PLoS ONE: Tetrandrine Veroorzaakt Mitochondriën-gemedieerde apoptose in Human MaagKanker BGC-823 Cells

Abstract

Tetrandrine, een bis-benzylisoquinoline alkaloïde geïsoleerd van de gedroogde wortel van Hang-Fang-Chi ( Stephania
tetrandra
S. Moore), is gerapporteerd dat anti-kanker effecten op veel tumoren bezitten. In deze studie hebben we onderzocht-tetrandrine geïnduceerde apoptose op de menselijke maagkanker BGC-823 cellen In vitro Kopen en In vivo
. De resultaten toonden aan dat tetrandrine remde significant levensvatbaarheid van de cellen op een dosis- en tijdsafhankelijke wijze en geïnduceerde apoptose. Het verhoogde de apoptose; opregulatie van Bax, Bak en Bad; en downregulatie van Bcl-2 en Bcl-xl in BGC-823 cellen. Bovendien tetrandrine verhoogde de activatie van caspase-3 en -9, afgifte van cytochroom c
en opregulatie van aPAF-1, suggereert dat tetrandrine-geïnduceerde apoptose is gerelateerd aan de mitochondriale pathway. Ondertussen, voorbehandeling met de pan-caspaseremmer z-VAD-fmk in BGC-823-cellen verlaagde tetrandrine geïnduceerde apoptose blokkeert activering van caspases. Bovendien tetrandrine effectief remde tumorgroei via inductie van apoptose, die werd geverifieerd door immunohistochemische analyse in een naakt muis xenograft model. Bij elkaar genomen, hebben we geconcludeerd dat tetrandrine aanzienlijk remde de proliferatie van maagkanker BGC-823 cellen door mitochondriën-afhankelijke apoptose, dat een veelbelovende rol kunnen spelen bij maagkanker therapie

Visum:. Qin R, Shen H, Cao Y, Y Fang, Li H, Q Chen, et al. (2013) Tetrandrine Veroorzaakt Mitochondriën-gemedieerde apoptose in Human MaagKanker BGC-823 cellen. PLoS ONE 8 (10): e76486. doi: 10.1371 /journal.pone.0076486

Editor: Lucia R. Languino, Thomas Jefferson University, Verenigde Staten van Amerika

Ontvangen: 16 december 2012; Aanvaard: 27 augustus 2013; Gepubliceerd: 1 oktober 2013 |

Copyright: © 2013 Qin et al. Dit is een open-access artikel gedistribueerd onder de voorwaarden van de Creative Commons Attribution License, die onbeperkt gebruik, distributie en reproductie maakt in elk medium, op voorwaarde dat de oorspronkelijke auteur en de bron worden gecrediteerd

Financiering:. Dit werk werd ondersteund door de volgende beurzen: de subsidies van de National Natural Science Foundation of China (81070423 en 81101677), de subsidies van de Natural Science Foundation van de provincie Jiangsu (BK 2.010.332). De financiers hadden geen rol in de studie design, het verzamelen van gegevens en analyse, besluit te publiceren, of de voorbereiding van het manuscript

Competing belangen:.. De auteurs hebben verklaard dat er geen tegenstrijdige belangen bestaan ​​

Introductie

In China, maagkanker, een van de meest voorkomende kwaadaardige tumoren, als gevolg van een accumulatie van genetische en epigenetische veranderingen, nog steeds een hoge incidentie en mortaliteit [1-3]. Er zijn verschillende factoren die het ontstaan ​​van maagkanker, zoals Helicobacter Pylori
infectie, voeding, tabaksgebruik, etc. [4]. Afhankelijk van de omstandigheden, de meeste patiënten met maagkanker nodig chirurgie, chemotherapie en /of chemoradiotherapie [5]. Eerdere studies hebben aangetoond dat maagkanker is een complexe genetische ziekte die verband houdt oncogenen of tumor suppressors [6].

Tetrandrine (C _{38H 42N 2O 6, MW 622,730 ) is een bis-benzylisoquinoline alkaloïde geïsoleerd van de gedroogde wortel van Hang-Fang-Chi ( Stephania
tetrandra
S. Moore). Onlangs heeft de diverse biologische activiteiten van tetrandrine zijn intensief bestudeerd vanwege zijn brede gebruik bij artritis, aritmie, ontsteking, silicose, verschillende soorten tumoren en reverse multi-drug resistentie [7,8]. Het is gemeld dat tetrandrine grote invloed is op tumoren met inbegrip van het vertragen van tumorgroei en het verhogen van dieren overlevingstijd en overlevingskansen [9-12]. Tetrandrine veroorzaakt een G1 celcyclus blokkade en induceert apoptose in verschillende celtypes. De precieze mechanismen waardoor tetrandrine initieert apoptose en remt celgroei in gastrische tumorcellen onduidelijk [13]. Het is gemeld dat de codelivery van paclitaxel (Ptx) en tetrandrine van nanodeeltjes op efficiënte wijze de cytotoxiciteit van Ptx kan verbeteren door opeenvolgende inhibitie van ROS-afhankelijke Akt route en activatie van apoptotische trajecten voor oxidatie therapie voor maagkanker [14]. Echter, als therapeutisch middel, Ptx onvermijdelijk ernstige bijwerkingen vanwege de niet-specifieke toxische effecten en speciale oplosmiddelen en tumorcellen beter bestand tegen Ptx geïnduceerde apoptose [15-17] geworden. Een eerdere studie heeft aangetoond dat tetrandrine een synergistisch effect met chemotherapeutische middelen op de apoptose van maagkanker cellijnen [18]. Verder is een derivaat (H1) van tetrandrine oefent goede anti-multidrug resistentie-activiteit door het initiëren van de intrinsieke route van apoptose en remmen van de activering van Erk1 /2 en Akt1 /2 [19]. Deze bevindingen suggereren dat tetrandrine Ptx kunnen vervangen als eerstelijns chemotherapie voor maagkanker.}

Omdat tetrandrine een groot potentieel in anti-kankertherapie, is het belangrijk te bestuderen systematisch het mechanisme te begrijpen. Daarom is in deze studie, onderzochten we de mogelijke mechanismen van tetrandrine op de menselijke maagkanker cellen In vitro Kopen en In vivo
.

Materialen en methoden

Materialen en reagentia

Tetrandrine werd verkregen uit Jiangxi Yintao Pharmaceutical Development Company (Jiangxi, China). Antilichamen werden verkregen van de volgende bronnen: antilichamen tegen Bcl-2, Bax, Bcl-xl, caspase-3, -8, -9, cytochroom c
, Apaf-1 en β-actine waren uit Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, USA); anti-Bad en Bak waren afkomstig Bioworld Technology (St. Louis Park, MN, USA). De Trizol reagens kit werd gekocht bij Invitrogen (Grand Island, NY, USA). MTT (3- (4, 5-dimethylthiazol-2-yl) -2, 5-difenyltetrazoliumbromide) werd gekocht bij Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA).

Celkweek

De menselijke maagkanker cellijn BGC-823 werd gekocht van Shanghai Cell Biology, de Chinese Academie van Wetenschappen (Shanghai, China). De cellen werden gekweekt in Dulbecco's gemodificeerd Eagle's medium (DMEM) (Gibco BRL, Grand Island, NY, USA), aangevuld met 10% foetaal runderserum (Hyclone, Logan, UT, USA), 1% penicilline en 1% streptomycine in een bevochtigde atmosfeer van 95% lucht en 5% CO _{2 bij 37 ° C.}

Cellevensvatbaarheid assay

Cel levensvatbaarheid werd gemeten door de MTT-bepaling. In het kort werden cellen gezaaid in 96-well platen met een dichtheid van 1 x 10 ^{4 cellen /putje. Na 36 uur werden de cellen behandeld met of zonder tetrandrine variabele concentraties van 24, 48 en 72 uur; en fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS) diende als negatieve controle. Dan 20 ul MTT-kleurstofoplossing (0,5 mg /ml, opgelost in PBS en gefiltreerd door een 0,2 mm membraan) werd aan elk putje toegevoegd en geïncubeerd bij 37 ° C gedurende 4 uur. Daarna werd 150 gl dimethylsulfoxide werd toegevoegd aan elk putje en de platen werden gedurende nog 10 min geïncubeerd bij 37 ° C. De absorptie werd gemeten bij 490 nm onder toepassing van een 96 putjes microplaat reader. De IC _{50 waarde werd gedefinieerd als de concentratie geneesmiddel die 50% celgroei remt vergeleken met de controlegroep.}}

Western blotting

Maagkanker cellen werden tweemaal met PBS gewassen, en vervolgens 100 ui RIPA lysisbuffer (Beyotime, China) werd toegevoegd aan elk putje om lyseren cellen gedurende ongeveer 20 minuten. Vervolgens werd het mengsel gecentrifugeerd bij 12.000 g
gedurende 15 min en de supernatant werd verzameld. Eiwitconcentratie werd gedetecteerd onder toepassing van een BCA Protein Assay Kit (Beyotime, China) volgens de instructies van de fabrikant. Totaal eiwit werd door SDS-PAGE op 8%, 10% en 12% polyacrylamidegelen en elektroforetisch overgebracht op polyvinylideen (PVDF) membranen (Millipore, Bedford, MA, USA). Na het blokkeren gedurende 2 uur of overnacht met 5% niet-vette droge melk (opgelost in Tris-gebufferde zoutoplossing-Tween 20 buffer; TBST), werden membranen geïncubeerd met primaire antilichamen (1: 500-1: 1000 verdunning) gedurende 2 uur bij kamertemperatuur of overnacht bij 4 ° C en vervolgens driemaal met TBST (5 mM Tris-HCl, pH 7,4, 136 mM NaCl, 0,1% Tween 20) vóór reactie met mierikswortelperoxidase (HRP) geconjugeerd secundaire antilichamen (1: 5000 -1: 10.000) gedurende 1 uur bij kamertemperatuur geroerd. Na driemaal wassen gedurende 10 min elk met TBST werden de membranen behandeld met ECL Western Blotting Detection Reagent.

Kwantitatieve Real-time PCR

Totaal cellulair RNA werd geïsoleerd onder toepassing van Trizol reagens ( Invitrogen) volgens het protocol van de fabrikant en opgelost in DEPC-behandeld water. De concentratie van totaal RNA werd gemeten door UV-absorptie spectroscopie. Reverse transcriptie werd uitgevoerd met een RevertAid ™ First Strand cDNA Synthesis Kit (MBI Fermentas, Waltham, MA, USA) volgens het protocol van de fabrikant. Het nieuw gesynthetiseerde cDNA werd geamplificeerd door polymerasekettingreactie (Fermentas). De sequenties van elke primer die in deze studie zijn weergegeven in Tabel 1. De polymerasekettingreactie reactieomstandigheden worden vermeld als volgt: 95 ° C gedurende 3 min, 95 ° C gedurende 5 min, 58 ° C gedurende 30 min, en 72 ° C gedurende 30 min gevolgd door 40 cycli bij 94 ° C gedurende 15 s en 60 ° C gedurende 1 min. Alle testen werden uitgevoerd in drievoud.
Gene
Sense primer (5 'naar 3')
Antisense primer (5' 3’)
bcl-2GGATCCAGGATAACGGAGGCCCAGATAGGCACCCAGGGTbaxACCAAGAAGCTGAGCGAGTGTACAAACATGGTCACGGTCTGCbclxlGGCAGGCGACGAGTTTGACCCATCCCGGAAGAGTTCATβ-actinTGGCACCCAGCACAATGAACTAAGTCATAGTCCGCCTAGAAGCATable 1. Sequenties van primers voor de genen die in deze studie.
CSV Download CSV

Annexine V-propidiumjodide bindingsbepaling

In het kort, cellen werden uitgezaaid in 6-putjesplaten en behandeld met verschillende concentraties tetrandrine gedurende 24 uur, en PBS dienden als negatieve controle. Vervolgens werden de cellen geresuspendeerd in 500 ul koude bindingsbuffer. celsuspensies werden gekleurd met Annexine-V en propidium iodide (BD Pharmingen ^{TM, Becton Dickinson, San Jose, CA, USA) volgens de instructies van de fabrikant, en flowcytometrie analyse werd uitgevoerd door FACS (Coulter, Becton Dickinson).}

Caspase-3 activiteit test

In het kort, cellen werden in een 6-wells plaat met een concentratie van 4 x 10 ^{5 /putje en behandeld met de aangegeven concentratie van drugs. een gelijk volume PBS werd gebruikt als een negatieve controle. Caspase-3 activiteit werd gemeten met een caspase-3 activiteit testkit (Beyotime, China) volgens de instructies van de fabrikant. De absorptie werd daarna gemeten bij 405 nm met een microplaat reader. Alle experimenten werden in drievoud uitgevoerd.}

Ethics statement

Procedures bij dieren en hun zorg werden uitgevoerd in overeenstemming met de NIH richtlijnen (NIH Pub. No.85-23, herzien 1996) en werden goedgekeurd door de Animal Care en gebruik Comite van de aangesloten People's Hospital, Jiangsu University.

Dierproeven

Vrouwelijk naakt muizen (BALB /c nu /nu), 4-6 weken oud, werden verkregen uit de Experimental Animal Center van de Chinese Academie van Wetenschappen (Shanghai, China) en in een biologisch kabinet op het Laboratory Animal Facility van Jiangsu Universiteit onder specifieke pathogeen-vrije omstandigheden bewaard. De dieren werden in een 12-uur licht-donkercyclus gehouden. Kamer temperatuur op ongeveer 20 ° C en de vochtigheid werd op ongeveer 50% in een kamer met een gefilterde lucht gehouden.

Tetrandrine behandeling van subcutane BGC-823 tumoren in muizen

Vaststellen een BALB /c muis xenograft model van menselijke maagkanker, BGC-823 cellen bij een concentratie van 5,0 x 106/150 pl werden geïnjecteerd in de rechterflank van elk BALB /c naakt muis. Ongeveer 10 dagen later (tumorgrootte bereikt 120-150 mm3), naakt muizen werden willekeurig verdeeld in drie groepen (N = 5) en gezien de volgende behandelingen: controle (behandeling met fysiologisch zout), lage doseringsgroep (behandeld met 40 mg /kg tetrandrine) en hoge dosis groep (behandeld met 120 mg /kg tetrandrine). BALB /c muizen werden intraperitoneaal geïnjecteerd met tetrandrine (200 pl, 40 mg /kg of 120 mg /kg) of een gelijk volume normale zoutoplossing, eenmaal per dag gedurende 3 weken, resp. De tumorgrootte werd elke 3 dagen gemeten in twee loodrechte dimensies met schuifmaten en het tumorvolume (TV) werd berekend door de formule: TV = lengte (mm) x breedte ^{2 (mm 2) x 0,5 . Relatieve tumorvolume (RTV) werd berekend volgens de volgende formule: RTV = TV _{t /TV 0, waarbij TV 0 is het tumorvolume op dag 0 en TV t de tumor volume op een bepaalde dag t. Ondertussen werden de dieren gewogen tweemaal per week. Aan het eind van het experiment werden de tumoren uitgesneden en gefixeerd in formaline voor verdere analyse.}}

Immunohistochemische analyse

De in paraffine ingebedde monsters werden uit BGC-823 naakt muizen werden gekleurd met de volgende antilichamen : Bcl-2 en Bax (Boster), Bcl-xl, geactiveerde caspase-3 en caspase-geactiveerd 9 (Santa Cruz) voor immunohistochemie. Beelden werden genomen met een fluorescentie microscoop (Carl Zeiss).

Statistische analyse

Alle experimenten werden ten minste driemaal uitgevoerd en alle gegevens werden weergegeven als het gemiddelde ± standaardafwijking (SD). Statistische verschillen werden bepaald door one-way ANOVA met SPSS 16.0 software. Een p waarde van minder dan 0,05 werd beschouwd als significant.

Resultaten

cytotoxische effect van tetrandrine op BGC-823 cellen

De chemische structuur van tetrandrine is weergegeven in figuur 1A. Het antiproliferatieve effect van tetrandrine onderzocht in BGC-823 cellen met de MTT assay. Zoals wordt getoond in figuur 1B, werden de cellen behandeld gedurende 24, 48 en 72 uur met verschillende concentraties tetrandrine. Tetrandrine bleek significant remt de groei van BGC-823 cellen op een dosis- en tijdsafhankelijke wijze. BGC-823 cellen werden significant geremd door tetrandrine bij 10 ug /ml ( P
< 0,05). De IC _{50 waarde was 6,104 ± 0,786, 4,471 ± 0,650 en 3,744 ± 0,573 na 24, 48 en 72 uur van behandeling tetrandrine, respectievelijk. Aldus werden 6, 8 en 10 ug /ml bepaald als vertegenwoordiger concentraties in de volgende studies.}

Inductie van apoptose door tetrandrine

Tetrandrine gemedieerde anti-kanker capaciteiten is gerapporteerd worden geassocieerd met apoptose [9-12]. Daarom onderzochten we het vermogen van tetrandrine geïnduceerde apoptose van BGC-823-cellen onder toepassing van een flowcytometrie test. Zoals gemeten door stromingscytometrie, de effecten van tetrandrine BGC-823 apoptose zijn getoond in figuur 2A en B, met de 24-uur tetrandrine behandelingen op 0, 6, 8 en 10 ug /ml resulteerde in 4,35%, 11,4% , 17,72% en 32,34% apoptotische cellen, respectievelijk, en tetrandrine (8 ug /ml) gedurende 0, 12, 24 en 48 uur waardoor 3,4%, 6,64%, 19,15% en 25,85% apoptotische cellen, respectievelijk (Figuur 2C en D). Deze gegevens duidelijk aangegeven dat tetrandrine geïnduceerde apoptose in BGC-823 cellen in een dosis- en tijdsafhankelijke manier. Het aantal apoptotische cellen verhoogd met de tetrandrine concentratie en behandelingstijd.

Tetrandrine-gemedieerde expressie van Bcl-2 familieleden

De meer specifieke mechanisme voor de inductie van apoptose in BGC onderzoeken -823 cellen door tetrandrine, ontdekt we de expressie van apoptose-gerelateerde eiwitten door Western blotting en hun mRNA-niveau door real-time (RT) -PCR. Hier hebben we de expressie van Bax, Bad, Bak, Bcl-2 en Bcl-xl in BGC-823 cellen behandeld met tetrandrine. Na 24 uur blootstelling aan tetrandrine, Bax, Bad en Bak eiwitexpressie werd dosisafhankelijk verhoogd, dat Bcl-2 en Bcl-xl eiwitexpressie was dosisafhankelijk verminderde (Figuur 3A). We vonden ook dat tetrandrine de expressie van Bax kunnen upreguleren en neerwaarts reguleren van de expressie van Bcl-2 in een tijd-afhankelijke wijze (Figuur 3B). Om te bepalen of tetrandrine de gentranscriptie van bcl-2, Bcl-xl en bax zou beïnvloeden, werd de mRNA-expressie onderzocht door RT-PCR (Figuur 3C). De RT-PCR resultaten laten duidelijk samenviel met die weergegeven in figuur 3A.

Tetrandrine-geïnduceerde apoptose via een mitochondriële route in BGC-823 cellen

Om te onderzoeken of-tetrandrine geïnduceerde apoptose werd geassocieerd met de activatie van caspase leden, maten we de expressie van caspasen in BGC-823 cellen behandeld met verschillende concentraties tetrandrine door Western blotting. De resultaten toonden een dosisafhankelijke verhoging van gesplitst caspase-3 en caspase-9 gesplitst in tetrandrine- behandelde cellen (Figuur 4A). Echter niet detecteerbaar niveau van gesplitst caspase-3 en caspase-9 gesplitst zijn in de cellen in afwezigheid van tetrandrine behandeling (gegevens niet getoond). Om de rol van caspase activatie in tetrandrine geïnduceerde apoptose vervolgens bepalen, werden BGC-823 cellen voorbehandeld met de pan-caspaseremmer z-VAD-fmk (10 uM) gedurende 4 uur en vervolgens behandeld met 8 ug /ml tetrandrine voor 24 h. Vergeleken met de controle werden de relatieve activiteiten van caspase-3 verhoogd BGC-823 cellen behandeld met tetrandrine alleen (Figuur 4B). Bovendien is de afgifte van cytochroom c
werd in een dosis-afhankelijke wijze toe met tetrandrine. Een vertegenwoordiger flowcytometrie resultaat toonde dat cellen voorbehandeld met z-VAD-fmk sterk verlaagde tetrandrine geïnduceerde apoptose en dat slechts een klein aantal apoptotische cellen werd gedetecteerd (Figuur 4C). Vervolgens hebben we de expressie van cytoplasmatisch cytochroom onderzochte c
, dat vrijkomt uit de mitochondriën in het cytoplasma tijdens apoptose gehandeld apoptotic protease activerende factor-1 (Apaf-1) door het verhogen van de binding van Apaf- 1 ATP /dATP, en geïnduceerde caspase-9-afhankelijke activatie van caspase-3 [20-22]. Gevonden werd dat tetrandrine de expressie van cytochroom cytoplasmatische aanzienlijk toegenomen c Kopen en Apaf-1 in BGC-823 cellen op een dosisafhankelijke wijze (figuur 4D). Samen vormen deze bevindingen suggereerden dat een mitochondriën bemiddelde caspase cascade route was betrokken bij tetrandrine geïnduceerde apoptose.

Anti-tumor effect van tetrandrine BGC-823 xenotransplantaten naakt muis

Sinds tetrandrine gevonden significant remmen de groei van BGC-823 cellen in vitro
, we verder het anti-tumor effect van tetrandrine in vivo hotels met gevestigde xenograft modellen geëvalueerd. Zoals getoond in figuur 5A, kan tetrandrine effectief remmen tumorgroei na een 24-daagse behandeling. Aan het einde van 24 dagen, de gemiddelde tumor volumes 493,06 mm ^{3 en 1243,00 mm 3 in de hoge doseringsgroep en lage dosisgroep, respectievelijk overeenkomend met 80,52% en 50,9% remming in vergelijking met de controlegroep groep. Bovendien werd tumorgewicht verlaagd als gevolg van een behandeling met tetrandrine bij beide concentraties (Figuur 5B & Tabel 2). Dit resultaat toonde aan dat een hoge dosis tetrandrine een sterkere anti-tumor effect dan een lage dosis op de BGC-823 xenograft model had.
Groep (n = 5)
tumorvolume (mm 3)
Remmende Rate (%)
Tumor gewicht (g)
Remmende Rate (%)
control2531.78 ± 153.251.194 ± 0.10Tet (40 mg /kg) 1243,00 ± 55,19 ** * 50.900.641 ± 0,06 *** 46.31Tet (120 mg /kg) 493,06 ± 145,63 *** 80.520.298 ± 0,09 *** 75.04Table 2. Remming van tetrandrine (Tet) op tumorgroei van naakt muizen
*** P Restaurant <.; 0.001 versus
de controlegroep. CSV Download CSV}

Tetrandrine-geïnduceerde apoptose in BGC-823 xenotransplantaten

Immunohistochemie analyse van tumorweefsels uitgesneden uit BGC-823 xenogetransplanteerde naakt muizen bevestigde opnieuw dat apoptose in-tetrandrine behandelde tumoren had plaatsgevonden en dat de mitochondriale pathway gespeeld een belangrijke rol tijdens apoptose. Er waren vijf naakt muizen in elke groep. We zagen dat de expressie van Bcl-2 en Bcl-xl was afgenomen, terwijl de eiwitniveaus van Bax, geactiveerde caspase-3 en caspase-9 geactiveerd waren significant verbeterd door tetrandrine (figuur 6). Al deze bevindingen sterk bevestigd dat tetrandrine apoptose kunnen veroorzaken, in overeenstemming met de In vitro
studie.

Discussie

Maagkanker is de vierde meest gediagnosticeerde gezwellen achter kanker van de long-, borst-, colon en rectum, veroorzaakt bijna een miljoen doden per jaar en is de tweede oorzaak van kanker-gerelateerde sterfte in de wereld [23-26] geweest. Chirurgie, chemoradiotherapie, en moleculaire gerichte therapie zijn de belangrijkste behandeling strategieën in de behandeling van maagkanker [27] geweest. Hoewel chirurgische resectie de meest effectieve curatieve behandeling is geweest, de resultaten zijn inconsistent en beperkt door tumorrecidief en chemoresistance. Conventionele chemotherapeutische geneesmiddelen, zoals Ptx, 5-fluoruracil en cisplatine doden tumorcellen door het induceren van apoptose en autofagie; maar tumorcellen resistent tegen drugs geïnduceerde apoptose [17,28,29] geworden.

Het is gemeld dat tetrandrine sterke anti-tumor activiteit zowel in vitro Kopen en in
vivo in veel kankercellen, zoals A549 humane longcarcinoomcellen, blaaskanker cellen, darmkankercellen, hepatoma cellen, etc. [9-12]. Een eerdere studie toonde dat tetrandrine een veelbelovende rol van synergistische wisselwerking met chemotherapeutische middelen kunnen spelen eventueel door synergetische effecten induceren van apoptose en neerwaarts reguleren chemotherapeutisch middel-geassocieerde genen in MKN-28 cellen en BGC-823 cellen [18]. Echter, het mechanisme van tetrandrine menselijke maagkanker BGC-823-cellen niet geïdentificeerd. In deze studie hebben we aangetoond dat tetrandrine vertoonde krachtige anti-tumor activiteit in de richting van de menselijke maagkanker In vitro Kopen en In vivo
, ophelderen van de onderliggende mechanismen van de actie.

In de eerste plaats onze resultaten toonden dat tetrandrine remt effectief BGC-823 celproliferatie geanalyseerd door MTT op een dosis- en tijdsafhankelijke wijze. Intussen is de IC _{50s van tetrandrine bedroeg ongeveer 6,1, 4,5 en 3,7 ug /ml in BGC823 cellen 24, 48 en 72 uur, respectievelijk. Volgens eerdere studies, chemotherapeutica doden solide tumoren hoofdzakelijk door het induceren van apoptose [30-32]. We vonden dat apoptose geïnduceerd door tetrandrine in een concentratie-afhankelijke manier door stromingscytometrie analyse met verhoogde vroege apoptotische cellen en laat apoptotische cellen bij maagkanker BGC-823 cellen.}

In zoogdiercellen, apoptose worden geactiveerd door de extrinsieke route geactiveerd door de dood receptor en de intrinsieke route gereguleerd door Bcl-2 familieleden en caspase cascades in het mitochondrion [33,34]. In onze studie, tetrandrine verhoogde de expressie van pro-apoptotische eiwitten Bax, Bad en Bak en verminderde de eiwitniveaus van Bcl-2 en Bcl-xl. Daarom is een verhoogde verhouding van anti- en pro-apoptotische eiwitexpressie, zoals Bax /Bcl-2-verhouding, zou leiden tot het verlies van mitochondriale membraanpotentiaal. Disfunctioneren mitochondria releases cytochroom c
, dat zich ophoopt in het cytosol en vormt een complex met aPAF-1. In de intrinsieke route, als effector, caspase-3 wordt gesplitst door activering van caspase-9 [35-37]. In deze studie hebben we aangetoond dat caspase-9 en caspase-3 werd geactiveerd door tetrandrine. De pan-caspase-remmer z-VAD-fink verminderde apoptose in BGC-823 cellen, wat aangeeft dat de mitochondriale pathway speelt een centrale rol in-tetrandrine geïnduceerde apoptose.

Het is gemeld dat tetrandrine de weerstand zou kunnen keren naar vele chemotherapie drugs, zoals Ptx en doxorubicine in de KBv200 en K562 naakt muis xenograft modellen [38,39]. Tetrandrine bezit ook een sterk vermogen om angiogenese te inhiberen gliomen bij ratten [40]. Bovendien zijn onze resultaten bleek dat tetrandrine vertoonden sterke anti-tumor activiteit van het remmen van tumorgroei en het induceren van apoptose in de ingestelde BGC-823 naakt muis xenograft model.

Samenvattend zijn onze gegevens blijkt dat tetrandrine significant geïnduceerde apoptose in humane maagkanker BGC-823 cellen en haar naakt muis xenograft modellen. Tetrandrine-geïnduceerde apoptose werd geassocieerd met activatie van de intrinsieke apoptose route. Gebaseerd op deze resultaten, kon tetrandrine een groot potentieel hebben in de behandeling van menselijke maagkanker in de toekomst.

Dankwoord

We willen de leden van de Clinical Medicine Department of Jiangsu University bedanken voor hun technische bijstand.

• PLoS ONE: SULF2 Methylering wordt geassocieerd met In Vitro cisplatine gevoeligheid en de klinische werkzaamheid voor maagkanker patiënten behandeld met een Modified FOLFOX regime
• PLoS ONE: stads verordening van Claudin-18 wordt geassocieerd met de proliferatieve en invasieve Potentieel van maagkanker bij de Invasieve Voorzijde