PLoS One: Elemzés a MET mRNS expresszió gyomorrák RNS in situ hibridizációs vizsgálat: A klinikai vonatkozások és összehasonlítása immunhisztokémia és Silver In situ Hybridization

absztrakt katalógusa

Megvizsgáltuk MET katalógusa mRNS expressziós státus RNS in situ hibridizáció (ISH) technika az elsődleges és áttétes elváltozások 535 műtétileg eltávolított gyomor karcinóma (GC) esetben. Összehasonlítottuk az eredményeit a immunhisztokémiai és ezüst in situ hibridizáció, és megvizsgálta az egyesület klinikopatológiai jellemzők és a prognózis. Között 535 primer GC, 391 (73,1%) volt gólt 0, 87 (16,3%) volt gólt 1, 38 (7,1%) volt gólt 2, 12 (2,2%) volt gólt 3 és 7 (1,3%) volt gólt 4 által RNS ISH. Magas MET katalógusa mRNS expresszióját (pontszám ≥3) összefüggésbe hozták a nyirokcsomó-metasztázis ( P katalógusa = 0,014), a távoli áttétek ( P katalógusa = 0,001), és a nagyobb TNM ( P katalógusa < 0,001). MET katalógusa mRNS expresszió korrelált fehérje expresszió (r = 0,398; P katalógusa < 0,001), és gén kópiaszám (r = 0,345; P katalógusa <. 001). A mutató betegek magas MET katalógusa mRNS primer vagy metasztatikus léziók rövidebb volt a teljes túlélés, mint a mutató alacsony MET katalógusa mRNS (primer tumor, P katalógusa = 0,002; áttétes nyirokcsomók, P katalógusa < 0,001). A mutató betegek pozitív átalakítását MET katalógusa mRNS állapotát metasztatikus nyirokcsomó rövidebb volt a teljes túlélés, mint a nem konverzió ( P katalógusa = 0,011). A többváltozós elemzések kimutatták, hogy a magas MET katalógusa mRNS expressziójának metasztatikus nyirokcsomó volt független prognosztikai tényezője a teljes túlélés ( P katalógusa = 0,007). Ezért ez a tanulmány azt sugallja, hogy a MET katalógusa mRNS expresszió értékelte RNS ISH hasznos lehet, mint potenciális marker azonosítása MET katalógusa onkogén-függő GC. Katalógusa

Citation: Choi J Lee HE, Kim MA, Jang BG, Lee HS Kim WH (2014) elemzése MET katalógusa mRNS expresszió gyomorrák RNS in situ hibridizációs vizsgálat: a klinikai vonatkozások és összehasonlítása immunhisztokémia és Silver in situ Hibridizáció. PLoS ONE 9 (11): e111658. doi: 10,1371 /journal.pone.0111658 katalógusa

Vágó: Svetlana Pack, CCR, National Cancer Institute, NIH, az Amerikai Egyesült Államok katalógusa

Beérkezett: március 11, 2014; Elfogadva: október 6, 2014; Megjelent: november 3, 2014 katalógusa

Copyright: © 2014 Choi et al. Ez egy nyílt hozzáférésű cikk feltételei szerint terjeszthető a Creative Commons Nevezd meg! Licenc, amely engedélyezi a korlátlan használatát, a forgalmazás és a reprodukció bármilyen adathordozón, feltéve, hogy az eredeti szerző és a forrás jóváírásra. Katalógusa

Forrás: Ez a munka támogatta a Nemzeti Kutatási Alapítvány Korea (NRF) A3 Foresight programot (http://www.nrf.re.kr). A finanszírozók nem volt szerepe a tanulmány tervezés, adatgyűjtés és elemzés, döntés, hogy közzéteszi, vagy a készítmény a kézirat. Katalógusa

Érdekütközés: A szerzők kijelentették, hogy nem ellentétes érdekek léteznek. Katalógusa

Bevezető

az elmúlt évtized során a receptor-tirozin-kináz (RTK) utak bizonyultak vonzónak célzott gyógyszerek daganatellenes terápiás [1], és a MET útvonal egyik ilyen ígéretes célokat. MET
egy proto-onkogén, található a 7q31 lokusz kódolja RTK számára hepatocita növekedési faktor (HGF) [2], [3]. A szoros szabályozását a HGF /met útvonal, amely megfigyelhető a fejlődés és regeneráció elvész a rák, és ez a dereguláció keresztül történik többféle mechanizmus [1]. Aberráns MET aktiválás fontos szerepet játszik a rákos sejtek túlélését, a növekedés, angiogenezis, és metasztázis különböző rákokban, beleértve a tüdő, az emlő, a vese, és a gyomor-bél traktus rosszindulatú betegségek [4]. Annak ellenére azonban, a betegek rétegződés szerint MET kifejezés vagy tevékenység fontos terápiás siker, a módszereket szintjének értékelésére MET kifejezés vagy tevékenység nem állapították meg [4]. Katalógusa

A gyomorrák (GC), abnormális MET-aktiváció már gondoltam, hogy kapcsolatban áll egy olyan gént dózis hatás [5], és MET katalógusa génamplifikáció (GA) vagy fehérje túltermelése járt agresszív tumor jellemzők és /vagy rosszabb klinikai kimenetelt [6] - [14]. Továbbá, MET katalógusa -amplified vagy -overexpressed GC megmutatta a kezelésre adott válasz több inhibitorok a HGF /MET jelátviteli útvonal a preklinikai vizsgálatok [15], valamint I. fázisú klinikai vizsgálatok [12], [16]. Ezért MET gátlás potenciálisan egy újabb sikeres terápiás stratégiát követi a humán epidermális növekedési faktor receptor 2 (HER2) -targeted terápia előrehaladott GC. Azonban a korábbi tanulmányok különbözõ módszerek azonosítására MET-pozitív GC és kimutatták eltérés a prevalenciája MET túltermelése vagy erősítés: MET túltermelése mozgott 18% 73,7% tanulmányok immunhisztokémiai (IHC) [7] - [9], [13], [14], [17], MET katalógusa gén kópiaszám (GCN) nyereség mozgott 10% 21,2% vizsgálatok kvantitatív valós idejű polimeráz láncreakció (qPCR) [10], [ ,,,0],11], és MET katalógusa GA mozgott 2% -ról 3,9% -ra tanulmányok fluoreszcens in situ hibridizáció (FISH) [12], [18] vagy ezüst in situ hibridizáció (SISH) [13]. Ezek közül a módszerek, IHC széles körben alkalmazzák a klinikai gyakorlatban, és a legvalószínűbb szűrési módszer kimutatására MET-pozitív GC. Ugyanakkor további feltárása továbbra is szükség van, hogy megtalálja a prediktív biomarker vagy vizsgálati módszer a MET-gátlás terápiában. Katalógusa

Ebben a vizsgálatban végeztünk egy RNS in situ hibridizáció (ISH) assay párosított DNS oligonukleotid próbák és előerősítő erősítő -label próbák megjelenítés [19]. Ez a módszer a formalin-fixált, paraffinba ágyazott (FFPE) szövetek és lehetővé teszi, hogy egyetlen molekula vizualizációs alatt egy világos látóterű mikroszkóppal. Korábbi vizsgálatunkban igazoltuk, hogy HER2 katalógusa mRNS expresszió értékeltük RNS ISH jól korrelál a fehérje túlzott mértékű és GA értékelte IHC és FISH 211 GC esetben [20]. Is, mi szerint a korreláció MET katalógusa GCN és fehérje expressziós egy korábbi vizsgálatban [13]. Itt értékeltük MET katalógusa mRNS expresszió RNS ISH módszerrel, és az eredményeket összehasonlítottuk azokkal IHC és SISH egy nagy sorozat GC. Ezen túlmenően, a klinikopatológiai paraméterek és a klinikai eredmények GC szerinti betegek MET katalógusa mRNS expressziós státus értékeltük. Katalógusa

Anyagok és módszerek katalógusa

A betegek és szövetminták katalógusa

Mi összegyűjtöttük archivált szövetminták GC betegek egymás vetettük gastrectomián szöuli Nemzeti Egyetemi Kórház, Szöul, Korea, 2004. januárjától a 2005. december Végül 535 mintát elsődleges GC és 199 mintát szinkron regionális áttétes nyirokcsomó (LN) származó 535 beteg esetében álltak rendelkezésre ebben a vizsgálatban. A klinikai és patológiai jellemzői a betegeket vizsgált áttekintésével orvosi grafikonok és patológiai rekordok (1. táblázat). TNM sorolták rendszer szerint az American Joint Committee on Cancer Staging Manual, 7 ^{th kiadás. Klinikai eredmények követték nyomon napjától műtét, amíg a halál vagy 60 hónap. Katalógusa}

Minden szövetmintát fixáltuk 10% -os pufferolt formalinban 24-48 órán át, majd paraffinba ágyaztuk. Core szövetek (2 mm átmérőjű) vettük fel trephine berendezés (Superbiochips Laboratories, Szöul, Korea). Az elsődleges GC, az invázió első az egyes primer tumor nem lett kiválasztva. A metasztatikus LN-ek voltak kitéve a szövet array, de az esetek mikrometasztázisok kizártuk. Összesen 22 szöveti microarray blokk, amely tartalmazza a 60 magot épültek. Katalógusa

Etikai nyilatkozat katalógusa

Minden emberi egyedeket során kapott terápiás műtét. A résztvevők nem adott írásbeli hozzájárulásával, hogy vegyenek részt a vizsgálatban. A retrospektív vizsgálatot végeztünk a minták felett a polcokon, miután a patológiai diagnózis, és az összes a mintákat névteleníti a vizsgálat előtt. A IRB (Seoul National University Hospital) jóváhagyta a retrospektív vizsgálatban a feltétellel anonimizálási (Hivatkozás: H-1006-035-320). Katalógusa

RNS ISH katalógusa

Az in situ kimutatására MET
mRNS, a RNAscope FFPE 2.0 assay kit (Advanced Cell Diagnostics, Hayward, CA, USA) alkalmaztunk a gyártó utasításai szerint. Röviden, a 2- és 3-um vastag FFPE szöveti metszeteket paraffint, fűtött, kezelt proteázt és hibridizáljuk szondával 40 ° C-on 2 órán át (a referencia-szekvencia, NM_001127500; szonda régió, 1236-2257). A mosás után és amplifikáció, 3, 3'-diamino-benzidin adtunk kimutatására cél-RNS. A sejtmagokat hematoxilinnel ellenfestettük. Pozitív festés jelezte barna pettyes pontok a sejtmagban és /vagy a citoplazmában. MET katalógusa mRNS expressziós soroltuk 5 fokozat szerint a gyártó pontozási iránymutatás: 0 pont, nem festés vagy < 1 pont cellánként; 1-es pontszám, 1-3 pont per sejt (látható 20-40 ×); 2 pont, 4-10 pont per sejt és nem, vagy csak nagyon kevés pont klaszterek (látható 20-40 ×); 3 pont, > 10 pont per sejt és < 10% pozitív sejtek dot klaszterek (látható 20 ×); pontszám 4, > 10 pont per sejt, és > 10% pozitív sejtek dot klaszterek (látható 20 ×) (1. ábra). A próbák UBC katalógusa (ubiquitin C) és a dapB katalógusa (a bakteriális gén) használunk a pozitív és a negatív kontroll, ill. A mintákat tekinthető megfelelőnek, ha a UBC katalógusa mRNS jelek voltak jól látható alatt 10x objektívvel és a dapB katalógusa jel nem volt látható. Katalógusa

IHC és SISH katalógusa

az immunhisztokémiai a MET végeztünk anti-teljes MET (SP44) nyúl monoklonális primer antitesteket (Ventana Medical Systems, Tucson, Arizona, USA). Egy automatikus immunostainer (irányadó XT, Ventana Medical Systems) használtunk a gyártó utasításai szerint. MET immunfestést szerezte a HercepTest pontozási iránymutatások GC (DAKO, Glostrup, Dánia): pontszám 0, nincs membrán festődés vagy membránfestődés a < 10% a tumorsejtek; 1-es pontszám, halvány /alig észrevehető részleges membrán festés > 10% a tumorsejtek; 2-es pontszám, gyenge-közepes festésével a teljes membrán > 10% a tumorsejtek; 3 pont, erős festődést a teljes membrán > 10% a tumorsejtek (2. ábra).

Kétszínű SISH assay-t tájékoztatják MET DNS-próbával, és tájékoztatja a 7. kromoszóma szondát (Ventana Medical Systems) a Ventana BenchMark XT a gyártó protokollokat. Jeleket felsorolt ​​40 daganatos sejtmagban magonként, és MET katalógusa gén állapot sorolták segítségével 6 csoportba a Colorado Egyetem Rákkutató Központjának kritériumok epidermális növekedési faktor receptor gén [21] (2. ábra). Katalógusa

a statisztikai elemzés katalógusa

a χ ^{2 teszt vagy Fisher-féle egzakt tesztet használtuk, hogy teszteljék a szövetség között MET állapot és klinikopatológiai tényezők. A Student-féle t katalógusa -teszt hasonlítottuk össze eszközök folyamatos változók. A Spearman korrelációs tesztet alkalmaztuk közötti kapcsolat értékelésére RNS ISH eredmények és IHC vagy SISH eredményeket. A Kaplan-Meier-módszerrel becsülni a teljes túlélés (OS) vagy OS csoportok közötti különbségek a különböző MET állapotát összevetettük a log-rank teszt. Többváltozós túlélési analízist a Cox arány modell. Adatelemzés végezte az SPSS 20.0 verzióját (SPSS, Chicago, IL, USA), és az eredményeket szignifikánsnak tekintettük, ha a P katalógusa < 0,05. Katalógusa}

Eredmények katalógusa

1. MET katalógusa mRNS állapotát értékelte RNS ISH katalógusa

535 primer tumor, 391 (73,1%), 87 (16,3%), 38 (7,1%), 12 (2,2%) és a 7. ( 1,3%) mutatott RNS ISH pontszám 0, 1, 2, 3, és 4, ill. Amikor az eredményeket összehasonlítottuk az RNS ISH a klinikopatológiai adatok, beleértve a túlélés és elemzett RNS ISH az IHC és SISH adatait, a csoportok pontszámot a 3. és 4. megmutatta egyedi lehetőségeket. Ezért tekinthető a pontszám a 3. és 4. magas MET katalógusa mRNS-csoport, és a teljes 19 esetben (3,5%) tartozott emelnünk MET katalógusa mRNS.

Nagy - MET katalógusa mRNS járt idős korban ( P katalógusa = 0,002), a nagyobb tumor mérete ( P katalógusa = 0,006), LN áttét ( P katalógusa = 0,014), nyirokér invázió ( P katalógusa < 0,001), megnövekedett számú áttétes nyirokcsomók ( P katalógusa < 0,001), a távoli áttétek ( P katalógusa = 0,001), és a magasabb TNM ( P katalógusa < 0,001) képest is az alacsony MET katalógusa mRNS (2. táblázat). Azonban magas MET katalógusa mRNS nem mutatott összefüggést a nemmel, lokalizációja, Lauren osztályozás, és inváziós mélység (2. táblázat). Katalógusa

199 szinkron áttétes nyirokcsomók, 119 (59,8% ), 45 (22,6%), 22 (11,1%), 4 (2,0%) és 9 (4,5%) mutatott RNS ISH pontszám 0, 1, 2, 3, és 4, ill. Ezért 13 esetben (6,5%) volt magas MET katalógusa mRNS. Közül 199 pár primer és metasztatikus léziók, 186 (93,5%) mutatott egybehangzó MET katalógusa mRNS állapot és 13 (6,5%) nem. Az említett 13 disszonáns esetben negatív konverziós találtak 50% (14/07) a magas MET katalógusa mRNS a primer tumor, és a pozitív átalakítás találtak 3,2% (6/185) az alacsony MET katalógusa mRNS primer tumorok (3. táblázat). katalógusa

2. MET fehérje és GCN állapotát értékelte az IHC SISH katalógusa

Az IHC, 236 (44,1%), 171 (32%), 113 (21,1%) és 15 (2,8%) primer tumorokat szerzett 0, 1, A 2. és 3., ill. IHC 3+ jól kivehető klinikopatológiai jellemzők, és ez a MET túltermelése csoport szignifikáns összefüggést életkor ( P katalógusa = 0,005), a nagyobb tumor mérete ( P katalógusa = 0,009), invázió mélysége ( P katalógusa = 0,05), LN áttét ( P katalógusa = 0,018), nyirokér invázió ( P katalógusa = 0,026), a megnövekedett számú áttétes nyirokcsomók ( P katalógusa < 0,001), a távoli áttétek ( P katalógusa = 0,007), és a magasabb TNM ( P katalógusa = 0,001). Azonban MET túltermelése nem mutatott semmilyen összefüggést a nemmel, a tumor helye, és Lauren besorolás (táblázat S1). Katalógusa

199 szinkron áttétes nyirokcsomók, 46 (23,1%), 92 (46,2%), 46 (23,1 %) és 15 (7,5%) mutatott IHC pontszám 0, 1, 2 és 3, ill. Közül 199 pár primer és metasztatikus léziók, 187 (94,0%) mutatott egybehangzó MET fehérje állapot és 12 (6,0%) nem. Ezeknek 12 disszonáns esetben negatív konverziós találtak 36,4% (11/04) primer tumorok MET túltermelése, és pozitív átalakítás találtak 4,3% (8/188) primer tumor nélkül MET túltermelése. Katalógusa

a SISH, MET katalógusa GA volt megfigyelhető 2,6% (14/535) a primer tumor. MET katalógusa GA szignifikáns összefüggésben nagyobb tumor mérete ( P katalógusa = 0,038), nyirokér invázió ( P katalógusa = 0,009), a megnövekedett számú áttétes nyirokcsomók ( P katalógusa < 0,001), a távoli áttétek ( P katalógusa = 0,005), és a magasabb TNM ( P katalógusa = 0,002). Azonban MET katalógusa GA nem mutatott összefüggést a nemmel, lokalizációja, Lauren besorolás, invázió mélysége és LN metasztázis (táblázat S2). Katalógusa

3. Korrelációja MET státus alapján RNS ISH, IHC és SISH katalógusa

A korreláció MET katalógusa mRNS és fehérje állapotát értékelték RNS ISH és IHC 4. táblázat mutatja be A 535 primer tumor, ott pozitív korrelációt MET katalógusa mRNS és fehérje expresszió (r = 0,398, P katalógusa < 0,001). Minden 7 esetben RNS ISH pontszám 4 megmutatta MET fehérje túlzott mértékű. Közül 12 esetben RNS ISH pontszám 3, 5 esetben (41,7%) mutatott IHC pontszámot 3. Az esetek RNS ISH 2 pont mutatott változó IHC pontszámot. Az esetek RNS ISH pontszám 0 vagy 1 nem mutatott MET fehérje túltermelése kivéve az 1 eset. Közül 10 esetben mutató eltérés (azaz pozitív RNS ISH és negatív IHC vagy fordítva), 8 megállapította, IHC pontszámot 2 vagy RNS ISH pontszám 2 199 áttétes nyirokcsomók, volt egy jó pozitív korreláció MET
mRNS és fehérje expresszió (r = 0,462, P katalógusa < 0,001) (táblázat S3). katalógusa

Ezen kívül volt egy pozitív korreláció MET katalógusa mRNS kifejezés és MET
GCN (r = 0,345; P katalógusa < 0,001) (4. táblázat). Közül 7 esetben RNS ISH pontszám 4, 6 (85,7%) mutatott MET
GA és csak egy eset megmutatta HP (14,3%). A 12 esetben RNS ISH pontszám 3 megmutatta GA (50%), illetve a poliszómia, (50%) szerint SISH. Az esetek RNS ISH pontszám 2 megmutatta különböző SISH mintákat, beleértve a GA (5,3%). Egyik esetben RNS ISH pontszám 0 vagy 1 kimutatta, GA.

5. táblázat foglalja össze az eredményeket az RNS ISH, IHC és SISH elsődleges GC. Között 535 esetben 513 esetben (95,9%) negatív volt mindkét RNS ISH és IHC, és csak 22 esetben (4,1%) mutatott pozitív eredményt akár RNS ISH vagy IHC. Ezek 22 esetben mutatott MET katalógusa GA (54,5%), illetve a poliszómia, (45,5%) szerint SISH és diszómia vagy es triszómia soha nem figyeltek meg. Ami a SISH között a 14 esetben mutató GA, 11 esetben (78,6%) mutatott magas expresszióját mRNS és fehérje. Között a 58 esetben mutatja a HP, azonban csak 7 esetben (12,1%) mutatott magas expresszióját akár mRNS vagy fehérje. Között a 111 esetekben mutató LP, csak 3 esetben (2,7%) mutatott magas mRNS expressziót. Minden 352 esetben mutatja diszómia vagy es triszómia mutatott negatív eredményt mindkét RNS ISH és IHC. Katalógusa

4. Prognosztikai jelentősége MET állapotát primer és metasztatikus léziók katalógusa

High MET katalógusa mRNS primer tumor vagy áttétes nyirokcsomók szignifikánsan összefüggött a rossz OS (primer tumor, P = katalógusa 0,002, 3A, áttétes nyirokcsomók, P katalógusa < 0,001, ábra 3D). A primer tumorok alacsony MET katalógusa mRNS, a betegek pozitív átalakítás megmutatta rosszabb OS, mint a nem konverzió ( P katalógusa = 0,011, 3F ábrán). A primer tumorok nagy MET katalógusa mRNS, a negatív betegeknél átalakítás mutatott jobb OS, mint a nem átalakítás, de nem volt statisztikailag szignifikáns ( P katalógusa = 0,137, 3F ábrán ).

MET túltermelése primer tumor vagy áttétes nyirokcsomók szignifikánsan összefüggött a rossz OS (primer tumor, P katalógusa = 0,001, 3B, áttétes nyirokcsomók, P katalógusa = 0,024, ábra 3E). A primer tumor nélkül MET túltermelése, pozitív átalakítás trendszerű felé előrejelzése szegény OS, de nem volt statisztikailag szignifikáns ( P katalógusa = 0,393). A primer tumorok MET túltermelése, negatív átalakítás tendenciát mutatott a jobb OS, mint a nem átalakítás, de nem érte el a statisztikai szignifikancia ( P katalógusa = 0,132). Ezen túlmenően, MET katalógusa GA primer tumorok is szignifikáns összefüggést a rossz OS ( P katalógusa = 0,005, 3C, ábra). Katalógusa

A többváltozós elemzés nagy MET katalógusa mRNS áttétes nyirokcsomók egy független negatív prognosztikai tényező az OS, miután az életkor (< 60 y vs ≥60 év), Lauren besorolás (intesztinális típusú vs. diffúz vagy vegyes típusú), és a TNM stádium (I-II vs. III-IV). A kockázati arány 2,27 ( P katalógusa = 0,007) (6. táblázat). Azonban MET túltermelése áttétes nyirokcsomókban nem volt statisztikailag szignifikáns prognosztikai faktor többváltozós elemzés, bár a kockázati arány 1,76 ( P katalógusa = 0,067). Ezen túlmenően, MET katalógusa GA, magas MET katalógusa mRNS vagy fehérje túltermelése primer tumor nem volt statisztikailag szignifikáns prognosztikai faktor többváltozós analízissel (nem közölt adatok). Katalógusa

megbeszélés katalógusa

a jelen tanulmányban kimutatták, hogy a magas MET katalógusa mRNS expressziója szignifikánsan összefüggött a kedvezőtlen klinikai és patológiai jellemzői és rossz prognózissal egy nagy sorozat GC betegek RNS ISH módszerrel. Ezen túlmenően, az RNS ISH eredményeket jól korrelál azok SISH és IHC. A korábbi vizsgálatokban értékelték MET
mRNS-szintje a GC használta a Northern-blot-vizsgálat [8], [22], vagy a reverz transzkripciós polimeráz-láncreakció (RT-PCR) [8], [14], [23] - [25]. Azonban a legtöbb tanulmány volt a kis esetszám, és csak néhány közülük vizsgált klinikai következményei [22], [24], vagy elvégzett összehasonlítás DNS vagy fehérje állapot [14], [25]: Kuniyasu et al. Először vizsgálták MET mRNS expresszió Northern-blot analízis, és jelentette, hogy kifejeződése 6,0 kb-os átirata szoros korrelációt mutatott a tumor stádiuma és az LN metasztázis [22]. Amemiya et al. számolt be, hogy Stage IV GC betegek májmetasztázisos magasabb volt a MET kifejezés mind mRNS, mind fehérje szinten, mint színpadi IV GC nélküli betegek máj metasztázis RT-PCR és IHC [24]. katalógusa

A közelmúltban, azt jelentette, hogy a magas szintű a HER2 katalógusa mRNS jól korrelál fehérje túlzott mértékű és GA eredményeinek összehasonlításával 4 különböző in situ alapuló módszerek (RNS ISH, IHC, FISH és SISH) 211 GC esetben [20]. Hasonlóképpen, ebben a vizsgálatban a MET állapot, az eredmények azt mutatták, RNS ISH meglehetősen jó korrelációt azokkal IHC és SISH. Ezek az eredmények alátámasztják, hogy az RNS ISH lehet megbízható assay FFPE szövetminta, azonban további érvényesítési vizsgálatok szükségesek. Katalógusa

Kimutattuk, hogy MET katalógusa GA, magas MET katalógusa mRNS és fehérje túlzott mértékű értékeli SISH RNS ISH és IHC voltak nagyon egybehangzó, és nagy MET státusára DNS, mRNS és fehérje szignifikánsan rossz prognózissal társul. Ezek az eredmények alátámasztják, hogy a MET túlzott mértékű expressziója elsősorban a megnövekedett MET katalógusa GCN és ez a mechanizmus hozzájárul az agresszív viselkedés a MET katalógusa onkogén-függő GC. Mindazonáltal néhány esetben mutatja ellentmondás között MET
GCN, mRNS és fehérje szinten. Úgy gondoljuk, hogy a műszaki problémák (például, érzékenysége és specificitása a szonda vagy antitest, és a rossz minőségű mRNS FFPE szövetek) és intratumorális heterogenitása MET állapot lehet a fő oka ennek az eltérést. Azonban néhány biológiai mechanizmusok is kapcsolódik ez az ellentmondás. Például a MET túltermelése nélkül GA valósulhat transzkripciós aktiválás HGF-függő autokrin /parakrin hurkok vagy egyéb jelátviteli [23], [26]. Éppen ellenkezőleg, a MET katalógusa GA nem növelheti a gén termék. Asaoka et al. számolt be, hogy néhány GC sejtvonalak hordozó MET
GA kifejezve a fehérje, mint ugyanazon a szinten, mint a többi sejtvonal nélkül GA, de a tirozin-maradékok a kináz domén voltak foszforilált [27]. A mechanizmusok MET aktiváció és szerepe a HGF GC még tisztázásra szorul. Katalógusa

Köztudott, hogy a MET katalógusa szerepet játszik a metasztatikus progresszió a rák. Számos tanulmány kimutatta, hogy a MET
GA vagy túlexpressziót társult LN metasztázis [7], [13], [22] vagy a távoli áttét [13], a GC betegeknél. Ezen túlmenően, kimutatták, hogy a beadás a MET inhibitor csökkentett peritoneális terjesztését GC xenograft modellben [23]. Továbbá, Di Renzo et al. megállapította, hogy a rákos sejtek hordozó MET katalógusa aktiváló mutációk során kiválasztásra kerültek áttétet fej-nyaki laphámrák összehasonlításával gén szekvencia a primer tumor és metasztatikus nyirokcsomó [28]. Ugyanakkor a közvetlen összehasonlítása MET állapot között a primer tumor és a metasztázis nem végeztek egy nagy sorozat GC. Amikor összehasonlítottuk a MET expressziós státus között 199 párosított primer tumor és metasztatikus nyirokcsomók, valamint a teljes konkordancia 93,5%, illetve 94% RNS ISH és IHC, ill. Ezek az eredmények arra utalnak, hogy a MET-expressziós státust GC viszonylag állandó során áttét a regionális nyirokcsomókban. Ugyanakkor a pozitív átalakítását MET katalógusa mRNS állapot szignifikánsan összefüggött a rossz prognózissal egyváltozós és többváltozós analízis. Ezért ezek az eredmények arra utalnak, hogy az értékelés a MET állapotát metasztatikus léziók fontos lehet megjósolni prognózis és meghatározzák a további jelöltek MET-célzott kezelés. Katalógusa

In situ alapú RNS-analízis több előnye is van a "grind és megkötik "elemzés, mint az RT-PCR [19], és alkalmazható mind a klinikai gyakorlat és a retrospektív kutatás. Sőt, RNS ISH kedvezőbb, mint az IHC, ha nincs megfelelő antitest vagy ha a cél molekula a szekretált fehérje. Ebben a tekintetben a MET katalógusa, ez az előny is hasznos lehet, mert a HGF-termelő sejtek láthatóvá tehető a szöveti metszetek segítségével HGF szonda. Azonban sebezhető mRNS stabilitásának a szövetek és a magasabb költségek, mint az IHC hátrányai vannak a RNS ISH módszerrel. Reméljük, hogy a további műszaki fejlesztés megoldja ezeket a korlátozásokat. Katalógusa

Ebben a retrospektív vizsgálatban MET katalógusa mRNS státus alapján RNS ISH jól korrelál fehérje és GCN értékelte az IHC SISH, illetve és MET katalógusa GA nagyon egybehangzó magas expresszióját sem mRNS vagy fehérje. A túlélési analízis, magas kifejezése MET katalógusa mRNS primer vagy metasztatikus léziók, valamint a pozitív átalakítását MET katalógusa mRNS állapota jelentősen rossz prognózissal társul. Ezen túlmenően, MET katalógusa mRNS állapotát áttétes nyirokcsomók független prognosztikai faktor többváltozós analízissel. Eredményeink azt mutatják, hogy a MET katalógusa mRNS alternatívája lehet marker azonosítása MET katalógusa onkogén-függő GC. Katalógusa

alátámasztó információk katalógusa táblázat S1.
doi: 10,1371 /journal.pone.0111658.s001 katalógusa (DOCX) hotelben táblázat S2.
doi: 10,1371 /journal.pone.0111658.s002 katalógusa (DOCX) hotelben táblázat S3.
doi: 10,1371 /journal.pone.0111658.s003 katalógusa (DOCX) hotelben

Köszönetnyilvánítás katalógusa

Nagyon hálásak vagyunk, hogy Ms. Hyun Ju Park neki technikai támogatást.