren och källan kredit

Finansiering: Denna studie stöddes av programmet stöder för Chang-Jiang Scholars och innovativa forskargrupp i University (PCSIRT: IRT1137) och de grundläggande forskningsmedel för central universitet (lzujbky 2013-ct06). Finansiärerna hade ingen roll i studiedesign, datainsamling och analys, beslut att publicera, eller beredning av detta manuskript

Konkurrerande intressen:.. Författarna har förklarat att inga konkurrerande intressen finns

Inledning

Cancer kvarstår som en ledande dödsorsak och står för 14,1 miljoner nya fall och 8,2 miljoner dödsfall i 2012 [1]. Antalet nya fall väntas öka 70% i hela världen till 22 miljoner inom de närmaste två decennierna [2]. Cancer i lungor, mage, lever, kolon och bröst har den högsta dödligheten [3]. Gastric cancerceller kan direkt sprida sig till närliggande organ (lokal invasion) såsom bukspottkörteln, tvärgående tjocktarmen, levern och mjälten samt till avlägsna lymfkörtlar, lungor och benvävnad. Samtidigt som det är två olika patologiska processer, lokal invasion och fjärrmetastaser sammankopplade där den förstnämnda ofta främjar och sprider den senare. Genetiska mutationer och deras avvikande produkter är viktiga kännetecken och möjliggörare av cancerceller för spridning, resistens mot apoptos, lokal invasion, metastas, immun skatteflykt, angiogenes och svar på DNA-skada. NME
(nukleosiddifosfatkinas två eller icke-metastatiska celler) representerar en grupp av cancerassocierade och /eller cancerreglerande gener.

NME
består av en familj 10 gener som också är känd som nM23
gener [4] och har associerats med att undertrycka cancermetastaser och invasion till lokal vävnads [5]. Bland medlemmarna i denna genfamilj, NME1 Köpa och NMe2
har studerats ingående för sina cancerhämmande aktiviteter. NMe2
, som är mappad på kromosom 17q21 [6,7], kodar B-underenheten av nukleosiden difosfat (NDP) kinas [4]. Dess produkt har rapporterats inhibera metastas av bröstcancer och melanomceller; och en minskning av dess uttryck korrelerade med en ökad metastatisk potential av dessa cancerformer [8,9]. Men NMe2
uttryck var också förenad med dålig prognos för neuroblastom och osteosarkom [10,11]. Dessutom var NMe2
gen inte korrelerad med metastasering av livmoder indikerar och sköldkörtelcancer [12-14]. Dessa till synes motstridiga data tyder på att NMe2 kan ha differentiella effekter på olika typer av cancerceller och deras förmåga att lokalt invadera omgivande vävnader eller metastasera till avlägsna organ.

På grund av dessa olika NMe2 aktiviteter på olika cancertyper, vi analyserade vävnader avlägsnas kirurgiskt från patienter med magcancer och tillhörande den NMe2 uttryck i dessa vävnader med sina patologiska egenskaper. Denna patologi studie kompletterades med In vitro
experiment, där vi granskade andelen proliferation, migration och invasion av gastric cancerceller som har transfekterats stabilt med en mänsklig NMe2
cDNA att överuttrycker sin produkt . Dessa in vitro
experiment utformade för att förstå invasions av cancerceller som uttrycker olika nivåer av NMe2.

Material och metoder

Denna studie har godkänts av etiska kommittén på bedriva mänskliga forsknings Lanzhou University School of Medicine. Patienter eller deras vårdnadshavare under förutsättning att deras skriftligt informerat samtycke innan de rekryterades till studien.

Tissue immunohistokemi

Vi analyserade NMe2 uttryck i magcancer och angränsande normal vävnad kirurgiskt avlägsnade från 139 patienter inlagda på armén regional Hospital i staden Lanzhou från 2011 till 2012. Inga patienter fick kemoterapi eller strålbehandling före operation. Dessa kirurgiskt avlägsnade cancervävnader bearbetades för hematoxylin och eosin (HE) färgning. I korthet var en vax modul stansad 42 öppningshålen (6 x 7 hål /chip) av 2 mm vardera. Vävnadsblock var inbäddade i dessa hål (ett prov /hål). Detta vax modul därefter sektione så att vävnader från 40 patienter kunde undersökas samtidigt på en enda bild för att se fläck enhetlighet. För kontroll, första och sista hålen inbäddade med vävnad från godartade lever och njure, respektive. NMe2 uttryck detekterades med användning av en kommersiell immunhistokemi kit (Beijing ZSGB Biotechnology Co., Ltd.) med en kanin anti-human NMe2 antikropp (1: 300 utspädning, Beijing Biosynthesis Biotechnology Co., Ltd.) i enlighet med tillverkarens instruktioner. Nivåer NMe2 uttryck var numeriskt gjorde som visas i tabell 1 av en patolog som var blind för den kliniska information om dessa patienter.

Cellodling och cDNA transfektion

Celler från BGC823 och MKN45 gastric cancercellinjer köptes från Chinese Academy of Science (Shanghai, Kina). Celler i BGC823 linjen var ursprungligen från en 62-årig man med dåligt differentierade adenocarcinom i magen och de i MKN45 linje härrörande från en metastatisk massa av levern från en 62-årig japansk kvinna med en odifferentierad adenokarcinom av magen. Celler från båda linjerna hade resthalter av NMe2 uttryck och är därför idealisk för att studera effekterna av överuttryck denna genprodukt på gastric cancerceller In vitro
.

Cellerna odlades i en DMEM-medium (Sigma, St. Louis, MO, USA) innehållande 10% fetalt kalvserum (Hangzhou Sijiqing Biological Engineering Materials Co, Ltd, Hangzhou, Kina) vid 37 ° C med 5% CO _{2 och 95 % luft. Vid 70-80% av sammanflöde, var dessa celler transfekterade med ett cDNA för den humana NMe2
gen som klonades in i en pcDNA3.1 vektor (Shanghai GenePharma Co., Ltd. Shanghai, Kina) med användning av lipofektamin 2000 som DNA-bärare (Invitrogen, Grand Island, NY, USA). Celler som stabilt uttrycker NMe2 (betecknad som NMe2) selekterades genom att odla de transfekterade cellerna i DMEM-medium innehållande 1 mg /ml G418. Kontrollceller transfekterades med pcDNA vektorn utan NMe2
cDNA-inlägget (betecknad som mock) och genomgick samma val. Un-transfekterade moderceller undersöktes också som utgångs kontroller. En överexpression av NMe2 bestämdes genom RT-PCR för att kvantifiera nivån av NMe2
mRNA och genom immunläskningar av transfekterade cellysat med användning av en polyklonal NMe2 antikropp (1:. 100 utspädning, Beijing Biosynthesis Biotechnology Co, Ltd)}

RNA isolering och RT-PCR

Totalt RNA isolerades från transfekterade och icke-transfekterade celler genom att använda ett kommersiellt RNA-isoleringskit (Takara Biotechnology, Dalian, Liaoning, Kina) enligt tillverkarens instruktioner. RNA (2 jig) från varje prov transkriberades omvänt med användning av en PrimeScript RT Kit genom att följa tillverkarens protokoll. Den komplementära DNA omvänt transkriberat från RNA extraherat från dessa celler amplifierades genom ett Taq-polymeras med användning av följande primrar för NMe2
cDNA: 5'-AAGCAGCACTACATTGACCTGAAA-3 '(framåt) och 5'-GGTCTCCCCAAGCATCACTC-3 ' (omvänd). Glyceraldehyd 3-fosfatdehydrogenas (GAPDH) var också amplifierades som kontroll med användning av följande primrar: 5'-GCACCGTCAAGGCTGAGAAC-3 '(framåt) och 5'-TGGTGAAGACGCCAGTGGA-3' (omvänt). Amplifieringsreaktionen initierades genom denaturerande DNA vid 95 ° C under 5 min, följt av 30 cykler av malldenaturering vid 94 ° C under 1 min, primerhybridisering vid 60 ° C under 1 min, och primerförlängning vid 72 ° C under 1 min. Den NMe2 uttryck kvantitativt definieras som en ökning i NMe2
mRNA genom två gånger eller mer från baslinjen som fastställts av sken transfekterade celler.

Immunofluorescens färgning av NMe2
produkt

Celler stabilt transfekterade med NMe2
cDNA och en fordons vektor ströks ut på täckglas av glas och tilläts växa till konfluens. De sköljdes två gånger med iskall fosfatbuffrad saltlösning (PBS), fixerades i 4% paraformaldehyd i PBS under 15 min, permeabiliserades med 0,5% Triton X-100 och inkuberades med 1% bovint serumalbumin (BSA) under 30 min för att blockera icke-specifik bindning. Cellerna inkuberades sedan med en kaninantikropp mot humant NMe2 (1: 100, Beijing Biosynthesis Biotechnology) under 24 h vid 4 ° C följt av inkubering med en FITC-konjugerad sekundär antikropp (1: 100, Beijing Biosynthesis Biotechnology) i 1 h . Alla antikroppar späddes i PBS innehållande 1% BSA. Kärnor motfärgades med DAPI (1: 100 i PBS, 10 min vid rumstemperatur).

Cellcykelanalys

Celler som stabilt uttrycker NMe2 och kontrollceller i odling tillvaratogs och fixerades med 70% iskall etanol vid 4 ° C under 24 h, tvättades två gånger med iskall PBS, och behandlades sedan med RNas A (20 | ig /ml) under 30 min vid 37 ° C. De inkuberades med propidiumjodid (10 pg /ml av slutkoncentration) i mörker under 30 min vid rumstemperatur före analys med flödescytometri med avseende på DNA ploiditet.

Colony-bildningsanalys

Transfekterad och kontrollceller odlades vid en initial densitet av 1000 celler per 100-mm odlingsskål i ett komplett DMEM-medium i upp till fyra veckor. De färgades sedan med metyl-violett. Alla cellkolonier som var större än 2 mm i diameter (innehöll ≥50 celler) räknades i tre separata rätter och uttrycks som medelvärde ± SEM. För att datavalidering, räknade vi även livskraftiga celler som hade odlats i upp till 96 timmar. I korthet innebar detta föräldra BCG823 och MKN45-celler och celler som var stabilt transfekterade med antingen en human NMe2
cDNA eller fordonet vektorn (pc-DNA 3,1) ströks ut med en densitet av 2 x 10 ^{4 celler /ml. De fristående 48-96 timmar efter den första sådd med 1% trypsin och centrifugerades vid 1600 x g. Cellpelletar återsuspenderades i PBS och inkuberades med 0,04% av trypanblått under 3 min. Överlevande celler räknades på en hemocytometer.}

Analyser för cellmigration

Två kompletterande analyser genomfördes för att mäta effekten av överuttryck NMe2 på graden av cellmigration. Först var en sårläkande assay, där celler ströks ut i plattor med 6 brunnar och fick växa till ≥ 95% konfluenta. Efter tvättning cellerna två gånger med PBS, var en steril pipettspets används för att skrapa cellmonoskiktet (4-5 parallella repor /platta). Celler tvättades igen med PBS, fotograferades för att markera repade spår, och inkuberades med 2,5 ml serumfritt DMEM-medium. Vid en baslinje hastighet av cellmigration, var en repad område delvis täckt av celler som migrerat in i det skadade området 24-48 timmar efter skada, vilket resulterar i en mindre cellfritt område. Eftersom denna sårläknings analysen är semi-kvantitativ, var resultaten valideras ytterligare genom en Transwell cellmigrationsassay. Kortfattat, 6 × 10 ^{5-celler suspenderade i 500 | il serumfritt medium innehållande 0,1% BSA ströks ut i en Transwell (BD Biosciences) som placerades i en 24 brunnars platta. Den nedre kammaren innehöll 500 pl komplett DMEM-medium. Celler fick växa i den övre kammaren under 24 h för att underlätta cellmigrering från den övre kammaren till den nedre kammaren. I slutet av denna inkubationsperiod till membranet i den övre kammaren fixerades med 4% paraformaldehyd under 30 minuter, tvättades med destillerar vatten, och lufttorkades. Celler på den motsatta sidan av kammaren (transmigrated) färgades med 0,1% av metylviolett (Dade-Behring, Newark, DE) i 30 min, tvättades och betraktades under en upp-höger mikroskop (x 400, NIKON). Cellmigration definierades som antalet celler på membranet i 5 slumpmässiga omdöme fält.}

Analys med avseende på cellinvasion

Transwell-kamrarna belades med råttsvans typ I fibrillärt kollagen [15] under 30 min vid 37 ° C. Överflödig vätska avlägsnades och belagda kamrarna lufttorkades under 1 timme i en steril miljö. Celler suspenderades i 500 | il serumfritt DMEM-medium innehållande 0,1% BSA till en slutlig täthet av 6 x 10 ^{5 och ströks ut på kollagenmatrisen i en transwell som placerades i en 24 brunnars platta. Den nedre kammaren innehöll 500 pl komplett DMEM-medium. Celler fanns kvar på membranytan var försiktigt avlägsnades 24 h efter celler såddes och membranet fixeras och färgas för celler som hade transmigrated genom kollagenmatrisen till den motsatta sidan av transwell membranet.}

Statistiska analyser

Alla data analyserades med hjälp av SPSS 20,0 statistikprogram. Kvantitativa värden uttrycktes som medelvärde och SEM. Följande statistiska analyser användes i studien: Fishers exakta test eller chitvåtest för att definiera förhållandet mellan NMe2 uttryck och patologiska egenskaperna hos cancervävnad; ett sätt ANOVA för grupp jämförelse mellan moderceller och celler transfekterade med antingen ett fordon vektor eller en människa NMe2
cDNA; och Pearson analys för korrelation mellan NMe2 uttryck och differentiering och metastasering av cancerceller.

Resultat

Association of NMe2 uttryck med histologiska egenskaper magcancer

Vi samlade kirurgiska prov från 139 patienter med magcancer. Tabell 2 listar demografisk information om dessa patienter och histologiska egenskaper cancervävnad från dessa patienter. NMe2 uttryck var svag eller inte upptäcks i dåligt differentierad vävnad, men var intensiv i väl differentierad vävnad på en nivå jämförbar med intilliggande normal vävnad (Fig. 1). En hög nivå av NMe2 uttryck i samband med en signifikant reducerad metastas till lymfkörtlar ( p
= 0,038), men inte med storleken av primärtumör och djup cancerinvasion. En Pearson korrelationsanalys visade att NMe2 uttryck oberoende i samband med andelen celldifferentiering (r = 0,436, p
= 0,000) och spred sig till de lokala lymfkörtlarna (r = -0,281, p
= 0,001, tabell 1).

Effekt av NMe2 om spridning av gastric cancerceller i kultur

för att ytterligare undersöka sammanslutning av NMe2 uttryck med patologiska egenskaperna hos gastric cancerceller, studerade vi celler från BGC823 och MKN45 magcancer linjer, som uttryckte NMe2 svagt på en nivå jämfört med dåligt differentierade cancervävnad (Fig. 1). Dessa celler transfekterades med en human NMe2
cDNA för att överuttrycka NMe2 som kvantitativt mätt genom en ökning i NMe2
mRNA (kvantitativ RT-PCR) och NMe2 proteinprodukt (immunofluorescens, Fig. 2 ).

sökte vi sedan hur överuttrycker NMe2 reglerad celltillväxt genom mätning av DNA-ploidi och kolonibildning av dessa celler. Vi upptäckte ingen skillnad i DNA-ploiditet mellan celler som överuttrycker NMe2 och de icke-transfekterade och skentransfekterade celler från båda linjerna (tabell 3 och S1 Fig.), Vilket tyder på att en ökning av NMe2 uttryck hade ingen effekt på cellcykler. Emellertid NMe2-överuttryckande celler hade en signifikant reducerad förmåga att bilda kolonier i odling jämfört med sham transfekterade och icke-transfekterade celler (Fig. 3). Denna observation validerades av resultat från en cellräkning metoden (Fig. 3C) katalog

Effekt av NMe2 på cellmigration och invasion

Vi utvärderade nästa förmåga NMe2-överuttryckande celler att migrera eftersom en riktnings migration är en viktig förutsättning för invasionen av cancerceller till omgivande vävnad. Denna riktnings migration undersöktes med hjälp av en sårläkande analys, som mäter graden av celler migration in i området av skada som skapats av ett vasst föremål. Såsom visas i fig. 4A och 4B, bredden på ett skadat område efter 48 timmar i kulturer var större för NMe2
-transfekterade celler än för icke-transfekterade och skentransfekterade celler. Den långsamma migrationen återfanns i celler från båda cellinjer, vilket tyder på att celler som överuttrycker NMe2 migrerade mycket långsammare. Eftersom denna sårläknings analys är semikvantitativ, vi också kvantitativt mäta hastigheten för cellmigration med användning av en Transwell-analys. I överensstämmelse med sårläknings analys NMe2 överuttryckande celler migrerade vid ~ 50% av icke-transfekterade eller skentransfekterade celler (Fig. 4).

En minskning av cellmigration skulle kunna minska möjligheterna för dessa celler att invadera omgivande vävnad. För att undersöka denna möjlighet, mäter vi invasionen av cancerceller till kollagenmatrisen i en väletablerad transwell kammaranalys. BGC823 celler som överuttrycks NMe2 reducerade signifikant deras förmåga att invadera en kollagenmatris till 60% av icke-transfekterade och skentransfekterade celler (Fig. 5). Hastigheten för invasion var reduceras på liknande sätt i MKN45-celler transfekterade med den NMe2
cDNA jämfört med parentala celler och de som transfekterats med en fordonsvektor (fig. 5).

Diskussion

Vi har undersökt sambandet mellan NMe2 uttryck och egenskaper magcancer i vävnader kirurgiskt avlägsnade från patienter och odlade celler från två kända magcancer linjer. Studien är nödvändigt eftersom NMe2
ursprungligen identifierats som den första metastaser suppressor gen, men dess förmåga att blockera cancer lokal invasion och fjärrmetastaser verkar vara celltyp specifik bland cancer som hittills har undersökts [8- 14]. Till exempel, en analys av 35 patienter med sköldkörtel papillär cancer och 11 i metastatiska lymfkörtlar visade en signifikant minskad nivå av NME1
mRNA i metastatiska lymfkörtlar, medan NMe2
mRNA ändrades inte i den ursprungliga tumören och lymfkörtlar [14], vilket tyder på differential roller NME1 och NMe2 i cancerinvasion och metastas. En metaanalys av 278 patienter med koloncancer, 177 med bröstcancer, 137 med äggstockscancer och 77 med lungcancer fann också en lägre nivå av NMe2 uttryck i metastaserande cancer jämfört med icke-metastaserad cancer [17]. Trots en negativ association mellan NME1 /NMe2 uttryck och cancerinvasion till lokala lymfkörtlar och endometrial infiltration, NME uttryck förknippades inte med TNM poäng och differentieringen av intrauterin membrancancer och livmoderhalscancer [16]. Här ger vi flera rader av bevis för att NMe2 begränsar spridning, migration och invasion till den extracellulära matrisen av gastric cancerceller.

Först en högre nivå av NMe2 uttryck finns i väl differentierade och mindre invasiv vävnad från magcancer avlägsnas kirurgiskt före kemoterapi och strålbehandling i en stor patientgruppen (Tabell 1 & fig. 1). Metastas av cancer till lokala lymfkörtlar var oftare återfinns i cancervävnad som hade en låg nivå av NMe2 uttryck och detta samband mellan NMe2 uttryck och differentiering /metastas i dessa patient vävnader kvar efter det att uppgifterna stratifierades för ålder, kön, storleken av primärtumör och djupet av invasion (tabell 1 & 2). Dessa resultat överensstämmer med en färsk rapport att NMe2 binder telomeren upprepar bindande faktor 2 i kärnan för att minska telomerasaktivitet [37], vilket tyder på en mekanistisk länk mellan NMe2 uttryck och överlevnad av cancerceller.

För det andra, vi undersöktes effekterna av överuttryck NMe2 på frekvenser av proliferation, migration och invasion till den extracellulära matrisen in vitro
av celler från de två väl studerade magsäckscancer cellinjer BGC823 och MKN45 [18-21]. Transfektionen med ett mänskligt NMe2
cDNA resulterade i en två-faldig eller större nivå av NMe2 expression i dessa celler jämfört med mock-transfekterade celler (Fig. 2). Detta NMe2 överuttryck förändrade inte DNA ploidi (tabell 3), men betydligt bromsat kolonibildning av dessa celler (Fig. 3), vilket antyder att överuttryck NMe2 fördröjer en övergång från DNA-replikation till mitos. Detta resultat överensstämmer med tidigare rapporter om att NMe2 inte påverka tillväxten av odlade cancerceller och inte i samband med storleken av primär cancer implanteras i djur [22-27]. Det är dock oförenligt med rapporter om att NMe2 främjar [28,29] eller minskar [30] spridning av andra typer av cancerceller. Exakta skälen för avvikelsen återstår att utredas vidare, men dessa uppgifter tyder på celltyp specifika effekter av NMe2
genen på patogenesen av cancer.

För det tredje, i motsats till en minimal effekt på spridningen av gastric cancerceller, överuttryck av NMe2 resultat en betydande minskning av cellmigration och invasion genom kollagenmatrisen som visas i tre olika, men kompletterande analyser (fig 4 &. 5). Våra data stöder tidigare fynd av liknande hämmande effekt på bröstcancer [8], oral skivepitelcancer [28] och melanomceller [9], men undantag återigen noteras i hepatocellulär [13,29] och kolorektala karcinom celler [31]. Det återstår att bestämmas som om reducerad migration och invasion av NMe2-överuttryckande celler är en följd av en minskad förmåga av dessa celler till proliferation.

Våra resultat identifierade gastric cancerceller som känslig för överuttryckt NMe2, men en kritisk frågan kvarstår vad som reglerar dessa olika NMe2 aktiviteter mellan olika typer av cancerceller. En möjlig mekanism är att en NMe2 aktivitet beror på upp- och nedströms molekyler som interagerar med NMe2 i en viss celltyp. Flera molekyler har tidigare identifierats att interagera eller reglera NMe2, såsom EGFR, c-erbB-2 Review, c-erbB-3 Mössor och kön steroidreceptor i äggstockskarcinom [32]. Plakoglobin rapporterades att interagera med NMe2 att främja dess uttryck i celler från mänskliga tungan skivepitelcancer [33]. NMe2 konstaterades också att interagera med MDM2 (Mouse dubbel minut 2 homolog) för att minska rörligheten hos njurcancerceller [34]. MDM2 är en E3-ubiquitin-proteinligas och tjänar som en negativ regulator av p53 tumörsuppressor. Förhållandet mellan NMe2
genen och gener av myc
familj verkar vara mer komplicerat. Produkter av NME1 Mössor och har NMe2
gener föreslagits vara nedströms C- myc
reglerande väg [7] och delta i nedreglering av cdc42 funktion i neuroblastom [35]. NMe2 är också rapporterats interagera med G-quadruplex DNA i nukleas överkänsliga elementet i c-myc
promotor för att inducera c-myc expression [36]. Ett systembiologi tillvägagångssätt för att undersöka dessa specifika vägar i stället för enskilda molekyler kan krävas för att dissekera roller NMe2
genen och dess produkt i olika typer av cancer.

Sammanfattningsvis har vi visat att en överuttryck av NMe2 minskar migration och invasion av gastric cancerceller till cellmatrisen in vitro
. Som ett resultat, är NMe2 expression associerad med väl differentierade och mindre invasitve histologi för magcancer. Dessa resultat tyder på att NMe2
genen och dess produkt kan fungera som en potentiell markör för att förutsäga invasions av magcancer och även som ett terapeutiskt mål som kan uppregleras genom genterapi.

Bakgrundsinformation
S1 Fig. Effekt av NMe2 uttryck på gastric cancerceller cellcykeln.
DNA ploiditet av celler transfekterade med NMe2
cDNA analyserades genom flödescytometri med användning av ett kommersiellt kit enligt tillverkarens anvisningar. Panelerna A-C var för föräldra BCG823 celler och de transfekterade med NMe2
cDNA eller vektor. Panelerna D-F var för MKN45 celler med samma behandlingar
doi:. 10,1371 /journal.pone.0115968.s001
(DOC) Review

• PLOS ONE: transkriptionsfaktorer och mikroRNA-Co reglerade gener i Gastric Cancer Invasion i Ex vivo
• PLOS ONE: den kliniska betydelsen och Riskfaktorer för Solitary Lymph Node metastaser i Gastric Cancer