Palm vitamin E zmanjšuje kateholaminov, ksantinoksidaze dejavnost in želodčne poškodbe pri podganah, ki so izpostavljeni stresu zadrževanje vode in potopitvijo
Abstract
Ozadje
Ta študija je preučila učinke Palm vitamina E (PVE), in alfa-tokoferol (α-TF) dopolnitvah o adrenalina, noradrenalina, ksantinoksidaze plus dehidrogenaze (XO + XD) dejavnosti in želodčnih poškodbe pri podganah, izpostavljenih vodni potopitvi stres za zadrževanje potnikov (WIRS).
Metode
so Šestdeset moški Sprague-Dawley
podganah (200-250 g) naključno razdelili v tri enako velikih skupin. Kontrolna skupina je dobila običajne prehrane, medtem ko so obdelane skupine so prejele isto dieto z oralno dopolnitev PVE ali alfa-TF pri 60 mg /kg telesne teže. Po obdobju zdravljenja 28 dni, je vsaka skupina nadalje razdeljeni v dve skupini z 10 podganah, ne da bi jih izpostavi poudariti in drugi 10 podgane so bile podvržene WIRS 3,5 ure. Vzorce krvi so bili sprejeti za merjenje ravni adrenalina in noradrenalina. Podgane so nato žrtvovali, po katerem je bil želodec izrezali in odprli ob večji ukrivljenosti in preučil pri poškodbah in XO + XD dejavnosti.
Rezultati
podganah, izpostavljenih WIRS imel lezij v svojem želodčne sluznice. Naše ugotovitve so pokazale, da so prehranska dopolnitve v PVE in alfa-TF uspelo zmanjšati želodčne poškodbe bistveno v primerjavi s stresom kontrolno skupino. WIRS povečal plazemsko adrenalina in noradrenalina bistveno. PVE in α-TF zdravljenja bistveno zmanjša te parametre v primerjavi z poudaril nadzor.
Sklepe
dopolnitve z obeh PVE ali alfa-TF zmanjšujejo nastajanje želodčne poškodb. Njihov zaščitni učinek je bil povezan z njihovimi sposobnostmi, da zavira stres inducirano dvig ravni adrenalina in noradrenalina, kot tudi z zmanjšanjem ksantin oksidaze in dehidrogenaze dejavnosti.
Ozadju
Stres vpliva na psihološke in fiziološke stanj, ki lahko privedejo do različnih bolezenskih sprememb . En znan patološko stanje stres povzroča je tvorba želodca lezij in študije so pokazale, da je njegova patogeneza več dejavnikov. To vključuje dejavnike, ki ovirajo želodca integriteto sluznice, kot so spremembe v želodčni kislini, sluzi in bikarbonata izločki, ki zavirajo želodca sinteze sluznice prostaglandinov [1], zmanjšanje želodca pretoka sluznice krvi [2, 3], kakor tudi spremembe v stresnih hormonov [ ,,,0],4-6] in želodca gibljivost [7, 8]. Prav tako je znano, da povečanje nivojev kateholaminov med stresom povzroča vazokonstrikcijo [6]. Te spremembe se lahko na koncu privede do nastanka želodčnih lezij.
Nedavne študije so pokazale tudi vključevanje oksidativnega stresa v patogenezo stres povzroča razjede želodca [9, 10]. Ena posebna vrsta oksidanta poškodb je dotoka kisika škode po reperfundiramo ishemičnih tkiv [11]. Ksantin Oksidoreduktaza v dveh Razmjenljiv oblikah, ki so ksantin-dehidrogenaze in kisik odvisni ksantin oksidaza obstaja. V nekaterih študijah se je pokazalo, da je alopurinol zmanjšano gastrointestinalno poškodbe, pri podganah, ki so bili izpostavljeni ksantin /hipoksantinom + ksantin sistema oksidaza [12, 13].
Obstajajo nekatere prejšnje literature v zvezi z vlogo in sposobnosti vitamina E ali njegovih derivatov za zmanjšanje stresa in želodčne poškodbe. Naši prejšnji študiji je ugotovljeno, da je tako tokoferol in tokotrienola sposobnost, da zmanjša nastajanje želodčne lezij s stresom povzročenih pri podganah [7, 14]. Čeprav je tokoferol dobro znano, da je najbolj voljo aktivna oblika vitamina E, v zadnjem času vloge tokotrienolov je prejel obnovljeno pozornosti. Sedanja Študija je bila zasnovana za primerjavo učinkov dlani vitamina E, ki v glavnem vsebuje tokotrienole in α-tokoferol dopolnitev na kateholaminov in želodca ksantinoksidaze dejavnosti, ki so vključene v želodčnih lezij stres povzroča pri podganah.
Metode
Sixty moški Sprague-Dawley
podgane (200-250 g) so bile razdeljene v tri enako velikih skupin. Prva in druga skupina je bila dana palmovo vitamin E (PVE) ali alfa-tokoferol (α-TF), vsakokrat v odmerku 60 mg /kg telesne teže oralno 28 dni, kontrolna skupina pa je bila dana oljčno olje s pomočjo 4 palčni, 18 G iglo, ko vozilo. Palm vitamin E se uporablja v tej študiji, vsebuje mešanico 22% tokoferola in 78% tokotrienolov, ki je bilo pridobljeno iz Malezije Palm Oil sveta (MPOB). Odmerek vitamina E je bil izbran na podlagi naših prejšnje študije, ki je pokazala sposobnost tega odmerka za zmanjševanje želodčne lezije pojav [6]. Ob koncu obdobja zdravljenja, vzamemo kri in vsaka skupina je bila razdeljena na drugi dve skupini; ena skupina je podvržen WIRS 3,5 ure in druga skupina ni bila podvržena nobeni stres (brez stresa skupino). Podgane so bile odvzete hrane preko noči, preden so bili izpostavljeni stres.
Stres je bila izvedena z dajanjem vsako podgano v plastično omejitev premikanja posamično, po katerem so bile potopljene vratu globoko v čaši pri sobni temperaturi (23 ° C) 3,5 ure. Ta postopek je bilo narejeno po postopku, ki ga Nishida et al. (1997) [15]. Po izpostavitvi stres, smo podgane anestezirali z vbrizganjem tako ketamin (5 mg /100 g telesne teže) in ksilazin (1 mg /100 g telesne teže), preden je bila kri umaknjena za določitev nivoja kateholamina. Podgane smo nato usmrtimo nakar želodec odstranjen. Poskusna zasnova je odobril odbor Universiti Kebangsaan Maleziji živali etiko (UKMAEC).
Ocena želodca lezij
želodcu Poškodbe so bile izmerjene v skladu z 3X povečavo s pomočjo svetlobnega mikroskopa. velikost lezije v mm določimo z merjenjem vsak lezije vzdolž največjega premera. Vsakih pet petehialne poškodbe je enaka 1 mm lezije. Skupne dolžine v vsaki skupini podgan smo povprečje in izražen kot indeks lezij. Ta metoda je bila predhodno opisal Wong et al. [16].
Želodca ksantinoksidaze in dejavnosti dehidrogenaze ksantin
Tkivo priprava za merjenje ksantin oksidaze in ksantin-dehidrogenaze je bila izvedena po metodi, ki Qu et al prej opisanega. [17]. Merjenje ksantin oksidaze in aktivnosti ksantinskih dehidrogenaze sledila metodi, ki jo Terao et al opisan. [18].
Plasma adrenalina in noradrenalina
Plasma adrenalina (epinefrina) in raven noradrenalin (noradrenalina) so bile izmerjene z uporabo encimsko imunskimi testom (EIA) kompleti iz IBL-Hamburg, Nemčija (Kataloška številka 40-371-25001) .
statistična analiza
statistična analiza je bila opravljena s pomočjo SPSS statističnega paketa različice 12 (SPSS Inc. ZDA). Normalna porazdelitev vseh spremenljivk je bila proučena s testom Kolmogorov-Smirnov. Rezultate smo izrazili kot sredstvo ± standardna napaka od povprečja (SEM). Statistična značilnost (P < 0,05). Je bila določena z ANOVA sledi Tukey post-hoc preizkusa
Rezultati
Učinki PVE in alfa-TF na želodčni lezij
niso obremenjene podganah ni pokazala fokalne lezije v želodčne sluznice. Vendar želodčne poškodbe sluznice razvila pri podganah izpostavljena stresu za zadrževanje vode, potapljanjem (WIRS) 3,5 ure. Območje vpletenosti bila omejena na žleznega dela želodca. Pri podganah, ki so izpostavljeni stresu, predobdelave bodisi s palm vitamina E (PVE) ali alfa-tokoferol (α-TF) bistveno zmanjša število želodčnih poškodb, ki jih 52% (P = 0,001) in 40% (P = 0,001) (diagram 1). Makroskopska opazovanja pokazala, bodisi poškodbe, najpogosteje 1-2 mm v velikosti ali na robovih petehialne krvavitve (slika 2). Slika 1 želodčni število poškodb (v milimetrih) podgan, ki so bile predhodno obdelane z palmovo vitamin E (PVE) ali alfa-tokoferol (α-TF) za 28 dni in izpostavljeni stresu za zadrževanje vode in potopitvijo 3,5 ure. Stolpci predstavljajo sredstva ± SEM (n = 7). A; bistveno drugačen od skupine, ki niso obremenjene (CN + NS), b; bistveno drugačen od poudaril nadzora (CN + WIRS) (ANOVA sledi preizkus purani, p < 0,05).
Slika 2 mikroskopska opazovanja (3x) stresa zadrževanje vode in potapljanjem (WIRS) induciranih želodca poškodb. A: želodca tkivo normalne podgane (brez poškodbe). B: želodca tkivo podgane izpostavljen 3,5 h WIRS (Razvit želodčna razjeda, kot kaže puščica). C: želodca tkivo podgane izpostavljen 3,5 h WIRS plus dlani vitamina E (PVE) (Razvit petichae krvavitev, kot prikazujeta puščici). D: želodca tkivo podgane izpostavljen 3,5 ur po WIRS plus alfa-tokoferol (α-TF) (Razvit petichial krvavitev, kot je prikazano s puščicami)
Učinki PVE in alfa-TF na noradrenalin
Slika 3. kaže, da je izpostavljenost WIRS 3,5 ure povečala raven v plazmi noradrenalina bistveno (približno 92%, P = 0,001). koncentracije v plazmi noradrenalina iz poudaril PVE- (okoli 59%, P = 0,025) in α-TF-tretiranih skupinah (okoli 70%, P = 0,022) so se znatno zmanjšal v primerjavi s stresom kontrolno skupino. Vendar pa ni bilo opazili pomembno razliko v stopnji plazmi noradrenalin med stresom PVE in α-TF skupin. Izpostavljenost WIRS 3,5 ure povečana raven noradrenalina v plazmi znatno PVE- (P = 0,001) in α-TF-zdravljenih skupin (P = 0,001), v primerjavi z njihovimi skupinami, ki niso pod stresom. opazili na plazemske noradrenalin med skupinami, ki niso obremenjene, ni bistvene razlike (0,05 P >). Slika 3 Stopnja noradrenalin plazmi pri podganah, ki so bile predhodno obdelamo s palmovo vitamin E (PVE) ali alfa-tokoferol (α-TF) za 28 dni, in izpostavljena stresu za zadrževanje vode in potopitvijo 3,5 ure. Stolpci predstavljajo sredstva ± SEM (n = 7). A; bistveno drugačen od skupine, ki niso obremenjene (CN + NS), b; bistveno razlikujejo od poudaril nadzora (CN + WIRS) (ANOVA sledi preizkus purani, p < 0,05).
Učinki PVE in alfa-TF z adrenalinom
rezultatov, predstavljenih na sliki 4 kaže, da imobilizacija stres poveča raven adrenalin precej primerjavi z ne-poudaril skupine (približno 89%, P = 0,003). Prišlo je do znatnega zmanjšanja ravni adrenalin v stresom PVE- (okoli 18,7%, P = 0,002) in α-TF-tretiranih skupinah (okoli 20%, P = 0,001) v primerjavi s stresom kontrol. Vendar pa ni bistvene razlike v ravni adrenalin med poudaril PVE- in opazili skupine α-TF-zdraviti. Poleg tega je izpostavljenost WIRS povečana raven adrenalina v plazmi znatno PVE- ter skupine α-TF obdelan v primerjavi z njihovimi skupine niso pod stresom. niso opazili bistvenih razlik v ravni adrenalina med skupinami, ki niso pod stresom. Slika 4 raven adrenalina v plazmi pri podganah, ki so bile predhodno obdelamo s palmovo vitamin E (PVE) ali alfa-tokoferol (α-TF) za 28 dni, in izpostavljena stresu za zadrževanje vode in potopitvijo 3,5 ure. Stolpci predstavljajo sredstva ± SEM (n = 7). A; bistveno drugačen od skupine, ki niso obremenjene (CN + NS), b; bistveno razlikujejo od poudaril nadzora (CN + WIRS) (ANOVA sledi preizkus purani, p < 0,05).
Učinki PVE in alfa-TF z (XO + XD) aktivnost
Slika 5 prikazuje dejavnosti ksantin oksidaza plus ksantin-dehidrogenaze (XO + XD). Stres je naslon za vodo, potapljanjem (WIRS) znatno povečale dejavnosti XO + XD za 76% (P = 0,003) v primerjavi z ne-poudaril nadzora. Dejavnosti XO + XD od poudaril PVE- in skupine α-TF-obdelano bila bistveno zmanjša v primerjavi z poudaril nadzora. Vendar pa ni bilo bistvenih razlik v dejavnostih XO + XD med poudaril PVE- in skupin α-TF-zdraviti. Poleg tega niso opazili nobenih pomembnih razlik v dejavnostih XO + XD v PVE in α-TF poudaril skupino, v primerjavi z njihovo ne-poudaril skupine. Slika 5 želodca ksantin oksidaza + ksantin-dehidrogenaze (XO + XD) aktivnost v želodcu podganah, ki so bile predhodno zdravljene z palm vitamina E (PVE) ali alfa-tokoferol (α-TF) za 28 dni in izpostavljena stresu zadrževanje vode in potopitvijo 3,5 ure. Stolpci predstavljajo sredstva ± SEM (n = 7). A; bistveno drugačen od skupine, ki niso obremenjene (CN + NS), b; bistveno drugačen od poudaril nadzora (CN + WIRS) (ANOVA sledi preizkus purani, p < 0,05).
Pogovor
povečanje ravni noradrenalina in adrenalina zaradi stresa, so dobro dokumentirani [19-21] . Predloženi Študija je pokazala, da je izpostavljenost stresu za zadrževanje vode, potapljanjem (WIRS) 3,5 ure dovolj povečati stopnjo znatno teh kateholaminov; noradrenalin za 92% in adrenalin za 89%. Te ugotovitve podpirajo hipotezo, da nadledvične kateholamini igrajo fiziološko vlogo pri odzivu na stresne situacije. Hamada sod. ugotovila, da podgane, ki so izpostavljeni stresu razvili želodčne poškodbe, povezane z zmanjšano vsebnostjo možgani noradrenalin in povečanih plazemskih kateholaminov in ravni kortikosterona [22]. Podobno, smo prej pokazali, da je imel podgane izpostavljeni ponavljajoči stres zadrževalni višjo stopnjo plazemske noradrenalina in kortikosterona v primerjavi z podgane niso poudaril [6].
Med stresom, z njimi povezani mehanizmi so aktiviranje hypothalamic- hipofizno-nadledvične osi (HPA) in sympatho-nadledvična-medularni sistemi (SAM), ki povzročajo sproščanje kortikosterona skupaj s sprostitvijo noradrenalina in adrenalina [23]. Poleg tega lahko zvišanje ravni kateholaminov ustvarjajo proste radikale [24], ki so lahko citotoksična in mediacijo poškodbe tkiva, ki ga poškodbi celične membrane in sprostitev znotrajcelične sestavine. Na splošno velja, da je patogeneza želodca lezij na sluznicah vključuje proste radikale, kisika izvora.
V tej študiji so noradrenalin in ravni adrenalinske v izjemnih PVE in α-TF skupin bistveno v primerjavi s poudaril nadzora zmanjša. Vzporedno z njegovo sposobnost, da blokira noradrenalina, vitamin E blokirana tudi nastajanje želodčnih lezij na podganah izpostavljeni stresu. Poleg tega je raven noradrenalina in adrenalinske v izjemnih PVE- in α-TF-tretiranih skupinah niso razlikovali od svojih skupin, ki niso pod stresom. To pomeni, da ima vitamin E pomembno vlogo pri zmanjševanju povišane na kateholamine, ki jih povzroča stres. sta smo že poročali, da je povečanje stopnje noradrenalin blokiran na podganah danem dopolnitev tokotrienolov, vendar ne pri podganah prejemajo alfa-TF [6]. Te ugotovitve kažejo, da so tokotrienoli močnejši kot alfa-TF blokiranja učinke stresa. Vendar pa smo ugotovili, da ni značilnih razlik med poudaril PVE- in skupin α-TF-zdraviti. Oba zdravljenja so lahko izboljša učinke stresa, z zmanjšanjem ravni noradrenalina in adrenalina. Razlike, opažene so lahko posledica različnih modelov stres, ki se uporabljajo; akutna primerjavi ponavljajoči stres. Leta 2007, Campese in Shaohua je pokazala, da podgane krmljene z vitamin E-utrjenega dieti kaže znatno zmanjšanje noradrenalin izločanja iz zadnjo hipotalamusa [25]. Vitamin E-obogaten prehrana blažila tvorbo reaktivnih kisikovih v možganih, kar je povezano z zmanjšano aktivnostjo simpatičnega živčnega sistema in krvni tlak pri podganah z-fenolno povzroča ledvične poškodbe.
Peroksidacijo lipidov, posredovane s prostimi radikali se šteje za primarno mehanizem uničenje celične membrane [26]. Želodčne poškodbe, ki jih stres, alkohol, se je izkazalo, Helicobacter pylori
okužbe in nesteroidna protivnetna zdravila povzročajo bo posredovano predvsem z nastajanjem reaktivnih kisikovih zvrsti (ROS), ki se zdi, da igrajo pomembno vlogo pri proizvodnji lipidov perokside [3, 14, 27, 28]. Škoda želodčne sluznice zaradi WIRS je pripisana oslabljeno želodčno mikrocirkulacije, kar ima za posledico ishemijo, čemur sledi reperfuzija, proces, ki ustvarja proste radikale. Ugotovitev kaže, da so reaktivne vrste kisika in peroksidacijo lipidov pomembni v patogenezo želodčne sluznice škode zaradi stresa [10] inducirane. Ta sedanja ugotovitev je v skladu z dvigom XO dejavnosti po stresu, ki proizvaja ROS. Prejšnja študija je pokazala, da je izpostavljenost podgan do 3,5 ur WIRS privedlo do povečanja presnovi ksantin na raven, ki je primerljiva opazili ishemija-reperfuzijske modela poškodbe želodčne [2]. Ksantin oksidaza dejavnost je pomemben vir ROS, kot so superoksid anione (O
2 · -) in vodikov peroksid (H 2O 2) v patogenezo bolezni v različnih bioloških sistemih, vključno z prebavilih trakt [29-31]. Povečanje ROS bi potem povečali želodca peroksidacijo lipidov in kasnejše želodčne razvoj lezije. To podpira hipotezo, da je stres povzroča škodo, ki jo posreduje peroksidacije lipidov.
V pričujoči študiji, PVE in α-TF bi preprečili povečanje dejavnosti XO + XD precej po WIRS. Lahko bi bilo, da sta PVE in α-TF izboljšala želodčne sluznice pretok krvi, ki je bila oslabljena med WIRS [2, 32]. Izboljšana želodca pretok krvi bi dodatno zavirajo pretvorbo XD za XO. Raghuvanshi sod. so pokazali, da dajanje 400 mg vitamina E za šest dni, skupaj s 80 mg aspirina proizvaja odličen antioksidant učinek, kot je razvidno iz zmanjšano trombocitov ksantinoksidaze dejavnosti [33].
Vitamin E je v lipidih topen antioksidant in dobro sprejeta prva linija obrambni mehanizem proti peroksidacije lipidov. Deluje kot antioksidant verige breaking za peroksidacije lipidov v celičnih membran in kot dodatek ROS, kot so superoksid anion, vodikov peroksid in kisikov [34]. Yoshikawa sod. poročalo o zmanjšanju želodca ravni sluznice vitamina E in povečanje želodčne sluznice peroksidacije lipidov v ishemijo-reperfuzijo inducirane želodčne sluznice poškodbe in resnost poškodb je bil razširjen v vitaminskih podganah E-pomanjkanjem [35]. Naito sod. so pokazale, da v dušikovega podganah-oksid osiromašeni, vitamin E igral pomembno zaščitno vlogo proti ishemično-reperfuzijske-povzročene poškodbe želodčne sluznice, in predlagal, da je bil ta gastrozaščitnega učinek vitamina E, ne samo zaradi svoje antioksidativnim delovanjem, ampak tudi njegovo inhibitorno delovanje na nevtrofilcev infiltracija v želodčni sluznici [36]. Al-Tuwaijri in Al-Dhohyan poročali, da je enkraten peroralni predhodno dajanje α-tokoferol acetat podganah prepreči ishemijo-reperfuzijo povzročeno želodčne sluznice poškodbe [37].
Kot smo že omenili, lahko stres poslabša želodčne pretok krvi in vzrok ishemična podobnih pogojih. Ti pogoji lahko pride do poškodb, reperfuzijsko povzročena in končno razvoj želodca lezij. Med ishemija-reperfuzija, je peroksidacijo lipidov povečana zaradi proizvodnje ROS; dopolnitve z PVE in alfa-TF uspeli zmanjšati to povečanje. Sklepati je mogoče, da imajo PVE in α-TF gastroprotektivnih učinke proti WIRS, po možnosti prek svojih antioksidativnih lastnosti. Kot je prikazano v tej študiji, živali izpostavljene WIRS 3,5 ure razvite želodčne poškodbe sluznice, kar potrjuje ponovljivost tega modela za študij. Dopolnitve v PVE in alfa-TF na 60 mg /kg za 28 dni pred izpostavljenostjo stresu zmanjša želodčne sluznice poškodbe. Vendar pa niso opazili razlike med tema dvema agenti, ki kažejo enako učinkovitost pri preprečevanju stres povzroča škodo v želodcu.
Podobno je izpostavljenost WIRS dokazano, da poveča pogostnost želodčne sluznice in povečanje se je znižal z dajanjem različni antioksidanti [1, 38]. Študija, ki jo Ohta et al. so pokazali, da WIRS 6 ur zmanjšano želodčni koncentracija α-tokoferol, vendar predhodno jemanje askorbinske kisline delno obrnilo to zmanjšanje. V tej študiji, lahko preprečevanje škodljivih učinkov stresa na želodčni sluznici se posreduje antioksidantno aktivnost z PVE in alfa-TF, ki zmanjšajo tvorbo prostih radikalov, bodisi neposredno ali posredno poseduje, vodi do slabljenja lezij .
zaščitnega mehanizma vitamina E in njene vloge na zdravje ljudi še vedno ne razumemo dobro. Antioksidant značilnost vitamina E, zlasti njegov vpliv na polinenasičenih maščobnih kislin (PUFA) lahko izboljša integriteto celične membrane. Obstaja možnost, da želodčnih tkiva postanejo bolj odporni proti agresivnim dejavnikov, kot so kisline in pepsina.
Sklepi
Naši podatki kažejo, da je zaščitni učinek vitamina E, povezanih z zmanjšano ksantin oksidaze in dehidrogenaze aktivnosti, kar je povzročilo zmanjšanje tvorbe prostih radikalov. Obstaja tudi možnost, da je bila sposobnost obeh PVE in alfa-tokoferol v blokadi stres povzročeno škodo s svojim delovanjem na višji ravni, ki je bila tako, da blokira povečane v adrenalin in noradrenalin, znan mediatorje stresa.
Ugotavlja
Ibrahim Abdelaziz Ibrahim, Yusof Kamisah in Nafeeza Mohd Ismail prav tako prispevali k temu delu.
Izjave
Zahvala
študijo je, ki se financirajo z nepovratnimi sredstvi iz malezijskega ministrstva za znanost, tehnologijo in inovacije (IRPA Grant št . 06-02-02-10026 EAR). Avtorji se zahvaljujejo Pn Azizah Othmana in gospodu Muhamad Arizi Aziz za tehnično pomoč.
Avtorjev originalnih predloženi datoteke za slike
Spodaj so povezave do avtorjev prvotna predloženih spisov za slike. "Izvirno datoteko na sliki 1 12876_2011_737_MOESM2_ESM.pdf avtorjev 12876_2011_737_MOESM1_ESM.pdf avtorjev prvotni datoteki številka 2 12876_2011_737_MOESM3_ESM.pdf avtorjev prvotne datoteke za sliko 3 12876_2011_737_MOESM4_ESM.pdf avtorjev izvorne datoteke za sliko 4 12876_2011_737_MOESM5_ESM.pdf avtorjev prvotni datoteki sliki 5 konkurenčni interesi
avtorji izjavljajo, da nimajo konkurenčnih interesov.