PLoS ONE: Cirkuliacinis denatūruotu XAF1 DNR Nurodo blogos prognozės skrandžio Cancer

Anotacija

Fonas

denatūruotu DNR skysčiai gali būti tinkamas biologinis vėžiu sergančių pacientų. XAF1
buvo įrodyta, kad būti dažnai žemyn reguliuoja žmogaus skrandžio vėžiu (GC). Čia mes ištirti, jei XAF1
metilinimas GC galėtų būti naudinga biologinis.

Metodai

Realaus laiko PGR buvo naudojamas siekiant aptikti XAF1
iRNR raiška; imunohistocheminis ir Vakarų dėmė buvo naudojami ištirti XAF1 baltymo ekspresija GC audinių (n = 202), o jų atitinkami para vėžiniai histologiniai normalūs audiniai (PCHNTs). Realaus laiko metilinimas specifinės PGR buvo naudojami tiriant XAF1
rengėjas metilinimas toje pačioje skydelyje GC audiniuose, jų PCHNTs ir serumais.

Rezultatai

patvirtino dažnai XAF1
žemyn reguliavimas tiek mRNR ir baltymų kiekiai GC audinių, palyginti su įprastos kontrolės ir PCHNTs. XAF1
hypermethylation buvo įrodyta 83,2% (168/202) GC audinių ir 27,2% (55/202) iš PCHNTs, o ne metilinimas buvo aptikta 88 įprastos kontrolės. Metilinimo lygis GC audiniuose buvo reikšmingai didesnis negu PCHNTs ( P <
0,05). Iš XAF1 hypermethylation
reikšmingai koreliavo su žemyn reguliavimo XAF1
GC audinių abiejų mRNR ir baltymų koncentracijos ( P
< 0,001 kiekvienas). Be to, mes nustatėme aukštą dažnį, XAF1
metilinimas (69,8%, 141 iš 202) serumų DNR iš tos pačios pacientų, o serumai DNR nuo 88 ne naviko kontrolę buvo neigiami, XAF1
metilinimas. XAF1
metilinimas tiek GC audinių ir serumų gali būti geras biologinis diagnozuoti GC (AUC = 0.85 audinių ir AUC = 0,91 už serumais) ir reikšmingai koreliavo su prastesne prognozės ( P
< 0,001). Be to, po operacijos neigiamas iki teigiamo perėjimą XAF1
metilinimas serume stipriai susijęs su naviko atsinaujinimo.

Išvados

1) disfunkcija, XAF1
yra dažnas ir reguliuojama XAF1
promotoriaus hypermethylation; 2) Aptikimo cirkuliuojančių denatūruotas XAF1
DNR serume gali būti naudinga biologinis diagnozės, vertinti paciento rezultatą (prognozė ir pasikartojimo) GC pacientų

nurodomoji dalis:. Ling ZQ, LV P Lu XX J. JL Han J Inga LS, et al., (2013) Cirkuliacinis denatūruotu XAF1
DNR Nurodo blogos prognozės skrandžio vėžio. PLoS ONE 8 (6): e67195. Doi: 10,1371 /journal.pone.0067195

redaktorius: DunFa Peng, Vanderbilt universiteto medicinos centras, Jungtinės Amerikos Valstijos

Įstojo: Kovo 12, 2013; Priėmė: May 16, 2013 m Paskelbta: Birželis 27, 2013

Visos teisės saugomos: © 2013 lydeka ir kt. Tai atviros prieigos straipsnis platinama pagal Creative Commons Attribution licencija, kuri leidžia nevaržomai naudotis, paskirstymo ir dauginimąsi bet kokioje laikmenoje sąlygomis, su sąlyga, kad pirmasis autorius ir šaltinis įskaitomos

Finansavimas:. Šis tyrimas parėmė dotacijos iš mokslo ir technologijų generalinis projekto Zhejiang provincijos (2009C33143 Nr.), ir iš dalies dotacijos iš Backbone Talent Zhejiang provincijos medicinos ir higienos platformos programų (2011RCA009 Nr.). Į finansuotojai neturėjo vaidmenį studijų dizainas, duomenų rinkimo ir analizės, sprendimų skelbti, ar ruošiant rankraštį

konkuruojančių interesų.. Autoriai pareiškė, kad nėra konkuruojantys interesai egzistuoja

Įvadas

Skrandžio vėžys yra vienas iš labiausiai paplitusių vėžio Kinijos, su aukšto dažnumo ir mirtingumo, maždaug sudaro 10% visų piktybinių navikų [1]. Skrandžio Tumorigenesis yra sudėtinga, kelių etapų procesas, keisti daugelio genų [2]. Netipinė rengėjas metilinimas yra vienas iš pagrindinių mechanizmų nutildyti kai navikas slopinančias genus ir naviko susiję genai ir vaidina labai svarbų vaidmenį patogenezę ir progresavimo žmogaus vėžiui [3], [4] - [6], įskaitant skrandžio vėžio [7] , [8]. Tuo tarpu kaupiamas duomenys aiškiai rodo, kad DNR metilinimas gali būti naudinga ir galingas biologinis į vėžio rizikos vertinimo [5], [7], ankstyvąją diagnostiką [7], prognozuoti pacientų prognozės [7], [8], ir vertinant jautrumą chemoterapiniai vaistai [9]. Mūsų Neseniai atliktas tyrimas ir kiti tyrimai parodė, kad aptikti cirkuliuojančių metilintas DNR kraujyje yra stiprus ir praktinis požiūris vėžiu sergančių pacientų [7], [10], [11].

X chromosoma susijusi inhibitorius apoptozės ( XIAP
) -associated koeficientas 1 ( XAF1
) yra naujas neigiamas reguliatorius XIAP
, kuris apverčia XIAP anketa apsaugos vaidmenį vėžinių ląstelių [12] - [14]. Praradimo, XAF1
išraiška teiks vėžinių ląstelių atsparumą apoptozės ir skatinti vėžinių ląstelių išgyvenimą [14] - [17]. Disfunkcija, XAF1
buvo pranešta keliose žmogaus vėžio tikriausiai per promotoriaus metilinimo [15] - [19], o tai rodo jos svarbą Tumorigenesis. Žmogaus skrandžio vėžio XAF1
buvo pranešta, kad dažnai ir reikšmingai mažina reguliuojama ir tai žemyn reguliavimas, XAF1
tikriausiai per DNR hypermethylation konkrečių CpG svetainių [15], [16 ], [18]. Tačiau nė ataskaita galima susipažinti Apie XAF1
metilinimas kraujo ir jo potencialas kaip biologinis žymuo. Šiame tyrime mes išnagrinėjo XAF1
rengėjas metilinimas yra suporuotas audinių ir kraujo serumo mėginiuose iš didelio skydelyje pacientams, sergantiems skrandžio vėžiu, ir vertinami cirkuliuojančių denatūruotas XAF1
kaip potencialus biologinis žymuo skrandžio vėžio .

Naudota krovimo ir metodai

etika pareiškimas

De nustatyti žmogaus audinių mėginiai ir serumai buvo gauti iš Zhejiang Province, žmogaus audinių pavyzdį bankas. Egzempliorių naudojimas buvo patvirtintas Zhejiang Province vėžio ligoninėje institucinių ekspertizės valdyba. Parašė informuotas sutikimas buvo gautas iš kiekvieno paciento laikantis mūsų institucijos valdybos etikos reikalavimus. 88 ne vėžio savanoriai jei parašyta informuoto sutikimo. Dalis egzempliorių buvo iš Zhejiang provincijos Liaudies ligoninė ir pirmoji Liaudies ligoninė Chunan apskrityje. Instituciniai apžvalga valdyba medicinos etikos Zhejiang provincijos Liaudies ligoninė ir pirmoji Liaudies ligoninė Chunan apskritis patvirtino mėginio paėmimo metodą įskaitant rašytinį informuoto sutikimo iš visų pacientų.

Audinių pavyzdys

poriniai naviko ir para vėžiniai histologiniai normalūs audiniai (PCHNT) egzemplioriai buvo renkami operacijos nuo 202 pacientams, sergantiems pirmine skrandžio adenokarcinoma Zhejiang Province vėžio ligoninėje, Zhejiang provincijoje Liaudies ligoninė ir pirmoji Liaudies ligoninė Chunan apskritis laikas nuo 2008 sausio iki gruodžio 2009. PCHNT buvo įvertintas mikroskopu, kad būtų normalios ląstelės ir nesant displazijos ląstelių buvimą. Nė vienas iš šių atvejų buvo atlikta jokių gydymo prieš operaciją. Demografiniai, klinikiniai ir histopatologinių parametrai šiais atvejais buvo parodyta 1 lentelėje augimo modelis vėžinių ląstelių buvo pasiryžę pagal Ming klasifikaciją [20]. Visi tyrime dalyvavusių pacientų buvo stebimi iki periodiškai iki datos. Antralinių gleivinės biopsijos mėginiai iš 88 ne vėžio savanorių gastroskopiškai buvo atsitiktinai surinkta kontrolės per tą patį laikotarpį, įskaitant 54 vyrų ir 34 moterų, kurių amžiaus vidurkis 52,9 metų. Tarp šių savanorių, 48 pacientai buvo diagnozuotas lėtinis ne atrofinį gastritas. Tuo tarpu, poriniai serumo mėginiai buvo surinkti iki operacijos ar endoskopijos.

Analizė Helicobacter pylori ( h. Pylori
) Infekcija

biopsijos buvo gauti iš visų pacientų, kuriems buvo endoskopinio tyrimo , O
. pylori
statusas lėmė sparčiai ureazės testą ir Giemsa dažymo metodų [21], [22]. Jis buvo laikomas H
. pylori
infekcija, kai abu testai buvo teigiami, ir mėginiai su vienintelio teigiamo nebuvo įskaičiuotas statistinei analizei [22].

Realaus laiko PGR

iRNR išraiška iš XAF1
buvo analizuojami realiuoju laiku RT-PGR [23]. Iš viso RNR buvo paimti naudojant Trizol (GIBCO). Iš 3 mikrogramų visų RNR iš viso buvo atliktas atvirkštinę transkripciją naudojant M-mlv atvirkštinės transkriptazės (PROMEGA). Gliceraldehid fosfato dehidrogenazės ( GAPDH
) buvo pasirinktas kaip vidinio etalono. Sekų XAF1
pradmenys buvo taip: (F) 5'-TGGGTGTAGGATTCTCCAGG-3 ', (R) 5'-GGTTTGCCCAAG GACTACAA-3'. GAPDH
pradmenų sekas buvo taip: (F) 5'-CATGA GAAGTATGACAACAGCCT-3 ', (R) 5'-TAATTTTAGGTTAGAGGGTTATTGT- 3'. Ant 2 ^{-ΔΔCt metodas buvo naudojamas apskaičiuoti santykinius pokyčius genų ekspresiją.}

Imunohistocheminis Dažymo

iš XAF1 baltymo ekspresija nulėmė imunohistocheminio analizės XAF1 monokloninis antikūnas (Santa Krusas Biotechnologijos ). Imunohistocheminis dažymas XAF1 buvo atliekami naudojant tipinius parafino įterptųjų pavyzdžius iš 202 GC pacientams. Po to, kai deparaffinization, antigenas paieškos į 0,01 M citrato buferio, ir inaktyvacija endogeninio peroksidazės aktyvumo 3% H _{2O 2 /metanolis, mes inkubavome skaidres su antikūno dėl XAF1, esant 4 ° C temperatūroje per naktį, ir imunohistocheminį dažymo, laikantis standartinės avidinbiotin-peroksidazės sudėtingą technologiją, buvo atliekami naudojant 3,3'-diaminobenzidinas (DAB), kaip chromogeną. Branduoliai buvo counterstained hematoksilinu. Imunohistocheminį dažymo rezultatas (TKS) yra nustatomas pagal tris nepriklausomus patologai derinant dažymo dažnumą ir intensyvumą taip [24] [25]: ne dažymo gavo kaip 0, 1~10% ląstelių tamsintas įmetė kaip 1, 11~50% kaip 2, 51~80% kaip 3, 81~100%, kaip 4. Dažymo intensyvumas vardinės nuo 0 iki 3, su 0, neigiama; 1, silpnas; 2, vidutinio sunkumo; ir 3, stiprus. Kai yra daugiažidininė reaktyvumas ir yra reikšmingų skirtumų dažymo intensyvumo tarp židinių, buvo užregistruoti mažiausiai intensyvus ir intensyviausio dažymo vidurkis. Pirminiai duomenys buvo konvertuoti į TKS padauginus dažnio rezultatą ir dažymo intensyvumo balas. Teoriškai TKS gali svyruoti nuo 0 iki 12. TKS iš 9~12 buvo laikomas stipriu reaktyvumas, 5~8 buvo laikomas vidutinio sunkumo, 1~4 buvo laikoma silpna ir 0 pelnytas kaip neigiamas. Skyriai, kuriuose dažymo negalėjo būti gerai apibūdintas buvo laikomi abejotini.}

Vakarų dėmė analizė

Suporuotas naviko ir PCHNT egzemplioriai 20 atvejų buvo atsitiktinai atrinkti iš 202 skrandžio vėžiu sergantiems pacientams, skirtų Vakarų dėmė analizė. Iš viso baltymas išgauti ir tada kiekybiškai naudojant Lowry metodas [26]. Vakarų dėmė analizė atlikta naudojant anti-XAF1 monokloninius antikūnus (Santa Cruz, CA) pagal ankstesnėje ataskaitoje [6]. β-tubulino buvo įteiktas kaip vidaus kontrolė.

DNR ekstrakcijai, bisulfite pakeitimas ir Realaus laiko Metilinimas Konkretus-PGR (JEP)

Serial 5 mm skyriai, esančius karcinoma ir ne neoplazminė audiniai buvo montuojamas ant nepadengto stiklo skaidres ir džiovinami 37 ° C temperatūroje per naktį. Po deparaffinization bei dažant hematoksilinu ir eozinu (H & E), mes surinkti 5000 branduolius nuo 5 iki 10 serijos skyriuose naudojant 27G adatą. Surinkti branduoliai buvo gydomi 40 ml 200 mg /ml, proteinazės K (Sigma-Aldrich Co., St Louis, MO) 42 ° C, 72 val. Paramagnetinis karoliukas technologijos (AxyPrep Mag Kraujo gDNA komplektas, Axygen mokslo, Inc, Union City, CA) buvo panaudota siekiant izoliuoti genomo DNR nuo šviežio kraujo pagal KIT protokole. Protokolas susideda iš šių žingsnio: lizės, įrišimas, skalbimo ir išskyrimui. Teršalai per Susegimas, įrišimas ir skalbimo žingsnių yra pašalinami. DNR kokybė buvo vertinama pagal A260 /280 santykis NanoDrop ND-1000 spektrofotometru (NanoDrop Technologies, Inc, Wilmington, DE), DNR vientisumą buvo patikrintas denatūravimo agarozės gelio elektroforezės.

DNR buvo pakeista natrio bisulfite naudojant EpiTect bisulfite rinkinį (Qiagen Inc) šią Manufaktūra instrukcijas. Modifikuotas DNR buvo analizuojami realiuoju laiku JEP dėl ABI7500 PGR (ABI Co), naudojant SYBR Pašaro Taq ExTaq rinkinį (Takara Co Ltd "). XAF1
metilinimo ir unmethylation specifiniai pradmenys buvo sukurti taip: XAF1
(MF), 5'-TTTGTAAGAAACG AAATTTAATCGA-3 "(MR), 5'-CCTACCCTTAAAACCCACGAT-3"; XAF1
(UF) 5'-TTTGTAAGAAATGAAATTTAATTGA-3 "(UR) 5'-CTCCTACCCTTAAAACC CACAAT-3" [23]. Žmogaus genomo DNR (NVUI) turi būti apdoroti pagal SssI metiltransferazei in vitro buvo naudojamas kaip teigiama kontrolė. Periferinė kraujo DNR iš sveiko subjekto buvo naudojamas kaip neigiama kontrolė. Iš denatūruotu PNI mėginių procentinė dalis buvo apskaičiuota remiantis nuorodomis, kaip Ankstesnis aprašytų [27], [28]. Denatūruotu DNR indeksas gavo pagal DNR metilinimo procentais; 0, < 20%; 1, 20% -40%; 2, 40% -60%; 3, 60% -80%; ir 4, > 80%. Šis indeksas rezultatas 0 laikoma DNR unmethylation ir balai 1-4 buvo laikomi hypermethylated, atitinkamai [7], [27]. 20% išjungti riba DNR hypermethylation buvo grindžiamas kontrolės normalus pavyzdžių ir vidaus kokybės kontrolės gautų realaus laiko MSP analizė.

Mobilusis Kultūra ir narkotikų gydymas

Žmogaus skrandžio vėžio ląstelių linijos (AGS ir KATO-III) buvo auginamos RPMI1640 terpėje, papildytoje 10% vaisiaus galvijų serumo, 100 U /ml penicilino, ir 100 V /ml streptomicino 37 ° C temperatūroje ir 5% CO _{2, atitinkamai. Išauginti ląstelės buvo gydomi 5-aza-2'-deoksicitidino (5-aza-CdR) (Sigma-Aldrich), kurio galutinė koncentracija 1,0 mkmol /L. Trichostatin A (TSA) (Sigma-Aldrich), kurio galutinė koncentracija būtų 20 ng /ml administravo taip 5-aza gydymui arba vien tik dėl 24 h. Ląstelės buvo renkami ir pateikiami DNR, RNR ir baltymų gryninimui ir vėlesnių analizės.}

Statistinė analizė

SPSS 17.0 statistinės programinės įrangos buvo priimtas už duomenų analizę. Skaičiavimo duomenys palyginimai tarp grupių buvo atliktas χ
^{2 testus ir tikslus Fišerio testas. Išgyvenamumo analizė buvo computered naudojant Kaplan-Meier metodu ir didelių lygių buvo vertinami naudojant log-rank testą. Vienmatės analizės su Cox regresijos modelį buvo siekiama nustatyti nustatytiems prognostiniai faktoriai, ir daugiamatis analizė su Cox regresijos modelį buvo naudojamas ištirti bendrą poveikį. Dėl visų statistinių analizių, P
vertės. ≪ 0,05 buvo laikomas statistinis reikšmingumas}

Rezultatai

Down reguliavimo XAF1
pirminis skrandžio navikai

Jei ištirti, XAF1
genų ekspresijos aprašymą, mes išnagrinėjo iRNR išraišką XAF1
88 ne vėžio savanorių ir 202 pradinių skrandžio vėžio audiniuose ir jų atitinkamų PCHNTs. Kaip parodyta 1a paveiksle, XAF1
išraiška buvo gerokai sumažintas skrandžio vėžio mėginių, palyginti su tuo paprastu kontrolės ir PCHNTs ( P <
0,001). Tačiau nebuvo reikšmingo skirtumo XAF1
išraiška PCHNTs, palyginti su ne vėžio kontrolės.

Be to, XAF1
išraiška buvo žymiai mažesnis pažangių navikų (etape III /IV), nei kad ankstyvosios veiklos stadijos navikai (etapas I /II) ( p <
0,0001, S1A pav) ir buvo žymiai mažesnis blogai diferencijuotų navikų nei kad gerai /vidutiniškai diferencijuoti navikai ( p. <
0,0001, S1B paveikslas)

Norėdami patikrinti XAF1 baltymų kiekį skrandžio vėžio audiniuose, mes atliekame imunohistocheminės analizę 202 skrandžio vėžio audiniuose ir jų atitinkamų PCHNTs. Branduolinė XAF1 išraiška buvo nuolat dalyvauja normalioje skrandžio epitelyje būdingas aukštas imunoreaktyviųjų balus. XAF1 baltymo ekspresija buvo aptikta aukšto lygio 97,5% (197/202) iš PCHNTs (1b pav.) Tačiau aukštos raiškos XAF1 baltymų buvo aptikta tik 16,8% (34/202) skrandžio vėžio audiniuose; Dauguma skrandžio vėžio audiniuose buvo išvykęs arba žemo lygio XAF1 baltymo (1c pav). Į imunohistocheminius išvados apibendrintos 1 lentelė imunohistocheminį dažymo rezultatą skrandžio vėžio audiniuose buvo gerokai mažesnis nei PCHNTs arba įprastos kontrolės (, p <
0,0001, 1D pav.) Iš XAF1 baltymų netekimas reikšmingai koreliavo su H. pylori
infekcija, naviko dydis, histologinis diferenciacija, limfinės invazija, venų invazija, invazinės gylis, limfmazgių metastazės, tolimos metastazės ir klinikinė etapas (1 lentelė) (visi P <
0,05)
.

imunohistocheminius rezultatai 20 skrandžio vėžiu audiniuose buvo dar kartą patvirtino, naudojant Vakarų dėmė analizė. Tipinės Imunoblotingo rezultatai abiem atvejais buvo parodyta 1E pav. Santykinis kiekis XAF1 baltymų ekspresijos buvo standartizuoti beta-tubulino tų pačių mėginių. Vidutinis XAF1 baltymų lygis 20 skrandžio vėžiu audiniuose buvo gerokai mažesnis nei PCHNTs ( P
< 0,05). (1F paveikslas)

Rėmėjas Hypermethylation iš XAF1
pradinėje skrandžio navikų

Jei tirti molekulinius mechanizmus XAF1
tyla skrandžio vėžio, mes pritaikėme realaus laiko MSP technologiją studijuoti DNR metilinimo statusą, XAF1
rengėjas. Dažnumas, XAF1
hypermethylation skrandžio vėžio audiniuose, atitinkančių PCHNTs ir ne vėžio kontrolės buvo 83,2% (168/202), 24,8% (50/202) ir 5,7% (5/88), atitinkamai. Hypermethylation dažnis XAF1
į vėžio yra gerokai didesnė, nei ta, PCHNTs ir ne vėžio kontrolės (visi p
< 0,0001, 2 pav.)

Iš pažymos , Metilinti statusas XAF1
reikšmingai koreliavo su kai Klinikos-patologinis parametrų skrandžio vėžio, pavyzdžiui, limfmazgių metastazių, t-etape, H
. pylori
infekcija, ir tt (visi P <
0,05, 2 lentelė). Nėra reikšminga koreliacija tarp XAF1 parsisiųsti ir lytis, amžius diagnozės, auglio vietą ir toli metastazės buvo matyti hypermethylation (visi p
> 0,05). (2 lentelė)

XAF1
Rėmėjas Hypermethylation yra susijęs su jos Transkripcinis Triukšmo slopinimo skrandžio vėžio ląstelių

Jei išnagrinėti tarp XAF1
metilinimo ir XAF1
išraiškos santykius, lyginome XAF1
metilinimas lygis su , nustatomas XAF1
iRNR lygio ir baltymų koncentracija nei imunohistocheminio analizė (3a paveikslas) ar Imunoblotingo (3b pav) pagal Spearman koreliacijos analize. Kaip parodyta pav-3A, XAF1 baltymų raiškos (nustatoma pagal imunohistocheminio analizė) 202 GC audiniuose buvo glaudžiai susijęs su XAF1
iRNR lygis [LG (t /n)] (nustatyti RT-PGR) ( γ
= 0,841 p <
0,0001). Dar svarbiau, XAF1
metilinimas lygis buvo reikšmingai susijęs su XAF1
iRNR lygio ( gama pervežimas = - 0,846, P <
0,0001) ir XAF1 baltymų lygio ( γ
= -0,969 p <
0,0001). Panašūs rezultatai buvo gauti analizuojant ryšį, XAF1
rengėjas metilinimas ir XAF1 baltymo ekspresiją lemia Vakarų dėmė analizė (3b pav.) Šie rezultatai tvirtai pareikšti oficialūs kaltinimai, kad XAF1
išraiška reglamentuoja XAF1
promotoriaus metilinimo.

5-aza-CdR administracija Atstato išraiškos XAF1

Jei dar patvirtinti epigenetinius reguliavimą, XAF1
išraiška, AGS ir KATO-III ląstelės buvo gydomi 5-aza-CdR ir /ar TSA. XAF1
iRNR raiška buvo atgaivinta tiek skrandžio vėžio ląstelių linijas, kartu demetilinant iš XAF1
rengėjas (4 paveikslas) rodo, kad XAF1
yra transkripciškai nutildė šių ląstelių DNR hypermethylation. Įdomu tai, kad TSA gydymas vien buvo veiksmingas atstatant XAF1
išraiška AGS ir KATO-III be reikšmingų pokyčių, XAF1
metilinimas lygis, o tai rodo, kad Histonas pakeitimus, taip pat gali būti įtraukti į reguliavimo, XAF1
išraiška. Tačiau administracija TSA po 5-aza-CdR turėjo adityvus poveikis atkuriant genų ekspresiją su dar sumažėjusios metilinimo lygio, XAF1
. Šie rezultatai sutampa su naujausiais tyrimais, kad pasiūlytų, kad TSA gali turėti demetilinimu poveikį genų būdingų būdu [5]. Vakarų dėmė analizė naudojant AGS ląsteles, kaip pavyzdį, patvirtino naujausias reguliavimą XAF1 baltymų šių 5-aza-CdR ir 5-aza-CdR /TSA gydymo (4 paveikslas).

aptikimas Cirkuliacinis XAF1
metilinimas

Mes nustatėme aukštą dažnį, XAF1
metilinimas pirminėje skrandžio vėžiu (83,2%), o tai rodo, kad jis gali būti geras biologinis jei XAF1
metilinimas gali būti aptinkamas kraujo serume. Todėl mes išnagrinėjo XAF1
metilinimas yra suderintų serumo DNR iš 202 GC pacientams. XAF1
metilinimas buvo aptikta 141 (69,8%) serumas DNR iš 202 skrandžio vėžiu sergančių pacientų (5 paveikslas). Priešingai, XAF1
metilinimas nebuvo aptinkami serumo DNR iš 88 ne vėžio kontrolės.

Be to, mes patvirtino konsistencijos, XAF1
metilinimas tarp navikų audiniuose ir atitinkamas serume. 168 atvejų, parodė XAF1
metilinimas naviko audiniuose, 141 rodoma XAF1
metilinimas savo suporuotas serume, suteikiant apie 83,9% tarp jų nuoseklumą. Ir 34 skrandžio vėžiu sergantiems pacientams be XAF1
metilinimas savo skrandžio vėžio audiniuose, nėra metilinimas buvo rastas visas serumo DNR (S2 pav.)

XAF1
metilinimas kaip biologinis į skrandžio vėžio
diagnostika

Jei įvertinti XAF1
metilinimas kaip diagnozuoti GC biologinis žymuo, mes brėžiamas ROC kreivė (ROC) kreivės vertę ir apskaičiuotą plotą po kreive (AUC), vertės, naudojant DNR metilinimo duomenis iš abiejų GC audiniai ir serumas. Tiek ROC analizę XAF1
metilinimas audiniuose ir serumais atskleidė reikšmingą išskirtinį gebėjimą (6 paveikslas); AUC vertė audiniuose XAF1
metilinimas buvo 0,849 (95% pasikliautinasis intervalas, 0,806-0,892; P
< 0,0001), AUC vertė serume AXF1
metilinimas buvo 0,909 (95% pasikliautinasis intervalas, 0,875-0,942; p
< 0,0001).

Be to, kaip ir XAF1
metilinimas statusas skrandžio vėžio audiniuose ir serumų reikšmingai koreliavo su limfmazgių metastazių, t-etape, klinikinės stadijos ir kitų Klinikos-patologinis parametrus (visi p <
0,05, 2 lentelė)

XAF1
metilinimas. koreliuoja su prognozė skrandžio vėžiu sergantiems pacientams

reikšminga koreliacija, XAF1
metilinimas su daugeliu Klinikos-patologinis parametrų (2 lentelė) rodo, kad jis gali susieti su skrandžio vėžiu sergančių pacientų prognozei. Iki nurodytos datos apie tolesnius veiksmus, 113 168 pacientams, sergantiems XAF1
hypermethylation skrandžio vėžio audiniuose ėjo greitai ligos progresavimo arba mirė. Vidurine liga išgyvenamumas (DFS) buvo tik 23,4 mėnesių. Priešingai, iš 34 pacientų be XAF1
hypermethylation savo skrandžio vėžio audiniuose, tik 5 pacientai blogėja, o vidutinis DFS buvo 39,6 mėnesių. Kaplan-Meier analizė parodė, kad pacientams, sergantiems XAF1
hypermethylation savo skrandžio vėžio audiniuose eksponuojami akivaizdų blogiau išlikimui, negu be XAF1
hypermethylation ( P <
0,0001) (pav 7A). Be to, Kaplan-Meier analizė parodė, kad pacientams, sergantiems teigiamas serumas, XAF1
metilinimas buvo žymiai mažesnes DFS negu pacientams be serumo, XAF1
metilinimas ( P
< 0,0001 ) (7B pav), nurodant, kad XAF1
rengėjas metilinimas serume buvo nepalanki prognozuoti už skrandžio vėžiu sergantiems pacientams.

Cox regresinė analizė parodė, kad XAF1
metilinimas serume yra nepriklausomas veiksnys pacientų išgyvenimo: pacientams su XAF1
metilinimas buvo blogesnė prognozė ( p <
0,0001; Pavojingumo koeficientas, 5,710; 95% PI, 3.474~9.383). Be to, TNM etapai ir amžius diagnozės gali būti laikoma įtakojantis veiksnys prognozės skrandžio vėžio, tik tada, kai poveikis XAF1
metilinimas buvo pašalinta. Be to, cirkuliuojančių denatūruotas XAF1
kraujyje turėjo didesnę įtaką prognozei, nei kad TNM etapais (lentelė S1).

Teigiamas Perėjimas Cirkuliacinis XAF1
metilinimas prognozuoja auglio Pasikartojimas ir blogos prognozės

Tarp 202 pacientų, kurie buvo vertinami Ikioperacinė cirkuliuojančių XAF1
metilinimas, 72 pacientai gavo tolesnius patikrinimus cirkuliuojančių XAF1
metilinimas 2~5 kartų tarpais 1~6 mėnesių po operacijos. Tarp 12 pasikartojančių pacientų, 10 pacientų rodomas neigiamas iki teigiamo perėjimo XAF1
metilinimas statusą savo serumais, kiti du visada parodė teigiamas XAF1
metilinimas, tai rodo, kad XAF1
metilinimas serume gali būti geras žymeklis prognozuoti auglio augimą (3 lentelė).

Diskusijos

XAF1
( XIAP
-associated koeficientas 1) yra nauja, XIAP
privalomas baltymą, kuris gali sutrikdyti sujungus XIAP
su kaspazių, panaikina jos apsauga naviko ląstelių ir rezultatų naviko ląstelių apoptozę [12] - [ ,,,0],14]. Antiapoptozės funkcija, XIAP
lemia saviraiškos lygius XIAP pervežimas santykis su XAF1 pervežimas [15]. Sumažintas išraiška ar tyla XAF1
yra dažnas įvykis žmogaus navikų [16] - [19]. Šiame tyrime mes pirmą kartą patvirtino, kad XAF1
genų ekspresijos buvo gerokai žemyn reguliuojama tiek iRNR lygio ir baltymų lygį dideliu skydelyje pirminių skrandžio vėžio audiniuose, ir žemyn reguliavimo XAF1
išraiška buvo reikšmingai susijęs su naviko etapais, metastazių ir tt, implicating praradimą XAF1
funkcija naviko progresavimo. Tai atitinka kitų tyrimų ataskaitas [17] - [19]. Ištirti molekulinius mechanizmus, atsakingus už XAF1
tyloje, mes išnagrinėjo XAF1
rengėjas metilinimas didelis skydelis skrandžio vėžio audiniuose ( N
= 202) ir įprastos kontrolės ( N
= 88), naudojant realaus laiko MSP technologiją. Mes nustatėme aukštą dažnį (83,2%) DNR hypermethylation iš XAF1
skrandžio vėžio audiniuose. DNR hypermethylation iš XAF1
reikšmingas koreliuoja su žemyn reguliavimo XAF1
tiek mRNR ir baltymų kiekiai skrandžio vėžio audiniuose (3 paveikslas). Be to, 5-aza-CdR gydymas žymiai atkurta XAF1
išraiška XAF1
nutildė skrandžio vėžio ląstelių linijas (4 paveikslas). Šie duomenys aiškiai rodo, kad dažnai žemyn reguliavimas, XAF1
skrandžio vėžio ląstelių reglamentuoja jo promotoriaus hypermethylation. Įdomu tai, kad gydymas skrandžio vėžio ląstelių su TSA, histono deacetilazės inhibitorius, taip pat atstatyta XAF1
išraiška, atskirai arba kartu su 5-aza-CdR gydymo, nurodant, kad histono modifikacija taip pat gali būti įtrauktas į XAF1 <. Br> reguliavimas

DNR metilinimas gali būti naudojamas kaip galimą naviko biologinis į įvairių žmogaus vėžio [3] - [11], [23]. Dėl ląstelių be DNR cirkuliuojančių periferiniame kraujyje buvimas buvo aprašyta pacientams, sergantiems piktybiniais procesų, ir aktyvieji išleidimo naviko DNR į kraujotaką buvo pranešė, [29] - [31]. Daugybė tyrimų įrodė, auglio konkrečių pakeitimų cirkuliuojančių PNI susigrąžintas iš plazmos ar serumo pacientams, sergantiems įvairiomis piktybinių navikų, atitinkančių genetinių pokyčių, esančių pirminių navikų, išvadą, kad turi potencialą molekulinės diagnozės ir prognozės [29] - [32]. Nukleino rūgšties žymekliai aprašytos cirkuliuojančių PNI apima onkogeno mutacijas, mikrosatelitinius pakeitimus, genų pertvarkymų, ir epigenetinius pakeitimus, pavyzdžiui, nukrypusiu nuo normos promotoriaus hypermethylation [7], [8], [30] - [34]. Remiantis šiais stebėjimais, ypač nustatėme aukštą dažnį, XAF1
DNR metilinimas skrandžio vėžio audiniuose (83,2%), mes nusprendėme ištirti galimybę naudoti XAF1
rengėjas metilinimas yra serumą kaip skrandžio vėžiu sergantiems pacientams biožymens. Pirmiausia mes parodė didelį nuoseklumą aptikti XAF1
metilinimas tarp serumas ir pirminių skrandžio vėžio audiniuose. Kitas mes analizuojami cirkuliuojančių denatūruotas apie galimybę, XAF1
kaip diagnostinis persekiotoją naudojant ROC analizę. AUC (plotas po kreive) 0.909 parodė aukštą diagnostinę vertę aptikti XAF1
metilinimo kraujo serumo mėginiuose. Todėl, mūsų duomenys rodo, kad aptikimo XAF1
metilinimas cirkuliuojančių DNR gali būti naudojamas kaip diagnozuoti skrandžio vėžį neinvazinė biologinis žymuo. Be to, mūsų rezultatai taip pat parodė, kad teigiamas, XAF1
metilinimas serume buvo nepriklausoma prognostinis faktorius; prognozuoti prastą prognozę. Dar įdomiau, perėjimas iš neigiamos į teigiamą cirkuliuojančių XAF1
metilinimas po operacijos buvo reikšmingai susijęs su naviko atsinaujinimo. Šie duomenys rodo, kad aptikimo XAF1
metilinimas cirkuliuojančių kraujo serume DNR taip pat gali būti auglys biologinis prognozuoti skrandžio vėžiu pacientų prognozę ir stebėsenos auglio augimą po operacijos gydymą. Kadangi pacientų skaičius buvo atlikta ši tolesnių serumo tyrimas buvo mažas, tolesni moksliniai tyrimai didelėje imties dydis pacientų skaičių reikia patvirtinti šį įdomų faktą, kurį optimizuoti strategiją ir protokolą šiuo tikslu. Bet kuriuo atveju, lyginant su tradiciniais būdais, pavyzdžiui, gastroskopija egzamino skrandžio vėžiu sergantiems pacientams, Ryškiausias bruožas cirkuliuojančių denatūruotas XAF1
aptikimo yra veiksminga, greita, maža kaina, neinvazinis, nenaikina aplinka, aukštos diagnostikos sutinkamas norma ir tt, ir kaip toks įrodyti svarbias taikymo perspektyvas ateityje.

Išvados

disfunkcija, XAF1
yra dažnas ir reguliuojama XAF1
rengėjas hypermethylation skrandžio vėžio. Cirkuliacinis denatūruotas XAF1
DNR buvo susijęs su naviko ir piktybinės ligos progresavimo, kuris gali būti vertingas biologinis diagnozuoti skrandžio vėžį, prognozuoti pacientų prognozę ir stebėsenos auglio augimą po operacijos gydymą.

Parama informacija
pav S1.
jpg ekrano. A XAF1
genų ekspresijos lygis buvo mažesnis išplitusiu skrandžio vėžiu (III etapas /IV), nei kad pradžioje skrandžio vėžiu (etapas I /II). B XAF1
genų ekspresijos lygis buvo žemesnis prastai diferencijuotai skrandžio vėžiu, nei gerai /vidutiniškai (gerai /mod) diferencijuojama skrandžio vėžys P <
0,05
Doi:. 10,1371 /journal.pone.0067195.s001
(TIF)
S2 pav.
jpg ekrano. Koreliacijos analizė XAF1
hypermethylation rezultatus tarp GC audinių ir suporuotas periferiniame kraujyje (SERA)
Doi. 10,1371 /journal.pone.0067195.s002
(TIF)
lentelė S1.
xls. Daugiamatė išlikimo analizė Klinikos-patologinių duomenų 202 skrandžio karcinoma atvejais.

• PLoS ONE: Naujas grupuoti nuo PT4 skrandžio vėžio Pasak Serosal invazija plotis
• PLoS ONE: Janus kinazės 2 Polimorfizmais, susijusio su rizikos pacientams, sergantiems skrandžio vėžio Kinijos gyventojų