PLOS ONE: Corrélation inverse entre microARN-145 et FSCN1 Affectant gastrique migration et l'invasion du cancer

Résumé

microARN (MIRS) jouent un rôle important dans la modulation de l'expression des gènes au cours des processus de la tumorigenèse et le développement de la tumeur. Des études antérieures ont montré que miR-145 est régulée à la baisse dans le néoplasme de l'estomac et est liée à la migration de la tumeur et l'invasion. Cependant, le mécanisme et la fonction de miR-145 dans le cancer gastrique moléculaire restent floues. La présente étude est la première démonstration de la régulation à la baisse significative de l'expression de miR-145 dans le cancer gastrique infiltrant par rapport à l'expansion de cancer gastrique. En outre, la corrélation analyses ont révélé une forte corrélation inverse entre les niveaux d'expression FSCN1 miR-145 et dans le cancer gastrique infiltrant. De plus, nous avons démontré que miR-145 cible directement FSCN1 et supprime la migration et l'invasion cellulaire dans le cancer gastrique. Abattre l'expression de FSCN1 a conduit à la suppression de la migration et l'invasion des cellules cancéreuses gastriques, et re-exprimant dans des cellules FSCN1 miR-145-surexprimant inversé leurs défauts de migration et d'invasion. Ainsi, nous avons conclu que miR-145 régule la migration cellulaire et l'invasion dans le cancer gastrique principalement en ciblant directement FSCN1

Citation:. Chen Jj, Cai Wy, Liu Xw, Luo Qc, Chen G, Huang Wf, et al . (2015) Corrélation inverse entre les microARN-145 et FSCN1 Affectant gastrique Migration du cancer et Invasion. PLoS ONE 10 (5): e0126890. doi: 10.1371 /journal.pone.0126890

Academic Editor: Chengfeng Yang, Michigan State University, ÉTATS-UNIS

Reçu le 14 Janvier 2015; Accepté: 8 Avril 2015; Publié: 26 mai 2015

Droit d'auteur: © 2015 Chen et al. Ceci est un article en accès libre distribué sous les termes de la licence Creative Commons Attribution, qui permet une utilisation sans restriction, la distribution et la reproduction sur tout support, pourvu que l'auteur et la source originelle sont crédités

Disponibilité des données: Toutes les données pertinentes sont dans le ses fichiers de renseignements à l'appui du papier et

financement:. 1. national Natural science Foundation de Chine (Grant No. 81172283) JCC (http://www.nsfc.gov.cn/). Les bailleurs de fonds ont joué aucun rôle dans la conception de l'étude, la collecte et l'analyse des données, la décision de publier, ou de la préparation du manuscrit. 2. Natural Science Foundation de la province du Fujian (Grant No. 2012D037) JCC (http://xmgl.fjkjt.gov.cn/). Les bailleurs de fonds ont joué aucun rôle dans la conception de l'étude, la collecte et l'analyse des données, la décision de publier, ou de la préparation du manuscrit

Intérêts concurrents:.. Les auteurs ont déclaré aucun conflit d'intérêts existent

Introduction

le cancer gastrique a l'un des taux de mortalité les plus élevés pour les tumeurs malignes dans le monde [1]. Amélioration de la technologie médicale peut améliorer l'issue du cancer gastrique. Cependant, le cancer gastrique reste la deuxième cause la plus fréquente de décès liés au cancer [2], qui est causée par l'invasion tumorale et les métastases. Ensemble, forment des métastases et l'invasion d'un processus dans lequel les cellules tumorales malignes transfert d'un site primaire dans d'autres zones, puis forment des tumeurs à un site distant via le canal lymphatique, les vaisseaux sanguins ou la cavité du corps [3]. Par conséquent, la clarification des mécanismes moléculaires impliqués dans le développement et l'invasivité du cancer gastrique est nécessaire.

En 1977, Ming classé carcinomes gastriques dans l'expansion et types infiltratives basée sur leurs modèles de croissance et l'invasivité [4]. Ces types sont histologiquement facilement reconnaissables. Les carcinomes expansion croître en masse et par l'expansion conduit à la formation de nodules tumoraux distincts, alors que les cancers infiltrants sont des cellules tumorales qui envahissent individuellement [5]. Sur les deux types de cancer de l'estomac, cancer de l'estomac infiltrant est plus invasive que l'expansion du cancer gastrique. Une telle classification fournit ainsi une référence pour distinguer les échantillons de cancer gastrique cliniquement et facilite les études détaillées sur les mécanismes moléculaires du cancer gastrique.

microARN (MIRS) jouent un rôle essentiel dans de nombreux processus biologiques, y compris les processus de cancer, en inhibant directement l'expression des ARNm cibles par divers mécanismes moléculaires [6, 7]. En outre, Mirs subissent régulation aberrante pendant la cancérogenèse et peuvent agir soit comme oncogènes ou suppresseurs de tumeur [7]. Des études récentes ont montré que de nombreux Mirs affectent la prolifération et l'invasion dans le cancer gastrique. miR-21 est régulée à la hausse dans le cancer gastrique et favorise la prolifération de la tumeur et l'invasion dans le cancer gastrique en ciblant PTEN [8]. En revanche, miR-145 est régulée à la baisse dans le cancer gastrique humaine [9]. En outre, la recherche a montré que miR-145 peut supprimer la migration et l'invasion cellulaire en inhibant la traduction de protéine N-cadhérine dans les cellules de cancer gastrique [10]. Cependant, Kamikihara et al [11] détecte les niveaux de N-cadhérine expression dans 146 patients atteints de cancer gastrique par immunohistochimie, et les résultats ont montré que seulement 31 patients (21%) avaient l'expression N-cadhérine-positive. Par conséquent, d'autres mécanismes moléculaires de miR-145 peut réguler la migration et l'invasion cellulaire dans le cancer gastrique.

FSCN1 est une 55 kDa protéine liant l'actine qui est associée à filopodes et la formation de la saillie sur la base actine, et favorise la motilité cellulaire, la migration et l'invasion [12, 13]. l'expression FSCN1 est absent ou faible dans les epitheliums normaux, mais FSCN1 est surexprimée dans de nombreux cancers, notamment des adénomes du côlon, le cancer de l'ovaire épithélial de l'oesophage et le carcinome à cellules squameuses [14-16]. En outre, une série d'études ont indiqué que appliquée FSCN1 expression augmente la prolifération et l'invasion des cellules de cancer de l'ovaire et de l'estomac [17, 18].

Des études récentes ont montré que miR-145 fonctionne comme un suppresseur de tumeur et que miR-145 inhibe la surexpression migration et l'invasion du cancer de la prostate et le cancer de la vessie en ciblant FSCN1 [19, 20]. En outre, miR-145 inhibe la migration des cellules de cancer de l'estomac et de l'invasion, en ciblant la N-cadhérine. Cependant, le taux d'expression positive de la N-cadhérine dans les tissus du cancer de l'estomac est seulement de 21% [10, 11]. Par conséquent, la détermination du gène cible clé de miR-145 dans la régulation de l'invasion du cancer gastrique est nécessaire.

Dans la présente étude, nous avons d'abord constaté que miR-145 expression a été remarquablement régulée à la baisse dans le cancer gastrique infiltrant par rapport à celle dans le développement de cancer de l'estomac. De plus, nous avons fourni des preuves que miR-145 a supprimé la migration cellulaire et l'invasion dans le cancer gastrique principalement en ciblant directement FSCN1, qui a mis en évidence le rôle de miR-145 et FSCN1 dans la régulation du cancer gastrique phénotypes malignes.

Matériaux et Méthodes

échantillons cliniques

Tous les échantillons cliniques ont été recueillies avec le consentement éclairé des patients qui ont subi une gastrectomie à l'hôpital Zhongshan de l'Université de Xiamen à Xiamen (province du Fujian, en Chine) à partir de Juin 2012 à Octobre 2013 . Au total, les 160 paires d'échantillons cliniques prélevés comprenaient 80 échantillons non classés gastriques du cancer, 40 échantillons de cancer de l'estomac infiltrant et 40 l'expansion des échantillons de cancer de l'estomac. Le type pathologique de la tumeur a été confirmé par l'examen de la pathologie et les muqueuses gastriques normaux appariés ont été recueillies à partir de plus de 5 cm de la tumeur.

Éthique déclaration

Les protocoles d'étude étaient en conformité avec la directives éthiques de la Déclaration d'Helsinki (1975) et ont été approuvés par le Comité d'éthique médicale (n ° 20081012) de l'hôpital Zhongshan de l'Université de Xiamen à Xiamen (province du Fujian, en Chine). Nous avons obtenu des déclarations écrites de consentement de tous les participants impliqués dans cette étude.

Les lignées cellulaires

Les lignes MGC-803 et SGC-7901 cellules cancéreuses gastriques humains ont été achetés auprès de l'Institut de biologie cellulaire (Shanghai , Chine, http://www.cellbank.org.cn). La lignée cellulaire de rein embryonnaire humain 293T a été obtenu à partir de la American Type Culture Collection (ATCC, MD, USA). MGC-803 et les cellules CGT-7901 ont été maintenues dans un milieu RPMI-1640, tandis que les cellules 293T ont été maintenues dans du DMEM. Tous les médias contenaient 10% de sérum de veau fœtal (FBS), 100 U /ml de pénicilline et 100 pg /ml de streptomycine (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA).

luciférase reporter test

Les cellules ont été transfectés avec des gènes de luciférase reporter, β-galactosidase (β-gal) et miR-145 ou miR-mimétiques 145 inhibiteur (Guangzhou RiboBio) en utilisant la Lipofectamine 2000 réactif de transfection (Invitrogen). L'activité luciférase a été mesurée à 48 h après la transfection, et l'efficacité de transfection a été normalisée à l'activité β-gal interne.

Extraction d'ARN et RT-qPCR

ARN total a été extrait en utilisant le réactif Trizol (Invitrogen ) et une transcription inverse M-MuLV transcriptase inverse (Qiagen) pour produire de l'ADNc selon le protocole du fabricant. PCR en temps réel a été réalisée en utilisant la détection basée SYBR Green dans un Rotor-Gene 6000 Instrument (Corbett Life Science) selon les instructions du fabricant et en utilisant les paires d'amorces énumérées dans le tableau 1. miR-145 et d'amorces U6 ont été obtenues auprès de Qiagen. GAPDH ou U6 contrôle endogène a été utilisé comme étalon interne, et les résultats ont été calculés selon la méthode △△ CT (où CT est le cycle de seuil).

plasmide construction

Les amorces utilisées pour la construction des reporters et des plasmides de luciférase sont répertoriés dans le tableau 1. la FSCN1 région 3 'non traduite humaine (UTR) a été amplifié à partir MGC-803 ADNc par amplification par PCR avec le lA Taq ADN polymerase (Takara) et clone en aval du codage de luciférase séquence dans le vecteur PMIR-REPORT (Ambion) au niveau des sites de restriction SacI et MluI (Promega) pour la construction du rapporteur luciférase FSCN1-3'UTR humaine. Des mutations ont été introduits dans les sites miR-liaison en utilisant un kit de mutagenèse QuikChange (TransGen). Pour les plasmides d'expression de miR-145 et FSCN1, les séquences ont été amplifiées par PCR et clonées dans les sites Spel /Nhel et sites Xbal /Ndel, respectivement, du vecteur PLV-cs.4.0-base (Promega). Pour le plasmide d'interférence FSCN1, deux paires de séquences ont été annelés et sous-clonés dans PLKO.1 selon le protocole du fabricant.

Production lentiviraux et la transfection

cellules HEK293T ont été ensemencées sur un insert de 6 puits à 24 h avant la transfection. Le miR-145 Le plasmide d'expression, le plasmide FSCN1 shRNA ou l'expression FSCN1 plasmide a ensuite été co-transfecté avec des plasmides d'emballage (phr et pCMV-VSV-G) en utilisant le réactif Lipofectamine 2000 de transfection (Invitrogen). Les surnageants viraux ont été recueillis à 48 heures après la transfection, on centrifuge à 3000 g pendant 15 min et filtré à travers des filtres de 0,45 pm (Millipore). Les titres viraux ont été déterminés par transduire des cellules HeLa à des dilutions en série et en analysant l'expression de GFP par cytométrie de flux. MGC-803 7901 cellules ou des cellules à 50-70% de confluence ont été infectées avec les surnageants viraux contenant 10 mg /ml de polybrène pendant 24 heures. Du milieu frais a ensuite été ajouté aux cellules infectées, qui ont ensuite été sélectionnés avec la puromycine.

La migration cellulaire et l'invasion test

Les cellules (3x10 ^{5) ont été étalées sur 8,0 um taille des pores Boyden chambres (Transwell, Corning Life Sciences, Acton, MA, USA) soit revêtues avec 10 ug de Matrigel (BD Bioscience, Bedford, MA, USA) par puits (pour l'invasion des essais) ou à gauche non couché (pour les essais de migration) dans le sérum sans un milieu contenant 10 g /L d'albumine sérique bovine. Un milieu contenant 10% de FBS a servi comme chimioattracteur dans la chambre inférieure. Les cellules non-envahissantes ont été enlevées avec des cotons-tiges après 36 h (pour les essais d'invasion) ou 20 h (pour les essais de migration). cellules Invaded ont été colorées avec de l'hématoxyline (HE) et comptées. Les données sont présentées comme la moyenne ± écart-type de trois expériences individuelles}

Western Blot

Les protéines ont été extraites avec un tampon de lyse érythrocytaire (ELB;. 50 mM de Tris, 140 mM de NaCl, 0,5% de NP- 40 et 100 mM de NaF (pH 7,6)) contenant 1 mM de fluorure de phénylméthanesulfonyle (PMSF, Sigma-Aldrich, USA). Chaque échantillon a été séparé sur un gel SDS-PAGE à 10%, puis transféré sur le difluorure de polyvinylidène (PVDF) membranes. Les membranes ont été bloquées avec 5% de lait et mises en incubation avec un anticorps FSCN1 anti-humain de lapin primaire (1: 3000; Cell Signaling Technology, USA) ou une souris GAPDH anti-humain (1: 5000; Sigma-Aldrich), l'anticorps pendant une nuit à 4 ° C . Les membranes ont ensuite été incubées avec le peroxydase de raifort approprié (HRP) conjuguée à des anticorps secondaires (Thermo Fisher Scientific). Les bandes ont été développées à l'aide d'un système (Amersham Biosciences, Buckinghamshire, Royaume-Uni) chimioluminescence amplifiée (ECL). La protéine de GAPDH a été utilisée comme témoin de chargement.

L'analyse statistique

Les données sont exprimées en moyenne ± SD. La signification statistique a été analysée par le test t de Student. La corrélation entre les niveaux de miR-145 et FSCN1 ARNm /protéine des niveaux d'expression dans les cancers gastriques humaines a été calculée par la corrélation de Spearman. Toutes les analyses statistiques ont été calculées en utilisant les statistiques GraphPad Prism (GraphPad Software). P
< 0,05 a été considérée comme statistiquement significative (NS, non significatif; * P
< 0,05; ** P
< 0,01; *** P
<. 0,001)

Résultats

relation inverse forte entre l'expression de miR-145 et sa cible putative, FSCN1, dans le type infiltrant cancer gastrique humain

Nous avons utilisé la base de données TargetScan (http://www.targetscan.org) pour identifier les 3 'UTR des ARNm cibles spécifiques de miR-145 qui peuvent réglementer la migration et l'invasion des cellules de cancer gastrique. De tous les ARNm prédites, nous avons sélectionné FSCN1, qui a été précédemment impliquée dans la migration et l'invasion tumorale. FSCN1 a également des séquences UTR en 3 'qui sont complémentaires à la séquence de la graine de miR-145 hautement conservée.

En premier lieu, nous avons examiné si la corrélation de miR-145 et FSCN1 pourrait être cliniquement pertinente en mesurant l'expression d' miR-145 et FSCN1 ARNm niveaux /protéine dans la normale /tumeur appariés échantillons de 80 patients atteints de cancer gastrique. L'analyse statistique a révélé une corrélation inverse significative entre l'expression de miR-145 et l'expression de l'ARNm FSCN1 /protéine dans les 80 paires d'échantillons cliniques (Fig 1A et 1B).

Ming classé carcinomes gastriques en type expansion et le type infiltrant basé sur les modèles de croissance et l'invasivité, et il existe une corrélation entre la classification de Ming et le pronostic clinique [5]. Par conséquent, les 40 échantillons de cancer de l'estomac infiltrant et 40 l'expansion des échantillons de cancer de l'estomac ont été choisis comme indiqué par le représentant coloration HE (figure 2A). Dans cette classification, les cellules d'un carcinome en expansion, en vertu de leur pouvoir de pénétration limitée, globale et produisent une masse circonscrite sous forme de polypoïde et des lésions bourgeonnante. En revanche, les cellules de carcinome infiltrant réparties périphériquement et largement, et une masse tumorale ne forme pas. Nous avons testé l'expression de miR-145 et FSCN1 ARNm dans le cancer gastrique par rapport à la muqueuse gastrique normale adjacente par PCR en temps réel. miR-145 a été remarquablement régulée à la baisse dans le cancer gastrique infiltrant par rapport à l'expansion de cancer de l'estomac, tandis que l'expression de l'ARNm de FSCN1 était remarquablement régulée à la hausse (figure 2B). Nous avons sélectionné 10 échantillons de cancer gastrique infiltrants et 10 l'expansion des échantillons de cancer de l'estomac ainsi que leurs tissus normaux adjacents pour analyser l'expression par qPCR et western blot. Les niveaux d'expression de l'ensemble de miR-145 étaient plus faibles, en particulier dans les échantillons de cancer de l'estomac infiltrant par rapport à la muqueuse gastrique normale adjacente. En revanche, les taux globaux d'ARNm /protéine de FSCN1 étaient plus élevés dans le cancer de l'estomac infiltrant (figure 2C). Par conséquent, l'expression de miR-145 et sa cible putative FSCN1 avait une forte relation inverse dans le type infiltrant cancer gastrique humain, suggérant ainsi que les rôles essentiels de miR-145 et FSCN1 sont dans l'invasion du cancer gastrique.

miR -145 cible directement FSCN1 dans les cellules cancéreuses gastriques

Pour déterminer si miR-145 régule l'expression de FSCN1 dans les cellules de cancer gastrique, nous avons d'abord régulé à la hausse le niveau de miR-145 dans le cancer gastrique MGC-803 cellules en utilisant un vecteur à base de lentivirus. Nous avons ensuite procédé à la qPCR, qui a révélé que miR-145 surexpression significativement régulée à la baisse le niveau de FSCN1 (figure 3A), et des expériences de Western Blot de l'ARNm a confirmé que le niveau de FSCN1 protéine a également été supprimée dans les cellules miR-145 surexprimant (figure 3B ). A l'inverse, knockdown de miR-145 niveaux en utilisant un inhibiteur de miR-145 a entraîné de manière significative induite FSCN1 ARNm /expression de la protéine dans les deux SGC-7901 et MGC-803 cellules (figure 3C). Nous avons généré un vecteur rapporteur de la luciférase de luciole contenant UTR du FSCN1 3 'et ensuite co-transfectées MGC-803 cellules avec miR-145 imite ou un inhibiteur de miR-145 pour enquêter si FSCN1 est une cible directe de miR-145. Les lysats ont été analysés pour déterminer l'activité de luciférase 24 heures après la transfection. Le dosage de la luciférase a montré que les miR-145 mimétiques a entraîné une diminution d'environ 55% de l'activité, tandis que l'inhibiteur de miR-145 a augmenté l'activité de la luciférase de 62% MGC-803 cellules par rapport au témoin miR-négatif (figure 3D). De plus, nous avons muté trois principaux éléments de reconnaissance miR-145 putatif (MRE) dans le 'UTR par mutagénèse QuikChange FSCN1 3 pour une utilisation dans le dosage de la luciférase (figure 3D). Les résultats ont montré que les effets de la réglementation des miR-145 imite ou miR-145 inhibiteur ont été principalement abrogées, qui a confirmé que les effets de silence de miR-145 sur FSCN1 ont été supprimées par la perturbation des interactions miR-PEPAM (figure 3D). Collectivement, ces études ont fourni des preuves convaincantes que FSCN1 est une cible directe de miR-145 dans des cellules de cancer gastrique.

Repression de FSCN1 est nécessaire pour miR-145 pour inhiber la migration et l'invasion des cellules cancéreuses gastriques

le cancer gastrique MGC-803 et les cellules SGC-7901 ont été transfectées de façon stable avec deux FSCN1 shRNA différents pour inhiber FSCN1 pour mieux comprendre le rôle potentiel des FSCN1 dans la migration de la tumeur miR-145-médiation et de l'invasion. L'efficacité de brouillage FSCN1 ARNsh a été confirmée par analyse par Western Blot (Figure 4A et 4B). Les résultats de l'essai transwell ont montré que la capacité des cellules à migrer et à envahir était fortement supprimée après avoir frappé vers le bas l'expression de FSCN1 dans MGC-803 et les cellules CGT-7901 par rapport aux cellules témoins négatives (figure 4C et 4D), ce qui suggère un rôle essentiel de FSCN1 dans ces processus.

miR-145 est connu pour supprimer la migration et l'invasion de types de cancer beaucoup, y compris le cancer gastrique [10, 19, 21]. Comme prévu, l'expression forcée de miR-145 a entraîné une diminution significative des taux de migration et d'invasion dans MGC-803 et les cellules SGC-7901. En outre, simultanée ré-expression de FSCN1 compromis la migration cellulaire et l'invasion capacité miR-145-supressed presque complètement dans les deux cellules MGC-803 et SGC-7901 miR-145-transfectées (figure 5A et 5B). A l'inverse, nous avons utilisé FSCN1 shRNA pour inhiber l'expression de FSCN1 dans miR-145 inhibiteur transfectées MGC-803 et les cellules SGC-7901. Knockdown de FSCN1 complètement inversé l'activation miR-145 inhibiteur de médiation de la migration et l'invasion cellulaire, suggérant ainsi le rôle essentiel de FSCN1 dans ce processus (Fig 5C et 5D). Collectivement, les résultats ci-dessus ont démontré que la répression des FSCN1 est nécessaire pour miR-145 pour inhiber la migration et l'invasion des cellules cancéreuses gastriques.

Discussion

La déréglementation des Mirs a été impliquée dans diverses les cancers humains, y compris le cancer gastrique humaine. Cependant, les mécanismes moléculaires par lesquels modulent mirs le processus de carcinogenèse et le comportement des cellules cancéreuses ne sont pas complètement définis. L'expression différentielle miR dans les tumeurs par rapport à leurs tissus normaux adjacents ou entre des groupes d'échantillons de tumeur avec une issue clinique favorable ou faible a été utilisée pour générer des signatures miR ayant un potentiel pronostique et /ou d'une valeur prédictive pour certains types de cancer. Néanmoins, la participation des Mirs aberrantly exprimées dans le cancer gastrique humaine reste largement inexploré. Des études antérieures ont indiqué que miR-145 est régulé à la baisse dans diverses affections malignes humaines, comprenant le cancer du sein, le cancer du poumon et le cancer gastrique [9, 22, 23]. Lu et al [24] ont trouvé que miR-145 fonctionne comme un suppresseur de tumeur et les oncogènes cibles, à savoir deux ANGPT2 et NEDD9, dans le carcinome des cellules rénales. Une autre étude a montré que miR-145 inhibe la migration et l'invasion cellulaire en inhibant la traduction de la protéine N-cadhérine dans les cellules cancéreuses gastriques [10]. Cependant, Kamikihara et al [11] a révélé que seulement 21% des patients atteints de cancer gastrique ont expression N-cadhérine positif analysée par immunohistochimie. Par conséquent, un mécanisme moléculaire alternatif sous-jacente miR-145 est impliquée dans la régulation de la migration cellulaire et l'invasion du cancer gastrique.

Dans la présente étude, nous avons confirmé que miR-145 est régulée à la baisse dans les tissus de cancer gastrique par rapport à la muqueuse gastrique normale adjacente, ce qui est cohérent avec les résultats précédents [9]. Dans une tentative d'identifier de nouvelles cibles en aval de miR-145, nous avons utilisé la base de données TargetScan pour effectuer des expériences de dépistage. De plusieurs candidats, nous avons sélectionné FSCN1 pour d'autres expériences parce FSCN1 a été trouvé à jouer un rôle important dans la migration de la tumeur et l'invasion. Plusieurs preuves suggèrent que FSCN1 est la cible en aval direct de miR-145. En premier lieu, FSCN1 contient des séquences hautement UTR à l'extrémité 3 'qui sont complémentaires à la séquence de la graine de miR-145 conservée. D'autre part, une corrélation inverse entre miR-145 et FSCN1 n'a été trouvée dans les paires d'échantillons provenant de patients atteints de cancer gastrique. Enfin, lors de la classification des échantillons cliniques en élargissant le type et le type infiltrant basé sur la classification de Ming, nous avons constaté que miR-145 est remarquablement régulée à la baisse dans le cancer gastrique infiltrant par rapport à l'expansion de cancer gastrique. Par ailleurs, une plus forte corrélation inverse a également été détectée entre miR-145 et FSCN1 niveaux d'expression dans le cancer de l'estomac infiltrant. La présente étude a apporté un nouvel éclairage sur la corrélation entre miR-145 et FSCN1 dans le cancer gastrique infiltrant. Dans une étude précédente, Lauren divisé les cancers gastriques dans les deux types suivants: type intestinal et le type diffus [25]. Type de cancer de l'intestin est décrit comme étant une tumeur des glandes ressemblant à un carcinome du côlon, le cancer et le type diffus est constitué d'amas isolés ou de petits de cellules sans la formation de glandes. Les types de tumeurs dans la classification de Lauren et Ming sont très proches les uns des autres. La plupart des tumeurs en expansion ont des caractéristiques de type intestinal cancer, et la plupart des tumeurs infiltrantes sont des cancers de type diffus [5]. Cependant, un nombre important de carcinomes gastriques ne peut pas être classé en type intestinal ou de type diffus, y compris les cancers indifférenciés qui n'infiltrent pas diffusément et les cancers glandulaires qui infiltrent diffuse. En outre, la détection du cancer gastrique au début en utilisant la classification de Lauren est relativement difficile parce que le stade précoce du cancer de type diffus, par définition, ne diffuse. Cependant, la classification de Ming peut résoudre ces problèmes [5]. Dans la classification de Ming, les modes de distribution des cellules indiquent clairement une différence fondamentale dans leur potentiel de croissance ainsi que la puissance de pénétration et de l'invasion. Comme le cancer gastrique infiltrant est plus invasive que l'expansion du cancer gastrique, ces résultats suggèrent que miR-145 et FSCN1 deux jouent un rôle crucial dans l'invasion du cancer gastrique.

Bien que plusieurs rapports ont mis en cause la réglementation des FSCN1 par Mirs dans de nombreux cancers [19, 20, 26], au mieux de notre connaissance, aucun rapport n'a suggéré que FSCN1 est une cible directe de miR-145 dans le cancer gastrique. Dans cette étude, nous avons confirmé que miR-145 réprime l'expression de FSCN1 et cible 3 'UTR de FSCN1 dans les cellules de cancer de l'estomac directement. En outre, la ré-expression simultanée de FSCN1 compromis le miR-145-supressed migration cellulaire et la capacité d'invasion presque complètement miR-145 transfectées MGC-803 et les cellules SGC-7901, ce qui indique que la répression des FSCN1 est nécessaire pour miR -145 pour inhiber la migration et l'invasion des cellules cancéreuses gastriques. Par conséquent, FSCN1 est une cible en aval importante de miR-145 dans la régulation de l'invasion du cancer gastrique.

En résumé, la présente étude a identifié que miR-145 est principalement régulée à la baisse dans le cancer gastrique infiltrant et que miR-145 expression et l'expression FSCN1 ont une forte corrélation inverse dans le cancer gastrique infiltrant. Fonctionnellement, nous avons démontré que miR-145 supprime la migration cellulaire et l'invasion dans le cancer gastrique principalement en ciblant directement FSCN1. Par conséquent, le rétablissement de l'expression de miR-145 peut être explorée comme une stratégie alternative thérapeutique contre le cancer gastrique.

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