PLOS ONE: Reverse Correlação entre MicroRNA-145 e FSCN1 Afetando Migração Câncer Gástrico e Invasion

Abstract

Os microRNAs (Mirs) desempenham um papel importante na modulação da expressão genética durante os processos de tumorigênese e desenvolvimento do tumor. Estudos anteriores mostraram que o miR-145 é regulada negativamente na neoplasia estômago e está relacionada com a migração e invasão do tumor. No entanto, tanto o mecanismo de função e de miR-145 em cancro gástrico molecular permanecem obscuros. O presente estudo é a primeira demonstração da infra-regulação significativa da expressão de miR-145 em câncer gástrico infiltrativa em comparação com a expansão do câncer gástrico. Além disso, a correlação análises revelaram uma forte correlação inversa entre os níveis de expressão FSCN1 miR-145 e em câncer gástrico infiltrativa. Além disso, foi demonstrado que o miR-145 tem como alvo directamente FSCN1 e suprime a migração celular e invasão de cancro gástrico. Derrubar a expressão de FSCN1 levou à supressão de invasão e migração em células de cancro gástrico, e re-expressão em células FSCN1 miR-145 que sobre-expressam invertida seus defeitos migração e invasão. Assim, concluímos que miR-145 regula a migração celular e invasão no câncer gástrico, principalmente diretamente pela segmentação FSCN1

Citation:. Chen Jj, Cai Wy, Liu Xw, Luo Qc, Chen G, Huang Wf, et al . (2015) Correlação inversa entre MicroRNA-145 e FSCN1 Afetando Migração Câncer Gástrico e Invasão. PLoS ONE 10 (5): e0126890. doi: 10.1371 /journal.pone.0126890

Editor do Academic: Chengfeng Yang, Michigan State University, Estados Unidos

Recebido: 14 Janeiro, 2015; Aceito: 08 de abril de 2015; Publicado em: 26 de maio de 2015

Direitos de autor: © 2015 Chen et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Disponibilidade de dados: Todos os dados relevantes estão dentro do papel e seus arquivos de suporte de informação

Financiamento:. 1. National Natural Science Foundation da China (Grant No. 81.172.283) JCC (http://www.nsfc.gov.cn/). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito. 2. Natural Science Foundation da província de Fujian (Grant No. 2012D037) JCC (http://xmgl.fjkjt.gov.cn/). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

o câncer gástrico tem uma das maiores taxas de mortalidade de tumores malignos em todo o mundo [1]. tecnologia médica melhorada pode melhorar o resultado do cancro gástrico. No entanto, o câncer gástrico continua a ser a segunda causa mais comum de mortes relacionadas ao câncer [2], que é causada pela invasão de tumores e metástases. Juntos, invasão e metástase formar um processo em que as células tumorais malignas transferir a partir de um local primário para outras áreas e, em seguida, formar tumores num local distante através do canal linfático, vasos sanguíneos ou na cavidade corporal [3]. Por isso, esclarecer os mecanismos moleculares envolvidos no desenvolvimento e capacidade de invasão de câncer gástrico é necessário.

Em 1977, Ming classificados carcinomas gástrico para expansão e tipos infiltrativas com base em seus padrões de crescimento e invasão [4]. Estes tipos são facilmente identificáveis ​​histologicamente. carcinomas de expansão crescer em massa e por expansão, resultando na formação de nódulos tumorais discretas, enquanto que os carcinomas infiltrativas tem células tumorais que invadem individualmente [5]. Dos dois tipos de cancro gástrico, cancro gástrico infiltrante é mais invasiva do que a expansão do cancro gástrico. Essa classificação fornece, assim, uma referência para distinguir amostras de câncer gástrico clinicamente e facilita estudos detalhados sobre os mecanismos moleculares de câncer gástrico.

Os microRNAs (Mirs) desempenham papéis críticos em muitos processos biológicos, incluindo processos de cancro, inibindo diretamente a expressão de mRNAs alvo através de vários mecanismos moleculares [6, 7]. Além disso, miRs submetidos a regulação aberrante durante a carcinogénese e pode actuar tanto como oncogenes ou supressores de tumores [7]. Estudos recentes têm mostrado que muitos miRs afectar a proliferação e invasão de cancro gástrico. miR-21 é regulada para cima no câncer gástrico e promove a proliferação e invasão do tumor no câncer gástrico, visando PTEN [8]. Em contraste, o miR-145 é sub-regulada no cancro gástrico humano [9]. Além disso, a investigação mostrou que o miR-145 pode suprimir a migração celular e invasão por inibição da tradução da proteína N-caderina em células de cancro gástrico [10]. No entanto, Kamikihara et al [11] detectados os níveis de N-caderina expressão em 146 pacientes com câncer gástrico por imuno-histoquímica, e os resultados mostraram que apenas 31 pacientes (21%) tiveram expressão-N-caderina positivo. Portanto, alguns outros mecanismos moleculares de miR-145 pode regular a migração celular e invasão de cancro gástrico.

FSCN1 é uma proteína de ligação à actina de 55 kDa que está associado com a formação de filopodia e saliência à base de actina, e ele promove a motilidade celular, migração e invasão [12, 13]. expressão FSCN1 está ausente ou baixa no epitélio normal, mas FSCN1 é abundante em muitos carcinomas, incluindo adenomas colo-rectal, cancro do ovário epitelial e carcinoma de células escamosas do esôfago [14-16]. Além disso, uma série de estudos indicam que aplicada FSCN1 expressão aumenta a proliferação e invasão de células de cancro do ovário e gástricas [17, 18].

Estudos recentes descobriram que o miR-145 funciona como um supressor de tumores e que miR-145 superexpressão suprime migração e invasão no câncer de próstata e câncer de bexiga, visando FSCN1 [19, 20]. Além disso, o miR-145 suprime a migração de células de cancro gástrico e invasão por segmentação N-caderina. No entanto, a taxa de expressão positiva de N-caderina em tecidos de cancro gástrico é de apenas 21% [10, 11]. Portanto, a determinação do gene alvo chave de miR-145 na regulação invasão do cancro gástrico é necessário.

No presente estudo, nós encontrado pela primeira vez que o miR-145 foi notavelmente expressão sub-regulada no cancro gástrico em comparação com a infiltrante na expansão câncer gástrico. Além disso, fornecemos evidências de que o miR-145 suprimiu a migração celular e invasão no câncer gástrico, principalmente diretamente pela segmentação FSCN1, que destacou o papel de miR-145 e FSCN1 na regulação dos fenótipos malignos de câncer gástrico.

Materiais e métodos

amostras clínicas

Todas as amostras clínicas foram coletadas com o consentimento informado dos pacientes que foram submetidos a gastrectomia no Hospital Zhongshan, da Universidade de Xiamen em Xiamen (Fujian, China) a partir de junho de 2012 a outubro de 2013 . No total, os 160 pares de amostras clínicas coletadas incluiu 80 amostras não classificados câncer gástrico, 40 amostras com câncer gástrico infiltrativas e 40 em expansão amostras de câncer gástrico. O tipo patológico do tumor foi confirmada por exame de patologia e as mucosas gástricas normais pareados foram coletados de mais de 5 cm de distância dos tumores.

Ética declaração

Os protocolos de estudo estavam de acordo com o orientações éticas da Declaração de Helsinki (1975) e foram aprovados pela Comissão de Ética médica (No. 20.081.012) de Zhongshan Hospital da Universidade de Xiamen em Xiamen (Fujian, China). Obtivemos depoimentos escritos de consentimento de todos os participantes envolvidos neste estudo.

As linhas celulares

As linhas humanos MGC-803 e SGC-7901 de células de câncer gástrico foram adquiridos no Instituto de Biologia Celular (Shanghai , China, http://www.cellbank.org.cn). A linha celular de rim embrionário humano 293T foi obtida a partir da American Type Culture Collection (ATCC, MD, EUA). células SGC-7901 MGC-803 e foram mantidas em meio RPMI-1640, enquanto que as células 293T foram mantidas em DMEM. Todos os meios continham soro fetal de bovino 10% (FBS), 100 U /ml de penicilina e 100 ug /ml de estreptomicina (Invitrogen, Carlsbad, CA, EUA).

repórter luciferase ensaio

Células eram transfectadas com genes de luciferase repórter, β-galactosidase (β-gal) e o miR-145 ou imita o miR-145 inibidor (Cantão RiboBio) usando Lipofectamine 2000 reagente de transfecção (Invitrogen). A actividade de luciferase foi medida às 48 h após a transfecção, e a eficiência de transfecção foi normalizada para a actividade β-gal interna.

extracção de ARN e RT-qPCR

O RNA total foi extraído usando o reagente TRIzol (Invitrogen ) e sujeitos a transcrição reversa com M-MuLV da transcriptase reversa (Qiagen) para produzir ADNc de acordo com o protocolo do fabricante. PCR em tempo real foi realizado utilizando detecção baseada em verde SYBR num rotor-Gene 6000 instrumento (Corbett Life Science) de acordo com as instruções do fabricante e utilizando os pares de iniciadores listados na Tabela 1. iniciadores U6 miR-145 e foram obtidos de Qiagen. GAPDH ou controle endógeno U6 foi usado como um padrão interno, e os resultados foram calculados utilizando o método CT △△ (onde CT é o ciclo limiar).

plasmídeo construção

Os iniciadores utilizados para a construção dos plasmídeos repórteres de luciferase e estão listadas na Tabela 1. a FSCN1 3 'não traduzida humana (UTR) foi amplificado a partir de ADNc MGC-803 através de amplificação por PCR com a ADN-polimerase Taq LA (Takara) e clonado a jusante da codificação da luciferase sequência no vector PMIR-REPORT (Ambion) nos sítios de restrição Saci e MluI (Promega) para a construção do repórter luciferase FSCN1-3'UTR-humano. As mutações foram introduzidas nos locais de miR-ligação usando um Kit de Mutagénese QuikChange (transgénica). Para os plasmídeos de expressão de miR-145 e FSCN1, as sequências foram amplificadas por PCR e clonado nos locais SpeI /Nhel e Xbal /Ndel, respectivamente, do vector-PLV-cs.4.0 básico (Promega). Para o plasmídeo interferência FSCN1, dois pares de sequências foram hibridados e subclonados no PLKO.1 de acordo com o protocolo do fabricante.

Produção viral e transfecção

células HEK293T foram semeadas em uma inserção de 6 poços às 24 h antes da transfecção. O plasmídeo de expressão de miR-145, FSCN1 shRNA ou plasmídeo de expressão FSCN1 plasmídeo foi então co-transfectado com plasmídeos de empacotamento (pHR e pCMV-VSV-G) utilizando o reagente de transfeco Lipofectamine 2000 (Invitrogen). Os sobrenadantes virais foram recolhidos às 48 h após a transfecção, centrifugada a 3000 g durante 15 min, e filtrada através de filtros de 0,45 um (Millipore). Os títulos virais foram determinados por transdução de células HeLa em diluições em série e analisando a expressão de GFP por citometria de fluxo. MGC-803 células ou células 7901 em 50-70% de confluência foram infectadas com sobrenadantes virais contendo 10 mg /ml de polibreno durante 24 horas. Meio fresco foi então adicionado às células infectadas, que foram depois seleccionadas com puromicina.

A migração celular e invasão ensaio

As células (3x10 ^{5) foram semeadas em 8,0 de poro de tamanho de Boyden câmaras (Transwell, Corning Life Sciences, Acton, MA, EUA) quer revestidas com 10 ug de Matrigel (BD Bioscience, Bedford, MA, EUA) por poço (para a invasão ensaios) ou para a esquerda não revestido (para ensaios de migração) no soro-livre meio contendo 10 g /L de albumina de soro bovino. Meio contendo 10% de FBS serviram como um quimioatractivo na cara inferior. As células não-invasoras foram removidas com cotonetes após 36 h (para ensaios de invasão) ou 20 h (para ensaios de migração). células invadidas foram corados com hematoxilina (HE) e contadas. Os dados são apresentados como a média ± DP de três experiências individuais}

Western blotting

As proteínas foram extraídas com tampão de lise de eritrócitos (ELB;. 50 mM de Tris, 140 mM de NaCl, 0,5% NP- NaF 40 e 100 mM (pH 7,6)) contendo 1 mM de fluoreto de fenilmetanossulfonilo (PMSF, Sigma-Aldrich, EUA). Cada uma das amostras foi separada num gel de SDS-PAGE a 10% e, em seguida, transferidos para membranas de difluoreto de polivinilideno (PVDF). As membranas foram bloqueadas com 5% de leite e incubaram-se com anticorpo FSCN1 anti-humano primário de coelho (1: 3000; Cell Signaling Technology, EUA) ou o rato GAPDH anti-humana (1: 5000; Sigma-Aldrich) de anticorpos durante a noite a 4 ° C . As membranas foram então incubadas com peroxidase de rábano apropriado (HRP) -conjugated anticorpos secundários (Thermo Fisher Scientific). As bandas foram desenvolvidas usando um sistema de quimioluminescência aumentada (ECL) (Amersham Biosciences, Buckinghamshire, Reino Unido). A proteína de GAPDH foi usada como um controlo de carga.

A análise estatística

Os dados são expressos como a média ± DP. A significância estatística foi analisada com o teste t de Student. A correlação entre os níveis de miR-145 e níveis de expressão FSCN1 mRNA /proteína em cânceres gástrico humano foi calculada pela correlação de Spearman. Todas as análises estatísticas foram calculados usando o software de estatística GraphPad Prism (GraphPad Software). P Art < 0,05 foi considerado estatisticamente significativo (NS, não significativo; * P Art < 0,05; ** P Art < 0,01; *** P
. < 0,001)

resultados

forte relação inversa entre a expressão de miR-145 e seu alvo putativa, FSCN1, no câncer gástrico tipo infiltrativa humana

Foi utilizado o banco de dados TargetScan (http://www.targetscan.org) para identificar os 'UTRs 3 de mRNAs alvo específicos de miR-145 que podem regular a migração e invasão das células cancerosas gástricas. De todos os ARNm preditos, que seleccionado FSCN1, que tenha sido previamente implicado na migração e invasão do tumor. FSCN1 também sequências altamente conservadas no UTR 3 'que são complementares à sequência de semente de miR-145.

Primeiro, foi investigado se a correlação de miR-145 e FSCN1 poderia ser clinicamente relevante através da medição da expressão de níveis /proteína miR-145 e mRNA FSCN1 em Normal /tumor emparelhado amostras de 80 pacientes com câncer gástrico. A análise estatística revelou uma significativa correlação inversa entre a expressão de miR-145 e a expressão de mRNA FSCN1 /proteína nos 80 pares de amostras clínicas (Fig 1A e 1B).

Ming classificados carcinomas gástricos em tipo de expansão e tipo infiltrativa com base em padrões de crescimento e capacidade de invasão, e existe uma correlação entre a classificação de Ming eo prognóstico clínico [5]. Portanto, 40 amostras de cancro gástrico infiltrativas e 40 expandem amostras de cancro gástrico foram escolhidos como indicado pelo representante coloração HE (figura 2A). Nessa classificação, as células de um carcinoma em expansão, em virtude de seu poder de penetração limitada, agregado e produzir uma massa circunscrita na forma de polipóide e lesões fungating. Em contraste, as células de carcinoma infiltrante distribuídos perifericamente e amplamente, e uma massa tumoral não se formar. Testamos a expressão de miR-145 e ARNm FSCN1 cancro gástrico em comparação com a mucosa gástrica normal adjacente por PCR em tempo real. miR-145 foi extremamente regulada no cancro gástrico infiltrativa em comparação com a expansão do câncer gástrico, enquanto a expressão de mRNA FSCN1 foi notavelmente regulado para cima (Fig 2B). Foram selecionados 10 amostras com câncer gástrico infiltrativas e 10 expandindo amostras de câncer gástrico, juntamente com seus tecidos normais adjacentes ao analisar a expressão por qPCR e western blot. Os níveis de expressão global de miR-145 foram mais baixas, em particular nas amostras de cancro gástrico infiltrativas em relação à mucosa gástrica normal adjacente. Em contraste, os níveis de ARNm /proteínas totais de FSCN1 foram mais elevados no cancro gástrico infiltrante (Fig 2C). Consequentemente, a expressão de miR-145 e seu alvo putativo FSCN1 tinha uma forte relação inversa no câncer gástrico tipo infiltrativa humana, sugerindo assim que os papéis essenciais de miR-145 e FSCN1 estão em invasão câncer gástrico.

miR -145 visa diretamente FSCN1 em células cancerosas gástricas

Para determinar se miR-145 regula a expressão de FSCN1 em células cancerosas gástricas, primeiro-regulado o nível de miR-145 em câncer gástrico MGC-803 células usando um vector à base de lentivírus. Em seguida, realizada qPCR, que revelou que o miR-145 sobre-expressão significativamente regulada para baixo o nível de ARNm de FSCN1 (Fig 3A), e as experiências de Western blot confirmou que o nível de proteína de FSCN1 também foi suprimida em células de miR-145 que sobre-expressam (Fig 3B ). Por outro lado, knockdown de miR-145, utilizando os níveis de um inibidor de miR-145 resultou em induzida significativamente a expressão /proteína ARNm FSCN1 em ambos SGC-7901 e células MGC-803 (Fig 3C). Geramos um vector repórter contendo luciferase de pirilampo UTR FSCN1 3 'e células MGC-803, em seguida, co-transfectadas com o miR-145 imita ou um inibidor de miR-145, para investigar se FSCN1 é um alvo directo de miR-145. Os lisados ​​foram analisados ​​quanto à actividade de luciferase 24 h pós-transfecção. O ensaio de luciferase mostraram que os miR-145 imita resultou num decréscimo de aproximadamente 55% na actividade, ao passo que o inibidor de miR-145 aumentou a actividade de luciferase de 62% em células MGC-803 em comparação com o controlo de miR-negativa (Fig 3D). Além disso, nós mutado três principais putativos miR-145 elementos de reconhecimento (MRE) na UTR através de mutagénese QuikChange FSCN1 3 para uso no ensaio da luciferase (Fig 3D). Os resultados mostraram que os efeitos reguladores dos miR-145 imita ou miR-145 inibidor foram revogadas, principalmente, que confirmou que os efeitos de silenciamento de miR-145 em FSCN1 foram abolidos pela interrupção das interações miR-ERM (Fig 3D). Colectivamente, estes estudos forneceram evidências convincentes de que FSCN1 é um alvo direto de miR-145 em células cancerosas gástricas.

Repressão ao FSCN1 é necessário para miR-145 para inibir a migração e invasão das células cancerosas gástricas

o câncer gástrico células SGC-7901 MGC-803 e foram estavelmente transfectadas com dois diferentes FSCN1 shRNAs para inibir FSCN1 para entender melhor o papel potencial da FSCN1 na migração do tumor miR-145-mediada e invasão. A eficiência de interferência FSCN1 shRNAs foi confirmada por análise de Western blot (Figura 4A e 4B). Os resultados do ensaio Transwell mostrou que a capacidade das células para migrar e invadem foi altamente reprimido após derrubar a expressão de FSCN1 em MGC-803 e células SGC-7901 em comparação com células de controlo negativo (Fig 4C e 4D), sugerindo assim um papel essencial de FSCN1 nestes processos.

miR-145 é conhecido por suprimir a migração e invasão de muitos tipos de câncer, incluindo câncer gástrico [10, 19, 21]. Como esperado, imposta expressão de miR-145 resultou em diminuição significativa das taxas de migração e invasão na MGC-803 e as células SGC-7901. Além disso, a re-expressão simultânea de FSCN1 comprometida a capacidade de migração celular e invasão de miR-145-suprimiu quase completamente em ambas as células MGC-803 e SGC-7901 miR-145 transfectadas (Figura 5A e 5B). Por outro lado, utilizou-se FSCN1 shRNA para inibir a expressão FSCN1 em miR-145 transfectadas com inibidor MGC-803 e células SGC-7901. Knockdown de FSCN1 inverteu completamente a activação mediada por inibidor de miR-145 da migração celular e invasão, sugerindo assim o papel essencial de FSCN1 neste processo (Fig 5C e 5D). Colectivamente, os resultados anteriores demonstraram que a repressão de FSCN1 é necessário para miR-145 para inibir a migração e a invasão de células de cancro gástrico.

Discussão

A desregulação da miRs tem sido implicada em várias cancros humanos, incluindo o cancro gástrico humano. No entanto, os mecanismos moleculares pelos quais miRs modulam o processo de carcinogénese e o comportamento das células cancerosas não foram completamente definidos. miR expressão diferencial em tumores em comparação com os tecidos normais adjacentes ou entre grupos de amostras tumorais com um resultado clínico favorável ou pobre foi usada para gerar assinaturas com miR potencial prognóstico e /ou valor preditivo em certos tipos de cancro. No entanto, o envolvimento das miRs expressos de maneira aberrante no cancro gástrico humano permanece largamente inexplorado. Estudos anteriores relataram que o miR-145 é regulada em várias neoplasias humanas, incluindo câncer de mama, câncer de pulmão e câncer gástrico [9, 22, 23]. Lu et al [24] descobriram que miR-145 funciona como um supressor tumoral e tem como alvo dois oncogenes, ou seja, ANGPT2 e NEDD9, no carcinoma de células renais. Outro estudo demonstrou que o miR-145 suprime a migração celular e invasão por inibição da tradução da proteína N-caderina em células de cancro gástrico [10]. No entanto, Kamikihara et al [11] descobriu que apenas 21% dos pacientes com câncer gástrico têm expressão-N-caderina positivos como analisado por imunohistoquímica. Portanto, um mecanismo molecular subjacente alternativa miR-145 está envolvido na regulação da migração celular e invasão de câncer gástrico.

No presente estudo, confirmamos que miR-145 é regulada para baixo em tecidos com câncer gástrico em comparação para a mucosa gástrica normal adjacente, o que é consistente com resultados anteriores [9]. Numa tentativa de identificar novos alvos a jusante de miR-145, utilizou-se a base de dados para executar TargetScan experiências de rastreio. A partir de vários candidatos, que seleccionado para outras experiências FSCN1 FSCN1 porque se verificou desempenhar um papel importante na migração e invasão do tumor. Várias linhas de evidência sugerem que FSCN1 é o alvo a jusante directa de miR-145. Em primeiro lugar, FSCN1 contém sequências altamente conservadas no UTR 3 'que são complementares à sequência de semente de miR-145. Em segundo lugar, uma correlação inversa entre o miR-145 e FSCN1 foi encontrado nas amostras emparelhadas de doentes com cancro gástrico. Finalmente, ao classificar as amostras clínicas em expansão tipo e tipo infiltrativa baseado na classificação de Ming, descobrimos que miR-145 é extremamente regulada no cancro gástrico infiltrativa em comparação com a expansão do câncer gástrico. Enquanto isso, também foi detectada uma correlação inversa forte entre miR-145 e FSCN1 níveis de expressão em cancro gástrico infiltrativa. O presente estudo uma nova luz sobre a correlação entre o miR-145 e FSCN1 no câncer gástrico infiltrativa. Em um estudo anterior, Lauren dividida cânceres gástrico para os dois tipos seguintes: tipo intestinal e tipo difuso [25]. cancro do tipo intestinal é descrita como assemelhando-se um tumor glandular carcinoma do cólon, cancro do tipo difuso e é composta de agregados solitários ou de pequenas células, sem a formação de glândulas. Os tipos de tumores na classificação de Lauren e Ming estreitamente correspondem um ao outro. A maioria dos tumores em expansão têm características de câncer do tipo intestinal e tumores mais infiltrativas são cancros do tipo difuso [5]. No entanto, um número significativo de carcinomas gástricos não pode ser classificado em tipo intestinal ou do tipo difuso, incluindo cancros indiferenciadas que não se infiltrar difusamente e cânceres glandulares que se infiltram difusamente. Além disso, a detecção precoce do cancro gástrico utilizando Laurén é relativamente difícil, porque a fase precoce do cancro do tipo difuso, por definição, não é difusa. No entanto, a classificação de Ming pode resolver estes problemas [5]. Na classificação de Ming, os padrões de distribuição das células indicam claramente uma diferença fundamental em seu potencial de crescimento, bem como poder de penetração e invasão. Como câncer gástrico infiltrativa é mais invasivo do que a expansão do câncer gástrico, esses resultados sugerem que miR-145 e FSCN1 ambos desempenham um papel crucial na invasão câncer gástrico.

Apesar de vários relatos têm implicado a regulação da FSCN1 por miRs em muitos carcinomas [19, 20, 26], com o melhor de nosso conhecimento, nenhum relatório sugeriu que FSCN1 é um alvo direto de miR-145 em câncer gástrico. Neste estudo, confirmamos que miR-145 reprime a expressão FSCN1 e directamente como alvo o 'UTR 3 de FSCN1 em células cancerosas gástricas. Além disso, a re-expressão simultânea de FSCN1 comprometido o miR-145-suprimida a migração celular e a capacidade de invasão quase completamente em miR-145 transfectadas MGC-803 e células SGC-7901, o que indicava que a repressão de FSCN1 é necessário para miR -145 para inibir a migração e a invasão de células de cancro gástrico. Portanto, FSCN1 é um importante alvo a jusante de miR-145 na regulação invasão câncer gástrico.

Em resumo, o presente estudo identificou que o miR-145 é principalmente regulada no cancro gástrico infiltrativa e que miR-145 expressão e expressão FSCN1 têm uma forte correlação inversa no câncer gástrico infiltrativa. Funcionalmente, demonstramos que miR-145 suprime a migração e invasão celular no câncer gástrico, principalmente diretamente pela segmentação FSCN1. Portanto, restabelecer a expressão de miR-145 pode ser explorada como uma estratégia terapêutica alternativa contra o cancro gástrico.

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