PLoS ONE: NMe2 Sumažina dauginimosi, migracijos ir invazija skrandžio vėžio ląstelių apriboti Metastasis

Anotacija

Skrandžio vėžys yra viena iš labiausiai paplitusių piktybinių navikų ir turi aukštą norma metastazių. Mes iškėlė hipotezę, kad NMe2
(Nukleozidai difosfatas kinazės 2), kuris anksčiau buvo laikomas anti-metastazavusiu geno, vaidina svarbų vaidmenį skrandžio vėžio ląstelių invazijos. Naudojant audinių lusto technologija ir imunohistocheminis, mes parodė, kad NMe2 išraiška buvo susijęs su lygiais diferenciacijos skrandžio vėžio ląstelių ir jų metastazės į limfmazgius. Kai NMe2
geno produktas buvo per išreikšta; in vitro
stabili transfekcija, ląstelės BGC823 ir MKN45 skrandžio vėžio ląstelių linijas sumažino tarifus dauginimosi, migracijos ir invazijos per kolageno matrica, tai rodo, slopina aktyvumą NMe2 į dauginti ir invazijos į skrandžio vėžį. NMe2 galėtų todėl, sunki kaip rizikos persekiotoją skrandžio vėžio invazijos ir naujo potencialaus tikslo genų terapija sustiprinti arba sukelti NMe2 išraišką

nurodomoji dalis:. Liu YF Yang A Liu W Wang, C Wang M, Zhang L, ir kt., (2015) NMe2 Sumažina dauginimosi, migracijos ir invazija Skrandžio vėžio ląstelių apriboti metastazių. PLoS ONE 10 (2): e0115968. Doi: 10,1371 /journal.pone.0115968

Akademinė redaktorius: Jian CaO, Stony Brook universiteto, JAV

Įstojo: Balandžio 18, 2014; Priėmė: Gruodžio 3, 2014 m Paskelbta: Vasario 20, 2015

Visos teisės saugomos: © 2015 Liu et al., Tai atviros prieigos straipsnis platinama pagal Creative Commons Attribution licencija, kuri leidžia nevaržomai naudotis, paskirstymo ir dauginimąsi bet kokioje laikmenoje sąlygomis, su sąlyga, kad pirmasis autorius ir šaltinis įskaitomos

Finansavimas: Šis tyrimas buvo paremtas pagal šią programą palaiko Chang-Jiang mokslininkų ir novatorišką mokslinių tyrimų komanda universitete (PCSIRT: IRT1137) ir fundamentiniai tyrimai fondų Centrinės universitetuose (lzujbky-2013-ct06). Į finansuotojai neturėjo vaidmenį studijų dizainas, duomenų rinkimo ir analizės, sprendimų skelbti, ar ruošiant šio rankraščio

konkuruojančių interesų.. Autoriai pareiškė, kad nėra konkuruojantys interesai egzistuoja

Įvadas

Vėžys išlieka pirmaujanti mirties priežastis, sudaranti 14,1 milijonų naujų atvejų ir 8,2 mln mirčių 2012 m [1]. Naujų atvejų skaičius, tikimasi per artimiausius du dešimtmečius [2] padidinti pasaulinės 70% iki 22 mln. Vėžiai plaučiuose, skrandžio, kepenų, storosios žarnos ir krūties turi didžiausią mirtingumą [3]. Skrandžio vėžio ląstelės gali tiesiogiai išplito į gretimų organų (vietos invazija), tokios kaip kasos, skersinis gaubtinės žarnos, kepenų ir blužnies, taip pat atokiose limfmazgių, plaučių, kaulų ir audinių. Nors yra dvi skirtingos patologinius procesus, vietos invazija ir nuotolinio metastazės yra sujungti, kurioje buvęs dažnai skatina ir propaguoja pastarasis. Genetines mutacijas ir jų neįprastų produktai yra pagrindiniai požymiai ir realizuotojai vėžinių ląstelių dėl platinimo, atsparumas apoptozės, vietos invazija, metastazės, imuninės vengimas, angiogenezę bei atsakas į DNR pažeidimus. "NME
(Nukleozidai difosfatas kinazės 2 arba nemetastazavusį Ląstelės) sudaro vėžį susijusios ir /ar vėžio reguliavimo genų grupę.

" NME
susideda iš šeimos 10 genų, kurie yra taip pat žinomas kaip NM23
genų [4], ir buvo susijusios su slopina vėžio metastazių ir invazija į vietos audinių [5]. Tarp šio geno šeimos nariams NME1 parsisiųsti ir NMe2
buvo plačiai tiriamas jų vėžį slopina veiklą. NMe2
, kuris yra susietas su [6,7] chromosomos 17q21, koduoja B subvieneto, kad nukleozidų difosfatas (NPP) kinazės [4]. Jo produktas buvo pranešta, kad slopina krūties vėžio ir melanomos ląstelių metastazes; ir jos išraiškos sumažėjimas buvo susijęs su didesniu metastazavusiu potencialo šių vėžio [8,9]. Tačiau NMe2
raiška taip pat buvo susijęs su blogos prognozės dėl neuroblastoma ir osteosarkoma [10,11]. Be to, NMe2
genas buvo ne koreliuoja su endometriumo kepenų ląstelių ir skydliaukės karcinoma [12-14] metastazių. Šie, matyt, kilo duomenys rodo, kad NMe2 gali turėti diferencialinės poveikį įvairių rūšių vėžio ląstelių ir jų gebėjimą vietoje įsiveržti aplinkinių audinių arba metastazuoja į tolimus organus.

Dėl šių įvairių NMe2 veiklą įvairių rūšių vėžio, mes analizuojami audiniai chirurginiu būdu pašalintas iš pacientų, sergančių skrandžio vėžiu ir susiejote NMe2 išraišką šių audinių su savo patologinių savybių. Ši patologija tyrimas buvo papildytas in vitro
eksperimentams, jeigu mes išanalizavome tarifus dauginimosi, migracijos ir invazijos į skrandžio vėžio ląstelių, kurios buvo stabiliai transfekuota žmogaus NMe2
kDNR superekspresuotų savo produktą , Tai in vitro
eksperimentai skirtos suprasti vėžio ląsteles, kad išreikšti skirtingus lygius NMe2 invazinis.

Medžiagos ir metodai

Šis tyrimas buvo patvirtintas etikos komiteto atliekant žmogaus tyrimus Lanzhou universiteto medicinos mokyklos. Pacientai ar jų globėjai, jei jų rašytinį informuoto sutikimo prieš verbuojami į tyrimą.

Audinių imunohistocheminis

analizuojami NMe2 išraišką skrandžio vėžio ir gretimuose normaliuose audiniuose chirurginiu būdu pašalinti iš 139 gydomų pacientų armijos Regioninė ligoninė į Lanzhou miesto nuo 2011 iki 2012. Nr pacientų chemoterapija arba radioterapija prieš operaciją. Šie chirurgiškai pašalintos vėžinės audiniai buvo tvarkomi hematoksilinu ir eozinas (He) dėmių. Trumpai tariant, vaškas modulis buvo perforuoti 42 diafragmos skyles (6 × 7 skylių /chip) 2 mm kiekvienam. Audinių blokai buvo įdėta į šias angas (vienas mėginys /hole). tada šis vaškas modulis buvo suskirstyta taip, kad audiniai iš 40 pacientų gali būti nagrinėjami vienu metu ant vieno stiklelio užtikrinti dėmių vienodumą. Kontrolės, pirmasis ir paskutinis skylės buvo integruotas su audinių iš nevėžinės kepenų ir inkstų, atitinkamai. NMe2 išraiška buvo aptiktas naudojant komercinę imunohistocheminis komplektas (Pekinas ZSGB Biotechnologijos Co, Ltd) su triušio prieš žmogaus NMe2 antikūnų (1: 300 praskiedimą, Pekinas biosintezė Biotechnologijos Co., Ltd) pagal gamintojo instrukcijas. Lygiai NMe2 išraiška buvo skaitmeniškai gavo kaip parodyta 1 lentelėje pagal patologas, kuris buvo apakintas, kad klinikinės informacijos šių pacientų.

Mobilusis kultūra ir kDNR transfekcija

Ląstelės iš BGC823 ir MKN45 skrandžio vėžio ląstelių linijos buvo perkami iš Kinijos mokslų akademijos (Šanchajus, Kinija). Ląstelių BGC823 linija pradžių buvo iš 62-erių metų vyras su prastai diferencijuotai adenokarcinoma skrandžio ir tuos, MKN45 linija, gautų iš metastazavusiu masės kepenyse iš 62-erių metų japonė su nediferencijuotos adenokarcinoma skrandis. Ląstelės iš abiejų linijų turėjo liekamųjų lygius NMe2 žodžio ir yra, todėl idealiai tinka studijuoti ekspresija šio geno produkto skrandžio vėžio ląstelių poveikį in vitro
.

ląstelės buvo auginamos A DMEM vidutinio ( "Sigma, St Louis, MO, US), kuriame yra 10% serumas iš veršiuko embriono (Hangdžou Sijiqing Biologinis Inžinerinės medžiagos Co, Ltd, Hangdžou, Kinija) 37 ° C 5% CO _{2 ir 95 % oro. Tuo 70-80% santakoje, šios ląstelės buvo pernešta su kDNR už žmogaus NMe2
geno, kuris buvo klonuotos į pcDNA3.1 vektoriaus (Šanchajus GenePharma Co., Ltd ". Šanchajus, Kinija), naudojant lipofectamine 2000 kaip DNR vežėjo (Invitrogen, Grand Island, NY, JAV). Ląstelės stabiliai, ekspresuojančios NMe2 (nurodytieji kaip NMe2) buvo atrinkti auga transfekuota ląsteles DMEM terpėje, turinčioje 1 mg /ml G418. Kontrolės ląstelės buvo pernešta su pcDNR vektoriaus be NMe2
kDNR Intarpas (paskirtas maketas) bei patyrė tą patį pasirinkimą. Un-Transfekuoti tėvinės ląstelės taip pat buvo tiriama kaip pradinės kontrolės. Kurio NMe2 raišką lėmė RT-PCR kiekybiškai įvertinti NMe2
mRNR ir immunoblots iš perkeltų ląstelių fragmentai, naudojant polikloninį NMe2 antikūnų lygį (1:. 100 praskiedimo Pekinas biosintezė Biotechnologijos Co., Ltd ")}

RNR išskyrimo ir PGR

viso RNR buvo išskirta iš perkeltų ir ne perkeltų ląstelių naudojant komercinę RNR išskyrimo rinkinys (TAKARA Biotechnologijos, Dalian, Liaoning, China) pagal gamintojo instrukcijas. RNR (2 mikrogramų) Iš kiekvieno mėginio buvo atvirkštinio transkripcija naudojant PrimeScript RT Kit pagal gamintojo protokolą. Papildomas DNR transkribuoti iš RNR išgaunamas iš šių ląstelių buvo papildytas Taq polimerazės naudojant šiuos pradmenis už NMe2
kDNR: 5'-AAGCAGCACTACATTGACCTGAAA-3 "(pirmyn) ir 5'-GGTCTCCCCAAGCATCACTC-3 "(atgal). Gliceraldehido 3-fosfato dehidrogenazės (GAPDH) taip pat buvo papildyta kaip valdymo, naudojant šiuos pradmenis: 5'-GCACCGTCAAGGCTGAGAAC-3 '(į priekį) ir 5'-TGGTGAAGACGCCAGTGGA-3' (atgal). Amplifikacijos reakcija buvo inicijuota denatūravimo DNR, esant 95 ° C temperatūroje 5 min, o po to 30 ciklų šabloną denatūravimo 94 ° C temperatūroje 1 min, gruntas atkaitinimo esant 60 ° C temperatūroje 1 min, ir grunto pratęsiant 72 ° C temperatūroje 1 min. NMe2 raiška buvo kiekybiškai apibrėžta kaip į NMe2
mRNR padidėjo du kartus ar daugiau nuo bazinės linijos pagal pseudo perkeltų ląstelių nustatyta.

imunofluorescenciniam iš NMe2 paieška Prekių

Ląstelės stabiliai Transfekuoti su NMe2
kDNR ir transporto priemonės vektorius buvo padengtas ant stiklo coverslips ir leidžiama augti iki santakos. Jie buvo skalaujamas du kartus su ledinio fosfato-buferio druskų tirpalo (PBS), nustatyta iš 4% paraformaldehido PBS už 15 min, laidžiomis su 0,5% Triton X-100, ir inkubuojami su 1% galvijų serumo albumino (BSA) už 30 min iki blokuoti nespecifinį. Po to ląstelės buvo inkubuojamos su triušio antikūnų prieš žmogaus NMe2 (1: 100, Pekinas biosintezė Biotechnology) už 24 val, esant 4 ° C temperatūroje ir po inkubuojant su FITC konjuguoto antrinio antikūno (1: 100, Pekinas biosintezė biotechnologijos) už 1 val , Visi antikūnai, praskiesto PBS su 1% BSA. Branduoliai buvo counterstained su DAPI (1: 100 PBS, 10 min kambario temperatūroje).

Mobilaus ryšio ciklo analizė

Cells stabiliai ekspresuojančiam NMe2 ir kontrolės ląstelių kultūroje buvo renkami ir fiksuojami 70% iš ledinio etanolyje 4 ° C temperatūroje 24 valandų, plaunama du kartus ledinio PBS, ir po to yra veikiamas RNaze A (20 mikrogramų /ml) 30 min, esant 37 ° C temperatūroje. Jie buvo inkubuojamos su propidiumo jodido (galutinės koncentracijos 10 g /ml) tamsoje 30 min kambario temperatūroje prieš analizę, taikant tėkmės citometrijos DNR ploidiškumo.

kolonija-formavimas tyrimas

transfekuotos ir kontrolės ląstelės buvo auginamos pradiniu tankis 1000 ląstelių viename 100 mm kultūros patiekalas visiškai DMEM terpėje iki 4 savaičių. Tada jie buvo tamsintas su metilvioletiniu. Visi mobilieji kolonijos, kurios buvo didesnis nei 2 mm skersmens (pateikta ≥50 ląsteles) buvo skaičiuojami trys atskiri patiekalai ir pateikti kaip vidurkis ± SEM. Dėl duomenų įteisinimo tikslu, mes taip pat skaičiuojami gyvybingų ląstelių, kurios buvo išauginti iki 96 val. Trumpai tariant, tėvų BCG823 ir MKN45 ląstelės ir ląstelės, kurios buvo stabiliai transfektuotose arba žmogaus NMe2
kDNR arba transporto priemonės vektoriaus (PC-DNR 3,1) buvo padengtas esant 2 x 10 ^{4 ląstelių tankis /ml. Jie buvo individualus 48-96 val po pirminio pasėjimo su 1% tripsino ir centrifuguojamas 1600 x g. Mobilaus ryšio granulės buvo resuspenduotas PBS ir inkubuojami su 0,04% Trypan mėlyna 3 min. Išlikę ląstelės buvo skaičiuojami ant hemocitometru.}

Kiekybinėje ląstelių migracijos

Du papildomi tyrimai buvo atlikti siekiant įvertinti ekspresija NMe2 ant ląstelių migracijos norma poveikį. Pirmiausia buvo žaizdų gijimo tyrimas, kur ląstelės buvo padengtas 6 duobučių lėkštelėse ir leidžiama augti iki ≥ 95% susiliejimo. Nuplovus ląsteles du kartus PBS, sterilia pipete patarimas buvo subraižyti ląstelių monosluoksnį (4-5 lygiagrečiai įbrėžimų /lėkštelėje). Ląstelės vėl buvo plaunamas PBS, fotografuojami pažymėti subraižyti takelius, ir inkubuojami su 2,5 ml serumo neturinčioje DMEM terpėje. Tuo pradinis norma ląstelių migraciją, subraižyti teritorija buvo iš dalies padengtos ląstelės migravo į nukentėjusiosios plotas 24-48 val po traumos, todėl mažesnio ląstelių nemokama srityje. Kadangi šis žaizdų gijimo tyrimas yra pusiau kiekybinis, rezultatai buvo toliau patvirtintas pagal Transwell ląstelių migracijos tyrimu. Trumpai, 6 × 10 ^{5 ląstelės suspenduotos 500 pL serumo neturinčioje terpėje, turinčioje 0,1% BSA buvo padengtą į Transwell (BD Biosciences), kuris buvo dedamas į 24 šulinėlių plokštelės. Apatinė kamera pateikta 500 įxL visiškai DMEM terpėje. Ląstelės buvo leidžiama augti viršutiniame kamerą, 24 val, siekiant palengvinti ląstelių migraciją iš viršaus kameroje prie apatinio kameroje. Šio inkubacijos laikotarpiui, į viršų kameroje membrana buvo nustatytas su 4% paraformaldehido 30 min, plaunamas Distill vandens, ir džiovinami ore. Ląstelės yra priešingoje pusėje kamera (transmigrated) buvo tamsintas su 0,1% metilo violetinės (Dade Behring-Newark, DE) 30 min, nuplauti, ir peržiūrėti pagal iki dešiniųjų mikroskopu (x 400, Nikon). Mobilusis migracija buvo apibrėžiamas kaip skaičių ląstelių membranoje 5 atsitiktinių peržiūros srityse.}

Analizės ląstelių invazija

Transwell kamerose buvo padengtas žiurkė uodegos I tipo Włókienkowy kolageno [15] 30 min 37 ° C temperatūroje. Skysčio perteklių buvo pašalintas ir padengtos kameros buvo džiovinami ore 1 val į sterilią aplinką. Ląstelės buvo sustabdytos 500 pL serumo neturinčioje DMEM terpėje, turinčioje 0,1% BSA, kad galutinė tankio 6 × 10 ^{5 ir padengtu kolageno matricoje A transwell, kad buvo dedamas į 24 šulinėlių plokštelės. Apatinė kamera pateikta 500 įxL visiškai DMEM terpėje. Ląstelės liko membranos paviršiaus buvo švelniai pašalinami praėjus 24 valandoms po ląstelės buvo sėklomis ir membrana buvo fiksuotas ir tamsintas už ląstelių, kurios buvo transmigrated per kolageno matricos į priešingą pusę transwell membrana.}

statistines analizes

Visi duomenys buvo analizuojami naudojant SPSS 20.0 statistinį programą. Kiekybiniai vertės buvo pateikti kaip vidurkis ir SEM. Šie statistiniai tyrimai buvo naudojami tyrime: Fišerio tikslusis testas ar chi kvadrato testas, pagal kurį atskiriamos NMe2 saviraiškos ir patologinių charakteristikas vėžio audinio santykius; vienas būdas ANOVA grupiniam palyginti tarp tėvinės ląstelės ir ląstelių transfektuotose arba transporto priemonės vektoriumi ar žmogaus NMe2
kDNR; ir "Pearson analizė koreliacija tarp NMe2 saviraiškos ir diferenciacijos ir metastazių vėžio ląstelių.

Rezultatai

asociacija NMe2 išraiškos su histologinių charakteristikas skrandžio vėžio

Mes surinkome chirurginės pavyzdį iš 139 pacientai, sergantys skrandžio adenokarcinoma. 2 lentelėje išvardytos demografinę informaciją šių pacientų ir histologinių charakteristikas vėžio audinio iš šių pacientų. NMe2 išraiška buvo silpnas arba neaptinkamas prastai diferencijuotos audinio, bet buvo intensyviai gerai diferencijuota audinio, esančio ties tokio lygio, panašus į gretimuose normaliuose audiniuose (1 pav.). Aukšto lygio NMe2 išraiška buvo susijęs su žymiai sumažintą metastazių į limfmazgius ( P
= 0,038), bet ne su pirminio naviko ir gylio vėžio invazijos dydžio. Pearson koreliacinė analizė parodė, kad NMe2 išraiška buvo nepriklausomai susijęs su normų ląstelių diferenciacijos (r = 0,436, P
= 0,000) ir išplito į vietos limfmazgių (r = -0,281 P
= 0.001, 1 lentelė).

poveikis NMe2 dėl gausėjančių skrandžio vėžio ląstelių kultūra

Jei toliau nagrinėti NMe2 išraiškos su patologiniais charakteristikas skrandžio vėžio ląstelių asociaciją, mes studijavo ląsteles iš BGC823 ir MKN45 skrandžio vėžio linijų, išreikštų NMe2 silpnai iki tokio lygio, palyginti su prastai diferencijuotos vėžio audinio (1 pav.). Šios ląstelės buvo pernešta su žmogaus NMe2
kDNR superekspresuotų NMe2 kaip kiekybiškai matuojamas vykdančio NMe2
iRNR (kiekybinis RT-PGR) ir NMe2 baltymų produkto padidėjimas (imunofluorescenciniam, 2 pav. ).

tada tiriama, kaip ekspresija NMe2 reguliuojama ląstelių augimą matuojant DNR ploidiškumą ir kolonijų susidarymą šių ląstelių. Mes nustatėme, nėra jokio skirtumo, į DNR ploidiškumo tarp ląstelių ekspresija NMe2 ir tų ne perkeltų ir maketas perkeltų ląstelių iš abiejų linijų (3 lentelė ir S1 pav.), O tai rodo, kad į NMe2 raiškos padidėjimas neturėjo ląstelių ciklų poveikį. Tačiau, NMe2-ekspresija ląstelės turėjo žymiai sumažintą gebėjimą sudaryti kolonijas kultūros, palyginti su placebo transfekuota ir ne-transfekuota ląstelių (pav. 3). Šis pastebėjimas buvo patvirtinti rezultatus iš ląstelių skaičiavimo metodą (3C pav.)

poveikis NMe2 ant ląstelių migracijos ir invazijos

Kitas įvertino NMe2 ekspresija ląsteles migruoti, nes gebėjimas kryptinę migracija yra svarbus būtina sąlyga, kad vėžinių ląstelių invazijos į aplinkinių audinių. Tai krypties migracija buvo tiriama naudojant žaizdų gijimo testą, pagal kurį nustatoma ląstelių migracijos greitį į žalos, kurią sukuria aštriu daiktu srityje. Kaip parodyta Fig. 4A ir 4B, kad nukentėjusiosios srityje po 48 val kultūrų plotis buvo didesnis, NMe2
-transfected ląstelės nei ne perkeltų ir maketas perkeltų ląstelių. Lėtas migracija buvo rastas ląstelių iš abiejų ląstelių linijų, tai rodo, kad ląstelės ekspresija NMe2 migravo daug lėčiau. Kadangi šis žaizdų gijimą tyrimą yra pusiau kiekybinis, mes taip pat kiekybiškai išmatuoti ląstelių migracijos greitį naudojant Transwell tyrimą. Suderinamas su žaizdų gijimo tyrimą, NMe2 ekspresija ląstelės migravo ne ~50% non-perkeltų ar juoktis-perkeltų ląstelių (4 pav.).

ląstelių migracijos mažėjimas gali potencialiai sumažinti šių ląstelių gebėjimą įsiveržti į aplinkinių audinių. Ištirti šią galimybę, mes matuojame vėžinių ląstelių invaziją į kolageno matricos gerai nustatyta transwell kameros metodu. BGC823 ląstelių, kurios ekspresija NMe2 žymiai sumažino jų gebėjimą įsiveržti kolageno matricą iki 60% ne transfekuota ir natūralaus modelio transfekuota ląstelių (5 pav.). Invazijos norma taip pat buvo sumažintas MKN45 ląstelių, transfekuotų su NMe2
kDNR, palyginti su tėvinės ląstelės ir tiems, transfekuota su transporto priemonės vektoriaus (5 pav.).

Aptarimas

Mes ištyrėme tarp NMe2 saviraiškos ir charakteristikas skrandžio vėžio audiniuose chirurginiu būdu pašalinta iš pacientų ir išaugintų ląstelių ryšius iš dviejų žinomų skrandžio vėžio linijas. Tyrimas yra būtina, nes, NMe2
iš pradžių buvo nustatyta, kad pirmosios metastazių slopinamojo geno, tačiau jo gebėjimas blokuoti vėžio vietinį invazija ir nuotolinio metastazių atrodo ląstelių tipo konkrečių tarp vėžio, kurios iki šiol buvo tiriamas [8- 14]. Pavyzdžiui, iš 35 pacientų, sergančių skydliaukės papilinio karcinoma ir 11 metastazių limfmazgiuose analizė parodė gerokai sumažintas lygis NME1
mRNR metastazių limfmazgiuose, o NMe2
iRNR buvo nepasikeitė į pirminio naviko ir limfmazgių [14], o tai rodo diferencialinės vaidmenis NME1 ir NMe2 vėžio invazijos ir metastazių. Metaanalizė 278 pacientų, sergančių storosios žarnos vėžiu, 177 su krūties vėžiu, 137 su kiaušidžių vėžiu ir 77 sergančių plaučių vėžiu taip pat nustatė mažesnį lygį NMe2 išraiška metastazavusiu vėžiu, palyginti su ne metastazavusiu vėžiu [17]. Tačiau, nepaisant neigiamo asociacijos tarp NME1 /NMe2 saviraiškos ir vėžio invazijos į vietinį limfmazgių ir endometriumo infiltracija, NME išraiška nebuvo susijęs su TNM balai ir vaisiaus membranos karcinoma ir gimdos kaklelio vėžio [16] diferencijavimo. Čia mes pateikiame keletą eilučių įrodymų, kad NMe2 riboja dauginimosi, migracijos ir invazija į tarpląsteliniame skrandžio vėžio ląsteles.

Pirmiausia, aukštesnio lygio NMe2 išraiška rastos gerai diferencijuota ir mažiau invazinės audinį iš skrandžio vėžio chirurginiu būdu pašalinta prieš chemoterapiją ir radioterapijos dideliu pacientų kohortos (1 lentelė & 1 pav.). Vėžio vietos limfmazgių metastazės buvo dažniau nustatyta vėžio audinio, kuris turėjo mažą NMe2 laisvę ir šią koreliaciją tarp NMe2 saviraiškos ir diferenciacijos /metastazių šių pacientų audiniuose lieka po to, kai duomenys buvo suskirstyti į grupes pagal amžių, lytį, The dydis pirminio naviko ir gylis invazijos (1 lentelė & 2). Šie rezultatai sutampa su naujausioje ataskaitoje, kad NMe2 jungiasi Telomera pakartoti privalomas veiksnys 2 branduolio sumažinti telomerazės veikla [37], kuriame siūloma mechaniškai susieti NMe2 saviraiškos ir išlikimo vėžinių ląstelių.

Antra, mes išnagrinėti poveikis per išreikšti NMe2 nuo normos dauginimosi, migracijos ir invazijos į tarpląsteliniame in vitro
ląstelių iš dviejų gerai ištirtas skrandžio vėžio ląstelių linijų BGC823 ir MKN45 [18-21]. Transfekcija su žmogaus NMe2
kDNR surengė du kartus arba daugiau lygio NMe2 išraiškos šių ląstelių, palyginti su tyčiosiuos, transfekuotų ląstelių (2 pav.). Tai NMe2 raiškos nepakeitė DNR ploidiškumą (3 lentelė), tačiau gerokai sulėtėja kolonijų susidarymą šių ląstelių (3 pav.), O tai rodo, kad ekspresija NMe2 vėluoja perėjimą nuo DNR replikacijos į mitozės. Šis rezultatas yra suderinamas su ankstesnių pranešimų, kad NMe2 neturi įtakos iš fermentuotų vėžio ląstelių augimą ir nėra susijęs su pirminės vėžio dydžio implantuoti į gyvūnų [22-27]. Tačiau jis yra nesuderinamas su pranešimais, kad NMe2 skatina [28,29] arba sumažina [30] kitų rūšių vėžio ląstelių proliferacija. Tikslios priežastys neatitikimo dar reikia toliau tirti, tačiau šie duomenys rodo, ląstelių tipo įtakos konkrečiam NMe2
genas nuo vėžio patogenezėje.

Trečia, priešingai nei minimalų poveikį nuo skrandžio vėžio ląstelių proliferaciją, kad NMe2 raišką lemia žymiai sumažinti ląstelių migracijos ir invazijos per kolageno matricos, kaip parodė trijų skirtingų, tačiau vienas kitą papildančių tyrimų (Figos 4 &. 5). Mūsų duomenys patvirtina ankstesnius rezultatus panašių slopinamąjį poveikį krūties vėžio [8], burnos suragėjusių ląstelių vėžio [28] ir melanomos [9] ląstelių, nors išimčių vėl buvo pastebėta kepenų ląstelių [13,29] ir storosios žarnos karcinoma ląstelių [31]. Belieka būti nustatomas kaip ar sumažinti migraciją ir invazija NMe2-ekspresija ląstelių lėmė sumažėjęs pajėgumą šių ląstelių į platinimu.

Mūsų rezultatai nustatė skrandžio vėžio ląsteles, taip jautriai reaguoja į per-išreikšta NMe2, bet kritinis klausimas lieka kaip ką reguliuoja šias skirtingas NMe2 veiklą tarp skirtingų rūšių vėžio ląstelių. Vienas iš galimų mechanizmas yra tai, kad NMe2 veikla priklauso nuo tiekėjų ir vartotojų molekulių, kurios sąveikauja su NMe2 tam tikroje ląstelių tipo. Keli molekulės anksčiau buvo nustatyta, kad bendrauti ar reguliuoti NMe2, pavyzdžiui, EGFR C-erbB-2
C-ErbB 3
ir seksas steroidų receptorių kiaušidžių karcinoma [32]. Plakoglobin buvo pranešta, kad bendrauti su NMe2 skatinti išreikštas ląstelių iš žmogaus liežuvio suragėjusių ląstelių karcinoma [33]. NMe2 taip pat buvo nustatyta, kad bendrauti su MDM2 (Pelės dvigubai minučių 2 homologas) sumažinti inkstų karcinoma ląstelių [34] motoriką. MDM2 yra E3 ubikvitino-baltymų ligazės ir tarnauja kaip neigiamas reguliatorius p53 naviko slopintuvas. Santykis tarp NMe2
genų ir genų MYC pervežimas šeimos atrodo sudėtingesnis. Produktai NME1 parsisiųsti ir NMe2
genai buvo siūloma tapti pasroviui c- myc pervežimas reguliavimo keliu [7] ir dalyvauja žemyn reguliavimo cdc42 funkcija neuroblastoma [35]. NMe2 taip pat pranešė, bendrauti su G-quadruplex DNR, nukleaziniu jautrumo elementas C-MYC pervežimas promotoriaus sukelti C-MYC išraišką [36]. Sistema biologija požiūris išnagrinėti šiuos konkrečius kelius, o ne atskirų molekulių gali būti reikalaujama, kad perpjauti vaidmenis NMe2
geno ir jo produkto skirtingų rūšių vėžio.

Apibendrinant, mes parodėme kad iš NMe2 raiškos sumažina migracijos ir invazija skrandžio vėžio ląstelių ląstelių matrica in vitro
. Kaip rezultatas, NMe2 išraiška yra susijęs su gerai diferencijuota ir mažiau invasitve histologijai skrandžio vėžio. Šie rezultatai rodo, kad NMe2
genas ir jo produktas gali tarnauti kaip potencialus persekiotoją prognozuoti skrandžio vėžiu yra invazinis ir kaip terapinio tikslo, kuris gali būti iki reglamentuojamo genų terapija.

Parama Informacija
S1 paveiksle. Poveikis NMe2 raiškos skrandžio vėžio ląstelės ląstelių ciklo.
DNR ploidiškumą ląstelių transfektuotose NMe2
kDNR buvo analizuojami tėkmės citometrijos naudojant komercinę komplektas pagal gamintojo instrukcijas. Plokštės A C buvo už tėvų BCG823 ląstelių ir tie, perkeltų su NMe2
kDNR ar vektorių. Plokštės D-F buvo už MKN45 ląstelių su tomis pačiomis gydymo
Doi.: /Journal.pone.0115968.s001
(DOC)
10,1371

• PLoS ONE: transkripcijos veiksniai ir MicroRNA-CO-reguliuojamų genų skrandžio vėžio invazijos ex vivo
• PLoS ONE: klinikinė reikšmė ir rizikos veiksniai Atsiskyrusiojo limfmazgių metastazių skrandžio vėžio