PLoS ONE: De doorgeven MicroRNA-26a in plasma en de potentiële diagnostische waarde in de maag Cancer

De abstracte

Achtergrond

In de afgelopen decennia, een groot deel van de studies is de mogelijkheid van de verstrekte circulerende microRNAs (miRNAs) als niet-invasieve biomarkers voor de diagnose van kanker. Het doel van deze studie was om de niveaus van circulerende miRNAs in weefsels en plasma van patiënten met maagkanker (GC) de diagnostische waarde detecteren en meten.

Methods

Er werden weefselmonsters verzameld van 85 GC patiënten. Plasma monsters werden verzameld van 285 GC 285 patiënten en controlepersonen. Verschillend tot expressie miRNAs werden gefilterd met door Agilent Human miRNA microarray en TaqMan lage dichtheid array (TLDA) met samengevoegde monsters, gevolgd door de kwantitatieve reverse transcriptie polymerase chain reaction (qRT-PCR) validatie. Receiver operating characteristic (ROC) krommen werden gestructureerd om de diagnostische nauwkeurigheid van de miRNAs evalueren. Het plasma niveau van miR-26a in GC patiënten van verschillende klinische fasen werd vergeleken.

Resultaten

Vier miRNAs (miR-26a, miR-142-3p, miR-148a en buitenspiegels 195) bleek toevallig verlaagde niveaus in weefsel en plasma van de GC patiënten vergeleken met controles en ROC curves werden geconstrueerd aantonen dat miR-26a had een hoogste gebied onder de curve (AUC) van 0,882. Bovendien werd miR-26a stabiel gedetecteerd in het plasma van patiënten met GC verschillende klinische kenmerken.

Conclusie

Plasma miR-26a kan een nieuwe en stabiele merker van gastrische kanker.

Citation: Qiu X, Zhang J, Shi w, Liu S, Kang M, Chu H, et al. (2016) Circulerende MicroRNA-26a in plasma en de potentiële diagnostische waarde bij maagkanker. PLoS ONE 11 (3): e0151345. doi: 10.1371 /journal.pone.0151345

Editor: Zheng Li, Peking Union Medical College Hospital, CHINA

Ontvangen: 29 oktober 2015; Aanvaard: 8 februari 2016; Gepubliceerd: 24 maart 2016

Copyright: © 2016 Qiu et al. Dit is een open toegang Artikel gedistribueerd onder de voorwaarden van de Creative Commons Attribution License, die onbeperkt gebruik, distributie en reproductie maakt in elk medium, op voorwaarde dat de oorspronkelijke auteur en de bron worden gecrediteerd

Data Availability:. Alle relevante gegevens binnen het papier en de Ondersteunende informatie bestanden

Financiering:. Dit onderzoek werd mede ondersteund door de National Natural Science Foundation of China (81230068, 81373091, 81302502, 81302490 en 81473049), Natural Science Foundation van de provincie Jiangsu (BK2012842 en BK20130641), de Key-programma voor fundamenteel onderzoek van Jiangsu Provinciale Departement van Onderwijs (12KJA330002), Specialized Onderzoek Fonds voor de Doctoral Programma van Hoger Onderwijs van China (20130092120063), Jiangsu Provinciale Training Programma voor Innovatie en Ondernemerschap voor gegradueerden (201412682004Y ), provincie Jiangsu Science and Technology Innovation Team, en de Priority Academische Programma Ontwikkeling van Jiangsu instellingen voor hoger onderwijs (volksgezondheid en Preventieve Geneeskunde)

Competing belangen:.. de auteurs hebben verklaard dat er geen tegenstrijdige belangen bestaan ​​

Introductie

Maagkanker (GC) is een van de meest voorkomende kwaadaardige ziekten in de wereld. Hoewel de totale incidentie is afgenomen in de afgelopen jaren, is de vierde meest voorkomende maligniteit (989.000 gevallen) en de tweede belangrijke oorzaak van kanker-gerelateerde sterfte (738.000 sterfgevallen) wereldwijd [1]. Meer dan 70% van de gevallen komen in ontwikkelingslanden [2]. In het bijzonder, gevorderd stadium patiënten nog aantonen extreem slechte overlevingskansen [3] .Om datum, wordt de diagnose van GC op basis van de klinische symptomen, en er zijn een aantal testen technieken toegepast, zoals endoscopie en barium maaltijd onderzoek. Echter, al deze benaderingen een aantal gebreken bij detectie van GC weergegeven. Bovendien zijn er enkele serum tumormarkers bijvoorbeeld carcino-embryonaal antigeen (CEA), koolhydraat antigeen 19-9 (CA19-9) en koolhydraat antigeen 72-4 (CA72-4), en er zijn enkele beperkingen van de gevoeligheid en specificiteit voor GC screening [4]. Vandaar dat we meer aandacht besteden aan het ontdekken van nieuwe, betrouwbare en niet-invasieve biomarkers van GC.

MicroRNAs (miRNAs) zijn een klasse van korte (20 ~ 25 nucleotiden), niet-coderende enkelstrengs RNA's [5]. Er wordt algemeen aangenomen dat miRNAs kunnen deelnemen aan het reguleren van genexpressie, die tot mRNA silencing als doel splitsing, translationele remming en mRNA verval [6]. Accumuleren bewijs heeft aangegeven dat miRNAs betrokken waren bij verschillende pathofysiologische processen en leiden tot fundamentele veranderingen in meerdere ziekten. Zhang et al
. gevonden dat miR-26a geïnduceerde endotheel apoptose en gaf een therapeutisch potentieel van miR-26a voor atherosclerose geassocieerd met apoptotische celdood [7]. Leonov et al
. beschreven remming van miR-132 resulteerde in hoge AGO2
uitdrukking, die betrokken was bij angiogenese en ontsteking tijdens primaire endotheelcellen activering [8]. Talrijke studies hebben aangetoond dat de miRNAs spelen onmisbare rol bij het ontstaan ​​van tumoren, die hetzij als oncogenen of tumor suppressor genen [9]. Verschillende miRNAs zijn gerapporteerd als zijnde gerelateerd aan kanker door het miRNA expressieprofielen [10-12]. Helaas, de weefselmonsters zijn moeilijk te verkrijgen. Detecteren van miRNAs in weefsels is niet realistisch in klinische toepassing.

Bovendien is steeds meer bewijs aangetoond dat circulerende miRNA's zijn bestand tegen RNase spijsvertering en stabiel detecteerbaar in plasma en serum met gemak van de metingen [13-14]. Eerdere studies hebben bevestigd dat het bestaan ​​van miRNAs in bloed en de expressie geassocieerd met kanker, waaronder grote B-cellymfoom, colorectale kanker, blaaskanker en borstkanker [15-18]. Deze studies samen een basis voor het circuleren van miRNAs als biomarker voor kankeronderzoek.

Veel studies tonen het expressieniveau van miRNA in plasma niet volledig overeen met die van de tumor. miR-378 daalde aanzienlijk GC weefsels en meerdere cellijnen [19], maar miR-378 waren betekenisvol opgereguleerd in serum GC patiënten [20]. Aangezien hetzelfde als miR-486, miR-486 kan fungeren als een tumor-suppressor miRNA in maagtumor [21], die zijn overexpressie in serum GC patiënten [22]. Op het moment kunnen verschillende serum /plasma miRNAs onderscheiden van de GC patiënten met de controles, toch kan niet die het miRNA expressie in weefsel. Als we kunnen vinden van de miRNAs zowel verschillend tot expressie bij maagkanker weefsel en plasma, moet het meer klinische betekenis te hebben.

Om vast te stellen of de miRNAs differentieel zowel in weefsel en plasma, gebruikten we twee microarrays om het scherm miRNAs . In de twee validatie fasen, vier kandidaat-miRNAs waren significant down-gereguleerd in de tumor weefsels en plasma monsters door qRT-PCR. Onze studie geeft aan dat miR-26a aanzienlijk stabiel was afgenomen in plasma van maagkanker patiënten en maagkanker patiënten konden onderscheiden van de controles, met een goede sensitiviteit en specificiteit. Het werd voorspeld dat een veelbelovende biomarker circulerende van maagkanker in routine klinische diagnose.

Materialen en methoden

Studie ontwerp en onderwerpen

Deze studie werd goedgekeurd door de institutionele beoordeling bestuur van Nanjing Medical University, en elke deelnemer op voorwaarde dat de ondertekende schriftelijke informed consent. Alle proefpersonen werden aangeworven in Yixin kanker ziekenhuis, Nantong Tumor Hospital, Huai-An First People's Hospital en De Tweede Affiliated Hospital van Nanjing Medische Universiteit van maart 2006 tot mei 2013 in de provincie Jiangsu, China.

De tumor weefsels en de normale weefsels (gevestigd > 5 cm van de tumor) werden verkregen van 55 GC chirurgische ingreep en snel bevroren in vloeibare stikstof. De plasma-monsters werden verzameld van 285 GC patiënten en 285 sexe en leeftijd gematchte plasma van de gezonde individuen werden verzameld als de controles. Alle patiënten bleken de diagnose histologisch GC eerste diagnose en geen van hen had gekregen therapeutische procedures, bijvoorbeeld chemotherapie of radiotherapie. We ingedeeld de tumor stadium in overeenstemming met de tumor-node-metastase (TNM) staging-systeem van de Unie voor International Cancer Control (UICC). De klinische kenmerken van de deelnemers worden in Tabel 1

Meertraps-studie was ontworpen om de plasma miRNAs identificeren als biomarkers voor GC patiënten (Figuur 1). In de ontdekking fase werden differentieel tot expressie miRNAs beoordeeld met gepaarde weefselmonsters van 5 GC patiënten (tabel S1) van Agilent Human miRNA Microarray (v12.0, Agilent Technologie, CA, USA). Plasmamonsters van patiënten 5 GC (tabel S2) waarvan de sekse, leeftijd klinische toestanden gekoppeld aan de weefselmonsters en 5 gezonde controles werden onderworpen aan TLDA (V2.0, Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) om differentieel tot expressie miRNAs identificeren . In de training fase werden de significant veranderd miRNAs eerst geëvalueerd door qRT-PCR in 50 gepaarde weefsels monsters en 80 GC serummonsters en 80 gematchte controles. Vervolgens werden de differentieel tot expressie miRNAs tussen het weefsel en serum verder behandeld extra 400 deelnemers, welke GC 200 patiënten en 200 controles inbegrepen.

RNA isolatie uit plasma en weefsel

Bloedmonsters in de aparte vacuüm blokjes werden gecentrifugeerd bij 3000 rpm gedurende 10 min bij 4 ° C. We verzamelden de supernatant en ze opgeslagen bij -80 ° C. Alvorens de isolatiewerkwijze, hebben we een eindconcentratie van 10 ^{-4 pmol /gl synthetische C
. elegans
miR-39 (CEL-miR-39) (Takara, Japan) aan elk monster, zodat het regelen van de biologische variabiliteit. Het RNA werd geëxtraheerd van 100 pi plasma gebruikmakend QIAGEN miRNeasy Mini Kit (Qiagen, Valencia, CA, USA). De totale RNA van de weefsels werd geïsoleerd met behulp van TRIZOL reagens (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA).}

Microarrays en qRT-PCR

Profiling werd met behulp van Agilent Human miRNA microarray uitgevoerd (v12.0 , Agilent Technologie, CA, USA) en TaqMan lage dichtheid array (V2.0, Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). Voor het isoleren van totaal RNA uit weefsels werd qRT-PCR uitgevoerd onder toepassing SYBR (R) PrimeScript ™ RT-PCR Kit (Takara Bio). Een gedetailleerde beschrijving van de experimentele protocollen gestort in de S1 gegevens.

Statistische analyses

De gepaarde weefselmonsters werden vergeleken met behulp van een Wilcoxon rank sum-test. Niet-parametrische Mann-Whitney U test werd uitgevoerd om de betekenis plasma miRNA niveaus tussen de kankergroep gezonde groep bepalen. Receiver-operator kenmerk (ROC) curves en de gebieden onder de ROC-curves (AUC) werden verkregen op de GC detectie potentieel van miRNAs te beoordelen. Statistische analyses waren tweezijdig test, en P
< 0,05 werd beschouwd als statistisch significant. Alle statistische analyses werden uitgevoerd met SPSS-software versie 16.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA).

Resultaten

Ontdekking van kandidaat-biomerkers door microarrays

We gebruikten twee microarray platforms voor de miRNAs te analyseren en te vergelijken met de miRNA expressie patronen uit twee verschillende omstandigheden. TLDA analyse werd voltooid om kandidaat miRNAs te bevestigen expressie niveaus. Een totaal van 142 miRNAs werden gedetecteerd in het plasma. 65 van de totale miRNAs werden verhoogd en 77 werden afgenomen in GC patiënten in vergelijking met de controlegroep

Om kandidaat miRNAs te identificeren, de expressie van miRNAs tussen patiënten en controles die noodzakelijk zijn om te corresponderen met twee criteria waren:. (1) de expressie deregulering in tumorweefsel was in overeenstemming met TLDA uitkomst [23]; en (2) het plasma miRNA niveaus waaruit ≥ 2-voudig verschil tussen patiënten en controles. Uiteindelijk, vier down-gereguleerd plasma miRNAs (dat wil zeggen, miR-26a, miR-142-3p, miR-148a en miR-195) werden geselecteerd als kandidaten voor de vuist-stage validatie (tabel 2).

Bevestiging van miRNAs door qRT-PCR

Ten eerste, de resultaten van microarrays analyses werden bevestigd met behulp van de gepaarde weefsel, de GC plasma en de bijbehorende bedieningsorganen voor deze vier miRNAs door qRT-PCR. Onze resultaten toonden dat de neiging van de resultaten van qRT-PCR was vergelijkbaar met de microarray analyses, hetzij in weefsel of plasma. De plot is gebleken dat de expressie van vier miRNAs waren statistisch significant in de GC weefsels ( P
= 0.001, P
= 0.002, P Restaurant < 0,001 en P
= 0,003 voor miR-26a, miR-142-3p, miR-148a en miR-195, respectievelijk, de figuren 2A-2D). In de tussentijd hebben we uitgevoerd qRT-PCR om de uitingen van miRNAs werden down-gereguleerd in een andere onafhankelijke set van 80 GC plasmamonsters en 80 gezonde controles te controleren. De uitingen van vier miRNAs in GC plasma waren significant gedaald ten opzichte van die van de controles (alle P Restaurant < 0,001 figuren 2E-2H). De uitdrukkingen niveaus van de vier miRNAs in plasma waren constant gedaald, te vergelijken met weefselmonsters.

Grootschalige validatie van de plasma microRNAs in GC patiënten

Om de stabiliteit van het plasma uitdrukkingen valideren van miRNAs, voerden wij qRT-PCR in een grote schaal van 200 GC plasmamonsters en 200 gekoppeld kanker-vrije controles. In overeenstemming met de resultaten van de trainingsfase, de expressieniveaus van vier miRNAs significante downregulatie in plasma van patiënten GC (alle P
< 0,001, figuur 3), wat suggereert dat deze vier miRNAs in plasma kan dienen als kandidaat biomarkers voor diagnose van GC.

Evaluatie van de diagnostische waarde van miRNAs voor GC

Om de efficiëntie van deze vier miRNAs als diagnostische merkers voor detectie GC bepalen, voerden wij ROC curve analyse van elke miRNA. Figuur 4 is gebleken dat de ROC curves van de vier kandidaat-miRNAs aangetoond dat de plasma miRNAs waren van waarde voor GC patiënten te onderscheiden van normale controles. De cut-off waarde van 0,651 was gelijk aan sensitiviteit + specificiteit-1, die maximaal voor miR-26a (relatieve expressie genormaliseerd door cell-39) was. Voor miR-26a, de gevoeligheid was 83,6% en de specificiteit was 81,5%, met een AUC van 0,882 (95% CI = 0,847-0,916) (Fig 4A). Op de cut-off waarde van 0,585 voor miR-142-3p, de gevoeligheid was 74,4% en de specificiteit was 84,1%, met een AUC van 0,839 (95% CI = 0,800-0,879) (Fig 4B). De AUC's waren 0,842 (95% CI = 0,803-0,882) en 0,765 (95% CI = 0,717-0,812) voor miR-148a en miR-195, respectievelijk. De sensitiviteit en specificiteit waren 75,4% en 83,1% voor miR-148a, 69,2% en 75,4% voor miR-195, respectievelijk (Fig 4C en 4D). De combinatie ROC curve analyse leverde de AUC waarde van 0,872 (95% Cl = 0,836-0,908) (Figuur 4E).

Om de diagnose waarde van de gastheer miRNA GC verifiëren combineerden we geven de plasma miRNAs en voerde de ROC curves zoals getoond in S1 en S2 Fig. Deze gegevens gaven aan dat de miR-26a die de grootste mogelijkheid toonde voor het differentiëren van de GC patiënten uit controles zou kunnen fungeren als een geschikte biomarker voor het detecteren van GC.

Discussie

Ondanks een aanzienlijke daling in GC sterfte in de afgelopen tien jaar, het sterftecijfer is nog steeds hoger dan veel andere voorkomende kwaadaardige aandoeningen [24]. In de afgelopen jaren is de tumor biomarkers bijvoorbeeld CEA, CA19-9, CA74-2 met beperkte gevoeligheid en specificiteit zijn op grote schaal gebruikt voor de diagnose, controle en prognose van GC [4]. Al met al, is van groot belang voor de diagnose van GC te zoeken specifieker en gevoeliger biomarkers.

Tissue miRNAs als biomarkers voor diagnose en prognose werden eerst voorgesteld. Bandres et al
. bleek dat miR-451 werd down-gereguleerd in het primair maag- en colorectale tumoren, en de down-regulatie van miR-451 werd geassocieerd met lage DFS en lage totale overleving [25]. Xiao et al
. geïdentificeerd miR-106a als aanzienlijk opgereguleerd miRNA in GC [26]. Zij vinden ook dat de expressie van miR-106a was significant gerelateerd aan de tumor stadium, lymfatische, verre metastase en invasie. Desalniettemin zijn veel soorten kanker patiënten die geen chirurgische ingreep in de klinische praktijk als ze worden gediagnostiseerd. Het vertrouwen op de chirurgische afdeling en invasieve procedure voor weefselmonster collectie sterk beperkt de toepassing van miRNAs in het weefsel van de diagnose van kanker [27]. De diagnostische kwaliteit van deze methoden is onbevredigend.

Opkomende bewijs ook impliceert dat circulerende miRNAs gerelateerd zijn aan kanker [28-30]. De recente studie rapporteerde dat de miRNAs detecteerbaar waren in plasma en stabiel bij kamertemperatuur en /of meervoudige invriezen-ontdooien werkwijzen [31]. Talrijke berichten had verlicht de bruikbaarheid van circulerende miRNAs als nieuwe invasieve biomarkers voor kanker, zoals colorectale kanker [32], borstkanker [33-34] en niercelcarcinoom [35].

In onze studie we systematisch gescreend de miRNA-profiel in de gepaarde weefsels en in het plasma van GC-patiënten en gezonde controles. Plasma verkregen uit 5 gevallen en 5 controles werden met elkaar gemengd tot twee samengevoegde monsters te vormen en werden gebruikt voor TLDA. Deze methode van het poolen monsters is een veel gebruikte techniek die is getoond betrouwbaar profiling [36-38] is. Het vergelijken van TLDA analyse en het resultaat van het weefsel microarray, vier miRNAs (miR-26a, miR-142-3p, miR-148a en miR-195) verminderde in GC werden geselecteerd.

Vervolgens identificeerden we vier kandidaat-miRNAs door qRT-PCR in twee fasen, en vond de expressie van vier miRNAs zakte in het plasma van GC patiënten die met instemming van de uitdrukkingen in de weefsels waren. ROC curve, ook bekend als gevoeligheidscurve, wordt algemeen erkend als een evaluatiemethode van diagnostische test. Het is ook een geïntegreerde indicator die de gevoeligheid en specificiteit van continue variabelen. In de huidige studie, ROC bleek dat de combinatie van vier miRNAs effectiever dan miR-26a individueel was. MiR-26a alleen al zou een goede diagnostische efficiëntie bij het onderscheiden van GC patiënten van gezonde controles met een AUC van 0,882 (gevoeligheid = 83,6% en een specificiteit = 81,5%) te bereiken. Een eerdere studie door Schneider et al
. verschijnt het serum niveaus van CEA, CA19-9 en CA72-4 in GC opgehelderd een gevoeligheid van 45,5% voor CA19-9, 23,8% voor CEA en 60,7% voor CA72-4 [39]. Deze waren veel minder is dan die van miR-26a. Voorts is de expressie van miR-26a in plasma was significant lager in de GC patiënten, en geen significantie met de progressie van GC (S3 figuur) vertonen. Vandaar dat miR-26a had een groot potentieel als een diagnostisch plasma biomarker voor GC.

In de afgelopen decennia heeft de vorige studies niet te controleren of de vraag of de miRNA expressie van plasma of serum kon de niveaus van het weefsel te vertegenwoordigen. Vergeleken met deze studies onze studie had eigen functie vanwege redenen als volgt. Ten eerste hebben we gekozen voor de miRNAs die verschillend tot expressie, zowel in weefsel en plasma, door vergelijking van de resultaten van twee microarrays. Dit resulteerde in een betere gelegenheid om haalbaar diagnostische markers. Bovendien vonden we dat miR-26a expressie significant verminderd bij patiënten GC en stabiel bewaard in het plasma (S3 figuur).

De resultaten bleek dat de plasma expressie van miR-26a was significant lager bij de patiënten GC vergeleken met de gezonde controles ( P
< 0,05), die stabiliteit GC patiënten met verschillende klinische toestand toonde. De down-regulering van plasma miR-26a expressie kan de waarschijnlijkheid van de diagnose van GC aan te geven. Daarom kan miR-26a een beste keuze om als potentiële biomarker dienen voor GC zijn. Deng et al
. toonde aan dat miR-26a niveaus GC weefsels opmerkelijker werden verlaagd dan in niet-tumor weefsel met qRT-PCR [40]. Zij toonden ook aan dat miR-26a remde tumorgroei en metastase deels door zich te richten FGF9
in vivo. Deze bestonden met onze resultaten. Deze bevindingen bevestigden dat miRNA-26a in plasma een potentiële diagnostische merker voor GC zijn.

De beperkingen van onze studie is dat de monsters voor het weefsel microarray en de TLDA niet van dezelfde patiënten, en onze steekproefomvang voor de microarrays waren relatief klein. Verdere analyse van de microarrays voor dezelfde patiënten en de uitgebreide steekproef bevestiging moeten worden toegepast als een nieuwe screeningsmethode voor GC in de dagelijkse klinische gebruik. Bovendien hebben we niet kiezen voor de up-gereguleerde miRNAs vanwege het feit dat er niet de up-gereguleerde miRNAs waarvan fold veranderingen waren ≥ 2. We geselecteerde kandidaat miRNAs die overvloedig werden uitgedrukt in plasma om ervoor te zorgen dat de waarschijnlijkheid van het onderzoek in de klinische praktijk.

Conclusies

Kortom, onze studie bleek vier down-gereguleerd miRNAs, miR-148a, miR-142-3p, miR-26a en miR-195, in GC patiënten. Bovendien werd het plasma expressie van miR-26a aanzienlijk verminderd en stabiel bij patiënten met maagkanker. Hierdoor kan miR-26a een niet-invasieve en stabiele biomarker maagkanker diagnose en screening.

Ondersteunende informatie
S1 gegevens. Experimentele Protocollen van Microarrays en qRT-PCR
doi:. 10.1371 /journal.pone.0151345.s001
(DOC)
S1 Fig. ROC curve analyse van de combinatie van twee miRNAs tussen de vier kandidaat miRNAs. Ondernemingen De combinatie van miR-26a en miR-142-3p (A), de combinatie van miR-26a en miR-148a (B), de combinatie van miR-26a en miR-195 (C), en de combinatie van miR-142-3p en miR-148a (D), de combinatie van miR-142-3p en miR-195 (E) en de combinatie van buitenspiegels 148a en miR-195 (F) leverde de grootste AUC
doi:. 10.1371 /journal.pone.0151345.s002
(DOC)
S2 Afb. ROC-curve analyse van de combinatie van drie miRNAs onder de vier kandidaat-miRNAs. Ondernemingen De combinatie van miR-26a, miR-142-3p en miR-148a (A), de combinatie van miR-26a, miR-142-3p en miR-195 (B), de combinatie van miR-26a, miR-148a en miR-195 (C) en de combinatie van miR-142-3p, miR-148a en miR-195 (D) leverde de grootste AUC.
doi: 10.1371 /journal.pone.0151345.s003
(docx)
S3 Fig. . Plasma niveau van miR-26a bij maagkanker patiënten gestratificeerd door de klinische toestand
Box plots bleek dat de plasma niveaus van miR-26a in 200 gezonde controles en 200 maagkanker patiënten in verschillende klinische status
doi:. 10.1371 /journal.pone.0151345.s004
(docx)
S1 Table. Klinische kenmerken van het weefsel onderwerpen screening door Agilent Human miRNA microarray
doi:. 10.1371 /journal.pone.0151345.s005
(DOC)
S2 Table. Klinische kenmerken van de plasma onderwerpen screening door TLDA
doi:. 10.1371 /journal.pone.0151345.s006
(DOC)

Dankwoord

Wij zijn zeer dankbaar voor de deelname van alle onderwerpen bij te dragen aan dit onderzoek.

• PLoS ONE: overexpressie en biologische functie van ubichitinespecifieke Protease 42 bij maagkanker
• PLoS ONE: associatie tussen het verlies van tanden en maagkanker: een meta-analyse van observationele studies