PLoS ONE: IL-26 skatina proliferaciją ir Išgyvenimo Žmogaus skrandžio vėžio ląstelių, reglamentuojančių STAT1 ir stat3 aktyvinimas balansas

Anotacija

Interleukinas-26 (IL-26) yra vienas iš citokinų išskiriami Th17 ląstelių, kurių vaidmuo žmogaus navikų lieka nežinoma. Čia mes tyrė išraišką ir galimą vaidmenį IL-26 į žmogaus skrandžio vėžiu (GC). IL-26 ir su juo susijusių molekulių, tokių kaip IL-20R1, STAT1 ir STAT3 išraiška buvo nagrinėjama realaus laiko PGR ir immunohistochemisty. IL-26 poveikis ląstelių proliferaciją ir cisplatinos sukelta apoptozės buvo analizuojami BrdU bendradarbiavimo tyrimą ir PI-aneksino V bendro dažymo, atitinkamai. Lentiviruso tarpininkaujant siRNR buvo ištirti jo veikimo mechanizmas, ir IL-26 susijusios signalizacijos buvo analizuojami Imunoblotingo. Žmogaus GC audiniai parodė padidėjęs IL-26 ir su juo susijusių molekulių ir aktyvacijos stat3 signalizacijos, o STAT1 aktyvacijos reikšmingai nesiskyrė tarp GC ir normalių skrandžio audinius. Be to, IL-26 buvo pirmiausia pagamintas Th17 ir NK ląstelių. IL-26 skatina platinimu bei išlikimą MKN45 ir Tarybos generalinis sekretoriatas-7901 skrandžio vėžio ląsteles nuo dozės priklausomu būdu. Be to, IL-20R2 ir IL-10R1, kuris yra du esminiai receptorių IL-26 signalizacijos, buvo išreikštas abiejų ląstelių linijų. IL-26 aktyvuota STAT1 ir STAT3 signalizacijos; Tačiau iš Bcl-2 raiškos ląstelę, Bcl-XL ir c-myc, nustatyta, kad IL-26 poveikis yra sąlygotas stat3 aktyvacijos. Nokdaunas iš STAT1 ir stat3 išraiškos rodo, kad proliferacijos ir anti-Apoptozinės poveikis IL-26 yra tarpininkaujant su STAT1 /stat3 aktyvavimo moduliavimą. Apibendrinant galima teigti, padidėjęs IL-26 žmogaus GC skatinti platinimu ir išlikimą, keičiant STAT1 /stat3 signalizacijos

nurodomoji dalis:. Jūs W Tang Q, Zhang C, Wu j, OL C, Wu Z, et Al. (2013) IL-26 skatina proliferaciją ir išgyvenimo žmogaus skrandžio vėžio ląstelių, reglamentuojančių STAT1 ir stat3 aktyvinimas balansas. PLoS ONE 8 (5): e63588. Doi: 10,1371 /journal.pone.0063588

redaktorius Salvatore V. Pizzo, Duke universiteto medicinos centras, Jungtinės Amerikos Valstijos

Įstojo: Balandis 11, 2012 m Priėmė: Balandžio 2, 2013 m Paskelbta: Gegužės 21, 2013

Visos teisės saugomos: © 2013 Jūs et al., Tai atviros prieigos straipsnis platinama pagal Creative Commons Attribution licencija, kuri leidžia nevaržomai naudotis, paskirstymo ir dauginimąsi bet kokioje laikmenoje sąlygomis, su sąlyga, kad pirmasis autorius ir šaltinis įskaitomos

Finansavimas:. Šis darbas parėmė dotacijas iš nacionalinio Gamtos mokslo fondo (81170415 už XC) ir Jiangsu Province raktas provincijos talentų programą (RC2011079 QT ir RC2007056 už XC). Į finansuotojai neturėjo vaidmenį studijų dizainas, duomenų rinkimo ir analizės, sprendimų skelbti, ar ruošiant rankraštį

konkuruojančių interesų.. Autoriai pareiškė, kad nėra konkuruojantys interesai egzistuoja

Įvadas

Skrandžio vėžys (GC) yra antra labiausiai paplitusi priežastis, dėl vėžio susijusių mirčių pasaulyje. GC yra sunku išgydyti net Vakarų šalyse, nes ji yra dažnai nebuvo aptikta iki pat stadijose ligos [1]. Nors iš veiksnių yra susiję su atsparumo išsivystymu ir progresavimo GC, nuoroda tarp lėtinės skrandžio uždegimas, pavyzdžiui, atrofinio gastrito sukeltas Helicobacter pylori ir GC rizikos tapo akivaizdu, pastaraisiais metais [2]. Lėtinis uždegimas todėl GC yra ilgas ir sudėtingas procesas, vykstantis per daugelį metų ir yra būdingas uždegiminės žalos į skrandžio gleivinės, citokinų sukeltos DNR sintezės ir ląstelių proliferacijos, hiperplazijos ir kancerogenezės [3].

ryšys tarp lėtinis uždegimas ir imuninės sistemos buvo gerai mokėsi, ir limfocitai yra pagrindiniai uždegimo mediatorių skatinamas kancerogenezėje [4]. Th17 ląstelės yra naujas tipas T limfocitų, kurios ekspresuoja RORγT ir išskirti įvairius citokinus įskaitant IL-17A, IL-17F, IL-21, IL-22 ir IL-26. Iš Th17 ląstelių diferenciacija reglamentuojamas keliose citokinų, įskaitant IL-1β, IL-6, IL-23, naviko nekrozės faktoriaus alfa (TNF-alfa), ir transformuojančio augimo faktoriaus beta (TGF-beta) [5], [6] , Neseniai atliktus klinikinius tyrimai parodė, kad Th17 ląstelės gali būti glaudžiai susiję su H. pylori susijusia patologija ir kancerogenezės GC [7], [8], [9], [10]. Nors keletas Th17 susiję citokinai nebuvo ištirtas, mažai žinoma apie interleukino-26 (IL-26), atsižvelgiant į skrandžio navikų.

IL-26 yra baltymas, kuris veikia arba kaip monomeras ar homodimeras. Iš pradžių buvo aprašyta Knappe et al. [11] pagal AK155 vardu. IL-26 turi silpną, bet reikšmingą sekos homologiją prie IL-10, ir todėl jos koduojamas baltymas yra IL-10 šeimos citokinų, kurie daugiausia priklauso klasei-2 citokinų šeimos narys. IL-26 gali būti išskiriami pirminių T ląstelių, NK ląstelių ir T ląstelių klonų ir yra paprastai bendrai išreikštas su kitų svarbių IL-10-susijusi citokinų, tokių kaip IL-22 [12], [13]. IL-26 rišasi prie atskiros ląstelės paviršiaus receptorių komplekso, susidedančios iš IL-20R1 ir IL-10R2 grandinių, ir jos funkcinės veikla skiriasi nuo tų, tarpininkaujant IL-10. IL-20R1 veikia kaip specifinio ligando surišantis grandinės IL-26, ir IL-10R2 yra esminis antra grandinės sukomplektuotas veikliosios receptoriaus komplekso. Neutralizuojančių antikūnų prieš arba IL-20R1 arba IL-10R2 grandines gali blokuoti indukcijos IL-26 signalizacijos [12]. Kai pilnai surinktas, receptorių kompleksas patiria konformacinius pokyčius (-us), skatinantis aktyvavimo receptoriais susijęs Janus tirozino kinazės, JAK1 ir TYK2, ir vėliau trumpalaikis doko ir fosforilinimo stat baltymų, STAT1 ir STAT3 [14], [15 ].

Kaip Th17 susijusios citokinui netirtas IL-26 vaidmuo navikų. Čia mes išnagrinėjo galimą dalyvavimą IL-26 į žmogiškąjį GC pirmą kartą ir ištirti savo pro-išlikimą ir antiproliferacinės poveikį in vitro
.

Medžiagos ir metodai

Pacientai

Šis tyrimas apėmė 60 pacientų su GC, kuriems buvo atlikta operacija nuo 2006 iki 2009 metu pirmasis filialas ligoninės Nanjing medicinos universiteto, Nanjing, Jiangsu provincijoje (1 lentelė). Visi eksperimentai buvo atliekami pagal išreikštoms Helsinkio deklaracijos principais. Rašytiniai informuoti sutikimai genų ekspresijos tyrimus audiniai buvo gauti iš visų pacientų prieš operaciją ar endoskopinio tyrimo. Tyrimo protokolas ir sutikimo davimo tvarką patvirtino etikos komisijos Pirmojo filialas ligoninės Nanjing medicinos universitete. Diagnozė ir pastatymas skrandžio vėžio buvo atlikta pagal AJCC (TNM) sustojimo sistema.

Kiekybiniai Realaus laiko PGR

atvirkštinės transkripcijos reakcijos buvo atlikta naudojant viršuje Pirmosios grandinės sintezei sistema ( Invitrogen CA) po gydymo RNR šablonų DNaze I išvengti genomo DNR užteršimo. Norėdami nustatyti santykinį lygį kDNR atvirkštine transkripcija pavyzdžių, realaus laiko PGR buvo atliekama su "Roche LightCycler480 (" Roche Diagnostics, JAV), naudojant gruntai IL-26 taip: į priekį, AAGCAACGATTCCAGAAGACC ir atbulinės eigos AAGTCCTCCACAAAGCGTATTTT, su papildyta ilgis 175 bp. GAPDH buvo naudojamas kaip kontroliuoti su šiais pradmenimis: pirmyn, AAGGTGAAGGTCGGAGTCAAC; pakeisti, GGGGTCATTGATGGCAACAATA; sustiprina ilgis, 102 BP. Realaus laiko PGR reakcija buvo atlikta pagal įtrauktos į SYBR® Pašaro ex Taq ™ Kit (Takara, Japonija) nurodymus. Duomenys buvo standartizuoti GAPDH lygių pavyzdžių.

IFA

IL-26 koncentracija GC pacientų ir sveikų kraujo serume buvo matuojamas naudojant komerciškai laisvų daugiasluoksnis ELISA rinkiniai (Biotang Inc., MA).

Vakarų dėmė analizė

Baltymai buvo paimti iš MKN45, SGC7901 ir jų STAT1 ir stat3 siRNA keistas ląstelių linijas, ir kiekybiškai naudojant baltymų tyrimą (Bio-rad Laboratories, CA). Baltymų pavyzdžiai (30 mikrogramų) buvo frakcionuotas SDS-PAGE ir perkelti į nitroceliuliozinio membrana. Imunoblotas buvo atliekama naudojant antikūnus prieš IL-26, IL-20R1, IL-10R2, p-STAT3 (S727), STAT3, p-STAT1 (Y701), STAT1, BCL-2, BCL-XL, C-Myc ir a- tubulino (visi perkami iš Abcam, MN). Rezultatai buvo ryškinamos su cheminės liuminescencijos aptikimo sistemos (Pierce "ECL Substratas Vakarų dėmė aptikimo sistema," Thermo Scientific ", IL) ir poveikio autoradiografavimą filmo (" Kodak xar filmo).

imunohistocheminis (IHC)

audiniai buvo surinkti ir sumontuoti 4% paraformaldehido per naktį 4 ° C, apdorojama, supjaustoma į 5 mkm storio segmentai. Imunohistocheminį dažymo sekcijų buvo atliktas su antikūnų prieš IL-26, IL-20R1, anksčiau aprašyta p-STAT3 (S727), ir p-STAT1 (Y701), naudojant metodus [16].

BrdU ląstelių proliferaciją Analizės

išauginti ląstelės buvo padengtas esant 1 × 10 ^{4 ląstelių /gerai 96-duobučių lėkštelėse tankis. Ląstelių proliferacija 0, 12, 24, 48, 60 ir 72 h buvo įvertintas naudojant bromdeoksiuridino ląstelių proliferacijos tyrimu rinkinys. Bromdeoksiuridino tirpalas (Mobilusis signalizavimo technologijos, MA) buvo įtraukta į kiekvieną šulinėlį pagal gamintojo instrukcijas 12 h. Ląstelių proliferacija lygis buvo nustatomas matuojant optinį tankį esant 450 nm, naudojant kompiuterinę kontroliuojama microplate skaitytuvą.}

Izoliacija ir kultūros žmogaus GC infiltruotų leukocitų

Fresh navikų audiniuose buvo išplauti du kartus RPMI 1640 . riebalų, jungiamojo ir nekrozės audinių buvo pašalintas. Audiniai buvo sumalta į 1-2 mm gabalus RPMI 1640, perduoti į 15 ml arba 50 ml kūgiški vamzdžiai, ir inkubuojami su trigubas fermentas virškinimą terpėje, turinčioje dezoksiribonukleazės (30 V /ml), Hyaluronidase (0,1 mg /ml), ir kolagenazės (1 mg /ml) 2 valandas kambario temperatūroje su švelniu purtant. Audiniai buvo resuspenduotos 10 ml RPMI 1640 ir filtruotas pro 70-mkm ląstelių filtrą (BD Pharmigen). Ląstelės spąstus kiaurasamtis buvo pateikti į atskirus šulinius kuriame yra 1 ml T-ląstelių augimo terpėje 24 šulinėlių plokštelės tolesniam aptikimo tėkmės citometrijos.

Th17 NK ląstelių izoliavimo, stimuliavimas ir tėkmės citometrijos analizė

Th17 ląstelės buvo gautas in vitro
stimuliacija CD4 teigiamų periferinio kraujo mononuklearų ląstelių (PKVL), kuris buvo izoliuotas tėkmės citometrijos tokiomis sąlygomis (20 ng /ml IL-1β, 20 ng /ml IL-6, 20 ng /ml IL-23, 5 ng /ml TGF-β, 5 g /ml anti-IL-12, ir 5 g /ml anti-IL-4) aprašyta anksčiau [17]. NK ląstelės buvo gautos naudojant NK ląstelių izoliavimo komplektas pirko iš Miltenyi Biotec (Kat. 130-092-657). Th17 ir NK ląstelės išliko in vitro parsisiųsti ir skatino 100 ng /ml LPS ir H. pylori
fragmentai, atitinkamai, ir analizuojami viduląstelinė citokinų dažymo.

ląstelės viduje citokinų dažymo, ląstelės buvo stimuliuojama 37 ° C temperatūroje 5 h su leukocitų aktyvacijos kokteilis (BD Pharmingen). Ląstelės buvo tamsintas su paviršinių žymenų, fiksuoto ir laidžiomis su IntraPre reagentas (Beckman Coulter), ir pagaliau dažyti ląstelėje žymekliais. Duomenys buvo įsigyta ant FACSVantage SE ir analizuojami su CellQuest programinės įrangos. Fluorochrominiai konjuguoto MA prieš IL-26, CD3, CD4, CD8, CD16, CD56 ir RORγT buvo įsigytas iš BD Pharmingen.

cisplatinos sukelta Apoptozę ir tėkmės citometrijos analizė

analizuojami ląstelės buvo auginamos visiškai terpėje su 1 g /ml cisplatina 24 h. Ląstelės buvo toliau analizuojami tėkmės citometrijos (FACSCalibur ™; BD biomokslai NJ). Naudojant PI /aneksinas dažymo rinkinys (BD biomokslų)

siRNA dizainas ir lentivirus gamyba ir perdavime

siRNAs orientacija STAT1 ir STAT3 buvo suprojektuoti ir sintetinamas Genscript Co (Nanjing, Kinija) taip: siRNR orientacija STAT1, GGACAAGGTTATGTGTATA; ir siRNR orientacija stat3, GGACATCAGCGGTAAGACC. Susintetintas siRNAs subklonuoti į lentiviruso vektoriaus pLL3.7 HAPI parsisiųsti ir Xhol
(Naujosios Anglijos Biolab, Jungtinė Karalystė) kartu su kontrolės siRNA ir pavadino pLL3.7-CS, pLL3. 7-STAT1-siRNA ir pLL3.7-STAT3-siRNA. Rekombinantinis lentivirus buvo gautos iš 293T ląstelių [16]. Į žmogaus GC ląstelių linijos MKN45 ir SGC7901 buvo įsigytas iš Kaiji Biotech Co (Nanjing, Kinija) ir auginami Dulbecco modifikuota Eagle terpėje (DMEM) papildytas 10% serumas iš veršiuko embriono, 100 V /ml penicilino ir 100 V /ml streptomicino (Gibco CA) ir transdukuotus lentivirus naudojant polibrenui (8 mikrogramai /ml).

Statistinė analizė

rezultatai pateikti kaip vidurkis ± SD ne trijų nepriklausomų eksperimentų. Palyginimai tarp grupių buvo atliekami su Mann-Whitney U testą. IL-26 raiškos ir įvairių klinikinių charakteristikų, koreliacija buvo analizuojami naudojant chi kvadrato testas. P vertes < 0,05 buvo laikomi statistiškai reikšmingas

Rezultatai

1.. Padidėjęs aktyvinimas IL-26 ir gretutinių stat3 signalizacijos žmogaus skrandžio vėžys

IL-26 išraiška žmogaus skrandžio vėžio buvo ištirta 60 šviežių navikų audiniuose ir suporuotas gretimuose normaliuose audiniuose skrandžio nuo 60 GC pacientams. Realaus laiko PGR analizė parodė reikšmingas per išraiška IL-26 mRNR žmogaus GC, palyginti su įprastais skrandžio audinių (p = 0,004, iki Mann-Whitney U testas) (1a pav.) Serumas IL-26 lygiai taip pat buvo reikšmingai didesnis GC pacientų nei sveikų (p = 0.0064, kurį Mann-Whitney U testas) (1B pav.) Be to, analizė IL-26 baltymo raiškos 60 parafino įdėta audinių mėginių parodė teigiamą išraišką 47 GC mėginių ir silpnai teigiamas (N = 14) arba neigiamas (n = 46) išraiška gretimuose normaliuose audiniuose. IL-26 teigiamos ląstelės buvo daugiausia esančių ne-parenchimines audinių, kurie gali būti sudaryti iš imuninių ląstelių aplinkinių ir infiltrating į vėžį arba naudojant kitokias įprastines skrandžio audiniuose. Be to, kiekybinis iš IHC dažymo rezultatus su vaizdo-Pro Plus (ver 5.0) penkių atsitiktinių laukų per skaidrę parodė, kad IL-26 išraiška buvo reikšmingai didesnis GC audinių nei gretimuose normaliuose audiniuose (p = 0,0087, pagal Mann-Whitney U testas). Aptikimo ir kiekybinio įvertinimo iš IL-20R1, iš IL-26 receptoriaus išraiškos, parodė, kad ji buvo išreikšta žymiai aukštesnių lygių žmogaus GC nei sveikuose audiniuose (p = 0,0041, pagal Mann-Whitney U testas). Aktyvinimo būsena STAT1 ir STAT3, kurios yra svarbios pasroviui signalizacijos veiksniai IL-26, buvo tiriama IHC naudojant specifinius antikūnus prieš fosforilintų likučių. Reikšmingas padidėjimas p-STAT3 (S727) buvo aptiktas GC audinių, o nėra statistiškai reikšmingi skirtumai p-STAT1 (Y701) koncentracija buvo aptikta tarp žmogaus GC audinių ir sveikų audinių (p = 0,0094 už STAT3 ir p = 0.392 už STAT1 iki Mann-Whitney U testas) (1c paveikslas, d).

analizė tarp IL-26 raiškos ir klinikos funkcijų koreliacijos parodė statistiškai reikšmingus ryšius tarp IL-26 raiškos ir naviko dydžio ir H , pylori
infekcija (1 lentelė).

2. Th17 ir NK ląstelių yra pagrindinis Mobilieji šaltiniai IL-26 žmogaus skrandžio vėžys

mobilieji šaltiniai IL-26 yra pirminiai T ląstelės, gamtos žudikas (NK) ląstelių ir T ląstelių klonai po stimuliacijos specifinius antigenus ar mitogeninis lektinai [14]. Todėl, siekiant apibrėžti IL-26 šaltiniu žmogaus GC, naviko patekę leukocitai (TILS) buvo izoliuotas nuo 20 šviežių žmogaus GC audinių mėginių ir bendro tamsintas su skirtingais žymekliais. IL-26 išraiška buvo reikšmingai didesnis CD3 teigiamų ląstelių (T ląstelių) iš žmogaus GC TILS nei T ląstelių, gautų iš periferinio kraujo mono-branduolinės ląstelės (PKVL) (16.52 ± 9.32% T-TILS vs 3.78 ± 2.91% už T-PKVL P < 0,0001), kuri buvo suderinta su realaus laiko PGR ir IHC rezultatus (2a1 pav, A2). Tarp bendro skaičiaus T ląstelių, 13,5 ± 3,71% CD4 teigiamų T ląstelių išreikštas IL-26, o tik 3,21 ± 2,61% CD8 T ląstelių buvo teigiamas IL-26 (2A3 paveiksle, A4). Be to, bendro dažymo IL-26 su CD4 ir RORγt, žymeklis Th17 ląsteles, buvo pastebėta, su 53,21 ± 16,82% nuo Th17 ląstelių išreikšti IL-26 žmogaus skrandžio vėžio mėginių (2a5 pav, A6). IL-26 NK ląstelių, kitas pasitaikančios ląstelių šaltinis IL-26, išraiška buvo analizuojami matuojant CD3-, CD16 +, CD56 + ląstelių bendradarbiavimo dažymą su IL-26, numeris, kuris parodė, kad 43.81 ± 19.44% iš Iš viso NK ląstelės išskiria IL-26 (2a7 figūra, A8). Kartu paėmus, mūsų rezultatai rodo, kad pagrindiniai korinio šaltiniai IL-26 žmogaus GC buvo Th17 ir NK ląstelės ir kiekvieno komponento masės procentinė dalis buvo apibendrinti pie chart (2a9 ir išsiaiškinti A10).

Jei toliau tirti IL-26 Th17 ir NK ląstelių sekreciją, PKVL buvo renkami iš 20 sveikų savanorių, ir skatino pagal Th17 poliarizacinių sąlygomis. Kitas pagrindinis šaltinis IL-26, NK ląstelių, buvo gauta iš PKVL naudojant komercinę žmogaus NK izoliavimo komplektas. Indukuotų arba izoliuotų Th17 ir NK ląstelių charakteristikos buvo patikrinti viduląstelinė citokinų dažymo ir toliau analizuojami tėkmės citometrijos (2B1 pav, B2). Stimuliavimas Th17 ir NK ląstelių su LPS ir H.pylori
fragmentai lėmė reikšmingą padidėjimą IL-26 sekrecija rodo, kad IL-26 yra gyvybiškai citokinų atsakas skrandžio vėžiu (2C pav.)

3. in vitro
proliferacinės ir anti-Apoptozinės efektai IL-26

IL-26 poveikis buvo tiriamas toliau su in vitro
studijų serijos atliekamas dviem žmonėms GC ląstelių linijas, MKN45 ir Tarybos generalinis sekretoriatas-7901. IL-26 poveikis ląstelių proliferacija buvo vertinama su BrdU incooperation testą ląstelių, gydytų skirtingų koncentracijų IL-26 (1, 10 ir 50 ng /ml). Jokių reikšmingų skirtumų ląstelių proliferaciją buvo aptikta tarp negydytų ląsteles ir gydytų 1 ng /ml IL-26. Tačiau, dėl ląstelių proliferacijos koeficientas smarkiai didėja kaip atsakas į 10 ir 50 ng /ml IL-26, palyginti su, kad neapdorotų ląstelių (3A pav). Be to, vertinimas anti-apoptozės poveikio IL-26 PI-AnnexinV bendradarbiavimo dažymo ląstelėse gydomi chemoterapija narkotikų cisplatina įvairiais laiko dėmės rodo, kad IL-26 turėjo didelę kovos su Apoptozė poveikį net esant 1 dozė ng /ml. Anti-aprotoninis poveikis didėja su koncentracija IL-26-10 ir 50 ng /ml (3B1 pav, B2),. Šie rezultatai rodo, kad IL-26 yra antiproliferacinės ir anti-apoptozinių poveikį žmogaus GC ląstelių linijas, kurios iš dalies paaiškina tarp IL-26 raiškos ir įvairių klinikinių charakteristikų, pastebėtų klinikinių tyrimų asociacija. Tačiau pagrindinis molekulinės mechanizmas turi būti toliau analizuojami.

4. Proliferacijos ir anti-Apoptozinės poveikis IL-26 yra susiję su stat3 aktyvinimo

Ankstesni tyrimai parodė, kad informacijos apie privalomus IL-26 į jo receptoriaus kompleksas gali sukelti greitą aktyvavimo STAT3 ir mažesniu laipsniu, STAT1 [ ,,,0],12]. Todėl mes pirmą kartą nustatė IL-26 receptoriaus komplekso (IL-20R1 ir IL-10R2) į MKN45 ir SGC7901 ląstelių išraišką ir patvirtinta, kad abu receptoriai buvo pateikti GC ląstelių linijų patvirtinti, kad IL-26 signalų transdukavimo buvo galima (4A pav). tada mes išnagrinėjo STAT1 ir stat3 signalizacijos aktyvavimas ir parodė, kad fosforilinimo iš S727 likučių STAT3 ir Y701 su STAT1 padidėjo reaguodamas į 10 ng /ml IL-26. IFN-γ (10 ng /ml) ir IL-6 (30 ng /ml) buvo naudojamas kaip aktyvinimo kontrolę, STAT1 ir STAT3, atitinkamai (4b paveikslas). Remiantis ankstesniais tyrimais, įrodančiais, kad STAT1 ir stat3 signaliniai keliai turi priešingas poveikis Tumorigenesis [18], mes ištirti pasroviui tikslus STAT1 ir STAT3 toliau aiškinsis mechanizmus, sukeliančius proliferacijos ir pro-išgyvenimo poveikį IL-26, keisdamas STAT1 ir STAT3 signalizacijos GC ląstelių linijų. Mūsų rezultatai parodė, kad IL-26 stimuliacija aktyvinama, kad Bcl-2 ekspresiją, Bcl-XL ir c-myc, tai rodo, kad IL-26 turi didesnį poveikį stat3 aktyvavimo negu apie STAT1 signalizavimo tiesiogiai arba netiesiogiai (4B pav). Šis rezultatas taip pat prisideda prie mūsų supratimą apie pro-išlikimo ir proliferacijos poveikiui IL-26 žmogaus GC ląstelių linijų.

5. Naviko poveikio IL-26 skatinimas priklauso nuo STAT1 /STAT3 Balansas

IL-26 poveikis tarp STAT1 ir stat3 aktyvavimo balansas buvo tiriama naudojant lentiviruso tarpininkaujant siRNA nutildymo iš STAT1 ir STAT3 į MKN45 ir SGC-7901 ląstelių. Atitinkamas siRNAs efektyviai žemyn sureguliavo STAT1 ir STAT3 išraišką tiek ląstelių linijų (5a pav.) Ląstelių proliferacija buvo vertinama BrdU bendradarbiavimo tyrimą kontroliuoti siRNA perkeltų ląstelių ir STAT1 ir STAT3 siRNA elgiamasi GC ląstelių linijų auginami žiniasklaidos, kurių sudėtyje yra 10 ng /ml IL-26. Nokdaunas iš stat3 išraiška labai slopino MKN45 ir Tarybos generalinis sekretoriatas-7901 ląstelių augimą, o STAT1 nokdaunas neturėjo ląstelių proliferaciją (5B1 paveiksle, B2) poveikį. Cisplatina sukeltas apoptozę buvo įvertintas PI-aneksino V bendro dažymo tose pačiose ląstelių palaikomų terpėse 10 ng /ml IL-26, ir rezultatai parodė, žymiai sumažėjo pro-išgyvenimo poveikio IL-26 stat3 triuškinantis ląstelių , o nėra statistiškai reikšmingi pokyčiai apoptozės norma buvo aptikta reaguojant į STAT1 nuslopinami (5C1 paveiksle, C2). Šie rezultatai rodo, kad IL-26 yra pro-išlikimą ir antiproliferacinės poveikį žmogaus GC ląstelių linijų tarpininkaujant bent dalinai STAT1 /stat3 signalizacijos.

Diskusijos

Ankstesni tyrimai parodė, kad IL-26 yra bendro išreikštas su kito svarbaus IL-10-susijusio citokino, IL-22, kuris taip pat yra išskiriami Th17 ląstelių [19], [20]. Tačiau pasakymas ir IL-26 vaidmuo žmogaus vėžio nebuvo ištirtas išsamiai. Čia, mes ištirti dėl pirmą kartą, sudaryto iš IL-26 raišką žmogaus GC audinių ir parodė, kad IL-26 ir susijusios molekulės, tokių kaip IL-20R1 yra aktyvuojami žmogaus GC audiniuose.

IL-26 yra bendrai -expressed su IFN-gama ir IL-22 žmogaus TH1 klonų, bet ne Th2 klonai. Be to, IL-26 yra bendro išreikšti IL-17 ir IL-22 Th17 ląsteles, svarbus pogrupyje CD4 + T-pagalbininkas ląstelių, kurios skiriasi nuo TH1 ir Th2 ląstelių [12], [21]. Šiame tyrime buvo nustatyta, IL-26, kad bus gaminamas pirmiausia CD4 teigiamas T pagalbininkas ląstelių žmogaus GC, tarp kurių beveik pusė Th17 ląstelių išskiriami IL-26. Mes išnagrinėjome kitą galimą mobiliojo ryšio šaltinį, NK ląstelių, kurios, kaip pranešama, susiję su naviko apimtį ir sklaidos žmogaus GC [22], [23] ir parodė, kad NK ląstelės taip pat buvo svarbūs šaltiniai IL-26 gamybos. Mūsų rezultatai patvirtina neseniai atliktas tyrimas, kuriame buvo rastas romanas poaibis CD56 + NKp44 + NK ląstelių kartu išreiškia IL-22 ir IL-26, ypač reaguojant į gydymo IL-23 [24]. Hughesas, ir kt
. aprašyta kitą pogrupį nesubrendusių NK ląstelių, kurios nereikia išreikšti CD56 ar NKp44 bet išreikšti CD117 ir CD161 ir constitutively skubus IL-22 ir IL-26 [25]. Be to, mūsų rezultatai parodė, pirmą kartą, kad IL-26 skatinamas žmogaus GC ląstelių proliferaciją pagal įtakos STAT1 ir stat3 aktyvavimo pusiausvyrą, taip suteikiant naują įrodymą, kad tarp NK ląstelių ir naviko tūrio nustatymui žmogaus GC santykius.

IL-26 buvo pranešė, kad signalas per heterodimerinio receptoriaus komplekso, sudaryto iš IL-20R1 ir IL-10R2 grandines. IL-20R1 veikia kaip specifinio ligando surišantis grandinės IL-26 ir su IL-10R2 funkcijos, kaip esminio antrojo grandinę, siekiant užbaigti veikliosios receptoriaus komplekso surinkimas. Neutralizuojančių antikūnų prieš arba IL-20R1 arba IL-10R2 grandinės įmanoma užtverti IL-26 signalizacijos. Kai pilnai surinktas, receptorių kompleksas patiria konformacinius pokyčius (-us), skatinantis receptoriaus susijęs Janus tirozino kinazės, JAK1 ir TYK2 aktyvavimo, ir vėliau trumpalaikis jungiamojo ir fosforilinimo stat baltymų, STAT1 ir STAT3 [26], [27]. Kaip vieną iš tolesnių signalizacijos veiksnių IL-26, STAT3 yra dažniausiai susijęs su tumorigenezei ir taip pat manoma, kaip onkogeną. STAT3, kuris yra laikomas konvergencijos taškas daugelio onkogeniniam signaliniu keliu, yra constitutively aktyvuota tiek vėžinių ląstelių ir imuninės ląstelės naviko mikroaplinkos [28], [29], [30]. Visų pirma, STAT3 aktyvavimo buvo pranešė, kad į beveik 70% kietosios ir hematologinių auglių, įskaitant daugybine mieloma, kelių limfomų ir leukemijos, krūties vėžio, galvos ir kaklo vėžio, prostatos vėžio, kiaušidžių karcinomos, melanomos, inkstų karcinomos, gaubtinės ir tiesiosios žarnos karcinoma ir užkrūčio liaukos epitelio navikai [31]. STAT3 yra žinoma, kad skatinti ląstelių proliferaciją bei angiogenezę ir vaidinti svarbų vaidmenį navikų imuninės-pabėgti, tačiau ji taip pat kenkia invazinis ir metastazavusiu potencialą navikų. Mūsų rezultatai parodė, kad STAT3 yra aktyvuota žmogaus GC audinių ir jos aktyvavimo gali būti susijęs su pernelyg IL-26 sekrecijos. Kita vertus, nėra didelių skirtumų buvo aptikta kitų tolesnės tikslo IL-26, STAT1, tarp naviko ir gretimuose normaliuose audiniuose. STAT1 ir STAT3 yra manoma, kad žaisti priešingas vaidmenis Tumorigenesis [18]. STAT1 turi sudėtingą įvairių funkcijų abiejose vėžinių ląstelių ir imuninę sistemą ir yra paprastai laikomas naviko slopintuvas, nes jos vaidmens augimo slopinimo ir apoptozės skatinimo [32].

Apibendrinant, mes parodėme, kad IL -26 skatina ląstelių augimą ir apsaugo nuo apoptozę žmogaus skrandžio vėžio ląstelių moduliuoja STAT1 /stat3 signalizacijos pusiausvyrą, nurodant, kad IL-26, gali būti vertinga prognostinė indikatorius ir terapinis taikinys skrandžio vėžiu sergantiems pacientams.

• PLoS ONE: Trumpalaikis klinikinė reikšmė Aksesuarai Kairysis kepenų arterija pacientams, kuriems atliekama Radical pašalintas skrandis skrandžio Cancer
• PLoS ONE: Enterococcus faecalis Infekcija sukelia uždegimą, Intraląstelinė Oxphos nepriklausomas ROS gamybą ir DNR žalą žmogaus skrandžio vėžys Cells