PLoS ONE: Cirkuliacinis MicroRNA-26a plazmoje ir jo galimą diagnostinę vertę skrandžio vėžio

Anotacija

Fonas

Per pastaruosius dešimtmečius, nemažai tyrimų pateikė apytakoje mikro RNR (miRNAs) kaip neinvazinių biologinių žymenų, skirtų vėžio diagnostikos galimybes. Mūsų tyrimo tikslas buvo nustatyti cirkuliuojančių miRNAs audiniuose ir plazmas skrandžio vėžio (GC) pacientų kraujyje ir įvertinti jų diagnostinę vertę.

metodų

Audinių mėginiai buvo surinkti iš 85 GC pacientai. Plazmos mėginiai buvo imami iš 285 GC pacientams ir 285 kontrolinės grupės. Skirtingai išreikšti miRNAs buvo filtruojamas pagal Agilent žmogaus Mirna mikrogardeliq ir TaqMan mažo tankio matricos (TLDA) su sudėtiniams mėginiams, po kiekybinė atvirkštinės transkripcijos polimerazės grandininė reakcija (KRL-PGR) patvirtinimo. ROC kreivė (ROC) kreivės buvo struktūrizuotas siekiant įvertinti diagnostikos tikslumą miRNAs. Plazmos lygis miR-26a GC pacientų įvairių klinikinių etapais buvo lyginamas.

Rezultatai

Keturi miRNAs (MIR-26a, PPN-142-3p, PPN-148A ir miR- 195) atskleidė atsitiktinai sumažėjo lygį audiniuose ir plazmoje GC pacientų, palyginti su kontroline grupe, ir ROC kreivės buvo pastatyti įrodyti, kad Pasaulis-26a turėjo didžiausią plotą po ROC kreive (AUC) 0.882. Be to, PPN-26a buvo stabiliai aptikta GC pacientams, sergantiems skirtingų klinikinių charakteristikų plazmoje.

Išvada

Plazminiai Pasaulis-26a gali pateikti naujų ir stabilus žymeklį skrandžio vėžio.

nurodomoji dalis: Qiu x Zhang J Shi W Liu S Kanas, M, Chu O et al. (2016) Cirkuliacinis MicroRNA-26a plazmoje ir jo galimą diagnostinę vertę skrandžio vėžio. PLoS ONE 11 (3): e0151345. Doi: 10,1371 /journal.pone.0151345

redaktorius: Zheng Li Pekino Sąjunga Medicinos koledžo ligoninė, KINIJA

Įstojo: Spalio 29 2015; Priėmė: Vasario 8, 2016 m Paskelbta: Kovo 24, 2016

Visos teisės saugomos: © 2016 Qiu et al., Tai atviros prieigos straipsnis platinama pagal Creative Commons Attribution licencija, kuri leidžia nevaržomai naudotis, paskirstymo ir dauginimąsi bet kokioje laikmenoje sąlygomis, su sąlyga, kad pirmasis autorius ir šaltinis įskaitomos

Duomenų prieinamumas:. Visa reikalinga duomenys neviršija popieriaus ir jo Pagalbinė informacija failus

finansavimas:. Šis tyrimas buvo iš dalies remia Nacionalinis gamtos mokslo fondo Kinijos (81230068, 81373091, 81302502, 81302490 ir 81473049), Gamtos mokslų fondo Dziangsi provincijos (BK2012842 ir BK20130641), raktas programa pagrindinio tyrimų Dziangsi provincijos švietimo departamento (12KJA330002), specializuoti mokslinių tyrimų fondas doktorantūros programa aukštojo mokslo Kinijos (20130092120063), Jiangsu provincijos mokymo programų naujovių ir verslumo studentams (201412682004Y ), Jiangsu provincijos mokslo ir technologijų inovacijų komanda, o prioritetas akademinę programą plėtros Dziangsi aukštojo mokslo institucijų (visuomenės sveikata ir profilaktinė medicina)

konkuruojančių interesų.. autoriai pareiškė, kad nėra konkuruojantys interesai egzistuoja

Įvadas

Skrandžio vėžys (GC) yra vienas iš labiausiai paplitusių piktybinių navikų pasaulyje. Nors bendras sergamumas sumažėjo pastaraisiais metais, ji yra ketvirtoji dažniausia piktybinių navikų (989,000 atvejų), o antroji pagrindinė priežastis, dėl vėžio susijusių mirties (738,000 mirčių) visame pasaulyje [1]. Daugiau nei 70% atvejų įvyksta besivystančiose šalyse [2]. Visų pirma, pažengusia pacientai vis dar rodo labai prasta išgyvenimo [3] .Norint datą, GC diagnozė remiantis klinikiniais simptomais, ir yra keletas bandymų metodai taikomi, pavyzdžiui, endoskopija ir bario miltai tyrimas. Tačiau, visi iš šių metodų parodė, kai kuri aptikimo GC defektų. Be to, yra keletas serumas naviko žymenys Pavyzdžiui karcinoembrioninius antigeno (CEA), angliavandenių antigeno 19-9 (CA19-9) ir angliavandenių antigeno 72-4 (CA72-4), ir yra kai kurie jautrumo ir specifiškumo už apribojimai GC atrankos [4]. Taigi, mes daugiau dėmesio skirti atrasti romaną, patikimas ir neinvazinių biologinius žymenis GC.

mikro RNR (miRNAs) yra trumpų (20 ~ 25 nukleotidų) klasę, nekoduojamame Viengrandė RNR [5]. Jis yra plačiai manoma, kad miRNAs gali dalyvauti reguliuojant genų ekspresiją, nulemianti mRNR slopinimo tokių kaip tikslinės skilimo, pritaikymo slopinimo ir iRNR ėduonis [6]. Daugėja įrodymų, nurodė, kad miRNAs dalyvavo keliuose patofiziologinių procesus ir sukelti esminių pokyčių kelių ligų. Zhang ir kt
. Nustatyta, kad miR-26a sukeltas endotelio apoptozę ir nurodyta terapinį potencialą miR-26a aterosklerozės, susietą su apoptozės ląstelių žūtį [7]. Leonovas, ir kt
. aprašyta slopinimas miR-132 lėmė aukštos AGO2
išraiška, kuri dalyvavo angiogenezę ir uždegimas metu pirminės endotelio ląstelių aktyvacija [8]. Daugybė tyrimų parodė, kad miRNAs žaisti būtinas vaidmenis Tumorigenesis, veikęs kaip onkogenų ar navikas slopintuvas genų [9]. Keli miRNAs pranešė būti susiję su vėžio į Mirna ekspresijos profilius [10-12]. Deja, audinių mėginiai yra sunku įsigyti. Nustatyti miRNAs audiniuose yra nerealu klinikinėje taikymo.

Be to, daugėja įrodymų, parodė, kad cirkuliuojančių miRNAs yra atsparūs RNaze virškinimą ir stabiliai aptinkamas kraujo plazmoje ir serume lengvai matavimų [13-14]. Ankstesni tyrimai patvirtino, kad miRNAs kraujyje buvimas ir išraiška susijęs su vėžio, įskaitant didelių B ląstelių limfomos, gaubtinės ir tiesiosios žarnos vėžio, šlapimo pūslės vėžio ir krūties vėžio [15-18]. Šie tyrimai kolektyviai teikti cirkuliacijai miRNAs veikia kaip naujus biologinius žymenis dėl vėžio atrankinės patikros pagrindas.

Daugelis tyrimų rodo pasakymas lygis Mirna plazmoje nėra visiškai suderinama su naviko. Pasaulis-378 žymiai sumažėjo GC audinių ir kelių ląstelių linijų [19], tačiau Pasaulis-378 buvo prasmingai iki reguliuojama GC pacientų serume [20]. Kaip tas pats kaip ir miR-486, miR-486 gali veikti kaip naviko-slopintuvas mirna skrandžio naviko [21], kuri buvo aktyvuojami GC pacientų serume [22]. Tuo metu keletas serumas /plazmos miRNAs gali atskirti nuo GC pacientams, sergantiems kontrolės, vis dėlto tai negali atstovauti Mirna išraišką audinio. Jei mes galime sužinoti miRNAs tiek skirtingai išreikštas skrandžio vėžio audiniuose ir plazmoje, ji turėtų turėti daugiau klinikinės reikšmės.

Jei išsiaiškinti, ar miRNAs skirtingai išreiškiama tiek audinių ir plazmos, mes panaudojome du mikrogardelių į ekrano miRNAs , Per dvejus patvirtinimo etapus, keturis kandidatės miRNAs buvo gerokai žemyn reguliuojama naviko audinių ir plazmos mėginių atliekant KRL-PGR. Mūsų tyrimas parodė, kad Pasaulis-26a buvo žymiai stabiliau sumažėjo plazmos skrandžio vėžiu sergantiems pacientams ir gali atskirti skrandžio vėžiu pacientams iš kontrolės, geras jautrumas ir specifiškumas. Buvo prognozuojama, kad bus daug žadančią cirkuliuoja biologinis skrandžio vėžio įprastą klinikinę diagnozę.

Medžiagos ir metodai

Studijos dizainas ir subjektai

Šis tyrimas buvo įgalioti institucinės peržiūros valdyba Nanjing medicinos universitete, kiekvienas pateikė pasirašytą rašytinį informuoto sutikimo dalyviu. Visi dalykai buvo įdarbintas Yixin vėžio ligoninė, Nantong auglio ligoninės, Huai-An Pirmas Liaudies ligoninė, o antrasis Susijusi ligoninė Nanjing medicinos universiteto nuo 2006 m kovo mėn iki 2013 m gegužės Jiangsu provincijoje, Kinija.

naviko audiniai ir normaliuose audiniuose (įsikūrusi > 5 cm atstumu nuo naviko) buvo gauti iš 55 GC pacientams, kuriems atliekama operacija ir priedėliai užšaldyti skystame azote. Plazmoje mėginiai buvo imami iš 285 GC pacientams ir 285 lytinius ir amžių atitiko plazmos nuo sveikų asmenų buvo surinkta kontrolės. Visi pacientai buvo įrodyta, kad histologiškai diagnozę GC pirminės diagnozės, ir nė vienas iš jų gavo terapines procedūras, pavyzdžiui, chemoterapija ar radioterapija. Mes klasifikuojami naviko stadiją pagal naviko mazgas metastazės (TNM) sustojimo sistemos sąjungos Tarptautinės vėžio kontrolės (UICC). Klinikiniai charakteristikos tyrimo dalyvių pateikti 1 lentelėje

kelių pakopų tyrimas buvo sukurta siekiant identifikuoti plazmoje miRNAs kaip GC pacientų biologinių žymenų (1 pav). Be atradimas etape skirtingai išreikšti miRNAs buvo įvertintas suporuotas audinių mėginių iš 5 GC pacientų (S1 lentelėje) pagal Agilent žmogaus Mirna mikrogardeliq (V12.0, Agilent technologijos, CA, JAV). Plazmos mėginiai iš 5 GC pacientų (S2 lentelė), kurių lytį, amžių klinikiniai narės suderinta su audinių mėginių ir 5 sveikų buvo atliktas TLDA (V2.0 Taikomoji Biosystems, Foster City, CA, JAV) nustatyti diferencijuotai išreikštas miRNAs , Mokymo etapo metu gerokai pasikeitęs miRNAs pirmą kartą buvo įvertintas KRL PGR 50 suporuotų audinių pavyzdžių ir 80 GC serumo mėginių ir 80 kontrolinės grupės. Vėliau, skirtingai išreikšti miRNAs tarp audinių ir kraujo serume buvo toliau nagrinėjamas papildomų 400 dalyvių, tarp kurių 200 GC pacientams ir 200 kontrolę.

RNR išskyrimas iš kraujo plazmos ir audinių

Kraujo mėginiai, atskiri dulkių kubeliai buvo centrifuguojamas esant 3000 apsisukimų per minutę 10 min, esant 4 ° C temperatūroje. Mes surinkti supernatantą ir saugomi juos iki -80 ° C. Prieš pradedant izoliavimo tvarką, mes pridėjome galutinė koncentracija būtų 10 ^{-4 pmol /iL sintetinės C
. elegans
Pasaulis-39 (asmenų-Pasaulis-39) (Takara, Japonija) į kiekvieną mėginį, siekiant į kontroliuoti biologinį kintamumą. RNR buvo išskirta iš 100 įxL plazmos naudojant QIAGEN miRNeasy Mini Kit (Qiagen, Valensija, Kalifornija, JAV). Bendras RNR audinių buvo izoliuotas naudojant TRIZOL reagento (Invitrogen, Karlovi Varai, CA, JAV).}

Mikrogardelių ir KRL-PGR

profiliavimo buvo atliekami naudojant AGILENT žmogaus Mirna mikrogardeliq (V12.0 Agilent technologijos, CA, JAV) ir TaqMan mažo tankio matrica (V2.0; Applied Biosystems Foster Miestas, CA, JAV). Dėl viso RNR atjungimo nuo audinių, KRL-PGR buvo atliekama naudojant SYBR (R), PrimeScript ™ RT-PCR Kit (Takara BIO). Išsamus aprašymas eksperimentinių protokolų kaupiamos S1 duomenų.

statistines analizes

suporuoti audinio mėginiai buvo palyginti naudojant Vilkoksono rangas sumą testą. Neparametriniai Mann-Whitney U testas buvo atliekamas siekiant nustatyti kraujo plazmoje Mirna lygių tarp vėžio grupės ir sveikos grupėje svarbą. buvo gauti imtuvas-operatorius savybę (ROC) kreivės ir plotai po ROC kreivėmis (AUC) įvertinti GC aptikimo potencialą miRNAs. Statistinė duomenų analizė buvo dvipusis testas, ir P
< 0,05 buvo laikomas statistiškai reikšmingas. Visi statistinės analizės buvo atlikta su SPSS programinės įrangos versija 16,0 (SPSS Inc., Chicago, IL, JAV).

Rezultatai

Discovery kandidačių biologinių žymenų iki mikrogardelių

naudojamų du mikrogardeliq platformos į miRNAs analizuoti ir palyginti Mirna raiškos modelius iš dviejų skirtingų sąlygų. TLDA analizė buvo baigtas patvirtinti kandidato miRNAs raiškos lygį. A 142 miRNAs viso buvo aptikta kraujo plazmoje. 65 viso miRNAs buvo padidintas, o 77 buvo sumažėjo GC pacientų, palyginti su kontroline grupe

Jei nustatyti kandidates miRNAs, kad miRNAs tarp pacientų ir kontrolės išraiška buvo būtina, kad atitiktų du kriterijus:. (1) išraiška dereguliavimo naviko audinyje atitiko TLDA rezultatus [23]; ir (2) plazmoje Mirna lygiai įrodyti ≥ 2 kartus skirtumo tarp pacientų ir kontrolės. Galų gale, keturi žemyn reguliuojamos plazmoje miRNAs (ty, PPN-26a, PPN-142-3p, PPN-148A ir Pasaulis-195) buvo pasirinktas kaip už kumščio stadijos patvirtinimo (2 lentelė) kandidatų.

patvirtinimas miRNAs atliekant KRL-PGR

Pirma, mikrogardelių analizių rezultatai buvo patvirtinti naudojant suporuotas audinių, GC plazmos ir suderintos kontrolę šių keturių miRNAs atliekant KRL-PGR. Mūsų rezultatai parodė, kad iš KRL-PGR rezultatus tendencija buvo panaši į mikrogardelių analizes, arba audiniuose arba kraujo plazmoje. Sklypas parodė, kad sąvoka lygiai keturių miRNAs buvo statistiškai reikšmingas GC audinių ( P
= 0,001 P
= 0,002 P
< 0,001 ir P
= 0,003 mir-26a, PPN-142-3p, PPN-148A ir miR-195, atitinkamai, Figos 2A-2D). Tuo tarpu, mes atliekame KRL PGR, norint patikrinti miRNAs išraiškos buvo žemyn reglamentuojamas kitoje nepriklausomoje rinkinį 80 GC plazmos mėginių ir 80 sveikų. Iš keturių miRNAs GC plazmos išsireiškimai buvo gerokai sumažėjo, palyginti su kontrolinės grupės (visi P
< 0,001, Figos 2E-2H). Išraiškas lygiai keturių miRNAs kraujo plazmoje pastoviai buvo sumažėjęs, lyginant su audinių pavyzdžius.

Didelio masto patvirtinimo iš plazmos mikro RNR GC pacientai

Kad patvirtintų stabilumą plazmoje išraiškos iš miRNAs, mes atliekame KRL PGR į didelio masto 200 GC plazmos mėginių ir 200 suderintų vėžio nemokamai kontrolės. Priebalsis su mokymo etapo rezultatus, ekspresijos lygis keturių miRNAs parodė reikšmingą žemyn reguliavimą plazmoje GC pacientų (visi P
< 0,001, 3 pav), o tai rodo, kad šie keturi miRNAs plazmos gali tarnauti kaip kandidačių biologinių žymenų, skirtų diagnozei GC.

Įvertinimas diagnostinio potencialo miRNAs GC

Jei vertinti minėtų keturių miRNAs kaip diagnostikos žymekliai GC aptikimo veiksmingumą, mes atliekame ROC kreivė analizė kiekvieną Mirna. 4 pav atskleidė, kad ROC kreivės keturių kandidačių miRNAs parodė plazmoje miRNAs buvo naudingi atskirti GC pacientus nuo įprastų kontrolės. Ribinė vertė 0.651 buvo lygus jautrumo + specifiškumo-1, kuri buvo didžiausia Mir-26a (santykinis išraiškos normalizavosi Cell-39). Mir-26a, jautrumas buvo 83,6%, o specifiškumas 81,5% su iš 0,882 AUC (95% PI = 0.847-0.916) (pav 4a). Tuo vertės atjungimo nuo 0,585 Mir-142-3p, jautrumas buvo 74,4%, o specifiškumas 84,1% su iš 0,839 AUC (95% PI = 0.800-0.879) (pav 4b). Į AUC buvo 0,842 (95% PI = 0,803-0,882) ir 0,765 (95% PI = 0,717-0,812) Mir-148A ir miR-195, atitinkamai. Jautrumas ir specifiškumas buvo 75,4% ir 83,1% Mir-148A, 69,2% ir 75,4% Mir-195, atitinkamai (pav 4c ir 4d). Derinys ROC kreivė analizė davė AUC vertė 0,872 (95% PI = 0,836-0,908) (pav 4E).

Jei patikrinti diagnostikos vertę priimančiosios Mirna GC mes kartu bet plazmos miRNAs ir atliekamas ROC kreives, kaip parodyta S1 ir S2 Fig. Šie duomenys rodo, kad Mir-26a, kurie parodė, kad didžiausią galimybę diferencijuoti GC pacientus iš kontrolės, gali veikti kaip tinkamą biologinis žymuo aptikti GC.

Diskusijos

nepaisant didelio nuosmukio GC mirtingumo pastarąjį dešimtmetį mirštamumas yra dar didesnis nei daugelio kitų piktybinių navikų bendrų [24]. Pastaraisiais metais, naviko biologiniai žymenys Pavyzdžiui CEA, CA19-9, CA74-2 su ribota jautrumo ir specifiškumo buvo plačiai naudojami diagnozei, stebėsenai ir prognozavimui GC [4]. Apskritai, yra labai svarbi diagnozuojant GC ieškoti konkretesnių ir jautriai biologinius žymenis.

pirmą kartą buvo pasiūlytas Audinių miRNAs kaip diagnozės ir prognozės biologinius žymenis. BANDRES ir kt
. parodė, kad Pasaulis-451 buvo žemyn reguliuojama pirminėje skrandžio ir storosios žarnos navikų, ir žemyn reguliavimas miR-451 buvo susijęs su mažu DFS ir mažo bendro išgyvenamumo [25]. Xiao ir kt
. identifikuoti Pasaulis-106a, kaip dramatiškai iki reglamentuojamo Mirna GC [26]. Jie taip pat nustatė, kad miR-106a išraiška buvo reikšmingai susiję su naviko stadijos, limfinės, tolimos metastazės ir invazijos. Vis dėlto, daug rūšių vėžiu sergantiems pacientams, kurie buvo negali operuotis klinikinėje praktikoje, kai jie yra diagnozuota. Priklausomybė nuo chirurgijos skyrių ir invazinės procedūros audinių mėginio paėmimo stipriai apribojo miRNAs taikymą audinio vėžio diagnozę [27]. Diagnostikos kokybės iš šių metodų yra nepatenkinama.

naujus įrodymus taip pat reiškia, kad cirkuliuojančių miRNAs yra susiję su vėžio [28-30]. Neseniai tyrimas pranešė, kad miRNAs buvo aptinkamas kraujo plazmoje ir stabilus kambario temperatūroje ir /ar kelis užšaldymo-atšildymo procesus [31]. Daugybė ataskaitos buvo apšviestas, kad cirkuliuojančių miRNAs kaip nauji neinvazinių biologinių žymenų nuo vėžio, pavyzdžiui, storosios žarnos vėžio [32], krūties vėžio [33-34] ir inkstų ląstelių karcinoma [35] naudingumas.

Mūsų tyrimo duomenimis, mes metodiškai tikrino Mirna profilio suporuotas audiniuose ir plazmoje nuo GC pacientų ir sveikų. Plazmos gautas iš 5 atvejais ir 5 kontrolė buvo sumaišyti kartu, kad sudarytų du bendrus mėginius ir buvo naudojami TLDA. Šis sujungiant mėginius metodas yra plačiai taikomas metodas, buvo įrodyta, kad būti patikimi profiliavimo [36-38]. Lyginant TLDA analizę ir audinių microarray rezultatą, keturi miRNAs (MIR-26a, PPN-142-3p, PPN-148A ir Pasaulis-195) mažinamiems GC buvo pasirinktas.

Vėliau mes nustatė keturias kandidates miRNAs atliekant KRL-PGR dviem etapais ir nustatė, ekspresijos lygis keturių miRNAs smuko į GC pacientų, kurie buvo susitarusi su audiniuose išraiškos plazmoje. ROC kreivė, taip pat žinomas kaip jautrumo kreivę, yra plačiai pripažįstamas kaip vertinimo metodo diagnostinį testą. Ji taip pat yra integruota rodiklis, atspindintis jautrumą ir specifiškumą ištisinių kintamųjų. Atsižvelgiant į dabartinę studijų, ROC analizė parodė, kad keturi miRNAs derinys nebuvo efektyvesnis nei miR-26a atskirai. Vien MIR-26a galėtų pasiekti gerą diagnostinę efektyvumą atskiriant GC pacientų iš sveikų, kurio 0.882 AUC (jautrumo = 83,6%, specifiškumas = 81,5%). Ankstesnis tyrimas Schneider ir kt
. rodomos serume CEA, CA19-9 ir CA72-4 GC nušvietė iš 45,5% už CA19-9, 23,8% už CEA ir 60,7% jautrumą CA72-4 [39]. Tai buvo kur kas mažiau nei miR-26a jautrumo. Be to, išraiška lygis miR-26a plazmoje buvo reikšmingai mažesnė GC pacientų ir neparodė reikšmę su GC (S3 pav) progresavimą. Taigi, PPN-26a turėjo didelį potencialą kaip diagnostinė plazmos biologinis žymuo dėl GC.

Per pastaruosius dešimtmečius ankstesni tyrimai nebuvo patikrinti, ar Mirna išraiška plazmoje arba serume gali atstovauti audinio kiekį. Palyginti su šių tyrimų, mūsų tyrimas turėjo savo funkciją skolinga priežasčių taip. Pirma, mes pasirinkome miRNAs kuris išreikštas skirtingai tiek audinių ir plazmos, lyginant dviejų mikrogardelių rezultatus. Tai lėmė, kad geresnės galimybės nustatyti galimų diagnostinių žymenų. Be to, mes nustatėme, kad Mir-26a išraiška gerokai sumažėjo GC pacientų ir saugomi stabilus plazmos (S3 pav).

rezultatai atskleidė, kad plazmos išraiška miR-26a buvo reikšmingai mažesnė GC pacientų palyginti su sveikų žmonių ( P
< 0,05), kuri parodė, stabilumą GC pacientams, sergantiems skirtingų klinikinės būklės. Žemyn reguliavimas plazmos Pasaulis-26a išraiškos gali nurodyti diagnozuoti GC tikimybę. Todėl, PPN-26a gali būti geriausias pasirinkimas tarnauti kaip galimą biologinis GC. Dan ir kt
. parodė, kad Pasaulis-26a lygiai GC audiniuose buvo daugiau nepaprastai sumažėjo, nei ne naviko audiniuose KRL-PGR [40]. Jie taip pat parodė, kad Pasaulis-26a slopina naviko augimą ir metastazes iš dalies orientacija FGF9
in vivo. Tai sudarė su mūsų rezultatus. Šie duomenys patvirtina, kad Mirna-26a plazmoje gali būti potencialus diagnostikos žymeklis GC.

Tačiau mūsų tyrimo apribojimai, kad dėl audinių microarray ir dėl TLDA mėginiai buvo ne iš pačių pacientų, ir mūsų imtys už mikrogardelių buvo santykinis mažas. Daugiau analizė dėl tų pačių pacientų ir išsiplėtusios-imties patvirtinimo mikrogardelių privalo būti taikomas kaip naują atrankos priemonė GC į įprastinį klinikinį naudojimą. Be to, mes nepasirinko aukštyn reguliuojama miRNAs dėl to, kad ten buvo ne iki reguliuojama miRNAs kurių kartus pokyčiai buvo ≥ 2. Mes pasirinkome kandidates miRNAs kurie buvo gausiai išreikštas plazmos įsitikinti nagrinėjimo tikimybe klinikinėje praktikoje.

Išvados

Apibendrinant, mūsų tyrimas atskleidė keturis žemyn reguliuojamas miRNAs, PPN-148A, PPN-142-3p, PPN-26A, bei Pasaulis-195, GC pacientai. Dar svarbiau, kad plazmos išraiška miR-26a buvo gerokai sumažintas ir stabili pacientams, sergantiems skrandžio vėžiu. Kaip rezultatas, PPN-26a gali numatyti neinvazinė ir stabilią skrandžio vėžio diagnostikos ir tikrinimo biologinis.

Pagalbinė informacija
S1 duomenis. Eksperimentiniai protokolai mikrogardelių ir KRL-PGR
Doi:. 10,1371 /journal.pone.0151345.s001
(DOC)
S1 pav. ROC kreivė analizė du miRNAs tarp keturių kandidačių miRNAs derinys.
PPN-26a ir miR-142-3p (A), PPN-26a ir Pasaulis-148A (B), derinys, derinys miR-26a ir miR-195 (C), ir miR-142-3p ir miR-148A (d) kartu, miR-142-3p ir miR-195 (E) kartu ir miR- kartu 148A ir Pasaulis-195 (F), davė didžiausią AUC
Doi:. 10,1371 /journal.pone.0151345.s002
(DOC)
S2 pav. ROC kreivė analizė tris miRNAs tarp keturių kandidačių miRNAs derinys.
PPN-26a, PPN-142-3p ir miR-148A (A), PPN-26a, derinys, PPN-142-3p ir miR-195 (B), miR-26a, miR-148A ir miR-195 (C) ir miR-142-3p, miR-148A ir miR-195 (d), derinys; davė didžiausius AUC.
Doi: 10,1371 /journal.pone.0151345.s003
(docx)
S3 pav. . koncentracija plazmoje miR-26a skrandžio vėžiu sergantiems pacientams, skirstyta pagal klinikinę būklę
Box sklypai parodė plazmoje PPN-26a 200 sveikų ir 200 skrandžio vėžiu sergantiems pacientams skirtingu klinikinę būklę
Doi:. 10,1371 /journal.pone.0151345.s004
(docx)
S1 lentelė. Klinikiniai charakteristikos audinio dalykų patikrinimą pagal Agilent žmogaus Mirna mikrogardeliq
Doi:. 10,1371 /journal.pone.0151345.s005
(DOC)
S2 lentelė. Klinikiniai charakteristikos plazmoje dalykų patikrinimą pagal TLDA
Doi:. 10,1371 /journal.pone.0151345.s006
(DOC)

Padėka

Mes esame giliai dėkingi už dalyvavimą visi dalykai, prisidedantys prie šio tyrimo.

• PLoS ONE: Padidėjusi ir biologinė funkcija Ubikvitino-proteazių 42 skrandžio Cancer
• PLoS ONE: Asociacija tarp dantų netekimo ir skrandžio vėžys: meta-analizė stebėjimo Studies